组织微阵列在生物制药研发中的应用

组织芯片(tissue chips)又称组织微阵列(TMA)是近几年发展起来的新技术,它是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.一个芯片蜡块的连续切片可同时用作免疫组化、荧光原位分子杂交、多彩FISH、mRNA原位分子杂交等方法的分析,使基因DNA、mRNA和蛋白质同时在不同分子水平表达和原位分析成为可能.它具有体积小、信息量大、快速平行、高效等诸多优点.本文结合组织芯片的特点和用途,对其在生物制药研发中的运用进行了初步探索.     

采用组织芯片技术分析胃癌中泛素对细胞周期调控因子p27表达的影响

目的 研究胃癌组织中泛素(Ubiquitin)对细胞周期调控因子p27表达的影响及意义。方法 采用组织芯片技术制作60例胃癌组织芯片，同时用S-P免疫组织化学和原位分子杂交(cDNA—mRNA)方法检测胃癌组织芯片中Ubiquitin、p27、p27mRNA的表达。结果60例胃癌组织中，Ubiquitin、p27、p27mRNA的阳性率分别为3．3％、40．0％、55．0％。淋巴结转移组的胃癌p27和p27mRNA阳性率显著低于无淋巴结转移胃癌(P＜0．01)。Ubiquitin表达与p27低表达明显相关。结论 应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的。具有快速、方便、经济、准确的特点。p27的表达水平可以作为评估胃癌预后的参考指标，Ubiquitin影响p27的低表达。     

肝炎基因诊断芯片检测肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA、HCVRNA的临床研究

目的：研究乙型和丙型病毒性肝炎基因诊断芯片的制备和其对血清及肝组织中HBVDNA、HCVRNA检测的准确性。方法：根据肝炎病毒的特征基因片段设计探针序列，荧光标记，将其以微阵列形式排列在经过特殊处理的玻片上，同时点上系统监控的内参照基因，制成肝炎基因诊断芯片；从待测血液、组织标本中抽取微量肝炎病原体DNA（RNA），与芯片杂交，用特有的荧光波长扫描芯片通过计算机软件进行分析诊断^[1-5]；用病毒性肝炎基因诊断芯片双盲检测40例乙型肝炎患者血清，40例健康人血清、40例丙型肝炎患者血清，99例肝炎后肝硬化肝组织蜡块标本，15例慢性乙型肝炎患者肝组织活检标本及血清，同时用荧光微粒子定量法测定血清中乙型肝炎病毒标志物HBsAg、HBeAg,PCR法检测血清中HBVDNA、HCVRNA，免疫组化法检测肝组织HBcAg、原位分子杂交法检测HBVDNA。结果：40例乙型肝炎病毒标志阳性血清，基因芯片检测阳性30例，阴性10例，40例丙型肝炎血清，基因芯片检测阳性25例，阴性15例，40例健康人血清，基因芯片检测均阴性。15例血清乙型肝炎病毒标志物阳性的患者做肝活检，血清基因芯片检测阳性15例，肝组织标本免疫组化HBcAg阳性15例，原位分子杂交HBVDNA阳性14例，基因芯片检测阳性14例。99例乙型肝炎后肝硬化肝组织石蜡标本，免疫组化HBcAg阳性67例，HBV DNA原位分子杂交阳性53例，基因芯片检测阳性46例，其中肝组织免疫组化HBcAg、原位分子杂交HBV DNA均阳性者40例，单HBcAg阳性者检出6例，阴性33例。结论：我们设计的基因芯片可同时检测乙型和丙型肝炎病毒；其对丙型肝炎的诊断阳性率较低；其检测肝组织中的HBVDNA，同原位分子杂交，HBVDNA结果相比，阳性检出率可达76％（40／53）；其不但能用于血清中HBVDNA检测，同时可用于肝组织中的HBVDNA的检测。     

血管内皮生长因子mRNA及其蛋白、上皮细胞钙黏蛋白在喉鳞状细胞癌中表达的研究

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及其蛋白、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨它在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用及其临床应用价值.方法 应用原位分子杂交和免疫组织化学SP法,检测VEGF mRNA及其蛋白、E-cadherin在60例喉鳞状细胞...     

乙型肝炎后肝硬化患者肝组织中HBcAg、HBV DNA表达及基因芯片检测

目的 用免疫组织化学法、原位分子杂交法、肝炎基因诊断芯片检测99例乙型肝炎后肝硬化患者的肝组织，观察HBcAg和HBV DNA在肝组织中的表达，比较各种方法优缺点。方法 将PCR扩增的HBV DNA探针用点样仪点于玻片介质上，处理后制成基因芯片，收集肝炎后肝硬化组织标本99份，分别用原位分子杂交法，基因芯片检测HBV DNA，免疫组织化学法检测HBcAg。结果 HBcAg阳性67例（67．7％），原位分子杂交HBV DNA阳性53例（53．5％），基因芯片检测阳性46例（46．5％）。32例三种方法检测HBcAg及HBV DNA均阴性。HBcAg颗粒和HBV DNA颗粒在肝组织中呈浆膜型高表达分布，其肝组织病变是活动的。结论 乙型肝炎后肝硬化患者肝组织中有较高的HBV复制率，HBcAg及HBV DNA高表达与肝组织病变活动有关，基因芯片对肝组织中HBVDNA检出率与原位分子杂交结果无显著差异，P＞0．05。     

一种简易的组织微阵列技术及其应用

组织微阵列又称组织芯片,是近年来新兴的一项生物芯片技术。它是将数十、数百甚至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上而成的微缩组织切片。1998年Kononen等在DNA微阵列的基础上,首先制作了乳腺癌的组织微阵列,并应用荧光原位杂交(FISH)、免疫组织化学和mRNA原位杂交技术研究了6种基因及其产物的表达状态。组织芯片具有高效、快速、成本低、信息含量高、实验误差小、自身内对照和可比性强的特点。我们尝试了组织芯片的制作,并在组织芯片上进行了HE染色和数种抗体的免疫组织化学染色,取得了一些体会。     

健胃汤对大鼠胃溃疡愈合质量及表皮生长因子受体表达的影响

目的探讨健胃汤对溃疡愈合质量的影响及作用机制。方法采用大鼠乙酸胃溃疡模型，观察健胃汤对该模型溃疡愈合质量的影响，并用原位分子杂交法检测表皮生长因子受体mRNA（EGFR mRNA）的表达。结果健胃汤能改善胃黏膜组织损伤并提高溃疡周围组织EGFR mRNA的表达，与模型对照组比较，差异有显著意义（P〈0．05）。结论健胃汤能提高溃疡愈合质量，增强溃疡瘢痕处EGF mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

基因芯片技术在肿瘤研究中的应用

基因芯片是将大量靶基因 (或基因片段 )用点样仪有序地(点与点之间的距离一般小于５００μｍ )点在玻璃、硅等载体上制作而成 ,包括ＤＮＡ芯片 (ＤＮＡ微阵列 )与ｃＤＮＡ芯片（ｃＤＮＡ微阵列 )两种。将待测样品用荧光染料标记制成的探针与芯片杂交 ,杂交信号用激光扫描仪检测 ,计算机分析检测结果 ,可获得类似于传统的点杂交等的分子杂交数据 ,比较各组间靶基因表达谱的差异 ,可达到快速、高效、高通量及平行性地分析生物信息的目的。近年来 ,基因芯片技术已广泛地应用于肿瘤的多项研究中。１肿瘤性疾病的分类、诊断和预后与传统的分子诊…     

组织芯片在病理学的研究进展

组织芯片 (tissue chip)又称组织微阵列 (tissuemicro- array) ,是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张玻璃片上制成的组织切片 [1]。分为多组织切片 (multi- tissue section,最多可含 6 0个直径 2mm的组织 )和组织微阵列 (最多可含 1 0 0 0个直径 0 .6 mm的组织 )。组织芯片的特点是 :体积小 ,信息含量大 ,一次性实验即可获大量结果 (high-throughout)。组织芯片可用于组织中的 DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测。象普通切片一样 ,可做苏木精—伊红 (HE)染色、特殊染色、免疫组织化学、DNA/ RNA原位杂交、荧光原位杂交(fluorescen…     

SHG-44细胞体内外实验中KDR mRNA 的表达及意义

目的探讨插入型激酶受体(KDR)mRNA在裸小鼠可移植人脑胶质瘤不同生长阶段与不同组织区域中的表达规律,以及探讨其与肿瘤血管形成的作用关系,以期从肿瘤间质角度为胶质瘤选择治疗靶点提供实验依据.方法利用恶性人脑胶质瘤SHG-44细胞进行裸小鼠体内实验:在30只裸小鼠(10组)皮下建立SHG-44细胞移植瘤动物模型,每5天取一组标本,以KDR mRNA原位分子杂交技术处理移植瘤石蜡标本.同时在体外进行SHG-44细胞原位杂交,所得结果和移植瘤比较分析.结果 KDR mRNA高表达于移植瘤中内皮细胞和部分瘤细胞,且在移植的早期(5-15d)和晚期(35-50d)以及在缺氧瘤组织区域上存在相对高表达.体外SHG-44细胞不表达KDR mRNA.结论 KDR mRNA在移植性人脑胶质瘤细胞中有较高表达,在不同的生长阶段和不同的瘤组织区域上存在差异表达的规律性,对肿瘤血管形成具有重要作用.KDR可作为抗胶质瘤血管形成的治疗靶点.     

芒果苷作用于COX-2和5-LOX双靶点改善良性前列腺增生炎症

目的 研究芒果苷对良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)炎症的治疗作用及其潜在的作用机制。方法 Western Blot和q-PCR技术检测大鼠前列腺组织中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)在蛋白水平上和mRNA水平上的表达，并用计算机分子对接技术加以佐证。此外，对前列腺湿质量(prostate weight, PW)、前列腺指数(prostate index, PI)、前列腺组织学形态进行考察。结果 Western Blot和q-PCR结果表明，芒果苷可抑制大鼠前列腺组织中COX-2和5-LOX在蛋白水平和mRNA水平上的表达，分子对接技术结果表明芒果苷与COX-2和5-LOX受体模型均有结合能力。同时，PW、PI及组织病理学切片结果均表明芒果苷可明显改善BPH炎症。结论 芒果苷同时作用于COX-2和5-LOX双靶点，通过下调COX-2和5-LOX的表达，从而改善BPH炎症。     

Twist蛋白上皮性钙黏蛋白mRNA及蛋白在喉鳞癌中表达的研究

目的 观察Twist蛋白、上皮性钙黏蛋白mRNA及蛋白在喉鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用及临床应用价值.方法 应用原位分子杂交检测上皮性钙黏蛋白mRNA和免疫组织化学SP法检测Twist蛋白、上皮性钙黏蛋白分别在80例喉鳞癌、30例不典型增生和20例慢性炎症组织中的表达.结...     

基因芯片及应用前景

１基本概念基因芯片 (ｇｅｎｅｃｈｉｐ)也叫ＤＮＡ芯片、ＤＮＡ微阵列 (ＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ) ,是指采用原位合成 (ｉｎｓｉｔｕｓｙｎｔｈｅｓｉｓ)或显微打印手段 ,将数以万计的ＤＮＡ探针固化于支持物表面上 ,产生二维ＤＮＡ探针阵列 ,然后与标记的样品进行杂交 ,通过检测交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断 ,由于常用硅芯片作为固相支持物 ,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术 ,所以称之为基因芯片技术。２应用测序。基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列 ,…     

采用组织芯片技术分析乳腺癌中PTEN对HIF-1α表达的影响

目的 研究乳腺癌组织中PTEN、HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达及PTEN对后两者的影响,并探讨其意义.方法 制作80例乳腺癌组织芯片,另设20例非肿瘤病变组织对照组,采用免疫组织化学方法检测HIF-1α、PTEN在乳腺癌中的表达,采用原位分子杂交方法检测HIF-1αmRNA在乳腺癌中的表达.结果 浸润性乳腺癌中HIF-1α、HIF-1αmRNA的表达高于非浸润性乳腺癌及非肿瘤病变组织对照组(P＜0.01);浸润性乳腺癌中PTEN的表达低于非浸润性乳腺癌及非肿瘤病变组织对照组(P＜0.01).淋巴结有转移组HIF-1α、HIF-1αmRNA的阳性率高于无转移组(P＜0.01);淋巴结有转移组PTEN的阳性率低于无转移组(P＜0.01).PTEN阳性组中,HIF-1α阳性率为40.6%,PTEN阴性组中阳性率为83.3%,两者有显著性差异(P＜0.01);PTEN阳性组中,HIF-1αmRNA阳性率为50.0%,PTEN阴性组中,HIF-1αmRNA阳性率为83.3%,两者有显著性差异(P＜0.01).结论 HIF-1α和HIF-1αmRNA的高表达及PTEN的低表达均与乳腺癌浸润及淋巴结转移有关.乳腺癌中PTEN与HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达呈负相关.     

死胎脐带组织中HBV DNA表达的研究

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)垂直传播是造成ＨＢＶ携带者的重要原因 ,也是导致新生儿发育不良和死亡的重要因素之一。为了解胎儿脐带组织中是否有ＨＢＶ复制 ,我们进行了初步研究。资料和方法一、死胎脐带组织中ＨＢＶＤＮＡ检测　采集 40例乙型肝炎产妇娩下的孕周在 3 6～ 40周范围的死胎 ,常规尸检 ,取脐带组织 (未受母血污染 ) ,1 0 %中性福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,组织切片 ,(原位分子杂交按Ｓｏｕｔｈｕｒｎ法 )脱蜡水化 ,蒸馏水冲洗 ,3 7℃温箱烘干 ,蛋白酶Ｋ(2 0 μｇ/ｍｌ)室温下消化 3 0ｍｉｎ ,脱水 ,3 7℃温箱烘干 ,加生物素标记的ＨＢ…     

基因芯片在肾癌相关基因研究中的应用

目的 :通过研究人肾癌组织和癌旁正常组织中差异表达的基因 ,寻找肾癌相关基因以用于诊断和治疗。方法 :以包含8000个cDNA基因表达谱芯片研究一组肾癌组织样本的基因表达谱。按一步法抽提肾癌和对照组癌旁正常组织的总RNA并纯化mRNA ;将等量的对照组组织和肾癌组织mRNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA—链做探针 ,混合后杂交上述基因芯片。经严格洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像 ,计算后分析比较两种组织中差异表达的基因。结果 :共筛选出差异表达基因95条 ,其中未知基因44条。结论 :基因芯片在筛选肾癌相关基因的改变具有快速、高通量、灵敏的特点 ,肾癌在细胞代谢、信号转录、蛋白合成的相关基因方面有异常表达     

DNA分子标记技术：一种新的中药分析方法

中药分析的主要任务是鉴定品种真伪,确定质量优劣。分子生物学研究发现,中药(不含矿物类及分泌物类药材如牛黄、马宝、燕窝和乳香、没药等)所依赖的生物资源———“物种”的生物多样性(Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ)是由于其基因组中ＤＮＡ多态性(Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)的结果,检测这种多态性的方法就是ＤＮＡ分子标记技术(ＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ)。它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表中药分析的遗传本质。在ＤＮＡ分子水平,分子杂交(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)和聚合酶链反应(Ｐｏｌｙｍｅ…     

肿瘤转移抑制基因nm23-H1 mRNA在胃癌中的表达及其临床意义

为探讨肿瘤转移抑制基因nm23-H1在胃癌中的表达及其意义．应用原位分子杂交(ISH)技术检测112例胃癌组织中的nm23-H1表达，结合临床资料分析。结果显示．胃癌肿瘤区、移行区及癌旁区的nm23-HtmRNA阳性表达分别为42．9%、27．6％和18%呈梯度下降趋势；nm23．H2 mRNA的阳性表达与胃癌的临床分型和组织学分类差异无显著性(P＞0．05)．在有和无淋巴结转移的胃癌中．nm 23-H1 mRNA的阳性表达率分别为10．8％(7/65)和87．2%(41／47)≥3年的生存者在随访88倒中68．6%(24／35)nm23-H1 mRNA表达阳性．在&;lt;3年的生存者中其阳性率为37．9“5(11/29)．结论；nm23-HtmRNA在胃癌病入的阳性高表达提示淋巴结转移步．生存期长．预后好。     

肉桂提取物调控COX-2的表达改善大鼠良性前列腺增生

目的 研究肉桂乙醇提取物(Cinnamomum cassia Prsel ethanol extract, CE)对良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasa, BPH)的治疗作用及其可能的作用机制。方法 分子对接初步推测CE中3种化合物对环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)的结合能力。考察前列腺湿重(prostate weight, PW)、前列腺指数(prostate index, PI),并采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-esion staining, HE)观察大鼠前列腺组织的形态变化;Western-blot和q-PCR检测大鼠前列腺组织中COX-2和5-LOX的蛋白、mRNA表达水平。结果 分子对接结果表明,CE中3种主要活性单体化合物与COX-2及5-LOX蛋白模型均有较好的结合能;Western-blot和q-PCR结果显示,CE能同时降低COX-2及5-LOX在蛋白和mRNA水平上的表达,对COX-2的下调具有显著性;PW、PI及组织病理学切片...     

p38蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响

目的观察特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响。方法BALB/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组。通过原位分子杂交和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-4、IL-5 mRNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4、IL-5含量以及肺组织IL-4、IL-5mRNA的表达较正常对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.01);SB203580干预组小鼠上述指标较哮喘模型组小鼠明显降低,差异亦具有显著性(P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻。结论SB203580能降低气道炎症细胞的聚集和炎症介质的表达。抑制p38 MAPK的活性可能成为哮喘治疗的新途径。