人与大小鼠精子中精蛋白mRNA的分析

目的 :研究人与大小鼠精子中精蛋白 m RAN存在情况。方法 :应用 RT-PCR法分别从人、大鼠和小鼠精子总 RNA中扩增得到精蛋白 (protamine) c DNA片段。结果 :人、大鼠和小鼠精子中均存在精蛋白基因相应的 m RNA,并发现头部畸形率高的精子中精蛋白 m RNA明显减少。结论 :精子的 m RNA有可能代表精子发生过程中某些基因的表达情况     

雷公藤单体T4对大鼠变态期精子细胞核蛋白转换的影响

大鼠喂服雷公藤单体Ｔ４７周后，取睾丸分离长形精子细胞核，取附睾分离精子核，提取总碱性核蛋白（ＴＮＢＰ），经电泳扫描后分析，发现长形精子细胞核ＴＨ／ＲＰ（总组蛋白／大鼠精核蛋白）比值升高，糖核蛋白含量下降，附睾精子核碱性蛋白也发生类似的改变，表明睾丸变态期精子细胞组蛋白一精核蛋白取代反应受阻，进而导致附睾精子核蛋白异常，这可能是Ｔ４导致大鼠不育的重要原因。文中还对精核蛋白与生育力的关系予以讨论。     

自发雄性不育近交系MIJ大鼠形态学特征观察

目的:了解本实验室培育的自发雄性不育近交系MIJ大鼠的形态学特征。方法:分别取1月龄、2月龄、3月龄不育大鼠(不育组,A组)、近交系内正常大鼠(系内正常组,B组)、正常雄性Wistar大鼠(正常对照组,C组),观察生长发育情况,常规方法制备病理切片,观察睾丸、附睾等器官组织学变化;取骨髓,常规方法染色体制片,G显带,进行染色体分析。结果:不育组大鼠体重增长速度稍慢,生殖器官发育迟缓;1月龄时腹腔内隐睾;睾丸下降时间、精索长度、睾丸引带长度、睾丸系数、附睾系数均明显落后于其他二组;且睾丸生精上皮发育不全,附睾内精子数量明显减少;但染色体形态及数目均正常,未观察到畸变。结论:自发雄性不育近交系MIJ大鼠呈睾丸下降延迟、睾丸发育不全、少精等特征,可以作为人类男性不育研究的良好动物模型。     

氯化镉对大鼠附睾结构及精子的影响

目的:探讨氯化镉(CdCl2)对大鼠附睾组织学和附睾精子参数的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机均分为对照组与3个实验组,每组5只动物。实验组分别腹腔注射CdCl2 0.2mg/kg(低剂量组),0.4mg/kg(中剂量组)和0.8mg/kg(高剂量组)×14d,对照组注射等量生理盐水。观察附睾上皮的组织学改变和附睾精子参数变化。结果:低剂量组的附睾上皮未见明显组织学病理改变。随着Cd2+剂量增加,实验组附睾主细胞的胞质疏松明显,胞内空泡化程度加大,核染色质边聚,静纤毛缩短,附睾管腔内的精子明显减少,多见降解的生精细胞。3个剂量组的精子存活率、精子活动率、精子浓度和正常形态精子率均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CdCl2染毒可导致大鼠附睾组织学损伤性改变,附睾精子参数显著降低,且损伤呈剂量效应。     

弱精不育与正常精子蛋白质的双向电泳研究

目的:检测人类正常精子与弱精不育精子的差异表达蛋白质。方法:用2-DE-IPG-DALT技术对36例弱精不育与10例正常精子总蛋白进行分离,银染后,切取2个在患者中不表达的差异蛋白质点进行质谱鉴定。结果:成功建立了弱精不育与正常精子总蛋白的双向电泳图谱,经图像分析显示,弱精不育精子中高丰度表达而正常样本中缺失或表达下调的27个蛋白点,正常精子中存在而在弱精不育精子中缺失或低表达的37个点。并对C35和C37这2个差异蛋白质进行了质谱鉴定。结论:差异蛋白与弱精不育相关。     

亚慢性口服氯化镉对成年大鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨亚慢性口服氯化镉(CdCl2)对成年SD大鼠睾丸生精功能的影响。方法:将SD大鼠分成8组,每组6只,分别喂含Cd2+0mg/kg(A组),8mg/kg(B组),40mg/kg(C组),200mg/kg(D组)的全价鼠粮1个月,及含Cd2+0mg/kg(E组),8mg/kg(F组),40mg/kg(G组),200mg/kg(H组)的全价鼠粮2个月。采用光镜和透射电镜观察睾丸生精上皮的组织学和细胞学变化,以精子常规参数来评价精子品质的改变。结果:光镜观察见D组和H组曲细精管初级精母细胞层与精原细胞层之间发生分离,局限性生精上皮脱落;H组生精上皮细胞层次减少。透射电镜观察到D组支持细胞胞质电子密度减小,残余小体增多,精原细胞核固缩,胞质内出现空泡。H组还出现曲细精管界膜内陷,支持细胞次级溶酶体、脂滴和残余小体增多,精子尾部中段外周致密纤维及外周微管部分缺失。D组体重增长值、睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量与A组相比明显减少(P<0.05)。G和H组睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量明显少于E组(P<0.01)。睾丸每日精子生成量、附睾尾精子量与染Cd2+剂量呈明显负相关关系(P<0.001)。H组与E组相比,体重增长下降,睾丸水肿,精子存活率、活动率和精子正常形态率下降,精子畸形指数上升(P<0.05)。结论:亚慢性口服CdCl2可造成成年大鼠睾丸生精上皮损伤,生精功能下降,损伤具有?     

不育男性精子及精浆中乳酸脱氢酶C_4同功酶活性的研究

本文测定了97例正常及不育男性精子及精浆中的乳酸脱氢酶C_4同功酶(LDH-C_4)活性。精浆/精子中该同功酶活性的比值在正常对照、精液常规正常而不育(不育Ⅰ组)、精液常规不正常的不育(不育Ⅱ组)和少精症组中依次为0.528,0.880,2.85和4.01(中位数值)。各不育组与对照组间均差异显著(P<0.005及P<0.0005)。以mU/10~6精子表示时,不育Ⅰ和Ⅱ组精浆中的LDH-C_4活性大于正常男性;精子中的活性则小于正常男性(P<0.005及P<0.0005)。此外,精子中LDH总活性与LDH-C_4活性之间有良好的正相关(r=0.9593)。     

不明原因的不育男性精子核碱性蛋白组型的电泳分析

本研究从15例正常生育力男性和37例不育男性的射出精子中提取核碱性蛋白,在酸性尿素系统聚丙酰胺凝胶中电泳,经微显像测密仪扫描获得各蛋白区带(组蛋白和HP1～3)的相对含量,并计算各蛋白条带的相对比值.实验结果表明:与正常生育力男性相比,不育组男性精子的TH(total histones)/HP1～3比值增高(P<0.01);而HP2+3/HP1比值降低(P<0.01).基于TH/HP1～3和HP2+3/HP1比值的分折,这些不育男性精子的核碱性蛋白组型可分为四种:1.TH/HP1～3比值较高,同时伴有较低的HP2十3/HP1比值;2.TH/HP1～3比值较高,而HP2+3/HP1比值正常;3,TH/HP1～3比值正常,而HP2十3/HP1比值较低;4.正常的TH/HP1～3和HP2十3/HP1比值.作者认为前三种异常的核蛋白组型可能与不育有关.     

雷公藤多甙对大鼠生精细胞及其酶活性的影响

本文连续观察了雄性大鼠服用雷公藤多甙(GTW)30至80d 后睾丸、附睾细胞形态学改变及睾丸 ACP、ALP、3β-HSD、睾丸和附睾生精细胞 LDH-C_4活性的变化;同时注意了药物抗生育作用的可逆性。结果表明:附睾精子先于睾丸生精细胞发生质和量的变化;支持细胞 ACP 活性有增强趋势;睾丸 ALP,LDH-C_4酶活性相对减弱,为生精细胞损伤的结果;用药80d 时,3β-HSD 活性则明显减弱。结果还提示 GTW 引起的不育似有恢复的可能。     

整合素配体玻连蛋白在人精子的表达及其与受精的关系

目的 :进一步研究整合素配体玻连蛋白 (Vn)在人精子的表达及其与受精的关系。方法 :选用 1 4例生育力正常的成年男性及 8例精液常规分析正常的不明原因不育男性患者的精液标本 ,液化后提取上游精子。精子体外获能后用兔抗人 Vn多克隆抗体及羊抗兔 Ig G-FITC行免疫染色。然后用流式细胞仪计数 Vn表达阳性精子百分数。部分获能精子同时与去透明带金黄地鼠卵行异种体外受精 (SPA)以检测其受精力 ,比较两组获能精子表面Vn表达阳性精子百分率及受精率差异并分析受精率与 Vn表达阳性的获能精子百分数之间的相关性。结果 :生育组与不育组获能精子 Vn表达水平分别为 2 1 .2 4± 1 1 .70 %与3.6 4± 3.2 7% ,不育组明显低于生育组 (P<0 .0 5)。生育组受精率大于 1 0 % ,不育组受精率小于 1 0 % ,符合划分生育力正常与异常的标准。所有标本 Vn表达阳性的获能精子百分率与精子受精率间具有相关性 (r=0 .476 )。结论 :人获能精子表面存在一定水平的整合素配体玻连蛋白表达 ;Vn参与受精过程 ;Vn表达异常可能与一些不明原因的不育有关     

不育症患者精子X,Y及18染色体的荧光原位杂交分析

目的:分析不育症患者精子X,Y,18染色体的荧光原位杂交情况。方法:在男性不育症组中,2例无精子症患者从附睾抽吸获取精子、3例从睾丸获取精子、2例严重少精症患者从射出精液中找到精子。选择5例正常射出精液者作为对照组。应用荧光原位杂交法(FISH)检查精子X,Y以及18号染色体,比较两组精子染色体非整倍体的发生率。结果:不育症组睾丸精子、附睾精子的非整倍体率无差别,但不育症组精子与正常男性组精子比较,非整倍体总发生率、性染色体二体性率及缺对染色体率明显增高(2.8％vs0.58％,0.81％vs 0.19％,2.1％vs0.37％),P<0.001。结论:无精子症与严重少精子症患者的精子比正常精子具有更高的染色体非整倍体率,需要进行大样本的研究,为不育症患者的治疗和遗传咨询提供有效的证据。     

雷公藤单体(TW_(19))雄性抗生育活性的研究

雷公藤单体(TW_(19))系从雷公藤中分离、提纯出的一个二萜类化合物,本实验观察其对雄性大鼠抗生育作用及可能机理.TW_(19)(400μg/kg·d)给药三周后无抗生育作用,五周后生育力丧失,附睾尾部精子活力和密度明显降低,畸形率升高,附睾重量减轻,但对附睾上皮的形态变化无明显影响,管腔内可见畸形精子及脱落生精细胞.附睾尾部液中肉毒碱含量,给药组较对照组显著降低.TW_(19)对附睾头部α-糖苷酶和酸性磷酸酶含量没有明显影响;对生精上皮影响轻微,各期曲细精管基本正常,少数表现出精子细胞轻度损伤;TW_(19)可使睾丸重量减轻,并可显著降低睾丸透明质酸酶含量,但对睾丸乳酸脱氢酶-C_4没有明显抑制作用;对前列腺、储精囊等附属性腺器官重量没有影响.结论:TW_(19)对雄性大鼠具有确定的抗生育效果,作用环节可能在精子细胞及附睾.     

溶脲脲原体感染与精子顶体反应

本实验对精液溶脲脲原体培养阳性的不育男性和其它不明原因不育男性及正常生育男性分别进行了精子明胶膜顶体反应和透射电镜观察。结果发现：在精液溶脲脲原体培养阳性的不育男性组中，严重感染者精子顶体反应率比其它不明原因不育组和正常生育男性组低，经统计学处理有显著意义（Ｐ１＜０．０１，Ｐ２＜０．０１）。电镜观察显示：溶脲脲原体感染者精子膜上有溶脲脲原体颗粒附着，出现精子膜和顶体膜缺损及破坏现象。本实验证实：溶脲脲原体感染可引起精子膜包括顶体膜的破损，精子顶体反应降低或消失。     

Testicular function in rats following immobilization stress

Stress is believed to influence male reproductive activity. Male rats were subjected to immobilization stress for 2 h/day for 30 days to assess the effects of stress on testicular function. Net mass of the testes, epididymes and the seminal vesicles, sperm morphology, number of epididymal sperms and percent progressive motility of the sperms were determined. Adrenal weights were significantly increased (P less than 0.05) in the stressed animals. There was no significant difference between the control and the stressed animals with respect to testicular and epididymal weight, level of sperm production, progressive motility, seminal vesicular weight and abnormal forms. Histological examination also revealed a similarity in the structure of seminiferous tubules, adequacy of cell types of developing germ cells, structure of Leydig cells and epididymal lumina in both the groups. This study demonstrated a lack of significant effect of immobilization stress on testicular function in rats.     

整合素亚基α_5、β_1在人精子的表达及其与受精的关系

目的 :研究精子表面整合素亚基 α5、β1的表达及其与精子功能状态和受精力的关系 ;整合素亚基 α5、β1的表达与不明原因不育症的关系。方法 :1 3例生育力正常男性的精液标本 ,9例临床诊断为不明原因不育症患者的精液标本。以精子穿透去透明带的金黄地鼠卵行体外受精试验 (SPA)检测精子受精力 ;对新鲜、获能和孕酮诱导顶体反应后精子行间接免疫荧光染色 ,流式细胞仪检测精子表面整合素亚基α5、β1表达阳性的精子百分率。以三色法染色 ,观察精子顶体反应的发生率。结果 :流式细胞仪检测显示正常组新鲜精子表面α5亚基的表达 (1 3 .3± 5 .4% )与对照组 (1 0 .7± 6 .4% )无显著差异 (P>0 .0 5 )。获能组精子表面 α5亚基的表达率 (6 5 .7± 1 7.6 % )比新鲜组和对照组显著增高 (P<0 .0 5 )。孕酮诱导顶体反应后 ,α5亚基的表达率 (6 5 .3± 1 8.9% )比新鲜组和对照组显著增高 (P<0 .0 5 ) ,但与获能精子组相比无显著差异 (P>0 .0 5 )。β1亚基的表达率分别为新鲜组1 2 .9± 7.4% ,获能组 1 5 .9± 7.9% ,诱导顶体反应组 1 6 .9± 6 .2 % ,与对照组 (分别为 :9.3± 3 .4% ,1 7.3± 7.8% ,1 2 .2± 8.7% )比较均无显著差异 (P>0 .0 5 )。获能精子表面α5亚基的阳性表达率与受精率有一定的线性相关 (r=0 .     

不育或流产患者抗精子及抗附睾的人单克隆抗体制备

我们用ＥＢ病毒转化法从免疫性不育或流产患者的淋巴细胞中制备了一批抗精子和抗附睾的人单克隆抗体。抗精子抗体与全精子、精子头、精子尾、赤道部或核后部反应；抗附睾抗体与附睾基细胞或纤毛区反应。这些来源于不育患者淋巴细胞的抗体具有抗生育效应的可能性较大，对人体具有副作用的可能性相对较小。其中抗附睾基细胞抗体的作用区段与精子在附睾内成熟的区段相一致，这种抗体对基细胞的功能及其在生殖过程中的作用均有特殊的研究价值。     

大鼠附睾精子-SH变化与运动关系的研究

本文以巯基(-SH)分子探针mBBr标记附睾精子,采用流式细胞仪分析,结合荧光显微镜观察;以研究附睾精子膜成熟变化,其结果显示:精子在附睾运行过程中,-SH渐渐氧化为二硫键(-S-S-)、并具异质性.Percol法筛选运动精子的研究表明:运动精子的-SH含量显著降低,这提示附睾精子膜-SH与-S-S的变化与精子运动的获得和发展有关.     

大鼠储精囊分泌蛋白Ⅱ在精子表面的荧光定位研究

本文报道应用免疫荧光定位技术首次证明大鼠储精囊分泌蛋白Ⅱ(SVPⅡ)和附睾精子表面结合。纯化的SVPⅡ和附睾精子一起培育后,经兔抗SVPⅡ抗血清和FITC标记的羊抗兔抗体共同保温,在荧光显微镜下观察,发现整个附睾精子表面被黄色的荧光所覆盖,且以精子头部为著;而同时以兔免疫前血清取代兔抗SVPⅡ抗血清作对照,精子表面未见任何荧光结合区。实验结果充分表明:SVPⅡ能和附睾精子表面呈特异结合,可能为大鼠精子包被抗原的成分。另外经免疫吸收试验和免疫交叉反应提示:SVPⅡ为组织特异抗原,与已纯化的其它SVP组分无交叉反应。