胆粉(汁)类药材的DNA指纹图谱鉴别方法研究

《中国药典》收载了猪胆粉、牛胆粉、蛇胆汁、羊胆、鹅胆粉、熊胆粉等药材。胆粉(汁)类药材在我国药用历史悠久,疗效明确。但其形态相似、多种药材缺乏专属性显微鉴别特征和化学特征,存在混伪风险,尤其是对正品中掺杂伪品的情况检出困难。控制胆粉类中药质量,保证临床疗效,解决胆粉类药材的真伪优劣鉴别问题是关键。STR分型技术是通过PCR扩增长度差异分型,比较鉴定生物个体的一种方法。该研究基于STR分型原理建立了一种简单快捷,可用于胆粉类药材及其掺杂样品的通用DNA指纹图谱鉴别方法,并收集猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、蛇、熊、鱼等原动物或胆粉样本,使用筛选获得的鉴别引物12S-L1091/12S-H1478和16S-L3428/16S-H3667扩增并进行STR分型获得DNA指纹图谱。结果各物种的STR指纹图谱不同,可进行物种鉴别,且DNA指纹图谱上能同时反映正品和伪品的信息,可鉴别正伪掺杂品。因此,通过2个引物的结合,完成了胆粉类药材及其正伪掺杂品的鉴别。此外,该研究建立的DNA指纹图谱鉴别方法也可用于其他动物药材的真伪鉴别和掺杂品检出。     

牛胆粉指纹图谱模式识别及多组分测定研究

针对牛胆粉药材中主要活性组分的化学性质,使用具有较好专属性及准确度的HPLC-ELSD建立可准确反映其内在质量的指纹图谱及主要活性组分含量测定方法。采用Phenomenex Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以10 mmol乙酸铵水溶液与乙腈作为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,ELSD漂移管温度为110℃,ELSD氮气流量为2.8 L·h-1。测得13批牛胆粉的甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸的含量,并使用化学计量学对牛胆粉药材指纹图谱进行预处理和模式识别分析。结果样品中甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸的平均质量分数分别为(25.2±17.0)%,(4.1±3.4)%,(24.5±20.0)%,(5.2±3.8)%,4者质量分数总和占牛胆粉(59.0±26.0)%。化学计量学分析结果表明自制样品与市售样品差异较大,指纹图谱之中有4处区域的色谱信号较小,但对这种差异的影响却不容忽视。所建HPLCELSD方法简便快速,适合从定性和定量的角度对牛胆粉进行质量评价与控制,可以为完善该药材质控标准提供科学依据。     

当归药材HPLC指纹图谱研究

目的建立当归药材RP-HPLC指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法以0.3%磷酸（pH3.0）-乙腈为流动相进行梯度洗脱。色谱柱为PhenomenexC18（4.6mm×250mm,5μm）,柱温30℃,检测波长290nm。结果建立了当归的指纹图谱的质量标准,并对不同产地当归指纹图谱的相似度进行了分析,共有指纹峰13个,其中4号峰为阿魏酸,当归药材的相似度大于0.9。结论采用高效液相色谱法建立当归药材的指纹图谱可靠、简便、重现性好,为提高当归药材质量控制标准提供参考。     

西洋参药材高效液相色谱法指纹图谱的研究

目的建立西洋参药材的高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱。方法采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析不同产地西洋参药材的HPLC,建立西洋参指纹图谱分析指标。结果确立了国产和进口西洋参指纹图谱的技术参数,确定18个共有峰;不同产地西洋参药材指纹图谱与对照指纹图谱(R)的相似度均大于0.85。结论该方法建立的西洋参药材HPLC指纹图谱,为药材鉴别和品质评价、质量控制、制定质量标准提供依据。     

紫苏叶中挥发油类成分的指纹图谱研究

目的建立紫苏叶药材中挥发油类成分指纹图谱及含量测定方法。方法选用（5％-苯基）-甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱（30m×0．32mm,0．25μm）,以程序升温的方法进行指纹图谱研究,同时采用GC．MS的方法进行成分鉴定;通过相似度分析、主成分分析、聚类分析等3种方法对不同产地的紫苏叶药材中挥发油类成分进行分析研究,比较不同产地的差异。结果建立了紫苏叶药材中挥发油类成分的指纹图谱和含量测定方法。通过计算机谱库检索,鉴定出20个化学成分,其中主要成分为2-己酰呋喃、紫苏醛、β-石竹烯、芹菜脑。采用相似度分析、主成分分析、聚类分析3种方法对紫苏叶进行指纹图谱分析,得到了较为一致的结论。结论通过对紫苏叶药材系统的质量研究,建立了药材的指纹图谱及含量测定方法,并反映了紫苏叶在地域方面存在差异,为药材的选择提供了一定依据。     

遵义地产药材白及与知母HPLC指纹图谱识别

目的:研究并建立遵义白及药材HPLC指纹图谱识别方法,方法:采用HPLC色谱法,建立指纹图谱识别共有模式。结果:建立白及药材HPLC指纹图谱识别方法,并对不同产地的白及和白及对照药材进行相似度比较,HPLC指纹图谱标定为13个共有峰,10批不同产地白及药材相似度均大于0.95,3批知母药材相似度均小于0.20。结论:白及药材HPLC指纹图谱具有重复性好、特征性强、方法简便等特点,可用于白及的有效鉴别。     

土茯苓药材HPLC指纹图谱研究

目的：采用反相高效液相色谱法（HPLC）,研究并建立土茯苓药材的指纹图谱。方法：采用YMC-Pack ODS-A（5μm,4.6mm×250 mm）色谱柱,乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱;流速0.8 ml/min;检测波长290nm。结果：方法学考察表明,本研究建立的分析方法有较好的重现性。不同来源土茯苓药材的指纹图谱相似度较好,土茯苓与其3种混淆品的指纹图谱有明显区别。结论：HPLC指纹图谱分析法可作为土茯苓药材的质量控制方法。     

刺五加药材指纹谱（HPLC—FPS）分析方法研究及不同产地药材谱比较

目的：对3种不同产地的刺五加药材进行指纹谱（HPLC-FPS）比较研究。方法：以宁安刺五加药材为分析对象。选择适宜的条件。建立3个刺五加药材样品的指纹图谱。结果：方法学考察表明,本研究建立的分析方法有比较好的重现性;不同产地的刺五加药材共有峰面积的比值有一定的差异。结论：HPLC指纹图谱分析法可简便快速鉴别区分不同来源的刺五加药材。     

不同产地黄芩药材的黄芩苷含量测定及指纹图谱研究

目的：比较研究不同产地黄芩药材指纹图谱，并测定黄芩苷含量评价药材质量。方法：用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（版本：2004A），对黄芩药材的甲醇提取物的指纹图谱进行了研究。采用药典方法测定黄芩苷含量。结果：不同产地黄芩药材指纹图谱有很大相似性。但黄芩苷的含量有很大的差异。以山西芮城含量最高，山西灵丘含量偏低。结论：建立的指纹图谱方法可操作性强，重现性好，可作为黄芩指纹图谱研究的基础。为黄芩药材的质量评估提供有益信息。     

连翘药材HPLC指纹图谱的研究

目的建立连翘药材HPLC指纹图谱。方法采用HPLC法,用Shiseido Capcell pak MG C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱,流速为1ml.min-1,检测波长210nm,柱温：25℃。以中药色谱指纹图谱相似度评级系统（版本2004A）软件计算,先建立标准指纹图谱,并与其他产地翘药相似度计算。结果以河南卢氏产连翘建立标准指纹图谱,其他产地连翘药材指纹图谱的相似度在0.704-0.938,确定了12个共有峰,建立了连翘药材HPLC指纹图谱。结论本法可作为连翘药材的质量控制方法。     

苍术薄层色谱指纹图谱研究

目的建立中药苍术的薄层色谱指纹图谱。方法采用硅胶GF254预制板以及硅胶HSGF254预制板,控制室内温度25℃、相对湿度53%,展开剂组成为甲苯-乙酸乙酯（7∶1）,紫外光（254 nm）下观察荧光猝灭斑点。用薄层色谱视频摄像系统拍摄图像,并自动生成色谱轮廓扫描图谱,同时获得积分数据。并对收集的10批药材样品在同一薄层板上平行分析比较。结果不同地区的10批苍术药材的薄层色谱指纹图谱有共同的特征荧光色谱图像。结论苍术的薄层色谱指纹图谱可作为其指纹特征。     

不同产地白芍药材的指纹图谱研究

目的：建立白芍药材的高效液相色谱和薄层色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法：利用ＨＰＬＣ方法,梯度洗脱,测定了 １０批白芍样品。色谱条件为：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ,５μｍ）,流速 １．０ｍＬ·ｍｉｎ－１,柱温为 ２５℃,流动相 Ａ为乙腈;流动相 Ｂ为０．０５％磷酸水,分析时间为９５ｍｉｎ。同时利用 ＴＬＣ方法,建立１０批白芍药材的薄层色谱指纹图谱,展开剂为三氯甲烷 －乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸（４０５１００．２）。结果：１０批白芍药材样品 ＨＰＬＣ指纹图谱获得包括芍药苷（９号峰）在内的 １５个共有峰,其中安徽、浙江的白芍饮片的指纹图谱相互之间差异较小。结论：白芍药材的指纹图谱特征性及专属性强,可用于全面控制白芍的质量,确保每批产品的均一性。     

基于主成分分析模式对不同产地梅花鹿茸HPLC指纹图谱研究

目的建立不同产地梅花鹿茸的HPLC指纹图谱,并对梅花鹿茸和马鹿茸的指纹图谱进行模式识别研究。方法利用HPLC-DAD方法,以不同产地梅花鹿茸药材为研究对象,对10批药材进行了指纹图谱分析,同时运用主成分分析对梅花鹿茸和马鹿茸进行模式识别研究。结果建立了10批梅花鹿茸药材的指纹图谱,确定了10个共有峰,通过主成分分析将梅花鹿茸和马鹿茸分为3类。结论所建立的HPLC指纹图谱及主成分分析模式方法具有快速稳定的特点。     

红穿破石HPLC指纹图谱研究

目的研究红穿破石药材的HPLC指纹图谱,为合理评价及有效控制其质量提供参考数据。方法采用Agilent TC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0mL/min,在291nm波长下检测,测定10批次不同产地红穿破石药材,并运用计算机辅助相似性评价系统计算图谱之间的相似度。结果 10批红穿破石药材指纹图谱之间的相似度较高。结论该方法重复性好,具有一定的专属性,可作为红穿破石药材鉴别的依据。     

薄层色谱指纹图谱对熟地黄质量稳定性的实验研究

目的：为鉴别生熟地黄及考察熟地黄饮片质量的稳定性和一致性，建立了薄层色谱指纹图谱。方法：薄层板：自制的0.25mol磷酸二氢钠缓冲盐硅胶G板；展开系统：乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（3：5：1：1）；显色：苯胺-二苯胺-磷酸溶液为显色剂，85℃加热至斑点显色清晰。结果：色谱图谱及全通道扫描结果显示，10批清蒸和10批酒炖样品间的相似程度较高，饮片质量比较均一、稳定。结论：薄层色谱方法操作简单，图谱特征明显，可比性强，是一种可以快速鉴别药材真伪及考察药材质量是否稳定、一致的有效手段。     

薄层色谱指纹图谱对熟地黄质量稳定性的研究

目的：为鉴别生熟地黄及考察熟地黄饮片质量的稳定性和一致性,建立了薄层色谱指纹图谱。方法：薄层板：自制的0.25mol磷酸二氢钠缓冲盐硅胶G板;展开系统：乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸∶水（3∶5∶1∶1）,显色：苯胺-二苯胺-磷酸溶液为显色剂,85℃加热至斑点显色清晰。结果：色谱图谱及全通道扫描结果显示,10批清蒸和10批酒炖样品间的相似程度较高,饮片质量比较均一、稳定。结论：薄层色谱方法操作简单,图谱特征明显,可比性强,是一种可以快速鉴别药材真伪及考察药材质量是否稳定、一致的有效手段。     

西洋参石斛药膳氨基酸类成分HPLC指纹图谱研究

目的：采用柱前衍生-反相高效液相色谱法（RP～HPLC）,建立西洋参石斛药膳中氨基酸类成分的指纹图谱。方法：采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法,色谱柱为Kromasil C18（250ram×4．6ram,5um）,流动相A为乙腈,B为N,N-二甲基甲酰胺-0．025tool·L^-1醋酸钠（1：100,体积分数36％乙酸调至pH6．0）,梯度洗脱,流速为1.0mL·min^-1,柱温为40℃,检测波长为360nm,进样量为10μL,测定10批西洋参石斛药膳的指纹图谱。结果：标定了23个共有峰,鉴定出17种氨基酸成分,含所有人体必需氨基酸;10批药膳样品指纹图谱的相似度大于0．92,初步建立了西洋参石斛药膳氨基酸类成分的HPLC指纹图谱。结论：该法稳定、简便、重复性好,建立的氨基酸类成分指纹图谱特征性强,可为西洋参石斛药膳的质量评价和工艺优选提供参考。     

HPLC-ELSD结合化学计量学研究银杏叶片中萜类内酯指纹图谱

目的：建立不同厂家银杏叶片中萜类内酯成分HPLC-ELSD指纹图谱。方法：色谱柱为Agi-lentExtend-C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为正丙醇-四氢呋喃-水（1：15：84）,柱温为30℃,流速为1mL·min-1,蒸发光散射检测器检测;采用LC／Q-TOFMS对指纹图谱中的共有峰进行指认。并利用化学计量学方法,包括主成分分析（PCA）、相似度分析（SA）、聚类分析（HCA）,对色谱数据进行分析。结果：该方法精密度、稳定性、重复性良好。同时采用LC／Q-TOFMS方法指认了5个共有峰,分别为银杏内酯J（M）、银杏内酯C、银杏内酯A、银杏内酯B及白果内酯。并采用该方法测定了市售14批银杏叶片,结合PCA、SA及HCA生成了银杏叶片中萜类内酯对照指纹图谱,并根据质量差异将样品分为4大类。结论：本方法可用于银杏叶片中萜类内酯成分的质量评价。     

川麦冬药材中黄酮类成分HPLC指纹图谱的研究

目的:建立川麦冬药材中黄酮类成分的HPLC指纹图谱分析方法,为整体控制和评价川麦冬药材的质量提供依据。方法:采用Waters Symmetry C18柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱,流速为1.0mL.min-1,检测波长296nm,柱温30℃。以甲基麦冬黄烷酮A为参照物,对10批市售川麦冬药材进行指纹图谱的分析。结果:建立了川麦冬药材黄酮类成分的HPLC指纹图谱共有模式,标定了13个共有峰,10批川麦冬药材的相似度在0.960～0.995。结论:该指纹图谱方法简便、准确、重复性好,可专属性地研究川麦冬药材的指纹图谱,为有效地控制该药材的内在质量提供了科学依据。