转化生长因子-β与白细胞介素-1对眼晶状体上皮细胞的影响

目的研究体外细胞培养中转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-1（IL-1）对人品状体上皮细胞（HLEC）的增生作用，对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法首先进行晶状体上皮细胞的原代培养，传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组，分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1，设空白对照组，进行^3H-TDR掺入实验，观察TGF-β、IL-1对晶状体上皮细胞的作用。结果TGF-β对在体外的HLEC增生有促进作用，并随剂量增加而增强（P〈0．05）。IL-1对在体外HLEC的增生也有促进作用并随剂量增加而增强（P〈0．05）。结论TGF-β、IL-1在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在牛晶状体上皮细胞中的表达和调控

目的　探讨牛晶状体上皮细胞 (BLEC)中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达和胎牛血清对表达的调控作用 ,推测白内障摘除术后血 房水屏障破坏对bFGF的影响。方法　采用免疫组化法和Westernblot法检测体外培养的BLEC中bFGF的表达 ,以及不同浓度胎牛血清 (0 1%、1 0 %及 10 0 % )作用 2 4h、10 0 %胎牛血清作用不同时间 (4、8、12及 2 4h)对bFGF相对表达量的影响。结果　免疫组化法检测显示绝大部分BLEC胞浆中可见bFGF表达。Westernblot法检测显示BLEC中表达的bFGF相对分子质量为 180 0 0 ;bFGF的表达随胎牛血清浓度的增加而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;随胎牛血清作用时间的延长而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　BLEC中可见低相对分子质量bFGF的表达 ;胎牛血清可诱导BLEC中bFGF表达 ;白内障摘除术后血 房水屏障的破坏可导致房水中血清浓度改变 ,引起晶状体上皮细胞中bFGF表达增强。     

碱性成纤维细胞生长因子受体抗体对人晶状体上皮细胞超微结构的影响

目的:为研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)及其受体抗体对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)超微结构的影响。方法:采用透射电镜观察正常HLECs及bFGF作用后及受体抗体阻断bFGF在HLECs作用的超微结构变化。结果:正常HLECs胞内较多的线粒体、粗面内质网和游离核糖体及少量微丝结构,核膜完整,染色质均匀。bFGF作用后表现为细胞膜完整,膜局部突起较多,线粒体和游离核糖体明显增多,基质较致密,细胞核附近有较多微丝结构,核膜完整,染色质均匀,核仁增大。bFGF受体抗体阻断作用后表现为细胞突起消失、细胞膜明显破坏,大量线粒体空化,嵴消失,基质减少,呈云雾状退化,内质网明显减少至消失,核膜破坏明显,有的细胞结构不清,趋于死亡。结论:bFGF对HLECs的促增殖作用可被FGF受体抗体所阻断。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF)对兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelia cell,RlECs)的作用。方法：采用bFGF作用于第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞对增殖的影响;电观察细胞形态的变化,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果：bFGF可促进晶状体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg.L^-1作用最明显,透射电镜显示细胞增殖活跃,流式细胞仪观察进入S期的细胞明显增加。结论：bFGF是促进培养兔晶状体上皮细胞增殖的重要因素。     

碱性成纤维细胞生长因子对牛晶状体上皮细胞增殖的影响及其在牛晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ） 在体外对牛晶状体上皮细胞（ＢＬＥＣ） 增殖的影响及确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 方法　ＢＬＥＣ 原代培养。用不同浓度的ｂＦＧＦ 及３Ｈ胸腺嘧啶（３ＨＴＤＲ） 处理ＢＬＥＣ３６ ｈ 后,液闪测定ｂＦＧＦ 对ＢＬＥＣ３ＨＴＤＲ 掺入率的影响。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹（ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ） 法确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 结果　ｂＦＧＦ 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖作用,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法表明ＢＬＥＣ 可表达低分子量（１８ ０００）ｂＦＧＦ 蛋白。 结论　ｂＦＧＦ 可能通过晶状体上皮细胞的自分泌,促进白内障术后残留晶状体上皮细胞的增殖,导致后发性白内障     

碱性成纤维细胞生长因子基因在人晶状体上皮细胞内的表达

目的:为研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因在人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)内表达情况。方法:采用原位杂交方法,用cDNA探针检测HLEC内bFGF mRNA的表达,并用图像分析进行相对定量。结果:HLEC内可检测到bFGF mRNA的表达。结论:HLEC内存在bFGF基因表达。     

转化生长因子β诱导晶状体上皮细胞凋亡

目的 探讨转化生长因子β（ＰＧＦ－β）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 ＭＴＴ法测定细胞经不同浓度ＴＧＦ－β作用后的增殖情况;以ＴＵＮＥＬ技术研究ＴＧＦ－β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 ＴＧＦ－β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖,抑制率高达３５％。原位凋亡测定显示ＴＧＦ－β作用３０ｍｉｎ至８小时可明显诱导晶体上皮细胞凋亡,阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀 以。结论 转化生长     

碱性成纤维细胞生长因子基因在胎儿与白内障患者晶状体上皮细胞内表达的比较

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子基因在胎儿和白内障患者晶状体上皮细胞内表达的区别。方法:采用原位杂交方法,用cDNA探针检测胎儿培养及组织切片中的晶状体上皮细胞和白内障患者前囊中的晶状体上皮细胞的bFGF的mRNA,并用图像分析进行相对定量,比较胎儿培养细胞、组织切片细胞及患者囊膜细胞的积分光吸收度值。结果:胎儿的培养及组织切片中晶状体上皮细胞和白内障患者前囊中的晶状体上皮细胞都存在bFGF基因表达。胎儿体外培养晶状体上皮细胞、胎儿组织切片晶状体上皮细胞和白内障患者晶状体上皮细胞积分光吸收度值分别为627.1±268.7,131.5±42.8和79.2±26.3。胎儿体外培养晶状体上皮细胞积分光吸收度值显著高于胎儿组织切片晶状体上皮细胞(P<0.01);白内障患者晶状体上皮细胞积分光吸收度值显著低于胎儿晶状体上皮细胞(P<0.01)。结论:晶状体上皮细胞体外培养可增加bFGF基因表达;胎儿晶状体上皮细胞bFGF基因表达显著高于白内障患者晶状体上皮细胞。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bF     

白细胞介素-1β促人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的 观察炎前因子白细胞介素-1β(IL-1β)对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-β浓度为0、1、10、20 ng/ml和时间为24、36、48 h作用下RPE细胞的VEGF和bFGF分泌量变化;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定10 ng/ml IL-1β作用48 h后RPE细胞的VEGF和bFGFmRNA变化;噻唑蓝(MTT)比色法测定IL-1β刺激后RPE细胞的增生状态.结果 相同刺激时间即36 h作用下,终浓度为1、10 ng/ml的IL-1β促进RPE细胞VEGF的分泌(q=32.79,42.56;P<0.01);10 ng/ml的IL-1β促进bFGF的分泌(q=7.514,P<0.01);与浓度为10 ng/ml的IL-1β刺激相比,增加IL-1β刺激浓度至20 ng/ml使RPE细胞VEGF和bFGF分泌量下降(q=9.35,6.92;P<0.01).相同浓度即10 ng/ml的IL-1β作用下,IL-1β作用时间与RPE细胞VEGF和bFGF分泌量具有正性时间-效应关系;浓度为10 ng/ml的IL-1β作用48 h可促进RPE细胞的VEGF和bFGF mRNA水平;MTT结果 证明IL-1β未明显影响RPE细胞的增生状态(F=0.317,P>0.05).结论炎前因子IL-1β可影响人RPE细胞VEGF和bFGF的分泌量,在一定的作用浓度和作用时间范围内具有显著的促进效应.     

地塞米松对大鼠品状体上皮细胞成纤维细胞生长因子受体表达的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)受体表达的影响及意义.方法 选取1月鼠龄SD大鼠,予地塞米松眼膏涂双眼结膜囊,分别于用药1个月、3个月及6个月后摘取晶状体作为实验材料;采用晶状体前囊膜铺片方式,应用荧光免疫组化技术进行FGFR1荧光免疫组化染色,检测其蛋白水平表达的变化;采用剥取晶状体囊膜组织方法,应用RTPCR技术检测FGFR1在转录水平表达的变化.取相同数量的正常同龄大鼠作为对照组进行相同的检测.结果 荧光免疫组化结果可见FGFR1呈绿色阳性表达,应用地塞米松1个月、3个月、6个月后,实验组FGFR1阳性表达分别为131663±15818、98058±7222和47342±3135,同龄对照组阳性表达分别为191579±14807、159016±10399和84543±6485,组间及组内差异均显著(P＜0.05);RT-PCR结果可见,用药1个月、3个月、6个月后,实验组FGFR1 mRNA表达水平分别为0.68±0.06、0.54±0.05和0.23±0.03,同龄对照组的mRNA表达水平分别为1.07±0.19、0.79±0.11和0.44±0.05,组间及组内差异均显著(P＜0.05);提示在蛋白及转录水平,正常大鼠LEC中FGFR1的表达随年龄增长逐渐降低,应用地塞米松可降低FGFR1的表达,并且随着地塞米松用药时间延长,FGFR1的表达进一步降低.结论 地塞米松可以降低大鼠LEC中FGFR1的表达,并随着用药时间的延长,其表达进一步降低,可能对白内障的形成有一定的影响.     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bFGF以及0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、1ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ns/mJ的TGF-β,两组均设空白对照.6 d后进行细胞计数.选用t-test进行统计分析.每株细胞重复3次,共重复3株细胞,观察bFGF和TGF-β对巩膜成纤维细胞的生长调控作用.结果 bFGF能明显促进人巩膜成纤维细胞的生长,随浓度增加呈明显剂量效应关系.bFGF大于10 ng/ml时(包括10 ng/ml),和无bFGF的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).TGF-β能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,抑制细胞生长的作用亦呈明显的剂量效应关系.TGF-β大于0.3 ng/ml时(包括0.3 ng/ml),和无TGF-β的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 本实验结果显示,bFGF对人巩膜成纤维细胞生长具有明显促进作用,而TGF-β则表现为明显抑制作用.进一步证实外源性bFGF和TGF-β可能作用于巩膜组织,并通过调控巩膜成纤维细胞的生长及巩膜细胞外基质合成代谢单独或协同作用参与巩膜重塑过程.     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸及其脂质体对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸及其脂质体对大鼠晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用。方法 体外培养大鼠LEC,细胞传代后分别加入bFGF反义和正义寡核苷酸及其脂质体,以营养液和无药脂质体为对照培养24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞bFGF mRNA的表达情况。结果 大鼠LEC原代培养24 h可见细胞生长,形态为多边形,培养2-3周细胞汇合成片;传代培养细胞可在1～2周汇合成片。MTT法测定显示,bFGF反义寡核苷酸组(Ⅰ组)、正义寡核苷酸组(Ⅱ组)及营养液组(Ⅴ组)的吸光度(A值)分别为0.138±0.074、0.325±0.097及0.370±0.079,Ⅰ组A值显著小于Ⅱ和Ⅴ组(P=0.024,0.005);bFGF反义寡核苷酸脂质体组(Ⅲ组)、正义寡核苷酸脂质体组(Ⅳ组)及无药脂质体组(Ⅵ组)的A值分别为0.128±0.032、0.258±0.120及0.348±0.017,Ⅲ组A值显著小于Ⅵ组(P=0.000)。RT-PCR法检测结果显示,以2μg总RNA为模板,循环30次,bFGF反义寡核苷酸、bFGF正义寡核苷酸及营养液的扩增产物的量分别为0.33、0.99及0.85μg;:bFGF反义寡核苷酸脂质体、bFGF正义寡核苷酸脂质体及无药脂质体的扩增产物的量分别为0.23、0.48及0.56μg。结论大鼠LEC可在体外培养;bFGF反义寡核苷酸及其脂质体可     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞增殖及移行作用的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养的人晶状体上皮细胞（HLEC）增殖及移行作用的影响.方法 在无血清培养液培养的HLEC中分别加入不同终浓度的bFCF（0.01、0.1、1、10及100 μg/L）,MTT法测定其促细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLEC损伤愈合模型,观察不同终浓度bFGF处理24 h后HLEC的移行情况.结果 bFGF浓度为0.1、1、10、100 μg/L时,其对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,100 μg/L作用24 h增殖率最大,达112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性.bFGF通过促进细胞周期变化,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多,通过促进HLEC由G0向G1的转化来促进细胞的增殖;bFGF浓度1、10、100 μg/L作用24 h.可明显促进HLEC的移行,其移行能力分别为27.21%、154.42%、和238.77%,与阴性对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0.01）.结论 bFGF可促进HLEC的增殖和移行,是HLEC强有力的有丝分裂原和促移行因子.     

TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用

晶状体上皮细胞的转分化是后发性白内障和前囊下白内障的主要病理改变.目前研究发现有多种调控因素参与晶状体上皮细胞转分化的发生发展过程,其中转化生长因子β(TGFβ)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等生长因子在此过程中起着至关重要的作用,另外细胞外基质等一些因素也与之密不可分.本文就近年来关于TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用、两者的协同作用的研究作一综述.     

碱性成纤维细胞生长因子促人晶状体上皮细胞增生的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂ－ＦＧＦ）在后发性白内障形成过程中的作用。方法 应用体外培养人的晶状体上皮细胞,第３代细胞悬液接种于２４孔培养板内,加入不同终浓度的ｂ－ＦＧＦ（０,１,０,１０．０,１００．０ｎｇ／ｍｌ）,每组重复３孔,培养７２ｈ后,细胞计数。结果 ｂ－ＦＧＦ添加组,细胞增生呈浓度依赖性,ｂ－ＦＧＦ浓度越高,细胞增生越快。结论 白内障手术后房水中内源性ｂ－ＦＧＦ的增加可能是后发     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞促增殖作用研究

研究了碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的促增殖作用。方法胎儿晶状体上皮细胞原代与传代培养。第２代培养细胞中添加ｂＦＧＦ,浓度１０＾－３－１０＾３ｎｇ／ｍｌ,用甲基噻唑基四唑测定法观察ｂＦＧＦ对ＨＬＥＣｓ的影响。结论ｂＦＧＦ在后囊混浊发生上起了生要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β在实验性近视中的研究进展

bFGF(碱性成纤维细胞生长因子，basic fibmblast growth factor)和TGF-β(转化生长因子-β，transfbmling growth factor-β)是体内分布广泛、具有多种生物学功能的两种细胞因子。近年的研究发现，实验性近视发生发展过程中视网膜及巩膜的bFGF和TGF-β含量发生改变，而外源性的bFGF和TGF-β也可影响近视的形成，表明bFGF和TGF-β与近视具有密切的关系。其可能的机制为：在异常的视觉环境中，视网膜上的hFGF和TGF-β含量发生变化，作为信号，传递到巩膜，进而影响巩膜细胞的增殖及细胞外基质的降解，使巩膜重新塑形，眼轴过度延长，形成近视。本研究就这两种生长因子和近视的相关研究做一论述。     

MG132对人晶状体上皮细胞增生、移行和上皮-间充质转化的抑制作用

背景 晶状体后囊膜混浊（PCO）发生的主要病理机制是白内障术后后囊膜残留的晶状体上皮细胞（LECs）的增生、移行和分化,研究发现蛋白酶体抑制剂MG132可抑制牛LECs的增生,但对人LECs的生物学影响尚不明确. 目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的人LECs增生、移行和上皮-间充质转化（EMT）的抑制作用.方法 收集白内障超声乳化摘出术中连续环形撕囊的囊膜片用组织块培养法进行原代培养并传代,取第2代或第3代LECs进行常规消化,调整细胞密度至5×105个/ml,以200 μl/孔接种至96孔板常规培养24 h,分别加入成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用MTT法测定吸光度（A490）值,计算LECs的增生率.在移行能力测定中,应用传代的人LECs分别加入FGF-2、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,用无菌棉棒在细胞层中划出细胞裸露区,继续培养24 h,计数移行至裸露区的细胞,评估细胞移行率.在传代的人LECs培养液中分别加入转化生长因子-β2（TGF-β2）、MG132或MG132＋TGF-β2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用免疫组织化学法检测细胞质中纤维连接蛋白（FN）的表达. 结果 对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值（A490）分别为0.582±0.020、0.723 ±0.010、0.434±0.011和0.465±0.008,总体差异有统计学意义（F=110.482,P＜0.01）,FGF-2组LECs增生值明显高于对照组,MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数目分别为8.67±1.08、11.58±1.59、2.67±0.09和2.75±0.09,差异有统计学意义（F=34.301,P＜0.01）,其中FGF-2组LECs的移行数明显多于对照组,而MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数明显少于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与对照组比较,MG132组LECs的增生率和移行率分别降低25.4％和75.0％,FGF-2组LECs增生率和移行率分别增加24.2％和33.6％,MG132＋FGF-2组LECs的增生率和移行率分别下降20.1％和68.3％.对照组、TGF-β2组、MG132组和MG132＋TGF-β2组LECs中FN表达量（A值）分别为1.242±0.023、2.329±0.113、1.043±0.021和1.163±0.018,差异有统计学意义（F=113.752,P＜0.01）,TGF-β2组LECs中FN表达量明显高于对照组,而MG132组和MG132＋TGF-β2组明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.TGF-β2可以诱导人LECs转分化,FN表达增强;MG132与TGF-β2同时存在时可以减弱人LECs转分化,FN表达下降. 结论 MG132抑制体外培养的人LECs的增生与移行,并可阻止TGF-β2诱导的人LECs的EMT.     

转化生长因子-β2诱导的上皮间质转分化对人晶状体上皮细胞基因表型的影响

目的观察转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮问质转分化（EMT）时,其形态和基因表型所发生的变化。方法在体外培养的人LECs中,加入100pg／mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白（CDHl）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（VIM）等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较。结果加人TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDHl的表达水平逐渐下调,48h时相对表达量为1．10E-06,和对照组2．68E-06相比差异有统计学意义（P=0．002）;间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48h时相对表达量为1．64E-02,和对照组1．37E-02相比差异有统计学意义（P=0．006）;而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48h时相对表达量为9．21E-03,虽和对照组8．67E-03相比差异无统计学意义（P=0．551）,但仍呈上升趋势。结论在TGF-132诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化。