转移生长因子β1在牛眼小梁网的表达

目的研究转移生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦ－β１）与开角型青光眼的关系。方法用异硫氰酸胍法提取２４只新生牛眼小梁网的总ＲＮＡ，将ＴＧＦ－β３３质粒导入大肠杆菌ＨＢ１０１中充分扩增、ＢａｍＨＩ酶切后，片段以α－３２－Ｐ－ｄＡＴＰ标记成ｃＤＮＡ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＤＮＡ）探针，ＲＮＡ斑点杂交，放射自显影法观察和测定牛眼小梁网的ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达。结果牛眼小梁网中有ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达。结论房水中的部分ＴＧＦ－β１由小梁细胞分泌。此结果可以作为利用分子生物学手段研究ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的异常合成、活化、清除及与开角型青光眼病理改变间关系的基础。     

转化生长因子β诱导晶状体上皮细胞凋亡

目的 探讨转化生长因子β（ＰＧＦ－β）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 ＭＴＴ法测定细胞经不同浓度ＴＧＦ－β作用后的增殖情况；以ＴＵＮＥＬ技术研究ＴＧＦ－β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 ＴＧＦ－β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖，抑制率高达３５％。原位凋亡测定显示ＴＧＦ－β作用３０ｍｉｎ至８小时可明显诱导晶体上皮细胞凋亡，阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀 以。结论 转化生长     

表皮生长因子对牛眼小梁细胞c—fos基因表达的诱导

目的研究表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）对小梁细胞的作用。方法应用分子杂交技术研究ＥＧＦ对体外培养的牛眼小梁细胞ｃ－ｆｏｓ基因表达的诱导和３Ｈ胸腺核苷酸（３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｉｎｃｏｒｐａｒａｔｉｏｎ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法观察细胞ＤＮＡ的合成。结果小梁细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率随着ＥＧＦ浓度不同而变化，浓度为２０～１５０ｎｇ／ｍｌ时，细胞掺入率随浓度增加升高（Ｐ＜０．０１）。与对照组相比，ＥＧＦ刺激停止生长的小梁细胞０．５小时后，ｃ－ｆｏｓ基因开始表达，１小时后达高峰，至２小时后消失。不同浓度ＥＧＦ刺激小梁细胞１小时后，ｃ－ｆｏｓ基因表达呈浓度依赖性。结论实验结果表明ＥＧＦ刺激小梁细胞增殖或进入生长状态，可能与ｃ－ｆｏｓ基因产物的信号传递作用有关。     

人眼小梁细胞体外表达表皮生长因子mRNA和表皮生长因子受体

目的 了解培养的小梁细胞分泌表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＥＧＦ）及细胞膜上表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ）的情况。方法 进行人眼小梁细胞体外培养。用ＥＧＦ ｃＤＡＮ探针,α＾－３２ｐ同位素标记及斑点杂交放射自显影法,检测小梁细胞分泌ＥＧＦｍＲＮＡ的情况。结果 人眼小梁细胞体外培养成功。免疫组化染色显示小     

5－氟尿嘧啶对体外培养牛眼小梁细胞的毒性研究

目的探讨５－氟尿嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，５－Ｆｕ）在临床应用中对小梁细胞的毒性损伤。方法在体外培养牛眼小梁细胞，从细胞的形态、结构、生存及吞噬功能等方面观察５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的影响。结果５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的安全浓度为１×１０－６ｇｍｌ－１。结论结合５－Ｆｕ在兔眼前房的药代动力学研究资料，推论目前在人眼应用的剂量，不致对小梁细胞造成损伤。     

性激素受体在牛眼小梁细胞中的表达

目的了解牛眼小梁组织是否会表达性激素受体。方法体外培养新生牛眼小梁细胞，传至3代。用逆转录聚合酶链反应的方法检测牛眼小梁组织中性激素受体蛋白mRNAs(AR，EPα和PR)的表达，用免疫组织化学技术来定位这些受体。结果体外培养细胞符合牛眼小梁细胞的特点。RT-PCR检测到这些受体的mRNAs，AR、ER、PR免疫组化染色结果呈阳性。结论牛眼小梁细胞有性激素受体表达，这些受体在房水排除及青光眼发生方面可能有重要的病理生理学意义。     

转化生长因子β1对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和MMP9表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对培养的牛眼小梁细胞基质金属蛋白酶（MMPs)的影响。房水引流阻力在原发性开角型青光眼（POAG）发病机制中的作用。方法 对牛眼小梁细胞进行体外原代及传代培养，对传三代小梁细胞分别施加含TGF-β1终浓度为0、0.5,1,5ng/ml的培养液，48h后行MMP3及MM农艺师免疫组人SP法染色。结果进行计算机图像分析并行统计学检验。结果 体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3及MMP9，TGF-β1可抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达。结论 TGF-β1在一定范围内抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达，造成小梁网ECM的异常堆积，导致房水引流阻力增高。     

异搏定对培养角膜基质细胞分泌转移生长因子—β1的影响

目的 探讨异搏定对体外培养兔角膜基质细胞分泌ＴＧＦ－β１的影响。为预防或减轻ＰＲＫ后混浊形成提供线索。方法 将传代细胞，在加药培养后４８ｈ，应用ＴＧＦ－β１Ｆｍａｘ＾ＴＭＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ试剂盒和培养上清中ＴＧＦ－β１含量进行检测，根据标准曲线分别计算出各孔ＴＧＦ－β１的浓度。结果 Ｖｅｒａｐａｍｉｌ浓度５μｇ／ｍｌ和１０μｇ／ｍｌ，作用４８ｈ，培养上清中ＴＧＦ－μ１含量明显降低。     

转化生长因子-β1诱导培养的人眼小梁细胞产生弹性蛋白的实验研究

目的 了解转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）诱导培养培养的人眼小梁细胞产生的弹性蛋白。探讨房水引流阻力在原发性开角型青光眼（ｐｒｉｍａｒｙ ｏｐｅｎ ａｎｇｌｅ ｇｌａｕｃｏｍａ,ＰＯＡＧ）的病因和发病机制中的应用。方法 小梁网来源于除眼部疾患外的各种原因死亡的６岁以下儿童,在２４ｈ内取才于６例（１２只眼）正常眼球。人眼小梁细胞原代和传代     

5—氟尿嘧啶对体外培养牛眼小梁的细胞的毒性研究

目的探讨５－氟尿嘧啶在临床应用中对小梁细胞的毒性损伤。方法在体外增减牛眼小梁细胞，从细胞的形态、结构、自下而上了及吞噬功能等方面观察５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的影响。结果５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的安全浓度为１×１０＾－６ｇ．ｍｌ＾－１。结论结合５－Ｆｕ在兔眼前房的药代动力学研究资料，推论目前在人眼应用的剂量，不致对小鼠细胞造成损伤。     

MTT法检测转化生长因子—β对人角膜基质

目的 探讨转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对体外培养的人角膜基质细胞增殖的影响。方法 体外培养的传２～３代人角膜基质细胞,分别加入０．０１,０．１,１,５ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β,采用ＭＴＴ法研究ＴＧＦ－β对人角膜基质细胞增殖的影响。结果 ＴＧＦ－β以剂量依赖方式促进人角膜基质细胞增殖,其作用在第２天达到高峰。结论 ＴＧＦ－β能明显促进人角膜基质细胞增殖,因而可能成为促进角膜溃疡愈合的新方法。     

体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子—β2

目的：了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子－β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)，以确定TGF-β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法：一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA，利用RT－PCR检测TGF－β2的m RNA, 用双链测序鉴定PCR产物，并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF－β2蛋白的表达。结果：RT－PCR扩增得到的单一产物，其序列与已知序列完全一致。TGF－β2免疫组化染色呈阳性。结论：小梁细胞自身产生的TGF－β2，是小梁网局部微环境和房水中TGF－β2的来源之一，TGF－β2不仅通过旁分泌式，也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF－β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关，值得进一步研究。     

嘌呤受体P2X7在人眼小梁网细胞上的表达及分布

目的　探讨嘌呤受体Ｐ２Ｘ７在体外培养正常人眼小梁网细胞上的表达及分布。方法　体外培养、鉴定正常人眼小梁网细胞,利用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和免疫荧光法分别检测正常人眼小梁网细胞上Ｐ２Ｘ７受体ｍＲＮＡ和蛋白的表达情况及受体蛋白的主要分布部位。结果　光镜下观察原代培养的细胞具有人眼小梁网细胞的典型形态;免疫组织化学方法检测结果表明,培养的细胞纤维连接蛋白、层粘连蛋白、神经元特异性烯醇化酶及波形蛋白染色阳性,第Ⅷ因子染色阴性,鉴定为人眼小梁网细胞;ＲＴ－ＰＣＲ扩增到了Ｐ２Ｘ７ｍＲＮＡ１５２ｂｐ大小的基因片段,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ得到了相对分子质量约为７４０００的Ｐ２Ｘ７的蛋白条带,免疫荧光法证实Ｐ２Ｘ７受体在小梁网细胞膜、细胞质及细胞核内均有广泛分布。结论　人眼小梁网细胞上有Ｐ２Ｘ７受体表达,其在细胞内分布广泛。     

转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究

目的　本研究探讨转化生长因子-β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ-β）体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓ-ｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）的表达。方法　原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,ＭＴＴ法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入２０ｎｇ·ｍＬ－１ ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３,分别于１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ检测α-ＳＭＡｍＲＮＡ,Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果　与对照组相比,ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）,其中ＴＧＦ-β１促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强（Ｐ＜０．０５）;ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３均增加α-ＳＭＡ的表达（均为Ｐ＜０．００１）,ＴＧＦ-β３促进α-ＳＭＡ表达作用最强（Ｐ＜０．００１）。结论　ＴＧＦ-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。     

转化生长因子β及其对晶体上皮细胞的作用

本文综述转化生长因子β（ＴＧＦ－β）在细胞中的表达和激活过程，ＴＧＦ－β具有的生物学功能，及其在眼内不同细胞的分布。特别介绍了ＴＮＦ－β对晶体上皮细胞的作用。     

转化生长因子-β1对培养的人眼小梁细胞微丝肌动蛋白的影响

目的 了解转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）对培养的人眼小梁细胞微丝肌动蛋白的影响,探讨房水引流阻力在原发性开角型青光眼（ｐｒｉｍａｒｙｏｐｅｎａｎｇｌｅｇｌａｕｃｏｍａ,ＰＯＡＧ）的病因和发病机制中的作用。方法 小梁网来源于除眼部疾病患以外的各种原因死 ６岁以下儿童,在２３４ｈ内取材于３４例６７８只正常眼球,用各相对质量浓度的ＴＧＦ－β１有     

人眼小梁细胞的体外培养与细胞骨架和细胞连接的研究

目的建立体外培养的人小梁(human trabecular meshwork,HTM)细胞,并观察小梁细胞细胞骨架与细胞连接的形态学特征。方法体外培养的HTM细胞传代后,免疫组化方法鉴定,电镜观察小梁细胞的超微结构,激光共聚焦显微镜观察actin、vinculin、β-catenin的表达。结果通过光镜、透射电镜、扫描电镜和免疫组化的方法证实体外培养的细胞为人眼小梁细胞。人眼小梁细胞的细胞骨架与细胞连接丰富。结论体外培养的小梁细胞细胞骨架结构明显,证明该细胞有收缩能力;β-连接素与纽蛋白着染明显,说明体外培养的小梁细胞,其细胞与细胞间、细胞与细胞基质间的连接仍具有活体小梁细胞的特性。     

牛眼小梁网细胞体外培养及吞噬功能的研究

目的研究小梁细胞吞噬功能异常在青光眼发病中的作用。方法利用牛眼分离小梁网组织，进行小梁细胞体外培养；应用乳胶微球为标记物，定性及定量观察体外培养的牛小梁细胞吞噬功能及其影响因素。结果免疫组织化学染色证实牛小梁细胞能分泌纤维连接蛋白和层连蛋白。在体外，牛小梁细胞对乳胶微球有较强的吞噬能力。细胞吞噬乳胶微球的数目随培养时间的延长而增多，培养至２４小时，平均每个细胞含４０．５±６．７个微球，细胞在吞噬过程中出现明显的形态学改变，同时也伴有自身损伤，甚至死亡。肾上腺素及可的松抑制小梁细胞的吞噬功能（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦ对细胞吞噬作用无影响。结论小梁细胞的吞噬功能对保持房水流出道通畅起重要作用，小梁细胞的吞噬功能异常可能参与原发性开角型青光眼的发病过程。