胰岛素样生长因子结合蛋白与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是对在不同病因作用下的慢性肝损伤后的修复反应,随着肝纤维化的不断发展,最终可发展为肝硬化,甚至是肝癌。胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)是一组具有同源结构的蛋白质,具有调节细胞生长、粘附、凋亡、血管生成、肿瘤发生等多种功能。目前越来越多的研究发现IGFBPs与肝纤维化的发生发展关系密切。本文就近年来IGFBPs与肝纤维化相关性的研究进行综述。     

贝那普利对肝纤维化大鼠胰岛样生长因子结合蛋白-2表达的影响

目的研究血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)贝那普利对大鼠肝纤维化的疗效以及对肝纤维化大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP-2)表达的影响。方法22只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(n=6),模型组(n=8),贝那普利预防治疗组(n=8)。除正常对照组外,模型组和贝那普利预防治疗组均给予大鼠首次皮下注射40%CCl4油剂5 ml/kg,以后每次皮下注射40%CCl4 2 ml/kg,每周两次。给予正常对照组相同剂量的油剂皮下注射。同时贝那普利预防治疗组从实验第1天开始给予贝那普利10 mg/(kg.d)灌胃,直至实验结束。于8周末,分别杀死大鼠,留取血及肝组织标本备用。肝组织进行常规HE及Masson三色染色,酶联免疫法测定血清IGFBP-2,免疫组织化学染色肝组织IGFBP-2。结果贝那普利有明显抗大鼠肝纤维化的疗效,模型组IG-FBP-2在血清和肝组织的表达增加(P<0.05),贝那普利预防治疗组比模型组血清和肝组织IGFBP-2的表达减少(P<0.05)。结论贝那普利抗肝纤维化的机制可能与其降低血清及肝组织IGFBP-2的表达有关。     

肝纤维化大鼠血清NO水平动态变化

一氧化氧（ＮＯ）是一种活性氮氧自由基，它是在ＮＯ合成酶催化下以左旋精氨酸为底物而生成的。研究发现，在肝内，肝细胞、巨噬细胞及内皮细胞等均可以精氨酸为底物合成ＮＯ，这三类细胞在肝纤维化发生发展过程中具有重要作用。本研究探讨了实验性肝纤维化大鼠血清中ＮＯ...     

胰岛素样生长因子与肝纤维化的研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的激活和增殖是肝纤维化的中心环节,胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)是一类重要的促细胞活化、分裂的生长因子.IGFs与其受体结合后通过Ras/细胞外信号调节激酶途径、PI3-K途径、影响Na /H 交换以及抑制肝星状细胞凋亡等方式促进肝星状细胞增殖,从而加速肝纤维化.     

大鼠肝纤维化过程中ACE 2、Ang（1-7）的动态变化

目的探讨大鼠肝纤维化形成过程中ACE2、Ang(1-7)的变化情况。方法成年雄性Wistar大鼠36只,随机取6只为正常对照组,余30只制备CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,分别在造模第15、30、45、60、75天随机处死6只,对各组大鼠肝组织进行HE及Masson染色观察其病理变化,ELISA检测肝匀浆Ang(1-7)的水平,免疫组织化学方法检测肝组织ACE2蛋白的表达,Real-timePCR检测ACE2及TGF-β1mRNA的表达。结果随着大鼠肝纤维化进展,肝组织中ACE2、Ang(1-7)、TGF-βl表达水平呈上升趋势(P<0.01),但第60天至75天Ang(1-7)增加不明显,ACE2的表达水平下降(P<0.05)。结论 TGF-β与肝纤维化程度正相关,ACE2、Ang(1-7)参与肝纤维化的发生发展。     

大鼠肝纤维化过程中NO及NOS水平的动态变化

目的 研究大鼠肝纤维化过程中一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)水平的变化规律。方法 给予大鼠皮下注射CCl_4建立肝纤维化模型,采用比色法测定造模后不同时间点血清NO水平及肝组织NOS活性,并进行肝组织病理学检查,动态观察肝纤维化过程中NO及NOS水平的变化。结果 注射CCl_4后5、10d,肝组织病理改变主要表现为肝细胞坏死、气球样变性及炎性细胞浸润,NO及NOS水平明显升高(模型组NO、NOS水平比对照组NO、NOS水平分别为8.95±0.34μmol/Lvs3.33±0.46μmol/L及1.75±0.51nmol·min~(-1)·g~(-1)vs0.26±0.12nmol·min~(-1)·g~(-1),P均<0.01);20、30、45d,肝组织除上述病理改变外,汇管区逐渐出现纤维结缔组织增生,并向小叶内延伸,N0及NOS水平维持在高于对照组水平(模型组N0、NOS水平比对照组NO、NOS水平分别为8.60±0.89μmol/Lvs2.45±0.51μmol/L及/1.88±0.10nmol·min~(-1)·g~(-1)vs0.39±0.20nmol·min~(-1)·g~(-1),P均<0.01)。结论 大鼠肝损伤及肝纤维化时NO及NOS水平均明显升高。     

大鼠肝纤维化过程中NO及NOS水平的动态变化

目的研究大鼠肝纤维化过程中一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)水平的变化规律.方法给予大鼠皮下注射CCl4建立肝纤维化模型,采用比色法测定造模后不同时间点血清NO水平及肝组织NOS活性,并进行肝组织病理学检查,动态观察肝纤维化过程中NO及NOS水平的变化.结果注射CCl4后5、10d,肝组织病理改变主要表现为肝细胞坏死、气球样变性及炎性细胞浸润,NO及NOS水平明显升高(模型组NO、NOS水平比对照组NO、NOS水平分别为8.95±0.34μmol/L vs 3.33±0.46μmol/L及1.75±0.51nmol@min-1@g-1 vs 0.26±0.12nmol@min-1@g-1,P均<0.01);20、30、45d,肝组织除上述病理改变外,汇管区逐渐出现纤维结缔组织增生,并向小叶内延伸,NO及NOS水平维持在高于对照组水平(模型组NO、NOS水平比对照组NO、NOS水平分别为8.60±0.89μmol/L vs 2.45±0.51μmol/L及1.88±0.10nmol@min-1@g-1 vs 0.39±0.20nmol@min-1@g-1,P均<0.01).结论大鼠肝损伤及肝纤维化时NO及NOS水平均明显升高.     

历史血吸虫病肝纤维化患者血清肝纤维化指标和肝功能检测

杭州市余杭区历史上是血吸虫病严重流行区,1994年余杭达到阻断血吸虫病标准.迄今未发生本地感染的人畜血吸虫病,没有监测到阳性螺点.但上世纪六、七十年代余杭区对血吸虫病患者进行了大规模的药物治疗,这批患者目前大多年逾花甲.     

人胰岛素样生长因子-1的体外抗肝纤维化活性

探讨人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的体外抗肝纤维化作用。检测IGF-1对人正常肝细胞L-02增殖及生长周期的影响;建立CCl₄诱导的肝细胞损伤模型,探究IGF-1抗肝细胞损伤活性;以TGF-β1诱导的肝星状细胞HSC-T6为体外肝纤维化研究模型,检测IGF-1对HSC-T6细胞中纤维化相关蛋白表达水平及对胞内TGF-β1/Smad信号通路的影响。结果显示,IGF-1可解除TGF-β1对L-02生长的抑制作用,提高CCl₄损伤L-02的细胞存活率,降低HSC-T6细胞纤维化相关蛋白表达水平,抑制TGF-β1/Smad信号通路中Smad3的磷酸化。结果表明,IGF-1能够促进肝细胞增殖,保护肝细胞免受损伤,干预TGF-β1/Smad信号通路,抑制胞外基质ECM合成,从而发挥抗肝纤维化效果。     

化学性肝纤维化中血小板源性生长因子的动态变化

目的：研究血浆血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF)及病变区PDGF A,B链表达在化学性肝纤维化不同病理阶段的动态变化。方法：选用Wistar大白鼠通过皮下注射40％四氯化碳花生油混合液复制化学性肝纤维化动物模型。采用生物活性方法测定血浆PDGF,通过肝脏免疫组化染色观察病变区PDGF A,B链分布变化。结果：随着肝纤维化病变的加重,血浆PDGF逐渐升高。与对照组及相邻病变阶段比较均有显著差异（P＜0．01）。通过肝脏免疫组表明PDGF A,B链表达早期集中在汇管区间质细胞,散在分布于肝窦状隙,晚期广泛分布于纤维间隔内。结论：PDGF在化学性肝纤维化发生发展中起一定的促进作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-2参与斑马鱼胚胎心血管系统发育的实验研究

 目的 通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸制作斑马鱼IGFBP-2基因表达下调的动物模型,观察IGFBP-2表达下调导致斑马鱼胚胎心脏血管发育的异常表型及其对心脏发育相关基因表达的影响。方法 胚胎整体原位杂交验证IGFBP-2基因在斑马鱼胚胎发育早期的时空表达谱。特异抑制IGFBP-2基因启动子的吗啡啉（morpholino,MO）和标准对照吗啡啉（Con-MO）由Gene-Tools公司设计合成。设置0.05、0.10、0.25和1.0 mmol/L 4个不同浓度梯度的IGFBP-2 MO注射组,观察不同注射浓度对斑马鱼胚胎心脏异常表型发生率和死亡率的影响,并与Con-MO注射组以及野生型（Wild type,Wt）对照组比较。详细记录0.25 mmol/L浓度 IGFBP-2 MO注射组不同发育时段斑马鱼胚胎心脏发育的异常表型。荧光显微镜下观察IGFBP-2 EGFP重组质粒单独以及与IGFBP-2 MO或Con-MO共注射后12hpf胚胎的绿色荧光表达。原位杂交比较IGFBP-2 MO注射组与Wt组斑马鱼心房标记基因Amhc的表达情况;观察IGFBP-2基因下调的Vmhc-EGFP转基因斑马鱼心室特异性绿色荧光的变化;显微血管荧光造影显示IGFBP-2 MO注射组与Wt组胚胎外周血管发育的差异。结果 斑马鱼胚胎早期的发育过程中,IGFBP-2基因在眼球、中脑和肝脏先后表达。0.25 mmol/L浓度MO注射组12 hpf存活的胚胎在48 hpf有59.6%发生心脏发育的异常表型,包括心管搏动无力、心包水肿和房室环化障碍,部分胚胎发生心房扩大、房室反流伴循环瘀滞,且畸形随发育时间推移加重。接受单独显微注射IGFBP-2 EGFP重组质粒和与Con-MO共同注射的Wt胚胎12 hpf出现明显的绿色荧光表达,而重组质粒与IGFBP-2 MO共同注射的胚胎几乎无荧光表达,证实MO下调斑马鱼胚胎IGFBP-2基因的有效性。48 hpf胚胎整体原位杂交显示IGFBP-2 MO注射组心房特异标记基因Amhc的表达下调;48 hpf IGFBP-2基因下调的Vmhc-EGFP转基因斑马鱼心室特异绿色荧光蛋白的表达减弱;60 hpf IGFBP-2 MO注射组显微血管荧光造影显示体节间血管显影稀疏紊乱。结论 显微注射IGFBP-2 MO能够有效实现斑马鱼胚胎的IGFBP-2基因下调。IGFBP-2基因下调导致斑马鱼胚胎心脏血管的异常表型,并抑制心脏发生基因Amhc和Vmhc的表达。IGFBP-2在斑马鱼胚胎心血管系统的正常发育过程中起到重要作用。     

脑内过表达胰岛素样生长因子结合蛋白-4转基因小鼠的建立

目的构建脑内过表达胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)的转基因小鼠,以研究IGFBP-4对脑发育的作用。方法构建神经元特异性启动子血小板源性生长因子β链(platelet derived growth factorβchain,PDGF-β)驱动的IGFBP-4表达载体,通过显微注射构建转基因小鼠。用PCR法检测小鼠子代基因组IGFBP-4 c DNA的整合情况,Western blotting法和免疫组织化学法观察IGFBP-4在脑内的表达丰度和分布,比较野生型和转基因小鼠的体质量和脑质量的改变。结果外源IGFBP-4 c DNA稳定整合于转基因小鼠基因组,IGFBP-4蛋白在成年小鼠脑内表达水平升高了267%,脑区IGFBP-4蛋白分布符合PDGF-β启动子驱动的蛋白表达特征,与野生型小鼠IGFBP-4部位相似。转基因小鼠体质量未见明显改变,整脑质量增加了8.4%(P<0.05),其中脑干增加了16.5%(P<0.05),其余脑区改变不明显。结论外源IGFBP-4转基因在小鼠基因组中得到整合并能稳定遗传和表达,并影响了部分脑区的发育,为脑发育研究提供了有价值的动物模型。     

胎儿纤维连接蛋白与胰岛素样生长因子结合蛋白-1在早产预测中的价值

目的评价胎儿纤维连接蛋白（fFN）和胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）在早产预测中的临床价值。方法选择先兆早产孕妇210例,随机分为三组各70例,应用免疫法定性检测宫颈阴道分泌物中的fFN和IGFBP-1。A组行fFN检测,B纽行IGFBP-1检测,C组行二者联合检测,观察7d、14d内分娩结局,计算三种方法预测早产的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率。结果A组中19例阳性,51例阴性。B组中21例阳性,49例阴性。C组两者之一阳性或两者均阳性或共33例,两者均阴性37例。三种检测方法在7d和14d内预测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均无显著差异（P〉0.05）。结论fFN和IGFBP-1是预测早产的有效指标,联合应用可最大限度提高诊断符合率。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-3在肝脏组织中的表达及意义

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-3(Insulin-like growth factor binding protein-3,IGF-BP-3)在慢性肝炎、肝硬化及肝癌中的意义.方法收集11例正常肝组织、12例慢性肝炎、16例肝硬化及21例肝癌组织标本及临床资料.采用标记链霉素卵白素生物素(SABC)法,用抗IGFBP-3单克隆抗体(Sigma,14527)行免疫组织化学染色.结果正常对照、慢性肝炎、肝硬化及肝癌肝组织中IGFBP-3的表达阳性率分别为100.00%(11/11),100.00%(12/12),87.50%(14/16)及42.86%(9/21).采用Ridit分析,其IGFBP-3表达强度的R±SR值分别为0.7462±0.0288,0.6589±0.0413,0.5344±0.0610,0.2330±0.0373,R±1.96SR分别为0.6898～0.8026,0.6149～0.7767,0.4148～0.6540,0.159～0.3061.肝癌组织中IGFBP-3的表达强度明显低于肝硬化、慢性肝炎及正常对照肝组织(P＜0.05);肝硬化肝组织明显低于正常肝组织(P＜0.05);而在肝硬化与慢性肝炎肝组织之间,以及慢性肝炎肝组织与正常肝组织之间无显著区别(P＞0.05).结论肝组织中IGFBP-3的表达强度可反映肝功能的损害程度.肝癌组织中IGFBP-3的表达强度显著降低.     

血清胰岛素样生长因子结合蛋白-2水平与消化道恶性肿瘤的关系

目的:探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)与消化道恶性肿瘤发生之间的关系。方法:用酶联免疫吸附试验法测定116例原发消化道恶性肿瘤及21例手术治疗后6周患者血清IGFBP-2的水平,并同步检测血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)-1、2水平,与28例消化道良性疾病和40例健康体检者进行对照比较。结果:原发消化道恶性肿瘤组血清IGFBP-2水平显著高于健康对照组(P<0.01);21例手术治疗后6周患者、消化道良性疾病对照和健康对照之间均无显著性差异。相关分析显示消化道恶性肿瘤患者血清IGFBP-2水平与VEGF、IGF-1、IGF-2呈正相关性(r=0.454,P<0.01;r=0.290,P<0.01;r=0.276,P<0.01)。结论:IGFBP-2为促肿瘤生长因子,可作为消化道恶性肿瘤的检测指标,其对于研究肿瘤发生发展、辅助诊断消化道恶性肿瘤及评价手术治疗效果都具有重要意义。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-5在肝硬化、原发性肝癌患者肝组织和血清中的水平及临床意义

目的观察肝硬化、原发性肝癌患者肝组织和血清中胰岛素样生长因子结合蛋白-5（IGFBP-5）水平,探讨其与肝硬化、原发性肝癌的关系及其临床意义。方法取肝硬化组织、肝癌组织及癌旁正常组织各8例,采用实时RT-PCR技术检测IGFBP-5mRNA的表达水平;取肝硬化（21例）、原发性肝癌（14例）及正常对照者（14例）血清,采用ELISA法检测IGFBP-5水平,分析IGFBP-5在不同分组中水平的差异及其临床意义。结果肝硬化组肝组织中IG-FBP-5mRNA的表达及血清中IGFBP-5水平均较正常对照组降低（P均〈0.05）,与血清中升高的透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）和肝功能无相关性。原发性肝癌组肝组织中IGFBP-5的表达及血清中IGFBP-5水平均高于正常对照组和肝硬化组（P均〈0.05）,与血清中升高的甲胎蛋白（AFP）和肝功能亦无相关性。结论在肝硬化发生后,肝组织表达和合成IGFBP-5减少,与其他细胞因子的调节有关,其可能与HA、LN互补作为诊断早期肝纤维化的一个无创指标;原发性肝癌患者肝组织中IGFBP-5表达增多,血清水平增高,其有可能作为一个潜在的诊断原发性肝癌的检测指标。IGFBP-5与肝硬化、原发性肝癌的关系值得进一步研究。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的 检测胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布及其生物学作用.方法取未孕动情期、真孕及假孕3～6 d小鼠子宫做切片,采用免疫组化SP法检测IGFBP-4在小鼠子宫内膜的表达情况.结果 IGFBP-4在小鼠子宫内膜主要分布于腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞及蜕膜细胞.IGFBP-4在真孕组小鼠子宫内膜于孕3 d出现阳性表达;孕4～5 d中等强度表达;孕6 d表达最强,主要分布于整个蜕膜区细胞.未孕动情期小鼠子宫内膜IGFBP-4呈弱表达.假孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4只在孕5～6 d有微弱表达.真孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4表达明显强于同期假孕组.结论 IGFBP-4在围植入期小鼠子宫内膜持续表达,提示IGFBP-4可能在小鼠胚泡植入过程发挥重要生物学作用.     

宫颈胰岛素样生长因子结合蛋白-1与胎儿纤维连接蛋白的联合检测的临床价值

目的：通过在临床上使用胰岛素样生长因子结合蛋白-1/胎儿纤维连接蛋白检测试剂盒（胶体金法）与国外已上市的同类产品进行对比试验,对试剂盒快速诊断胎膜破裂和妊娠发动的有效性和适用性进行验证。方法招募前来产科就诊的18～40岁、孕周在22周以上（含22周）的孕妇,共开展284例临床试验。结果以进口试剂盒作为标准,国产在诊断胎膜破裂的Kappa一致性为0．9708（P＜0．0001）;在诊断妊娠发动的Kappa一致性为0．9920（P＜0．0001）。结论国产试剂盒在诊断胎膜破裂和妊娠发动方面与进口试剂盒的一致性极高。     

血清胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3与2型糖尿病肾病的关系

目的:测定血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGF-BP3)水平,探讨其与2型糖尿病肾病的关系。方法:选择2型糖尿病患者86例,根据其尿微量白蛋白排泄率(UAER)结果分为单纯糖尿病组(SDM组)33例、早期糖尿病肾病组(EDN组)28例和临床期肾病组(CDN组)25例。检测IGF-1、IGF-BP3、UAER等指标,分析IGF-1、IGF-BP3与糖尿病肾病的发病和病情轻重的关系。结果:CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER均明显高于SDM与EDN组(P <0.01),CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER亦均明显高于EDN组(P <0.01)。 IGF-1与肌酐、尿素氮、UAER和IGF-BP3均呈正相关关系(P <0.01),与年龄和糖化血红蛋白均无相关关系(P >0.05),而与空腹血糖呈负相关关系(P <0.01)。结论:血清IGF-1、IGF-BP3水平与2型糖尿病肾病的发生发展有相关性,可作为糖尿病肾病早期的诊断指标之一。