龙葵碱对雄性小鼠睾丸支持细胞毒性的初步研究

目的 初步探讨龙葵碱对睾丸支持细胞的毒性。方法 原代培养睾丸支持细胞,MTT 法检测不同浓度龙葵碱对于支持细胞的毒性作用;激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体膜电位的变化以及［Ca²⁺］_i 的改变。结果 龙葵碱作用于睾丸支持细胞 72 h 的 IC₅₀ 为 22.29 μmol/L。随着剂量的增大,细胞内线粒体膜电位降低,［Ca²⁺］_i 升高。结论 龙葵碱通过损伤小鼠睾丸支持细胞线粒体,升高细胞 ［Ca²⁺］_i,从而对睾丸支持细胞产生毒性作用。     

野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和［Ca2+］i的影响

目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的机制,观察其对 HepG2 线粒体膜电位和细胞内 Ca²⁺ 浓度［Ca²⁺］_i 的影响。方法 经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后,HepG2 细胞［Ca²⁺］_i 的变化。结果 野西瓜正丁醇萃取物可不同程度降低 HepG2 细胞线粒体跨膜电位,此外,中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高［Ca²⁺］_i,造成钙稳态平衡。结论 野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位,开放 MPTP 孔道,造成细胞内 Ca²⁺ 超载,诱导 HepG2 细胞凋亡。     

再灌注致大鼠心肌生物膜损伤及益心康胶囊的保护作用

目的：观察再灌注对心肌生物膜的损伤,评价中药复方－益心康胶囊（H303）对生物膜保护作用。方法：利用离体大鼠全心停灌／再灌（I／R）模型,预先灌注H303（0．2,0．1mg/mL,灌注10min),观察对MDA、磷脂酶A2、磷脂、游离脂肪酸、膜脂流动性、ATPase及线粒体呼吸功能的影响。结果：I／R可导致离体大鼠心脏生物膜产生严重损伤。H303可通过减轻大鼠心肌组织脂质过氧化程度、抑制PLA2活性、升高线粒体磷脂含量、降低FFA水平、改善膜脂流动性、保护线粒体Ca^2 -ATPase及肌纤维膜的Na^ ,K^ -ATPase活性及改善线粒体呼吸功能等作用而发挥抗损作用。结论：H303对离体大鼠心肌再灌注损伤具有保护作用。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。     

双苯氟嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca2+]i的影响

 目的研究双苯氟嗪(Dip)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)变化的影响。方法将400pmol的内皮素-1(ET-1)灌注到大鼠大脑中动脉附近制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,以Fura-2/AM作为钙荧光指示剂,双波长荧光分光光度法检测灌注ET-1后不同时间大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的变化及Dip对灌注ET-1后4h胞浆[Ca²⁺]_i变化的影响,并采用TYC染色法观察了Dip对灌注ET-1后24h脑梗死范围的影响。结果灌注400pmolET-1诱发大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i明显升高,并于灌注EF-1后4h达峰值,随着再灌注时间的延长,胞浆[Ca²⁺]_i逐渐降低;Dip20,40mg·kg^-1可以明显降低灌注ET-1后4h大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),Dip10mg·kg^-1组虽表现出一定的降低胞浆[Ca²⁺]_i的作用,但与溶剂组比较,差异无显著性(P>0.05);对脑梗死范围的测定结果显示,Dip可以缩小脑梗死范围,其作用呈现明显的剂量依赖关系(r=0.9797,P<0.01)。结论Dip对抗脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca²⁺]_i升高可能是其产生神经保护作用的重要机制。     

卡托普利对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙和钠钙交换电流的影响

 目的观察卡托普利预处理对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙和钠钙交换电流(Na⁺/Ca²⁺exchange current,I_Na-Ca)的影响。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。Flou-3/AM负载染色,应用流式细胞分析技术,测定细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]_i);利用全细胞膜片钳技术,观察I_Na-Ca的变化。结果与正常对照组比较,缺氧复氧可显著增加[Ca²⁺]_i和I_Na-Ca。与缺氧复氧组比较,卡托普利呈浓度依赖性抑制缺氧复氧时[Ca²⁺]_i增加,减少I_Na-Ca的增加。但[Ca²⁺]_i和I_Na-Ca仍高于正常对照组。结论心肌细胞缺氧复氧可引起[Ca²⁺]_i的异常升高,与I_Na-Ca的异常增加有关;卡托普利预处理可能通过轻度增加I_Na-Ca及其[Ca²⁺]_i而触发心脏延迟保护作用,抑制后续缺氧复氧引起的I_Na-Ca及其[Ca²⁺]_i的异常增加。     

左旋四氢帕马汀对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用

 目的研究左旋四氢帕马汀对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制。方法采用大剂量ISO sc 诱导产生大鼠急性心肌缺血模型(ISO 30 mg·kg^-1,每日1次,连续2d),实验大鼠随机分为正常组、ISO模型组、阳性时照组、左旋四氢帕马汀(60,120mg·kg^-1)给药组,测定心脏系数和血清中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)含量。观察心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-Px);Na⁺-K⁺-ATPase,ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性。观察左旋四氢帕马汀的保护作用。结果左旋四氢帕马汀能显著降低血清中CK和LDH的释放;也能显著降低血清和心脏匀浆中MDA水平,心脏重量参数显示对心肌水肿有明显的抑制作用;保护心肌GSH-Px,Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性。结论左旋四氢帕马汀对ISO所致大鼠急性心肌缺血有显著的保护作用。     

羊栖菜多糖对S180荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究

 目的分析羊栖菜多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究。方法建立肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7 d,采集红细胞,制备红细胞悬液,运用激光共聚焦扫描技术测定荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]的变化;运用相关试剂盒测定红细胞膜表面唾液酸含量和Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase活性的变化;用流式细胞仪分析红细胞膜电位水平的变化;采用高效毛细管电泳法测定红细胞电泳合淌度的变化。结果羊栖菜多糖能降低荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺],升高膜表面唾液酸的含量,增强膜表面Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase的活性,提高红细胞膜电位水平,提高红细胞的电泳合淌度。结论羊栖菜多糖可调节或恢复S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞多种生理生化功能。     

JAK,PTPs抑制剂钙拮抗剂对As2O3引起的[Ca2+]i变化的影响

 目的　研究蛋白酪氨酸激酶 (JAK)、蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTPs)抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃致人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆 [Ca²⁺]_i变化的影响。方法　Fluo-3/AM荧光探针标记胞浆游离Ca²⁺,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预后胞浆[Ca²⁺]_i 的变化及JAK PTPs抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃引起的胞浆[Ca²⁺]_i 变化的影响。结果　As₂O₃升高胞浆[Ca²⁺]_i,并被Ca²⁺通道阻滞剂不完全抑制。1μmol·L^-1的As₂O₃使NB4胞浆[Ca²⁺]_i明显增高,而对神经元胞浆[Ca²⁺]_i 影响不明显。JAK抑制剂genistein能浓度依赖性抑制As₂O₃触发的[Ca²⁺]_i 升高。给药后 280s的总抑制率均值分别为NB4:(6.7± 2.9)%,(25.6±2.5) %和(52.2±3.5)%;皮层神经元:(7.8±3.1)%,(18.1± 2.8) %和(51.3±3.3)%。结论　As₂O₃对不同细胞的胞浆[Ca²⁺]_i 升高程度不同。JAK,PTPs参与As₂O₃触发的钙池操纵性Ca²⁺内流。Ca²⁺通道阻滞剂参与了As₂O₃触发的电压门控性Ca²⁺内流。     

益心康胶囊含药血清对氧应激所致大鼠心肌线粒体H+-ATP酶活性损伤的保护作用

目的：研究中药复方－益心康胶囊（H303）及其各组份含药血清地氧应激所致大鼠心肌线粒体H^ －ATP酶活性损伤的保护作用。方法：利用氧应激损伤体系（Fe^2 /VitC)与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察对线粒体H^ －ATP酶的影响。 结果：大鼠心肌线粒体氧应激后,可致酶活性明显降低。单一组份研究表明,丹参和山楂（600mg/kg制备含药血清）对酶活性具有明显保护作用,低于各组份给药量的H303含药血清（100、200mg/kg）即可产生相似的保护作用。结论：H303含药血清对氧应激造成的线粒体呼吸链关键酶活性的降低具有保护作用,其中丹参和山楂可能是发挥作用的主要成份。     

西红花酸对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用

目的 研究西红花酸对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制。方法 采用大剂量ISOsc诱导产生大鼠急性心肌缺血模型(1SO30mg／kg，每日一次，连续2d)，实验大鼠随机分为正常组、ISO模型组、阳性对照组和3个西红花酸给药组(25，50，100mg／kg)，测定心脏系数和血清中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)含量，观察心肌组织谷肮甘肤过氧化物酶(GSH—Px)、Na^ ，K^ —ATP酶和Ca^2 ，Mg^2 —ATP酶活性及心脏病理改变，观察西红花酸的保护作用。结果 西红花酸能显著降低血清中CK和LDH的释放；也能显著降低血清和心脏匀浆中MDA水平，心脏重量参数显示对心肌水肿有明显的抑制作用；保护心肌GSH—Px；Na^ ，K^ —ATP酶和Ca^2 ，M8^2 -ATP酶活性，心脏病理切片表明西红花酿对心肌坏死有显著的保护作用。结论 西红花酸对ISO所致急性心肌缺血有显著的保护作用。     

益心康胶囊含药血清对氧应激所致线粒体损伤的保护作用

目的和方法：应用羟自由基损伤体系（Fe2 /H2O2)在体外与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察了氧应激对心肌线粒体的影响,探讨益心康胶囊（H303）含药血清对氧应激损伤的保护机制,结果：不同浓度Fe2 /H2O2可使反应体系中脂质过氧化产物明显升高,线粒体超微结构发生明显改变;线粒体肿胀度增加;线粒体GSH含量明显降低,H303含药血清可明显减轻上述损伤,表现为显著抑制线粒体脂质过氧化和GSH含量的降低,改善线粒体超微结构,减轻线粒体肿胀度,结论：氧应激可造成心肌线粒体结构和功能损伤,H303抗心肌缺血损伤的作用机制是通过防止线粒体脂质过氧化,保护内源性抗氧化物,改善线粒体结构等作用而实现的。     

三七总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)所致大鼠心肌肥厚的保护作用.方法:5mg/kg·d连续7d建立大鼠心肌肥厚模型.造模第二天开始ip PNS 25和50 mg/kg·d连续14d,测定全心重量指数(HW/BW)、左心室重量指数(LVW/BW即LVI);采用试剂盒用分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)和一氧化氮(NO)含量,及Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性;用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量.结果:ISO模型组大鼠的HW/BW、LVI明显升高;左心室Hyp、AngⅡ含量增高,NO水平下降,Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性降低.PNS能明显提高心肌组织NO水平及Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性,降低胶原的含量,抑制AngⅡ产生,使HW/BW及LVI下降,抑制心肌肥厚.结论:PNS对ISO所致大鼠心肌肥厚具有保护作用.     

延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌钙泵及钠钾泵活性的影响

目的:观察延胡索碱药物预处理对缺血再灌注心肌Ca2+-ATPase及Na+-K+-ATPase活性的影响。方法:将清洁级成年SD大鼠30只随机分为6组(延胡索碱高、中、低剂量预处理组,经典缺血预处理组,注射用水组和假手术组),结扎左冠状动脉前降支近段30min后再灌注60min,之后断头放血取心脏匀浆并测定心肌组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。结果:(1)Na+-K+-ATP酶活性变化:与假手术组比较,心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱中、高剂量组的心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活力都明显升高(P<0.01);与缺血预处理组比较,延胡索碱中、高剂量组心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活性差异无显著性(P>0.05)。(2)Ca2+-ATP酶活性变化:与假手术组比较,心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞膜Ca2+-ATP酶活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱高剂量组的心肌细胞膜Ca2+-ATP酶活性都明显升高(P<0.05);与缺血预处理组比较,延胡索碱高剂量组心肌细胞膜Ca2+-ATP酶活性差异无显著性(P>0.05)。结论:延胡索碱药物预处理可提高心肌细胞Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性,从而促进Na+-Ca2+交换,减轻细胞内Ca2+超载,保护缺血再灌注引起的心肌损伤。     

氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响及益心康胶囊含药血清保护作用的研究

目的观察氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体的影响，探讨抗心肌缺血中药复方——益心康胶囊(H303)含药血清对氧应激损伤的保护作用机制。方法利用激光共聚焦显微镜，观察羟自由基损伤体系(Fe2＋／H2O2)与豚鼠心肌细胞共同孵育30～60min后对心肌细胞线粒体膜电位的影响。结果豚鼠心肌细胞氧应激后，可致线粒体细胞色素氧化酶活性降低，以及荧光染料Rh123所显示的线粒体膜电位明显降低。H303含药血清可明显减轻上述损伤，表现为明显增强豚鼠心肌细胞线粒体氧化酶活性，使心肌细胞存活率增加；并具有保护心肌细胞膜电位的作用。结论氧应激可造成心肌线粒体膜电位降低。益心康胶囊含药血清可保护线粒体膜电位，从而发挥其膜稳定作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠线粒体Ca2+值及Na+-K+-ATP酶活性的影响

目的:探讨电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑线粒体Ca2 值及Na -K -ATP酶活性的影响。方法:将动物随机分为正常组、模型组、电针组,采用改良的Longa的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型。电针组于造模后针刺水沟、大椎、三阴交,捻转刺激30s后,接电针仪,持续20 min。结果:模型组Na -K -ATP酶活性较正常组显著下降,Ca2 值则较正常组明显升高;电针组Na -K -ATP酶活性与模型组比较有明显升高,Ca2 值较模型组显著降低。结论:电针可以提高缺血再灌注区域线粒体抗氧化损伤的能力,提高线粒体神经元细胞的能量代谢能力,从而发挥对缺血再灌注线粒体损伤的保护作用。     

栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的影响

目的:探讨栝楼桂枝颗粒是否通过调控线粒体能量代谢对脑缺血再灌注损伤大鼠起到脑保护作用.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和中药组.采用线栓法制备脑缺血再灌注模型,采用神经功能缺损评分法(mNSS)进行大鼠神经功能评分,测定大鼠脑梗死面积,采用透射电镜观察脑线粒体超微结构的改变;采用分光光度法测定线粒体呼吸链酶复合物...     

银杏叶提取物对缺血心肌线粒体膜脂质过氧化与ATP酶活性的影响

目的：探讨银杏叶提取物（EGB）对缺血心肌的细胞保护机制。方法：用垂体后叶素（20u/kg,ip)复制小鼠急性心肌缺血模型,观察不同剂量（100、200mg/g)EGB对心肌缺血60min线粒体获得率,膜磷脂含量,Ca^2 -ATP酶、Mg^2 -ATP酶活性,MDA及胞浆SOD活性变化的影响。结果：预先给予EGB可有效抑制缺血所致线粒体膜磷脂含量减少,MDA水平增高,提高线粒体Ca^2 -ATP酶及胞浆SOD酶活性,其部分作用表现为剂量依赖性。结论：EGB对缺血心肌的保护作用可能与其增加胞液SOD活性,防止线粒体膜脂质过氧化,维持线粒体膜Ca^2 -ATP酶活性,改善缺血心肌细胞Ca^2 转运有关。