染色体上引物原位标记（PRINS）技术及其应用的新发展

本文详细介绍了染色体上引物原位标记（ＰＲＩＮＳ）技术的新发展，其中包括随机引物原位标记技术、重复ＰＲＩＮＳ技术、多色ＰＲＩＮＳ技术和快速ＰＲＩＮＳ技术。并对ＰＲＩＮＳ技术在研究染色体结构、畸变、检测核酸顺序和基因定位等方面的应用作了介绍。     

应用引物原位标记技术快速检测X和18号染色体

目的为发展快速检测人类染色体的技术。方法应用原位引物标记（ＰＲＩＮＳ）在８例女性外周血淋巴细胞培养标本中检测了Ｘ、１８号染色体。结果在间期核及分裂相中均能特异地检测Ｘ、１８号染色体，Ｘ染色体的标记效率为８４％～９２％（平均８９％），１８号染色体为７３％～８７％（平均８４％）。标本经适当浓度的蛋白酶Ｋ处理后可以明显提高标记效率，增强标记信号。标记反应可利用原位ＰＣＲ仪进行，不到一小时即可完成。结论原位引物标记是一种快速、特异的染色体检测方法，利用这一技术将有可能在产前快速诊断染色体非整倍体。     

应用双色引物原位标记技术快速检测X和Y染色体

目的发展快速检测染色体的技术，探索应用改良的双色引物原位标记（primed in situlabeling，PRINS）技术快速检测未培养细胞间期核可能性。方法采用改良的双色技术，对205份羊水细胞中X和Y染色体进行分析检测。结果在未培养羊水细胞间期核和培养细胞的中期分裂相中，PRINS技术均能特异性地检测X和Y染色体，PRINS反应的成功率为98％，1个样本检出为47，XXY。结论双色引物原位标记技术是一种快速、简便、经济的染色体检测方法，具有较强的特异性和敏感性，有助于快速诊断染色体畸变。     

染色体上引物原位DNA合成技术及其应用

染色体上引物原位ＤＮＡ合成技术因具有简便、快速、不需克隆基因作探针等优点而被认为是现行原位杂交技术的潜在替代者。本文介绍了该技术的操作程序，其中包括非放射性的引物原位ＤＮＡ标记合成技术和本实验室刚刚建立的引物原位ＤＮＡ氚标记合成技术，并讨论了该技术的特点和不足之处。     

应用原位引物标记技术快速检测人类13,18,21号染色体

为发展新的快速产前诊断染色体非整倍体的方法，我们利用已发表的染色体α-卫星序列，设计特异性引物，应用原位引物标记技术检测了13、18、21号染色体。研究结果显示这是一种快速，简捷的染色体数目检测方法，蛋白酶消化处理可提高标记信号强度，准确掌握退火温度是保证标记信号特异性的关键，如何在原位标记过程中保持良好的染色体形态则有待于进一步改进实验方法。     

引物介导的原位标记技术在染色体计数分析中的应用

引物介导的原位标记技术在染色体计数分析中的应用李峰钟镐镐由江峰方伟岗吴秉铨引物介导的原位标记（Ｐｒｉｍｅｄｉｎｓｉｔｕｌａｂｅｌｉｎｇ，ＰＲＩＮＳ）技术是由Ｋｏｃｈ等［１］，于１９８９年建立的一种新的分子生物学技术，可快速地特异识别染色体。其基本过程...     

应用引物原位标记技术快速检测18三体综合征

目的　探索应用改良的引物原位标记技术快速检测未培养羊水细胞间期核的可能性。方法采用改良的引物原位标记 (primed in situ labeling,PRINS)技术 ,对 2 6 2份羊水细胞中 18号染色体进行分析检测。结果　在未培养羊水细胞间期核和培养细胞的中期分裂相中 ,PRINS技术均能特异性地检测 18号染色体 ,PRINS反应的成功率为 95 %。并发现两个样本为 18三体综合征。结论　引物原位标记技术是一种简便、快速、经济的染色体检测方法 ,具有较强的敏感性和特异性 ,有助于对传统细胞遗传学的分析。     

DNA纤维上的原位杂交技术

DNA纤维上的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术是一种非常重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位DNA合成(PRINS)等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

应用多色引物原位标记技术在未培养羊水细胞中同时识别18号、X和Y染色体

目的 建立多色引物原位标记(multi-primed in situ labelling)技术在未培养羊水细胞中检测染色体数目异常.方法 用非双膜氧核苷酸阻断的三色引物原位标记技术对未培养羊水细胞中的18、X和Y染色体同时进行标记.结果 成功地在69份未培养羊水细胞间期核中检测到相应的染色体信号,且结果与培养羊水细胞的染色体制备分析及其三色引物原位标记相符合,反应成功率达96%,标记率达85%.结论 该研究方法提高了检测通量,快速、简便、经济可行,值得进一步研究与推广.     

引物介导的原位标记技术在先天愚型诊断中的应用

先天愚型也称唐氏综合征（Ｄｏｗｎ′ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ），是人类最常见的常染色体异常疾病，约占染色体病的６３％，是先天性智力低下的主要原因之一，其发生率为１／７００。９５％的病人为２１三体，其余为易位或嵌合型。传统的诊断方法是通过染色体显带技术进行核型...     

人类中期染色体三色引物原位标记技术研究

目的探索应用优化的三色引物原位标记技术同时标记多条人类外周血淋巴细胞培养中期染色体的可行性。方法采用双色引物原位标记预实验检测外周血中期淋巴细胞的X、Y染色体以摸索和优化引物应用条件和反应顺序。以优化的三色技术同时标记正常样本及克氏综合征样本(47,XXY)的18、X、Y染色体以验证其有效性。结果在3h之内特异性的同时标记了18、X、Y染色体,双色和三色反应的标记率均达到90%以上。克氏综合征样本准确显示了2条18号染色体,2条X染色体和1条Y染色体。结论非ddNTP阻断的多色引物原位标记技术能够快速而准确地判别染色体数目异常的外周血淋巴细胞样本,原位标记由于有内对照而更加具有说服力。     

应用引物原位标记技术快速诊断先天愚型

目的 :为发展快速诊断先天愚型的方法 ,方法 :利用 2 1号染色体α -卫星序列 ,设计特异性引物直接在分裂间期和中期细胞上作引物原位标记。结果 :先天愚型三体型间期细胞核中和中期染色体上观察到 3个标记信号。正常对照组为2个标记信号 ,平均标记效率分别分 90 .8%、91.3%。先天愚型嵌合型显示 2个和 3个标记信号 ,并且各占一定的比例。结论 :引物原位标记技术可直接在淋巴细胞间期核中进行 ,4～ 5h内能对先天愚型患者作出快速、准确的诊断。为先天愚型的快速产前诊断开辟了新的途径     

染色体原位抑制杂交鉴别染色体易位和标记染色体

染色体原位抑制杂交鉴别染色体易位和标记染色体朱宝生，章晓梅，任淑平，黄士智，张云霞，祝杏珍，易淑君人类染色体异常纷繁复杂，准确鉴别染色体畸变对研究各种染色体病、产前诊断和对患者的预后作出准确的诊断意见至关重要。迄今为止，一些复杂的染色体畸变难以依靠带...     

应用引物原位标记技术快速检测SOX2基因

目的 应用引物原位标记(primed in situ labeling,PRINS)代替荧光原位杂交技术对SOX2基因进行快速检测.方法 常规制备人外周血染色体并制片,利用SOX2基因特异性引物在染色体上原位扩增包含生物素标记的探针.用酪胺信号放大(tyramide signal amplification,TSA)生物素系统处理经标记的探针.最后用链霉亲和素-德克萨斯红(streptavidin-Texas red)对生物素信号进行荧光染色,用DAPI染料对染色体进行复染.作为对照,MCF-10F细胞用慢病毒载体转染导人SOX2基因,使用相同的方法检测结合位点.结果 VideoTesT-FISH软件分析提示,实验组3号染色体长臂端有特异红色荧光信号表达,空白组与未经TSA信号处理的对照组则无特异性的红色荧光信号.经过转染的MCF-10F细胞则表现出不同的SOX2基因整合效果.结论 PRINS技术利用高敏感度的原位PCR技术(in situ PCR)结合荧光标记的脱氧核苷酸可在细胞内原位合成形成探针,可大大减少探针的费用与检测的时间,提高检测效率.在诱导多能干细胞的鉴定与分类中具有较为广泛的应用前景.     

引物介导原位标记技术在检测鼻咽癌石蜡切片HPV-DNA的应用

引物查导原位标记（primed in situ labeling,PRINS)技术是由Koch等在1989年首先提出来的.基本原理是将未标记的寡核苷酸作为引物与细胞或组织中的靶DNA或RNA进行杂交.在该引物的介导和聚合酶的催化下将生物素（地高辛、荧光素等）标记的核苷酸掺入，通过显色，达到原位显示的目的。笔者将此技术用于鼻咽癌石腊切片中人乳头状瘤病毒DNA的检测。     

引物原位标记联合核型分析快速检测克氏综合征

目的探索PRINS技术联合G显带核型分析检测克氏综合征染色体。方法对1034例男性不育患者外周血用常规G显带核型分析方法进行分析,对检出的克氏综合征（Klinefelter综合征）患者用引物原位标记（PRINS）技术进行染色体检测,比较分析染色体异常的检出情况。结果用常规G显带核型分析方法检出核型异常患者134例,核型异常比例为12.96%;其中染色体数目异常70例占异常总数的52.23%（Klinefelter综合征患者56例占41.79%）,余下为染色体结构异常64例占47.77%;采用PRINS技术对Klinefelter综合征患者的染色体进行检测,结果与G显带核型分析结果一致。结论与常规核型分析方法相比,PRINS技术可快速、准确检测染色体数目异常。     

用引物介导的原位标记技术检测乳腺癌组织中HPV16 DNA的体会

自 1993年Ｍａｎｓｕｒ等〔1〕证实人乳头瘤病毒 (ＨＰＶ)Ｅ6可转化人乳腺上皮细胞以来 ,乳腺癌组织中是否有ＨＰＶ感染的存在一直是人们关注的焦点。 1989年由Ｋｏｃｈ等〔2〕创立的引物介导的原位标记 (ｐｒｉｍｅｄｉｎｓｉｔｕｌａｂｅｌｉｎｇ ,ＰＲＩＮＳ)技术可快速地特异识别细胞内感染的病毒基因的存在 ,其检测病毒基因的敏感性明显高于原位杂交法并可进行细胞内定位。为证实人乳腺癌组织中是否有ＨＰＶ感染的存在 ,我们应用ＰＲＩＮＳ技术开展了乳腺癌组织中ＨＰＶ16型ＤＮＡ的检测1　材料与方法1 1　标本　取病理学诊断确诊的乳…     

DNA电镜技术及其应用

电子显微镜作为一种研究工具在核酸研究中已发挥很大作用并日益受到重视。1859年人们首先发现核酸为活体组织细胞核的主要组成成分,90年后又在电镜下观察到单个核酸分子,而Ａｖｅｒｙ等于1944年发现核酸是遗传的分子基础后,更激起人们了解核酸物理结构的兴趣。1959年Ａｌ?..     

引物原位标记技术检测SRY基因

目的 建立一种能更有效检测单拷贝基因的引物原位标记技术(primed in situ labeling,PRINS).方法 在传统PRINS技术基础上,引入TsqStatrt抗体、Y染色体上的性别决定区基因(SIBX determining region Y,SRY)4条引物和TSATM Biotin System来检测SRY基因,并以对SRY基因的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)为对照.结果 在PRINS结果中,通过对50个中期分裂相的分析,在Yp11.3的位置上都枪测到特异信号且清晰可辨别,此结果与FISH结果一致且标记信号强度相当.结论 这项改进后的PRINS技术可快速针对单拷贝基因和小DNA片段进行检测.因此,相对于昂贵且费时的FISH技术,是另一种有效的选择.