DiGeorge综合征：临床及细胞遗传学特征

ＤｉＧｅｏｒｇｅ综合征（ＤＧＳ）是一种遗传性疾病，其遗传方式尚未确定。本文论述了ＤＧＳ的临床特征及细胞遗传学基础，多种证据表明ＤＧＳ主要与２２ｑ１１缺失有关，并认为位于该位点的基因缺失可能产生不同的表型。同时指出其他假定的ＤＧＡ基因位点（如１１ｑ１３、１７ｐ１３）也不容忽视。     

A组轮状病毒外壳蛋白VP4的原核表达

选用原核表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ，该载体表达谷胱苷肽－Ｓ转移酶融合蛋白，将完整的Ａ组轮状病毒外壳蛋白基因插入ｐＥＧＸ２Ｔ中，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上没有明显的表达条带，而将部分ＶＰ４基因和６３１个碱基，插入ｐＧＥＸ２Ｔ，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中有明显的表达条带。     

无精症和严重少精症DYS240基因位点的分析

无精子因子的缺失将导致无精子症和严重少精子症。研究应用多聚酶联反应方法分析了６５例核型正常的无精子症和２５例核型正常的严重少精子症患者的ＤＹＳ２４０基因位点。结果显示，无精子症患者中６例缺失ＤＹＳ２４０基因位点，严重少精子症患者中４例缺失ＤＹＳ２４０基因位点。结果提示，ＤＹＳ２４０基因是ＡＺＦ的一个重要的候选成分。     

抗Dystrophin特异性抗血清Anti 5－7的制备

应用作者自行制备的含ＤＭＤ基因中段缺失突变热点区ｃＤＮＡ片段的克隆菌株ＴＡＰ１０６（ｐＳＤ），表达出ＤＭＤｃＤＮＡ５－７蛋白，作为抗原制备特异性抗血清。利用彻底变性的、由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶直接匀浆制备的抗原、和电洗脱纯化使处于相对天然状态的抗原分别免疫兔，得到各为１：２５６０和１：１２８０的高效价抗血清Ａｎｔｉ５－７，为我国ＤＭＤ／ＢＭＤ蛋白诊断创造了条件。     

一种N端缺失的rhGM—CSF（7～127）在大肠杆菌中的表…

在ｈＧＭ－ＣＳＦ结构与功能研究的基础之上，通过应用ＰＣＲ介导的缺失与突变和基因重组等技术，构建了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）的三种原核表达载体ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＧＡ，ｐＢＶ２２０／ＧＭ－ＴＡＡ和ｐＢＶ２２０／ＧＭ－３′ＵＴＲ。在三种载体内，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７～１２７）ｃＤＮＡ的５′端块缺失６个氨基酸，３′端则分别为天然终止密码ＴＧＡ，突变终止密码ＴＡＡ和ＴＧＡ加３′ＵＴＲ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表     

人TNFα－EGF重组质粒的构建

本实验将编码人ＴＮＦａ分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失，代之以人ＥＧＦ基因ｃＤＮＡ，实现基因重组。转化子经快速细胞破碎法初筛、经Ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，从中挑选出２０个人ＴＮＦａ－ＥＧＦ阳性重组质粒，为进一步获得重组嵌合人ＴＮＦａ－ＥＧＦ分子和ＴＮＦａ作用机制的深入探讨奠定了初步基础。     

反转录病毒Gag蛋白的自我装配

反转录病毒基因组的５′端是Ｇａｇ基因，它的下游为ｐｏｌ和ｅｎｖ基因。不管病毒的其它成分是否存在，Ｇａｇ蛋白均能够自我装配病毒样粒子（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅ，ＶＬＰ）甚至在部分氨基酸残基缺失，插入或连接外源基因后，Ｇａｇ蛋白的这种自我装配能力仍不丧失。已经发现，劳斯肉瘤病毒（ＲＳＶ）的Ｇａｇ蛋白的这种自我装配功能与其自身的三个装配域（ａｓｓｅｍｂｌｙｄｏｍａｉｎ，ＡＤ）有关，Ｇａｇ蛋白     

RhD基因外显子多态性观察

目的 观察中国人ＲｈＤ基因。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术,检测３２例血清学试验ＲｈＤ阳性,４４例ＲｈＤ阴性者的Ｄ基因外显子。结果ＲｈＤ阳性者Ｄ基因外显子无缺失,ＲｈＤ阴性者Ｄ基因外显子有完全缺失（６１．４％）、部分缺失（１８．２％）与无缺失（２０．４％）３种类型。结论 中国人ＲｈＤ基因外显子具有多态性。     

抗Dystrophin特异性抗血清Anti5—7的制备

应用作者自行制备的含ＤＭＤ基因中段缺失突变热点区ｃＤＮＡ片段的克隆菌株ＴＡＰ１０６，表达出ＤＭＤｃＤＮＡ５－７蛋白，作为抗原制备特异性抗血清，利用彻底变性的，由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶直接匀浆制备的抗原，和电洗脱纯化使处于相对天然状态的抗原分别免疫兔，得到各为１：２５６０和１：１２８０的高效价抗血清Ａｎｔｉ５－７，为我国ＤＭＤ／ＢＭＤ蛋白诊断创造了条件。     

人TNFα—EGF重组质粒的构建

本实验将编码人ＴＮＦα分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失，代之以人ＥＧＦ基因ｃＤＮＡ，实现基因重组，转化子经快速细胞破碎法切初筛，经Ｄｏｔ ｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定，从中挑选出２０个人ＴＮＦα－ＥＧＦ阳性重组质粒。为进一步获得重组嵌合人ＴＮＦα－ＥＧＦ分子和ＴＮＦα分子和ＴＮＦα作用机制的深入探讨奠定了初步基础。     

抗人CD4单链抗体的表达及其分离纯化

本研究将构建的抗人ＣＤ３单链抗体基因，克隆到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１，用ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合蛋白，并以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在Ｍｒ为５２０００左右出现的一条新生蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的４０％。经初步纯化和复性后，用ＧＳＴ亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗人ＣＤ３ＳｖＦｖ，竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有ＣＤ３亲和活性。     

抗人CD3单链抗体的表达及其分离纯化

本研究将构建的抗人ＣＤ３单链抗体基因，克隆到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，用ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合蛋白，并以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在Ｍｒ为５２０００左右出现一条新生蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的４０％。经初步纯化和复性后，用ＧＳＴ亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗人ＣＤ３ＳｃＦｖ，竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有ＣＤ３亲和活性     

DPC4基因与人类肿瘤

ＤＰＣ４是近年来从染色体１８ｑ２１．１分离出的一候补肿瘤抑制基因。ＤＰＣ４纯合性缺失具有一定的组织特异性，约５０％胰腺癌有ＤＰＣ４纯合性缺失。作为ＴＧＦ－β受体介导的信号转导环路中的一种转录因子，ＤＰＣ４在ＴＧＦ－β诱导的细胞增殖控制作用中起重要作用，ＤＰＣ４纯合性缺失消除了胰腺癌中细胞增殖的负性控制的一个关键性步骤。     

单纯性生长激素缺乏症IA型患者GH1基因缺失位点的研究

单纯性生长激素缺乏症（ＩＧＨＤⅠＡ型）的分子基础是生长激素结构基因（ＧＨ１）的缺失。为了进一步明确ＧＨ１基因缺失的发生机理，应用ＰＣＲ方法钓出了２名患者的包括缺失位点在内的基因片段，克隆后用双脱氧法进行序列分析。结果发现：２例患者在ＧＨ基因簇１８３３～２４２９ｂｐ、８４４６～９０４２ｂｐ位点的两段５９６ｂｐ（９９％同源）基因片段间发生了３次基因的同源性重组交换，从而导致了包括ＧＨ１基因在内的６．７ｋｂ的基因片段缺失。为研究同源重组的分子机理提供了依据。     

利用辐射杂种板(GB4)精细定位人类新基因H-RalGDS于染色体9q34.1

目的 Ｈ－ＲａｌＧＤＳ基因是我们新近分离与克隆的人类新的Ｒａｓ相关基因,是鼠Ｒａｌ鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子（ＲａｌＧＤＳ）在人类的同源基因。利用辐射杂种板（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ,ＲＨ）制图法进行该基因的精细定位。方法 根据Ｈ－ＲａｌＧＤＳ基因ｃＤＮＡ的３’不翻译区设计正反向引物,ＰＣＲ扩增人／鼠辐射体细胞杂种板（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ Ｇｅｎｂｒｉｄｇｅ ４ ｐａｎｅｌ）,并     

DPC4基因与人类肿瘤

ＤＰＣ４是近年来从染色体１８ｑ２１．１分离出的一候补肿瘤抑制基因。ＤＰＣ４纯合性缺失具有一定的组织特异性，约５０％胰腺癌有ＤＰＣ４纯合性缺失。作为ＴＧＦ－β受体介导的信号转导环路中的一种转录因子，ＤＰＣ４在ＴＧＦ－β诱导的细胞增殖控制作用中起重要作用，ＤＰＣ４纯合性缺失消除了胰腺癌中细胞增殖的负性控制的一个关键性步骤。     

抗人肿瘤坏死因子—α单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

目的：将抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，以期得到ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合表达蛋白。方法：将限制性内切酶酶切拼接法获得的Ｅ６ＳｃＦｖ基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物，光密度扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证表达产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，Ｅ６ＳｃＦｖ表达产物约为５２ｋｕ左右，与预期的结果相符；光密度扫描结果表明，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白占菌体总蛋白的４０％；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实，在相应分子量处，有ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的显色印迹；进一步对表达产物的形式分析，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的表达产物为包涵体形式。结论：在大肠杆菌中成功地表达了抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因与谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）基因的融合蛋白     

云南省四个少数民族中所见的G6PD基因突变型

目的 通过鉴定云南省白族、傣族等少数民族中的Ｇ６ＰＤ基因突变型,统计大理市白族Ｇ６ＰＤ缺乏症发生率及基因频率,以了解分子进化和民族起源,并为Ｇ６ＰＤ缺乏症的防治提供理论依据。方法 用错配碱基ＰＣＲ／ＲＥ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＡＲＭＳ法和ＤＮＡ序列分析等检测Ｇ６ＰＤ基因点突变。结果 经ＤＮＡ序列分析确认,首次在白族人群中发现Ｇ６ＰＤ Ｇ１３８８Ａ,发生率４２％、Ｇ１３７６Ｔ发生率２１％、Ａ９５Ｇ发生率     

鼻咽癌染色体7q32区域微缺失的研究

目的 进一步明确鼻咽癌染色体７ｑ３２的Ｄ７Ｓ５００－Ｄ７Ｓ４９５附近区域高频率等位基因缺失的范围。方法 采用更高密度的微卫星标记位点,分析３０个鼻咽癌病例等位基因杂合性缺失的情况。结果 ３０例 患者中有１９例（６３．３％）存在杂合性缺失;Ｄ７Ｓ５００－Ｄ７Ｓ５０９－Ｄ７Ｓ４９５是高频率缺失集中的区域,共同缺失区在Ｄ７Ｓ５０９附近。结论 Ｄ７Ｓ５０９附近可能存在与鼻咽癌发病相关的抑癌基因。     

人类性别决定基因的研究进展

人类睾丸决定依赖于Ｙ染色体上的ＳＲＹ基因，ＳＲＹ基因突变或缺失可产生ＸＹ个体的性逆转；而带有ＳＲＹ基因的ＸＸ个体往往出现男性化，其Ｘ染色体上的ＳＲＹ片段是由于Ｘ—Ｙ之间进行不等交换的结果。常染色体上的ＳＯｘ９基因与ＣＤ伴有性逆转有关，在胚胎发育期间，ＳＯｘ９基因通过在中肾间质细胞中表达，而影响骨骼和睾丸的发育。也许ＳＯｘ９与ＳＲＹ基因共同参与了男性睾丸的构建。定位在Ｘｐ２１上的ＤＳＳ基因也与性逆转有关，当一条Ｘ染色体上具有两个活性拷贝的ＤＳＳ时，能够引起带有正常Ｙ染色体和完整ＳＲＹ基因的ＸＹ个体性逆转。目前在ＤＳＳ区域内已鉴定到一种ＤＡＸ－１基因，ＤＸＡ－１基因突变的个体容易产生肾上腺发育不良，但不影响睾丸的发育，ＤＡＸ－１基因重复则有利于ＸＹ个体的性逆转，因此ＤＡＸ－１可能就是ＤＳＳ。