二氯化钴化学诱导乏氧对人A549细胞株增殖和凋亡的研究

目的 探讨不同浓度CoCl2诱导乏氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖、缺氧诱导因子-1α mRNA (HIF-1αmRNA)表达变化及诱导凋亡作用.方法 对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟乏氧培养,采用MTT法检测乏氧对A549细胞增殖的影响.实时荧光定量PCR法测定不同浓度CoCl2诱导乏氧HIF-1α mRNA表达水平的变化.Annexin V-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测不同浓度CoCl2诱导乏氧时A549细胞凋亡情况.结果 CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间和剂量依赖性抑制作用.常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α mRNA的表达,随着CoCl2浓度的增加,HIF-1α mRNA水平呈上升趋势,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=195.414,P=0.000).流式细胞仪检测结果显示,正常对照组,50,100,200,400 μmol/L CoCl2不同浓度组A549细胞凋亡率分别为1.97％±0.40％,3.97％±0.15％,6.93％±0.29％,12.97％±0.45％和15.80％±1.37％,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=220.209,P=0.000).结论 CoCl2对肿瘤细胞的增殖凋亡的影响呈浓度依赖性,进行化学模拟低氧时,要考虑CoCl2的作用浓度.     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

外源CC10基因对肺腺癌A549细胞细胞周期蛋白D1 mRNA表达的影响

目的:研究外源性CC10基因对肺腺癌A549细胞细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及其mRNA表达的影响。方法:用脂质体法将抑癌基因CC10转染到人肺腺癌细胞A549中8、16、24、32、48h后,用Western blot法观察CC10蛋白表达,观察细胞生长细胞克隆形成,用流式细胞仪观察细胞周期变化,用RT-PCR检测周期蛋白CyclinD1 mRNA的影响。结果:转染外源CC10基因对A549细胞生长具有抑制作用,细胞生长阻止于G0/G1期,CyclinD1 mRNA表达明显降低。结论:转染外源CC10基因对肺癌细胞G0/G1周期的抑制作用可能与CyclinD1基因表达下调有关。     

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

HIF-2α表达对低氧环境下胃癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达对人胃癌细胞株BGC823低氧状态下细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法利用氯化钴诱导的人胃癌细胞株BGC823作为研究对象,构建HIF-2α小干扰RNA(siRNA)特异性载体,转染低氧环境下的BGC823细胞,采用RT-PCR和免疫印迹法(Western blot)分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA和蛋白表达,CCK-8法检测转染前后BGC823细胞增殖情况,流式细胞术检测转染前后BGC823细胞凋亡和细胞周期分布情况。结果低氧诱导下,BGC823细胞HIF-2α表达显著增多。低氧环境下,特异性转染HIF-2αsiRNA于BGC823细胞后,HIF-2αmRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制,细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G2期细胞比例升高(P<0.05)。结论低氧环境下BGC823细胞表达HIF-2α增多,通过特异性HIF-2αsiRNA下调低氧环境下BGC823细胞中HIF-2α基因表达,能够抑制BGC823细胞增殖,改变细胞周期分布并诱导其凋亡,为胃癌分子靶向治疗提供新的证据。     

缺氧对人胃癌细胞的细胞周期调控及己糖激酶Ⅱ表达的影响研究

目的 探讨缺氧对人胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期调控机制及对乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶Ⅱ(HK Ⅱ)表达的影响.方法 人胃癌细胞株SGC-7901分成3组:缺氧12 h组、缺氧24 h组及对照组.缺氧组分别在缺氧条件下(37℃、5%CO2、2.0%O2饱和度)培养12 h和24 h,对照组置于正常氧浓度条件下(37℃、5%CO2、21%O2饱和度)培养24 h.流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达,荧光定量PCR法检测HK Ⅱ mRNA表达量.结果 缺氧情况下细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,缺氧12 h组、缺氧24 h组的G0/G1期比例显著高于对照组(P＜0.05);HIF-1α和HK Ⅱ在两组缺氧组与对照组比较,其表达量明显增加(P＜0.05),缺氧24 h组与缺氧12 h组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺氧导致细胞阻滞在G0/G1期,HIF-1α可刺激人胃癌细胞HK Ⅱ表达的增加,以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗胃癌的重要新方法.     

热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP作用及其机制的实验研究

目的 观察热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP的影响及其机制，为临床上应用热化疗联合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法 CCK-8法检测A549、不同温度下A549／DDP细胞对顺铂的敏感性；流式细胞仪分析热疗对A549／DDP细胞周期分布的影响；RT-PCR检测热疗对A549／DDP细胞ERCC1表达的影响。结果 亲代人肺腺癌细胞株A549对顺铂的敏感性明显高于耐药细胞株ASg9／DDP，不同温度加热后A549／DDP细胞对顺铂的敏感性均有提高；热疗尤其是热化疗后G2／M期细胞明显增多，G0／G1期细胞明显减少（P〈0．01）；热疗后A549／DDP细胞ERCC1mRNA表达未见明显改变。结论 热疗能提高人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP对顺铂的敏感性，热化疗具有协同作用。热化疗协同作用机制可能主要是诱导细胞周期阻滞，抑制细胞增殖，和DNA修复基因ERCC无直接相关性。     

奥沙利铂诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡机制的实验研究

本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT—PCR检测Bcl-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达量的变化,Western blot检测Bcl-2蛋白表达量变化。结果表明,奥沙利铂可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．979）和浓度（r=0．949）依赖性增强;24h后在光学显微镜下可见奥沙利铂组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,体积变小,细胞碎片增多,可见凋亡细胞;48h电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,奥沙利铂组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用24h后,骨髓瘤细胞被阻滞于S期（P〈0．05）;而作用48h后G0／G1期细胞所占比例明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用48h,细胞既l-2mRNA与Bcl-2蛋白表达量未见明显变化,caspase-8及caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：奥沙利铂可诱导RPMI8226细胞凋亡,其机制可能与其将细胞阻滞于S期,上调caspase-8、caspase-3mRNA表达有关;奥沙利铂诱导RPMI8226细胞凋亡可能不通过调节bcl-2基因表达实现。     

低氧诱导因子-1α在大鼠心肌梗死中的表达及其意义

目的：观察低氧诱导因子-1α（HIF1α）在梗死心肌中mRNA表达水平的变化。方法：结扎SD大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗死模型。36只大鼠随机分为对照组（6只）和模型组（30只），模型组于冠状动脉结扎后24h、48～72h和1周时分别取左心室心肌梗死区及非梗死区组织．用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HIF—1α mRNA的表达。结果：模型组不同时间点HIF-1α在梗死区心肌中mRNA表达水平均明显升高，且与非梗死区心肌比较差异均有显著性（P均〈0．01），在缺血l周内持续在高水平，模型组非梗死区域心肌组织与对照组HIF-1α mRNA水平比较差异无显著性（P均〉0．05）。结论：HIF1α mRNA在心肌梗死区的高表达是心肌对缺血和缺氧导致心肌坏死的一种分子水平的反应。     

Human mononuclear cell modulation of endothelial cell proliferation

Endothelial cell proliferation is a histologic characteristic of several forms of nephritis characterized by infiltration of the glomerulus with mononuclear cells. To investigate the mechanism mediating this event, human endothelial cells isolated from umbilical veins and cultured in vitro were incubated with supernatants of cultured human mononuclear cells. Supernatants from mononuclear cells exerted a dose-dependent stimulatory effect on endothelial cell proliferation. The stimulatory effect of supernatant was almost entirely removed by prior depletion of mononuclear cells of monocytes by adherence, suggesting that a monocyte product was responsible for the activity. To investigate the nature of the ligand responsible, partially purified human interleukin I added to endothelial cell cultures was found to stimulate cellular proliferation.     

胰岛细胞移植过程中细胞受损的提示

背景:胰岛移植后可能发生有害的组织不相容性反应,影响细胞的存活及功能.目的:探讨胰岛细胞移植中早期胰岛细胞的损害程度及原因.方法:采用脑死亡自愿捐赠器官供者的胰腺,采用胶原酶P进行消化分离胰岛细胞,测定不同冷缺血时间下胰岛细胞损害程度.将胰岛细胞与血液进行分组培养,HLA匹配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素:错配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素;对照组:受者伞血+RPMI1640.观察移植早期可能出现的胰岛细胞损害.结果与结论:胰腺切取顺利,在冷缺血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,超过8 h活性胰岛细胞数量只有19%甚至更低.人胰岛暴露于未经抗凝的人血液中,胰岛将诱发一个迅速血细胞消耗.血小板、中性粒细胞和单核细胞计数显示,无论HLA错配还是匹配与对照组相比较血细胞都发牛明显的消耗:加入肝素后HLA错配组及HLA匹配组血细胞消耗反应明显减轻;HLA匹配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量高丁HLA错配组(P<0.05),说明良好组织相容性有利于胰岛细胞存活.结果提示冷缺血时间对胰岛细胞活性的影响很大,在冷缺血时间小于5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞移植的胰腺获取;移植到血液的胰岛细胞会有普遍性的炎症性损害及HLA相关性损害.     

Clear cell renal cell carcinoma

Clear cell RCC is the most common type of RCC that occurs in adults. It has the worst prognosis among the common epithelial tumors of the kidney. Histologically, a wide range of morphologic patterns can be encountered. Those cases with a multi-locular cystic architecture are considered to be a distinct subtype because of the clinicopathologic features.     

Tumor cell growth and cell kinetics

Cancer cells differ from normal cells in many ways, but most importantly by not responding to normal growth-control mechanisms. Whereas the growth and division of normal cells is carefully regulated to meet the needs of the body, tumor cells proliferate autonomously and continually, eventually interfering with and destroying the functions of normal tissue. Knowledge of molecular cell biology has grown exponentially over the last decade. Yet much remains to be understood before there can be a significant impact on our ability to design more effective therapeutic strategies for cancer patients, thereby decreasing mortality.     

急性白血病细胞粘附分子的表达

目的：探讨细胞粘附分子基因在急性白血病的发生和髓外浸润中的作用。方法：运用基因芯片和逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测了25例急性白血病神经细胞粘附分子（NCAM）基因、细胞间粘附分子－1（ICAM－1）基因、血管细胞粘附分子－1（VCAM－1）基因的表达。结果：NCAM、ICAM－1、VCAM－1基因在急性白血病表达显著增高，并且有白血病细胞浸润患者粘附分子的基因表达高于无浸润患者，基因芯片检测结果与RT－PCR结果相同。结论：基因芯片能够为急性白血病的相关基因分析提供特异和可靠的数据。急性白血病的发病和浸润机制可能与骨髓细胞中粘附分子表达升高有关。     

嗅鞘细胞诱导树突状细胞成熟的作用研究

目的体外研究嗅鞘细胞(OEC)调节树突状细胞(DC)成熟的作用。方法从流产人胚胎和健康志愿者外周血浓缩白细胞中分别培养OEC和DC。使用DMEM/F-12(5%FBS)培养基,在24孔板中进行10~3OEC、10~3OEC+10~5DC共培养、10~3OEC/10~5DC分室培养、10~5DC或者10~5DC+1μg/mL LPS。在37℃,5%CO_2条件下孵育,48 h后,分别收集培养上清液和DC,用ELISA试剂检测上清中的TNF-α和IL-12p40的含量,流式细胞仪检测DC成熟的表面标志物CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达水平。结果经过10~(-5)mol/L的阿糖胞苷筛选培养12 d,NGFRp75免疫荧光检测表明OEC纯度达到90%以上,RT-PCR检测OEC表达NGF、BDNF、GDNF。OEC作用于DC能够增强DC分泌TNF-α和IL-12p40的表达,DC成熟表面标志物CD40、CD80、CD86和HLA-DR表达增加;同时,细胞因子和成熟表面标志物在分室培养中表达量增加更为显著。结论 OEC体外可诱导DC的成熟,且这种作用为非细胞接触的作用而是OEC通过分泌的可溶性分子作用结果。     

Basal cell and squamous cell carcinoma

OBJECTIVES: To describe the clinical and histologic subtypes, pathophysiology, recognition, and treatment options for basal cell and squamous cell carcinoma, and the molecular biology of sunlight-induced carcinogenesis. DATA SOURCES: Journal and review articles, research studies, textbooks, and clinical practice. CONCLUSIONS: Basal cell and squamous cell carcinoma will occur in more than one million cases annually in the United States, and are highly curable when detected and treated early. During the last decade, significant progress has been made in elucidating the molecular basis of skin carcinogenesis and in identifying newer approaches for the management and treatment of these keratinocyte cancers. IMPLICATIONS FOR NURSING PRACTICE: Nurses can play crucial roles in decreasing the morbidity and mortality from the skin cancer epidemic by identifying and referring patients with lesions suspicious for basal cell and squamous cell carcinomas.     

White cell related red cell antibodies

Occasional sera react weakly with a few red cells in the antiglobulin phase but without a recognizable pattern. We sought to identify the nature of such antibodies in 27 samples referred to our HLA laboratory for lymphocytotoxin testing. All samples were tested against a panel of 15 red cells by a capillary tube antiglobulin technique developed to conserve sera. This technique correlates well with tube antiglobulin tests, and can be performed with either fresh or thawed red cells. Of 27 sera, 14 contained anti-HLA B7, B17, or A28, since they reacted only with red cells from donors whose lymphocytes were B7, B17, or A28. Eight further sera probably contained anti-B7, -B17, or -A28, but reacted with one or two additional red cells. Two samples agglutinated all panel red cells so the presence of anti-B7, B17, or A28 could not be determined. In three additional sera, lymphocytotoxin testing suggested that specificity other than anti-B7, B17, or A28 was present. Of 27 sera containing weak unidentified red cell antibodies, 22 (81%) contain definite or probable anti-B7, -B17, or -A28. The identity of these troublesome antibodies can be determined by maintaining red cell panels of donors whose HLA phenotypes are known.