毫米波对人角质形成细胞基因表达的影响

目的:研究低强度毫米波对人角质形成细胞(HaCaT)基因表达的影响。方法:采用30.16 GHz、强度为1.0和3.5 mW/cm2的毫米波分别每天连续辐照HaCaT细胞30 min。细胞经不同次数辐照后,用基因芯片技术筛选毫米波反应基因,并以RT-PCR验证基因芯片筛选得到的结果。结果:经基因芯片筛选和RT-PCR证实,30.16 GHz、3.5 mW/cm2的毫米波辐照4次后,人角质形成细胞PAR-2、ERGIC-53基因表达明显上调(相对值分别为1.72±0.11 vs 1.24±0.09、1.52±0.21 vs 0.86±0.09,P均<0.01),而经1次毫米波辐照的细胞,均未见上述基因表达上调;30.16GHz、1.0 mW/cm2的毫米波辐照4次后,ERGIC-53基因表达亦明显上调(相对值为1.49±0.19 vs0.84±0.09,P<0.01),而PAR-2基因表达未见明显改变。结论:毫米波辐照影响基因的表达,基因表达的改变与辐照功率密度的大小和次数有关。     

乳宁方药物血清对人乳腺癌细胞基因表达的影响

目的:探讨乳宁方体外抗乳腺癌复发转移的作用机制。方法:SD雌性大鼠,分为乳宁方治疗组、乳宁方拆方温肾方治疗组、乳宁方拆方疏肝活血方治疗组、三苯氧胺(tamoxifen,TAM)治疗组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)治疗组、空白对照组,每组10只,制备含药血清。MDA-MB-435细胞传代培养,分别加入药物血清常规培养,采用体外matrigel细胞侵袭能力实验检测细胞的侵袭能力、实时逆转录聚合酶链反应法检测细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、金属蛋白酶组织抑制物-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)基因表达。结果:CTX治疗组、TAM治疗组、疏肝活血方治疗组血清均可下调MDA-MB-435细胞VEGF基因表达;CTX治疗组、乳宁方治疗组、温肾方治疗组血清可上调MDA-MB-435细胞TIMP-1基因表达,并能下调MMP-9基因表达。结论:乳宁方抑制MDA-MB-435侵袭的作用可能与影响MMP-9/TIMP-1的平衡性,以抑制肿瘤细胞的侵袭和转移有关。     

工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响

目的:采用γH2AX免疫荧光法观察工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响.方法:将人晶状体上皮细胞暴露于0.4 mT、50 Hz工频磁场2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,以0.1 μmol/L的DNA损伤剂4-硝基喹啉-1-氧化物作用1 h作为阳性对照,结束处理后进行γH2AX免疫荧光检测.计算细胞平均焦点数.将细胞平均焦点数及焦点阳性细胞率作为评价细胞DNA双链断裂程度的指标.结果:工频磁场暴露24 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(2.93±0.43)、(27.88±2.59)%,与假辐照组(1.77±0.37)、(19.38±2.70)%相比,差异具有显著性(P<0.05);工频磁场暴露48 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(3.14±0.35)、(31.00±3.44)%,与假辐照组相比,差异具有显著性(P<0.01);而工频磁场暴露2 h分别为(2.11±0.61)、(22.44±5.09)%,6 h分别为(2.18±0.47)、(22.59±3.08)%和12 h分别为(2.35±0.43)、(23.35±2.93)%,与假辐照组比较,差异没有显著性(P>0.05).结论:体外实验表明,0.4 mT工频磁场长时间辐照可以使人晶状体上皮细胞DNA双链断裂增加.     

恒磁场对阿霉素杀伤人乳腺癌细胞的协同作用

目的：观察恒磁场联合阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制.方法：MCF-7细胞经不同浓度的阿霉素和/或恒磁场（10mT）处理24h后,以MTT法检测不同条件下细胞生长受抑制情况; 流式细胞术检测各组细胞周期分布; 荧光显微镜检测细胞内活性氧变化情况; 蛋白电泳检测凋亡相关蛋白Caspase3表达情况.结果：恒磁场可明显增强阿霉素对MCF-7细胞生长的抑制效应（P〈0.01）,更强地抑制细胞DNA合成及有丝分裂（P〈0.05）,促使细胞内活性氧合成,并上调凋亡相关蛋白Caspase-3的表达.结论：恒磁场（10mT）对阿霉素杀伤人乳腺癌细胞具有较强的协同作用.     

紧密连接蛋白claudin-6在人乳腺癌细胞和组织中的表达及其与乳腺癌淋巴结转移的关系

目的：探讨紧密连接蛋白claudin-6在人乳腺癌细胞株、乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系,为判定乳腺癌淋巴结转移及估计预后提供依据。方法：应用RT-PCR和免疫组织化学S-P法,对人乳腺上皮细胞株HBL-100、低侵袭性乳腺癌细胞株MCF-7、高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB231和38例人乳腺癌组织claudin-6的表达进行检测,同时以30例乳腺良性肿瘤作为对照。结果： claudin-6在HBL-100细胞株中有表达,在乳腺癌细胞株MCF-7和 MDA-MB231中均无表达;乳腺癌组织中claudin-6表达明显低于对照组（P<0.05）;claudin-6表达与乳腺癌组织的病理分级及淋巴结转移有关联（P<0.05）,与患者年龄和临床分期无关（P＞0.05）。结论：claudin-6可能在乳腺癌的发生和转移中起一定的负性调控作用,并可作为判断乳腺癌淋巴结转移和估计预后的参考指标。     

乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系

[目的]探讨乳腺癌患者的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因表达及其与化疗疗效的关系.[方法]采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测60例行新辅助化疗CEF方案的女性乳腺癌患者乳腺癌组织的BCRP基因,根据化疗前BCRP基因表达情况,将60例患者分为阳性组及阴性组,比较2组间的疗效,观察BCRP基因表达与化疗疗效的关系.[结果]印例乳腺癌患者中BCRP基因阳性表达17例,阳性表达率为28.3%(17/60).BCRP基因阳性组患者总缓解11例,缓解率(64.7%)明显低于阴性组(93.0%),两组比较差异有显著性意义(P<0.05).[结论]BCRP基因高表达患者采用CEF方案化疗效果较差,BCRP基因的表达水平可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标.     

噪声磁场干预工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的抑制作用

目的:研究噪声磁场与50 Hz正弦工频磁场对原代培养人早孕绒毛滋养细胞分泌功能的影响,探索噪声磁场对工频磁场生物效应的可能干预作用。方法:体外分离、培养人早孕绒毛滋养细胞,以0.4 mT强度的工频磁场、噪声磁场以及工频磁场与噪声磁场叠加的复合磁场分别辐照处理6、12、24、48和72 h,同时设立相应的平行对照组。用电化学发光法测定每组细胞培养液中人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕酮的含量。结果:0.4 mT工频磁场单独暴露72 h,可抑制滋养细胞分泌HCG和孕酮(与空白对照组相比,P<0.05);0.4 mT噪声磁场单独暴露不影响滋养细胞分泌HCG和孕酮(与空白对照组相比,P>0.05);相同强度的噪声磁场与工频磁场叠加后,则可以抵消工频磁场对滋养细胞分泌功能的抑制作用。结论:0.4 mT工频磁场长时间暴露能抑制滋养细胞分泌HCG和孕酮。相同强度的噪声磁场可干预工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的抑制作用。     

吗啡对胶质瘤C6细胞RNA聚合酶Ⅱ通用转录因子F基因表达的影响

目的：检测吗啡对C6胶质瘤细胞RNA合成的影响。 方法：通过RT-PCR方法检测吗啡影响C6胶质瘤细胞RNA聚合酶Ⅱ通用转录因子F(TFⅡF)基因表达的变化。 结果：吗啡作用于C6胶质瘤细胞与相应对照组相比,TFⅡF转录产物均明显减少;纳络酮能阻断吗啡对TFⅡF基因表达抑制的作用。结论：吗啡通过μ受体途径介导C6胶质瘤TFⅡF基因表达抑制的作用。     

12-脂肪氧化酶抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的: 探讨12-脂肪氧化酶(12-LOX)抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其对survivin基因表达的影响。 方法: 对人肝癌细胞株HepG2进行细胞培养，取指数生长期细胞设对照组、12-LOX抑制剂组（baicalein 20、40和80 μmol•L^-1组），加试剂后继续培养72 h。透射电镜观察抑制剂组和对照组细胞形态。RT-PCR法分别检测实验组和对照组肝癌细胞12-LOX mRNA的表达情况。MTT 法检测细胞增殖情况。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。RT-PCR法检测survivinmRNA的表达。结果: 人肝癌细胞株HepG2中存在12-LOX mRNA的明显表达，baicalein干预后，12-LOXmRNA表达量明显减弱。透射电镜下发现，对照组细胞胞核和细胞器亚微结构清晰，核膜完整；而经baicalein处理后，凋亡细胞增多，而且同一电镜切片中可以观察到不同时期的凋亡形态学改变，并可见坏死细胞及细胞碎片。MTT显示大致呈时间-剂量依赖性抑制细胞增殖，细胞存活率随着baicalein给药后时间的延长和给药浓度的增加而逐渐下降(P<0.05)；baicalein 干预后HepG2细胞提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳，可见梯形条带，而对照组未出现梯形条带。12-LOX抑制剂baicalein可降低HepG2细胞中survivin表达，并呈浓度-时间依赖性。结论： 12-LOX抑制剂能诱导人肝癌细胞HepG2的细胞凋亡，其诱导细胞凋亡的机制可能与下调抗凋亡基因survivin的表达有关。     

溪黄草对肝癌HepG2细胞基因表达谱的影响

目的 采用表达谱芯片研究溪黄草水提取物对人肝癌细胞HepG2相关基因的影响,探讨溪黄草水提取物对肝癌作用的可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,加入溪黄草水提取物(9.54 mg/mL)作用24 h后,表达谱芯片检测溪黄草作用后HepG2基因的改变,并用RT-PCR和Western blot验证芯片的结果.结果 相差显微镜下观察,发现与阴性对照组相比,溪黄草水提取物作用后HepG2细胞数量明显减少.表达谱芯片结果显示,溪黄草水提取物(9.54 mg/mL)作用24 h后264个基因比阴性对照组上升2倍以上,194个基因比阴性对照组下降2倍以上.基因本体(GO)和KEGG分析表明溪黄草可上调HepG2细胞DUSPs、IGFBPs家族多个基因,下调MCMs家族多个基因.RT-PCR检测发现与阴性对照组相比,溪黄草处理组DUSP1和IGFBP1升高,FXR和ALDH8A1下降(P＜0.01),与表达谱芯片结果一致.Western blot结果发现溪黄草处理组DUSP1蛋白表达也显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 表达谱芯片研究表明溪黄草可通过调控多种基因而抑制肝癌细胞增殖.     

53例骨髓增生异常综合征患者WT1基因表达与临床相关性研究

目的：探讨WT1基因与骨髓增生异常综合征（MDS）发病和病情进展的关系及临床意义。方法：应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，检测53例MDS患者和10例正常人骨髓中WT1mRNA表达，并进行半定量分析。结果：MDS患者WT1mRNA表达阳性率和表达水平均高于正常对照组。WT1mRNA表达阳性率在MDS-RA和MDS-RAS组，明显低于MDS-RAEB和MDS-RAEB-t组，其表达水平从MDS-RA和MDS-RAS组向MDS-RAEB组和MDS-RAEB-t组逐渐升高。结论：WT1基因表达与MDS病情发展有关。WT1基因与疾病进展关系密切，是临床上对MDS病情的高危评估、预测病情变化和动态监测治疗效果及判断预后的重要指标。     

人黑色素瘤A375细胞中B7-H4表达的实验研究

目的:探讨B7-H4在人黑色素瘤A375细胞中表达及临床意义。方法:体外培养人黑色素瘤A375细胞,倒置显微镜观察细胞形态;采用RT-PCR和Western blot检测B7-H4 mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果:B7-H4 mRNA和蛋白在A375细胞中表达均增高。结论:B7-H4在人黑色素瘤A375细胞中表达升高,可为黑色素瘤的诊断和治疗提供参考。     

甲状腺激素对大鼠解偶联蛋白-2基因表达的影响

目的:探讨甲状腺激素对大鼠骨骼肌组织(SM)、肝组织(LV)和白色脂肪组织(WAT)中解偶联蛋白-2(UCP2)基因表达的影响。方法:正常雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、甲状腺功能亢进(甲亢)组和甲状腺功能低下(甲低)组,应用左旋甲状腺素钠和甲巯咪唑造成大鼠甲亢和甲低状态;用放免法检测血清总T3、T4的浓度;用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SM、LV和WAT中UCP2mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,甲亢组大鼠SM、LV和WAT中UCP2mRNA的水平分别增加了65%、50%和40%,甲低组大鼠SM、LV和WAT中UCP2mRNA的水平分别降低了9%、24%和20%,差异均具有统计学意义,P<0.05。结论:过量甲状腺激素对SM、LV和WAT中UCP2基因的表达具有上调作用,甲状腺激素水平过低则下调SM、LV和WAT中UCP2基因的表达。     

天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其Caspase-3和Caspase-8活化对凋亡的影响

目的:研究天花粉多糖(polysaccharide of snakegourd root)对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用、诱导凋亡的作用以及Caspase-3、Caspase-8活化对凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用;DAPI染色后荧光显微镜进行细胞凋亡核形态学观察;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度比色法测定天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中Caspase-3、Caspase-8活性变化。结果:MTT结果显示,天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用。10.0μmol/L以上浓度的天花粉多糖作用2 d,DAPI染色可见核浓缩及边缘现象,DNA电泳出现特征性的凋亡条带。1.0、5.0、10.0和20.0μmol/L天花粉多糖处理的MCF-7细胞2 d,细胞凋亡率分别为(5.2±1.3)%、(13.1±4.7)%、(27.6±6.8)%和(43.8±9.8)%;10.0μmol/L天花粉多糖处理MCF-7细胞1、2、3 d,Caspase-3活性在2 d达最高(2.32±0.12)U/μg,而Caspase-8活性则在1d达最高(1.92±0.11)U/μg,两者与对照组相比均有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制可能与Caspase-3、Caspase-8活化有关。     

结直肠癌和息肉中Caspase通路上基因表达水平

目的:检测结直肠正常黏膜-结直肠息肉-结直肠癌中Caspase凋亡通路上相关基因的mRNA表达水平,探讨其在结直肠癌发生、发展中的作用.方法:收集了19例结直肠癌患者的肿瘤组织、86例结直肠息肉患者的息肉组织和10例正常对照的结直肠黏膜组织.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT.PCR)测定结直肠正常黏膜、结直肠息肉、结直肠癌中Caspase通路上基因(Caspase-2、-3、-6、-7、-8、-9和.10)的mRNA表达水平.结果:年龄、性别等人口学特征在正常对照、息肉及结直肠癌病例组问分布均衡;与正常黏膜组比较,除Caspase-3在结直肠癌中表达升高外,其它基因mRNA表达均下降,但都没有达到统计学上的显著性水平;此外,除Caspase-9外,这些Caspase基因相互间mRNA表达水平存在显著的的正相关关系.结论:未发现Caspase凋亡通路上相关基因mRNA表达水平在肿瘤形成过程中发生显著变化;Caspase通路上基因相互之间表达水平呈显著相关.     

实时定量反转录-聚合酶链反应检测机械力对人牙周膜细胞骨钙素表达的影响

目的观察周期性牵张力作用下人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化关键基因骨钙素的表达变化,以明确周期性牵张力对HPDLCs成骨分化的诱导作用。方法利用自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的HPDLCs施加12%形变率、0.1Hz周期性牵张力1,2,3,5d,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化基因骨钙素(BGLAP)表达的时序性变化。结果体外培养HPDLCs骨钙素基因表达量极低,加力1、2、3、5d后骨钙素基因表达依次升高,并且在加力5d时表达量明显增高为对照组的71.6倍。结论周期性牵张力可以诱导HPDLCs向成骨方向分化,骨钙素在机械力诱导成骨分化的后期发挥作用。     

FEC化疗方案对p53依赖的凋亡上调调控因子mRNA在乳腺癌中表达的影响

目的研究FEC化疗方案对p53依赖的凋亡上调调控因子（PUMA）mRNA在乳腺癌组织中的表达及其影响。方法选择病理确诊为乳腺癌的癌组织标本30例,设为化疗前组（A组）;A组患者行新辅助化疗后手术过程中所取癌组织标本30例设为化疗后组（B组）;乳腺增生病变20例设为对照组（C组）。采用RT—PCR法检测三组乳腺标本中PUMAmRNA的表达;采用统计学分析A、B、C三组PUMAmRNA的表达特点以及A组30例乳腺癌患者PUMAmRNA的表达和年龄、肿瘤大小、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况等临床病理特征的联系。结果化疗前组（A组）和对照组（C组）组中PUMAmRNA的表达差异无统计学意义,FEC方案化疗后（B组）乳腺癌组织中PUMAmRNA的表达上调。PUMAmRNA的表达和淋巴结转移呈负相关,和其他临床病理特征无显著相关。结论乳腺癌的发生并不是由于PUMA表达的缺失所致。FEC方案通过促进PUMAmRNA表达的上调,从而诱发细胞凋亡的增加,发挥治疗作用。PUMA低表达导致的细胞凋亡减小,可能是乳腺癌侵袭性增加并且发生转移的机制之一。     

端粒酶启动子肿瘤靶向TNF相关凋亡诱导配体基因抗大肠癌细胞HT-29的活性研究

目的：探讨在端粒酶（hTERT）启动子驱动下TRAIL基因在大肠癌细胞HT-29的表达及其杀细胞作用。方法：通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TNF相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因转入大肠癌细胞HT-29，流式细胞仪检测GFP／TRAIL的表达和HT-29细胞凋亡率。结果：端粒酶启动子驱动的GFP／TRAIL基因和CMV启动子驱动的GFP（绿色荧光蛋白）基因在HT-29内的表达率分别达31．4％和67．0％；GFP／TRAIL基因对HT-29细胞的生长抑制率和凋亡率分别达74．2％和25．8％，与PBS和Ad／CMV—GFP比差异都有显著性意义（P〈0．05）。结论：端粒酶启动子驱动的GFP／TRAIL融合基因能在大肠癌细胞中有效表达；TRAIL基因对大肠癌细胞HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用。