p38MAPK抑制剂对大鼠急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的保护作用

目的 探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠合并肺损伤的保护作用.方法 54只雄性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组和SB203580(干预)组,每组18只.以左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立大鼠ANP模型,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,干预组在制模前腹腔注射SB203580(用二甲基亚枫溶解配制成10 μmol/L)5 mg/kg体重.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血测淀粉酶、TNF-α和IL-6含量,行胰腺及肺组织病理学检查,计算肺组织湿/干重比,测髓过氧化酶(MPO)含量,RT-PCR法检测中性粒细胞趋化因子(C1NC) mRNA表达,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.结果 术后6h,对照组的血淀粉酶、TNF-α和IL-6含量、肺组织湿/干重比、MPO活性、CINC mRNA及p-p38MAPK蛋白表达量分别为(1035±73) U/L、(0.94±0.16) μg/L、(4.77±0.86) μg/L、3.92±0.29、(0.39±0.02) U/g、0.28 ±0.04、0.09±0.04;ANP组分别为(5848±656)U/L、(3.84±0.32) μg/L、( 103.54±15.32) μg/L、4.97±0.47、(1.03±0.08) u/g、0.62±0.06、0.52±0.14;干预组分别为(4259±286) U/L、(1.64±0.21) μg/L、(76.56±11.46) μg/L、4.32±0.34、(0.78±0.05)U/g、0.37±0.04、0.27 ±0.08.ANP组的各项指标均显著高于对照组,干预组的各项指标均显著低于ANP组,但仍显著高于对照组(P值均＜0.01).结论SB203580可通过阻断p38MAPK信号通路,在一定程度上减少炎症因子的产生,减轻ANP大鼠胰腺及肺组织损伤.     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂减少大鼠肝脏炎症细胞因子的表达

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580阻断p36 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达的作用.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机分3组,每组10只.脑死亡组:诱导大鼠及死亡;脑死亡+SB203580组:大鼠脑死亡诱导成功后,经阴茎背静脉注射SB203580(10 mg/kg);两组大鼠脑死亡诱导成功,行人工呼吸6 h后,若平均动脉压大于80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),则为脑死亡供体,获取肝脏待检.对照组:正常大鼠麻醉后取肝脏待检.逆转录-聚合酶链反应检测肝脏肿瘤坏死因子(TNF)α和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达,Western blot检测肝脏TNF α和IL-1 β的蛋白质表达以及磷酸化p38 MAPK的表达.多个样本间比较行One-Way ANOVA分析,SNK法行两两样本间比较.结果 脑死亡组大鼠肝脏出现p38 MAPK磷酸化,磷酸化p38 MAPK的相对表达量比对照组明显增加(0.190±0.004比0.001±0.002),差异有统计学意义(q=172.53,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.670±0.012和0.240±0.003,较对照组(分别为0.130±0.013和0.001±0.002)明显增加(q值分别为123.99和243.09,P值均＜0.01);肝脏IL-1 β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.560±0.009和0.190±0.003,较对照组(分别为0.160±0.010和0.001±0.002)明显增加(q值分别为135.35和192.23,P值均＜0.01).脑死亡SB203580组大鼠肝脏p38 MAPK磷酸化下降,磷酸化p38 MAPK的表达量(0.120±0.004)比脑死亡组明显下降(q=63.90,P＜0.05),但仍明显高于对照组(q=108.63,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.430±0.016和0.180±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为55.11和61.03,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为68.89和182.06,P值均＜0.01);肝脏IL-1β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.270±0.009和0.140±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为98.13和50.85,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为37.22和141.38,P值均＜0.01).结论 SB203580能抑制p38 MAPK的磷酸化,阻断p38 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达,降低肝脏免疫原性.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在顺铂诱导癌周肝硬化肝细胞株凋亡中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在顺铂诱导正常肝细胞、癌周肝硬化肝细胞和肝癌细胞凋亡过程中的作用.方法 应用流式细胞仪、电镜、免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜和Western blot检测正常肝细胞株HL-7702、癌周肝硬化肝细胞株QSG-7701和肝癌细胞株QGY-7703加入顺铂和p38MAPK特异性抑制剂SB203580后的凋亡情况,以及p38MAPK、细胞分裂周期25同源体B(CDC25B)、p34cdc2和细胞周期素B1的表达.组间数据的比较采用单因素方差分析和SNK-q检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 正常肝细胞、癌周肝硬化肝细胞和肝癌细胞株加顺铂后,凋亡率均明显增加,以癌周肝硬化肝细胞株最明显(从0.8%增高到41.5%);用顺铂+SB203580处理后,癌周肝硬化肝细胞株的凋亡率降低(28.1%),细胞周期阻滞于S期.电镜、免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜均观察到细胞凋亡形态.癌周肝硬化肝细胞分别用顺铂和顺铂+SB203580后,p38MAPK相对表达量分别为0.51±0.05和0.53±0.04,CDC25B相对表达量分别为0.61±0.04和0.59±0.03,p34cdc2相对表达量分别为1.08±0.16和1.21±0.15,与空白对照组(p38MAPK、CDC25B和p34cdc2的相对表达量分别为0.43±0.02、0.28±0.05和1.01±0.12)比较,差异有统计学意义(F=20.056,P＜0.05).结论 顺铂通过p38MAPK通路诱导癌周肝硬化肝细胞凋亡,而正常肝细胞和肝癌细胞的凋亡诱导途径可能不同.     

NF-κB对急性坏死性胰腺炎大鼠甲状旁腺激素受体表达和低钙血症的影响

目的 探讨NF-κB对ANP大鼠甲状旁腺激素受体(PTH1R)表达及低钙血症的影响.方法 将雄性SD大鼠24只按完全随机法分为对照组、ANP组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂预处理组(PDTC组),各8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型.观察6 h后各组血清钙浓度以及胰腺组织病理改变,蛋白免疫印渍法检测肾脏和骨组织NF-κB、PTH1R蛋白表达,RT-PCR检测肾脏和骨组织FTH1R mRNA表达.结果 对照组、ANP组和PDTC组血钙浓度分别为(2.31±0.03)mmol/L、(2.01±0.03)mmol/L和(2.12±0.05)mmol/L,3组间差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织的NF-κB蛋白表达量分别为1.53±0.08和0.47±0.19;PDTC组分别为0.61±0.13和0.36±0.06,两组差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织PTH1R mRNA的表达量分别为0.27±0.08和0.29±0.06,PTH1R蛋白表达分别为0.87±0.07和0.31±0.09;PDTC组分别为0.57±0.27和0.37±0.11,1.13±0.17和0.68±0.15,两组差异显著(P<0.05).ANP组NF-κB活性较对照组明显升高,PTH1R表达明显下降;与ANP组比较,PDTC组NF-κB活性降低,血清钙水平明显升高,PTH1R的表达上调(P<0.05).结论 NF-κB可能通过间接下调组织PTH1R的表达,致血清钙显著下降.PDTC对改善ANP低钙血症有一定意义.     

硫化氢通过p38MAPK信号通路对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的调节作用以及P-p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)蛋白的表达的影响.方法:用四氯化碳诱导肝纤维化SD大鼠模型,将提取的肝纤维化大鼠肝细胞分组:对照组、H2S组(对照组基础上加H2S的供体N a H S至最适浓度)、S B组(对照组基础上加SB203580至最适浓度)、SB+H2S组(对照组基础上加Na HS、SB203580至最适浓度).M T T法检测N a H S及S B203580对肝纤维化大鼠肝细胞的增殖、增殖抑制率的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测肝纤维化大鼠肝细胞凋亡率;Western blot技术检测P-p38MAPK蛋白在各组中的表达水平.结果:与对照组相比,低浓度H2S(50μmol/L)促进肝纤维化大鼠肝细胞增殖明显(P=0.000),对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无影响;SB203580可抑制肝纤维化大鼠肝细胞的增殖,伴随药物浓度的升高细胞存活率降低(P=0.000),并诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡(P=0.000);P-p38MAPK蛋白在各组中均有表达,H2S组表达水平高于对照组(P=0.000),SB组、SB+H2S组与对照组、H2S组相比,P-p38MAPK蛋白的表达量均减少(均P=0.000).结论:低浓度H2S对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无诱导作用,但能通过激活p38MAPK信号转导通路促进其细胞增殖.     

SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路对α7尼古丁受体蛋白水平的影响

目的研究p38 MAPK信号传导通路激动及抑制对SH-SY5Y细胞α7神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白水平的影响并探讨受体蛋白与p38通路之间的关系。方法分别用p38 MAPK激活剂Anisomycin和p38 MAPK阻断剂SB203580激动和阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK通路蛋白的活化及其表达,Western印迹方法检测α7 n AChR蛋白水平。结果细胞经Anisomycin处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平升高了71%(P<0.01),同时细胞α7 n AChR蛋白表达升高了80%(P<0.01).细胞经SB203580处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平降低了62%(P<0.01),提示p38 MAPK信号通路被抑制,同时细胞α7 n AChR蛋白表达降低了80%(P<0.01)。结论 Anisomycin能激动SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白表达明显增强;SB203580能阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白水平显著降低。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在不可分型流感嗜血杆菌致人单核细胞炎症反应中的作用

目的 通过不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与单核细胞相互作用,研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路在NTHi致人体免疫细胞炎症反应中的作用.方法 NTHi为临床分离株,经血清学方法和16S rRNA测序证实.外周血单核细胞来自健康成年人静脉血,分为4组:培养基组、NTHi刺激组、SB203580(p38 MAPK抑制剂)干预组和UO126(p44/42 MAPK抑制剂)干预组.NTHi与单核细胞共培养1 h、4 h后收集细胞,用Western blot法检测p38、p44/42 MAPK的磷酸化程度;16 h后用流式细胞仪检测细胞表面Toll样受体(TLR)4的表达.预先用SB203580或UO126与单核细胞共孵育1 h,然后加入NTHi(感染复数为200),分别在4 h、16 h后收集上清,用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.采用SPSS11.5统计软件,组间比较用t检验,单核细胞TNF-α的表达用单因素方差分析,组间比较用LSD检验.结果 NTHi可迅速诱导p38、p44/42 MAPK通路的磷酸化,并至少持续到刺激后4 h.与培养基组比较,NTHi刺激16 h后单核细胞表面TLR4的表达明显增加(11.8±1.6,4.8±0.6),差异具有统计学意义(t=4.08,P<0.05).NTHi刺激4 h和16 h后上清液中的TNF-α(16.4±5.3,30.2±10.7)较培养基组(0.6±0.6,1.4±1.1)显著增加,差异具有统计学意义(4 h时I-J值为15.78,16 h时I-J值为28.82,P均<0.01).与细菌组比较,SB203580干预组单核细胞TNF-α水平显著降低(4 h时I-J值为11.26,16 h时I-J值为21.32,P均<0.05),而UO126干预组TNF-α水平无明显变化(4 h时I-J值为6.32,16 h时I-J值为12.57,P均>0.05).结论 TLR4可能参与了NTHi诱导的单核细胞反应,p38 MAPK是该反应的关键信号分子.     

PIAS1基因沉默对胰腺腺泡细胞炎症反应的影响

目的 观察活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(PIAS1)基因特异性siRNA干扰大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J后对雨蛙素诱导炎症反应的影响,探讨其在胰腺炎发病中的作用.方法 采用脂质体法将靶向PIAS1的siRNA和阴性siRNA转染AR42J细胞,24 h后分别加入雨蛙素继续培养24 h.同时设脂质体+雨蛙素组、雨蛙素组及仅加PBS的对照组.Western blotting检测p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)表达;RT-PCR及Western blotting检测各组细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达.结果 siRNA+雨蛙素组、阴性siRNA+雨蛙素组、脂质体+雨蛙素组、雨蛙素组及对照组细胞p38MAPK表达量分别为1.93±0.11、1.22±0.10、1.30±0.17、1.32±0.21、0.12±0.02;P-p38MAPK表达量分别为2.10±0.25、1.36±0.20、1.26±0.15、1.23±0.25、0.58±0.48,siRNA+雨蛙素组较其余各组明显增加(P值均＜0.05).siRNA+雨蛙素组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9 mRNA表达量分别为1.66±0.15、1.66±0.15、1.90±0.01、1.56±0.20;蛋白的表达量分别为2.06±0.37、2.20±0.34、1.80±0.10、1.17±0.05,均较其他雨蛙素处理组表达上调(P值均＜0.05).结论 PIAS1参与雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞p38MAPK活性与下游炎症介质的表达调控.     

特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化的影响

目的 探讨特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对小鼠感染肺炎衣原体后细胞因子变化.方法 使用TLR4基因缺失(C3H/HeJ)小鼠90只,随机分为正常组、感染组和SB203580组,每组再分别按0、1、4、7、14 d分成5小组.正常组鼻内接种二磷酸蔗糖缓冲液,感染组鼻内接种肺炎衣原体约4.0×106 IFU/ml,SB203580组在感染肺炎衣原体后腹腔注射SB203580(100 mg/kg).分别在接种后第0天,第1天、第4天、第7天、第14天预定的时间处死小鼠,取肺组织分别采用Western blot法测p38 MAPK蛋白的表达,用酶联免疫吸附法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)的表达,同时观察各组小鼠肺组织病理变化.结果 感染组肺组织中TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均高于正常组(P＜0.05或P＜0.01),并在第4天出现高峰,14天以后开始下降.SB203580组肺组织中细胞因子TNF-α、IL-1的表达水平在各时间点均低于感染组(P＜0.05或P＜0.01).同时,SB203580组p38 MAPK蛋白表达强度弱于感染组.结论 p38 MAPK参与小鼠感染肺炎衣原体的炎症反应,特异性p38 MAPK抑制剂SB203580能抑制小鼠感染肺炎衣原体后的细胞因子表达,减轻炎症反应.     

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其转录因子的影响

目的 探讨丹参酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGFβ1)活化的大鼠肝星状细胞(HSC)内p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的影响. 方法 分离并培养正常大鼠HSC,将TGFβ1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中,用p38信号通路特异性阻断剂SB203580和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性阻断剂PD98059分别阻断HSC内p38MAPK和ERK信号通路.细胞内总的P38蛋白、MKK3/6蛋白及MEF2A、MEF2C的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组和TGFβ1组;磷酸化P38蛋白、MKK3/6蛋白和α-SMA蛋白的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组、TGFβ1组、PD98059、PD98059+ SA-B组、PD98059+ TGFβ1组和SA-B+ PD98059+ TGFβ1组;SA-B对TGFβ1刺激的HSC内MEF2和Ⅰ型胶原报道基因的影响分为突变型(mt)对照组、野生型(wt)对照组、TGFβ1组、SA-B+ TGF β1组、SA-B组、SB203580+ TGF β1组、SB203580组.Western blot法检测HSC内磷酸化和总P38蛋白、MAPK激酶3/6 (MKK3/6)蛋白、肌细胞增强因子2(MEF2)A、MEF2C、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光素酶报道基因测定法检测MEF2报道基因和Ⅰ型胶原启动子的活性.多组间数据的多重比较用q检验.结果 SA-B组磷酸化P38蛋白相对表达量为0.33±0.05,明显低于空白对照组(q=7.08,P＜0.01); SA-B +TGF β1组的磷酸化P38蛋白相对表达量为0.46±0.04,明显低于TGFβ1组(q=10.45,P＜0.01);SA-B组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.11±0.07,明显低于空白对照组(q=3.944,P＜0.05);SA-B+ TGF β1组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.28±0.07,明显低于TGFβ1组(q=7.91,P＜0.01);SA-B+ TGFβ1组和SB203580+ TGF β1组MEF2报道基因的相对荧光素酶活性分别为2.93±0.09和2.50±0.05,均明显低于TGFβ1组(q值分别为35.35和37.2,P值均＜0.01);SA-B组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为15.82±0.97和13.00±0.40,均明显低于空白对照组(q值分别为5.18和13.32,P值均＜0.01);SA-B+ TGF β1组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为13.40±0.72和20.47±0.83,均明显低于TGF β1组(q值分别为43.93和12.52,P值均＜0.01); SA-B+ TGFβ1组α-SMA相对表达量为8.76±0.44,明显低于TGFβ1组(q=20.35,P＜0.01); SA-B+ SB203580+TGF β1组α-SMA相对表达量仅为3.57±0.49,明显低于TGFβ1组(q=39.78,P＜0.01);SA-B+ TGF β1组和SB203580+ TGF β1组Ⅰ型胶原报道基因的相对荧光素酶活性分别为1.61±0.05和1.42±0.07,较TGFβ1组明显降低(q值分别为26.4和27.62,P值均＜0.01).结论 SA-B可能通过抑制原代HSC内TGFβ 1的p38MAPK信号传导通路,抑制HSC的活化.     

辛伐他汀抑制人外周血单核巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2表达

目的 观察辛伐他汀对人外周血单核巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)表达的影响,并探讨其调控机制.方法 分离培养人外周血单核巨噬细胞,实验分为脂多糖(LPS)组、辛伐他汀组和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)干预组.LPS组:分别用不同浓度(0、1、10、102、103和104ng/ml)的LPS与细胞共同孵育6 h,观察不同浓度的辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响;并用1μg/ml的LPS与细胞孵育不同时间(0、6、12、24和48 h),观察辛伐他汀作用不同时间对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响.辛伐他汀组:1 μg/ml的LPS+不同浓度的辛伐他汀(10-2～10-7mmol/L)与单核巨噬细胞共同孵育24 h,1 μg/ml LPS+10-3mmol/L的辛伐他汀与单核巨噬细胞孵育不同时间(0、6、24、24和48 h),观察辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2mRNA和蛋白表达及酶活性的影响.MAPK组:分别用10 μmol/L的p38抑制剂SB203580、20 μmol/L的ERK抑制剂U0126和20 μmol/L的JNK抑制剂SP600125预处理30 min后,将单核巨噬细胞与1μg/ml的LPS共同孵育24 h,观察MAPK信号通路在LPS介导的Lp-PLA2表达中的作用.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Lp-PLA2 mRNA表达,比色法测定酶活性,Western blot方法 检测Lp-PLA2蛋白表达以及p38-MAPK蛋白及磷酸化水平.结果 (1)0.1μg/ml的LPS刺激6 h即可显著增加单核巨噬细胞Lp-PLA2 mRNA和蛋白的表达及其酶活性,并且随LPS浓度的增加和刺激时间的延长,该作用增强.(2)辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2的表达增加,并且降低酶活性,该作用呈浓度及时间依赖性.(3)辛伐他汀抑制LPS诱导的p38MAPK蛋白活化,p38MAPK的抑制剂SB203580可以完全阻断LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达增加,与辛伐他汀作用相似.而MEK1/2的抑制剂U0126和JNK的抑制剂SP600125对LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达的增加没有影响.结论 在培养的人外周血单核巨噬细胞中,辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达,降低Lp-PLA2酶活性,该作用至少部分由抑制p38MAPK信号转导通路介导.     

p38MAPK信号转导通路在EGF诱导食管腺癌SEG-1细胞表达u-PA中的作用

目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人食管腺癌SEG-1细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)mRNA和蛋白表达的影响及p38MAPK信号转导通路在其中的作用.方法:以相同浓度的EGF(100g/L)按时间梯度刺激SEG-1细胞,应用Western blot法测定各时间点总p38MAPK蛋白、磷酸化p38MAPK蛋白、u-PA蛋白表达,并应用RT-PCR方法检测各时间点u-PAmRNA表达.用p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞后,观察上述指标变化.结果:EGF可明显增强SEG-1细胞(u-PA)mRNA和蛋白的表达,并可激活p38MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性.SB203580能明显抑制EGF诱导的p38MAPK蛋白的磷酸化,用其阻断p38MAPK信号转导通路后,EGF对u-PAmRNA和蛋白表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性.结论:EGF可通过p38MAPK信号转导通路诱导SEG-1细胞表达u-PA.     

导痰汤对人脐静脉内皮细胞间黏附分子1mRNA和p38表达的影响

目的探讨导痰汤通过对p38丝裂原活化蛋白激酶的调节而干预内皮细胞间黏附分子1（ICAM-1）mRNA的表达,以明确导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法取新生儿脐带,分离脐静脉内皮细胞（HUVEC）,传代培养的1～3代用于实验。含药血清的置备：将导痰汤按照0．9g·kg^-1·d^-1剂量给sD大鼠灌胃后10d,经腹主动脉采血,分离血清。实验共分7组：HUVEC为空白对照组,含药血清（20％）处理HUVEC为导痰汤对照组,肿瘤坏死因子仪（TNF—α）预处理HUVEC为TNF—α诱导组,先采用5％、10％、20％含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5％、10％、20％导痰汤组,使用p38特异性阻滞剂SB203580处理HUVEC为SB203580阻滞组。通过实时定量PCR和Westernblot等方法,观察导痰汤对TNF—α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1mRNA的表达和p38表达的影响。结果①TNF-α诱导组ICAM-1mRNA的表达（1．17±0．26）和p38的表达（0．77±0．19）显著高于空白对照组和导痰汤对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;使用导痰汤含药血清或SB203580处理后,5％导痰汤组ICAM-1mRNA的表达为0．97±0．15;10％导痰汤组为0．85±0．17;20％导痰汤组为0．73±0．10;SB203580阻滞组为0．64±0．19;②5％导痰汤组p38的表达为0．69±0．21;10％导痰汤组为0．59±0．27;20％导痰汤组为0．47±0．11;SB203580阻滞组为0．36±0．09,表达显著下降,差异有统计学意义（P〈0．05）;p38活性与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．706,P〈0．01）。结论导痰汤可以通过调节p38表达而抑制TNF—α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM—1mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用。     

软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡

目的探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性。结果与对照组比较,PA组、PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P<0.05)。与PA组比较,PA+SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P<0.05);而PA+PD组和PA+SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P>0.05)。结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡。     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对溃疡性结肠炎肠黏膜肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨溃疡性结肠炎（UC）患者肠黏膜组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的表达及p38 MAPK抑制剂SB203580对活动性UC患者肠黏膜组织TNFα表达的影响。方法30例活动性UC患者被纳入本研究,以15例结肠癌患者的癌旁正常组织作为对照。免疫组化法检测UC患者肠黏膜活检组织中磷酸化p38 MAPK的表达。体外组织培养条件下观察SB203580对UC患者肠黏膜组织TNFα表达的影响,ELISA法检测培养上清液中TNFα含量。结果（1）UC患者肠黏膜磷酸化p38MAPK的表达明显高于正常肠黏膜,A值分别为549．22±32．54、143．52±11．89,阳染面积分别为[（1680．61±115．30）×10^-5、（351．68±12．73）×10^-5]μm^2,P值均〈0．01。（2）与未用SB203580处理的UC组比较,处理后UC肠黏膜组织分泌TNFα的水平明显较低,分别为（549．96±107．63、72．07±20．30）ng／L（P〈0．01）。（3）与未用SB203580处理的UC组比较,处理后UC肠黏膜组织p38 MAPK下游分子活化转录因子-2（ATF2）的活性表达明显减少,A值分别为688．32±47．37、265．82±40．25,阳染面积分别为[（2489．02±193．63）×10^-5、（1213．76±204．77）×10^-5]μm^2,P值均〈0．01,但对磷酸化p38 MAPK的表达无影响,A值分别为480．34±38．87、465．64±38．69,阳染面积分别为[（1536．68±182．16）×10^-5、（1486．26±165．49）×10^-5]μm62,P值均〉0．05。结论p38 MAPK信号传导通路在UC的发病中起着重要作用,阻断该通路可减少炎性细胞因子的释放。提示p38 MAPK信号传导通路可以为UC的治疗提供一个新的靶标,SB203580有可能成为UC治疗的新药物。     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用

目的观察p38信号通路（P38MAPK）在内皮细胞微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法将体外培养的HUVECs随机分组：①EMPs不同时点观察组：用EMPs（终浓度105／m1）分别刺激细胞0、3、6、12、24h;②EMPs不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10^2、10^3、10^4、10^5／ml的EMPs刺激细胞24h;③EMPs＋p38MAPK特异性抑制剂SB203580组：在EMPs（终浓度10^5／ml）刺激前,与终浓度为5μmol／L的SB203580共同孵育30min。用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM—1mRNA的表达。结果EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM—1mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性。p38MAPK特异性拈抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用。结论p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控。