血管生成因子VEGF、bFGF、endostatin在胰腺癌细胞中的表达

目的 探讨胰腺癌细胞血管生成因子表达水平与其恶性生物学行为的关系.方法 通过RT-PCR及ELISA检测胰腺癌细胞株SW1990、Capan-1、Aspc-1、MiaPaCa-2、Panc-1及PCT-3中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和内皮素(endostatin)的表达水平,同时通过Boyden Chamber趋化小室及CCK-8法进行6株胰腺癌细胞株的侵袭性及增殖检测. 结果 VEGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,以侵袭性最强的Panc-1表达最强.bFGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,增殖及侵袭性较强的Panc-1和PCT-3中的表达水平高于其他细胞株.6株胰腺癌细胞endostatin表达差异显著,在侵袭性最强的Panc-1中表达水平最高,其他细胞株不表达或表达量很低.胰腺癌细胞株胞外的VEGF及endostatin表达显著高于细胞内,bFGF细胞内表达显著高于细胞外.结论 血管生成因子VEGF、bFGF和endostatin的表达水平可能与胰腺癌细胞增殖与侵袭密切相关.     

人参皂苷Rg3对人前列腺癌细胞EphB4及抗凋亡蛋白bcl-xl表达的影响

目的：研究人参皂苷Rg3对人前列腺癌细胞株PC-3中EphB4及抗凋亡蛋白bcl—xl表达的影响。方法：用浓度为0、5、10、20和40μmol／L的人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24h,然后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测人参皂苷Rg3对PC-3细胞增殖的抑制作用,用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PC-3细胞凋亡的诱导作用,用RT—PCR和Western blot方法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后PC-3细胞中EphB4和bcl-x1的表达情况。结果：5、10、20和40μmol／L的人参皂苷Rg3对PC3细胞增殖的抑制率分别为20．93％、31．32％、51．63％、65．43％。5～40μmol／L的人参皂苷Rg3处理细胞呈明显的凋亡形态学改变,40umol／L人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24h后,凋亡细胞占（12．10±1．2）％,处理组比正常对照组（3．18±2．1）％凋亡明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同浓度人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24后,EphB4的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱,而且bcl—xl的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加逐渐减弱。     

抑制MMP-2表达对人胰腺癌细胞黏附和侵袭作用的影响及其机制探讨

胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制非常复杂,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)能够降解细胞外基质,与癌细胞分泌的血管生成及淋巴趋化因子一起参与浸润癌特异性的组织重塑和基底膜降解过程.本研究设计和构建带有U6启动子的MMP-2基因特异性的小干扰RNA表达质粒,将构建好的质粒转染入人胰腺癌Bxpc-3细胞株中,观察转染后癌细胞MMP-2及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA水平的变化及癌细胞本身迁移能力的变化,旨在探讨靶向MMP-2的RNA干扰抑制人胰腺癌细胞黏附和侵袭的作用及其机制.     

人参皂甙Rg3联合小剂量化疗抑制小鼠S-180肉瘤血管生成的作用

目的：观察人参皂甙Rg3联合持续小剂量环磷酰胺（CTX）对小鼠S-180肉瘤肿瘤血管生成的影响、抑瘤作用及毒副反应。方法：建立S-180肉瘤小鼠移植性肿瘤模型，60只小鼠随机分为4组，分别为人参皂甙Rg3组（5mg／kg）、CTX组（5mg／kg）、联合治疗组（人参皂甙Rg3和CTX的联合治疗）及模型对照组。治疗结束后测定肿瘤组织重量、肿瘤微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（vEGF）表达情况。结果：人参皂甙Rg3组、CTX组和联合治疗组小鼠移植瘤的瘤重较对照组降低（P〈0．05），肿瘤抑制率分别为36．12％、49．43％、71．10％，MVD及VEGF的表达较对照组均下降（P〈0．05），其中联合治疗组更明显（P〈0．05）。联合治疗组小鼠毒副作用较轻，生存质量较好。结论：小剂量CTX与人参皂甙Rg3联合应用显示出明显的抗血管生成协同作用，抑瘤效果显著，且毒副反应小。     

茄碱通过调控Stat3信号通路影响胰腺癌细胞Panc-1中MMP-2和MMP-9表达

目的 探讨茄碱对胰腺癌细胞Panc-1中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响及Stat3信号通路在此过程中的作用。方法 实验分为对照组和药物组,药物组分别采用浓度为3.5、7.0和10.5 μmol/L的茄碱对Panc-1细胞进行干预,明胶酶谱法观察茄碱对细胞中MMP-2和MMP-9活性的影响;实时荧光定量PCR检测MMP-2和MMP-9基因的表达变化;Western blotting法检测总蛋白中信号转导及转录激活因子3（Stat3）蛋白的磷酸化表达变化。结果 与对照组相比,药物组（7.0、10.5 μmol/L）MMP-2活性明显下降（t值分别为2.4、6.4,P<0.05）;MMP-9活性亦下降（t值分别为3.2、4.8,P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,药物组（7.0 μmol/L、10.5 μmol/L）MMP-2基因表达下调（t值分别为8.7、13,P<0.05）;MMP-9基因表达下调（t值分别为3.2、16.3,P<0.05）。Western blotting结果显示,随着茄碱浓度的增加,Panc-1细胞中Stat3蛋白磷酸化受到明显抑制（t值分别为10.2、6.4、6.2,P<0.05）,延长药物处理的时间（12 h、18 h、24 h）亦可抑制Stat3蛋白磷酸化（t值分别为11.4、26.1、20.4,P<0.05）。结论 茄碱可抑制胰腺癌细胞Panc-1中MMP-2和MMP-9的表达,发挥其抗肿瘤转移能力。其具体机制可能与调控Sata3信号通路有关。     

人参皂苷Rg3对HT-29细胞株MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株细胞增殖及对MMP-9和TIMP-1表达的影响,探讨其抑制肿瘤细胞侵袭、转移的机制.方法:分别用低剂量(25 μg/mL)、中剂量(50 μg/mL)和高剂量(100 μg/mL)人参皂苷Rg3及对照(0 μg/mL,DEME培养液和DMSO助溶剂)培养HT-29细胞24 h、48 h、72 h,采用RT-PCR方法检测MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率.结果:人参皂苷Rg3可以抑制HT-29细胞MMP-9 mRNA的表达,抑制作用随着剂量的增加及时间的延长而增强;可以促进HT-29细胞TIMP-1 mRNA的表达,促进作用随着剂量的增加及时间的延长而增强;对HT-29细胞生长的抑制作用与随着药物浓度的增加及作用时间的的延长而增强.结论:人参皂苷Rg3抑制HT-29结肠癌细胞株MMP-9的表达,促进TIMP-1的表达,并具有抑制肿瘤细胞生长的作用.     

β受体在人胰腺癌细胞株中的表达及其在细胞侵袭中的作用

目的 探讨β受体在经典神经递质去甲肾上腺素(NE)诱导人胰腺癌细胞株Mia-PaCa-2侵袭能力增强过程中的作用及其机制.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人胰腺癌细胞株β受体的表达.实验分为对照组、NE干预组、普萘洛尔(Propranolol)干预组、普萘洛尔和NE共同干预组(NE&Propranolol).采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达.结果 人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和BxPC3均表达β1和β2受体.NE组、NE&Pmpranolol组、Propranolol组和对照组穿膜细胞的吸光度值分别为0.78±0.02、0.32±0.03、0.26±0.01、0.28±0.02,NE组显著高于对照组和NE&Pmpranolol组(P<0.05),而Propranolol组穿膜细胞数与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);NE组中MMP-2、MMP-9和VEGF mRNA表达指数为0.87±0.02、1.04±0.02和0.92±0.01,蛋白表达灰度值为131.20±2.34、105.32±7.21和115.60±5.03,显著高于对照组和NE&Propranolol组(P<0.05),Propranolol组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 β受体在NE诱导胰腺癌细胞侵袭能力增强的发展过程中发挥重要作用,NE通过β受体介导上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达进而增强胰腺癌细胞的侵袭能力.     

siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对胰腺癌细胞TLR4表达的影响

目的 观察体外乏氧培养条件下胰腺癌细胞系Panc-1中HIF-1α和TLR4的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对胰腺癌细胞TLR4的调控作用.方法 低氧箱培养和CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫荧光法和流式细胞法分别检测缺氧状态下HIF-1α和TLR4在mRNA和蛋白水平的表达.采用化学合成小干扰RNA( siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)用siRNA转染Panc-1细胞.观察转染后HIF-1α沉默效果.结果 低氧条件下,Panc-1细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而TLR4 mRNA和蛋白的表达均显著升高.siRNA转染Panc-1后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时TLR4基因的表达上调也受到明显抑制.结论 缺氧促使胰腺癌Panc-1细胞TLR4在蛋白水平表达升高,TLR4信号通路可能和HIF-1α信号通路存在相互联系,并且共同促进了胰腺癌的恶性进展.     

人参皂甙Rg3对子宫内膜异位症大鼠血管生成的影响

目的探讨人参皂甙Rg3对大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,异位组织中血管内皮生成因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的影响。方法建立Wistar大鼠子宫内膜异位症模型,3周后将大鼠随机分为空白对照、人参皂甙Rg35mg/kg、10mg/kg和孕三烯酮4组,相应处理8周后,观察各组异位子宫内膜体积和形态学的变化,免疫组织化学法测定血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管,测定其微血管密度(MVD)。结果(1)治疗后,各给药组移植物呈现不同程度萎缩(P<0.05),其中以Rg310mg/kg组最为明显;(2)各给药组VEGF表达、MVD数量均低于对照组(P<0.05),其中以Rg310mg/kg组最为明显。结论Rg3可以通过调节VEGF表达和MVD数量来抑制EMs大鼠模型异位组织的血管生成。     

体外共培养hBMSCs和HUVECs对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的:利用三维共培养技术体外构建含多种细胞的胰腺癌微组织,研究骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、内皮细胞(HUVECs)对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响。方法:水凝胶复合细胞培养构建三维胰腺癌微组织模型。第一组:单纯Panc-1细胞;第二组:Panc-1细胞复合HUVECs;第三组:Panc-1细胞复合hBMSCs;第四组:Panc-1细胞复合HUVECs和hBMSCs。实时定量PCR分析胰腺癌肿瘤侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP-9)、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail基因。Western blot测定胰腺癌肿瘤侵袭相关的MMP-9、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail蛋白。结果:HUVECs共培养不影响MMP-9、E-cadherin和Snail基因和蛋白的表达(P>0.05),hBMSCs共培养促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05),同时加入两种细胞促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05)。结论:利用水凝胶为载体,加入骨髓间充质干细胞、内皮细胞与Panc-1胰腺癌细胞共培养,成功构建复杂的胰腺癌肿瘤微组织。通过对胰腺癌上皮间质转化相关机制研究,发现骨髓间充质干细胞通过调节MMP-9和上皮间质化对胰腺癌的侵袭行为起重要作用。     

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响

目的探讨20（R）–人参皂甙Rg3（SPG-Rg3）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组。利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC-50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用AnnexinV-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas、FasL蛋白表达的关系。结果 SPG-Rg3作用48h的IC-50为244.54μg/mL。流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加（P〈0.01）,凋亡率明显增加（P〈0.01）。免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加（P〈0.01）。结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关。     

核因子κB表达与胰腺癌转移及与MMP-2表达的关系

目的： 探讨核因子κB (NF-κB,p65)在胰腺癌（PC）中的表达与淋巴结转移及MMP-2表达的关系。方法：免疫印迹法检测45例PC(淋巴结转移30例，非转移15例)和9例正常胰腺组织(NP)中p65蛋白的表达；RT-PCR检测MMP-2mRNA的表达。 结果：p65，MMP-2在45例 PC组织中的阳性表达率分别为66.7%（30/45）和57.8%（26/45），在30例转移组织中的阳性表达率分别为83.3%（25/30）和73.3%(22/30)，在非转移组织中的阳性表达率分别为33.3%（5/15）和26.7%（4/15）， p65与MMP-2表达呈明显正相关（r=0.743,P<0.05）。结论：NF-κB异常表达与胰腺癌淋巴结转移有关，并与MMP-2正相关，NF-κB 可能通过对下游基因表达的调控，参与了胰腺癌的转移过程。     

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1与胰腺癌细胞获得性耐药的关系

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸酶1（MKP-1）在介导胰腺癌耐药细胞株SWl990／Fu产生获得性耐药过程中的可能机制。方法 采用Northern印迹杂交和Western蛋白免疫印迹杂交方法,检测MKP-1在体外诱导建立的人胰腺癌耐药细胞株SWl990／Fu、亲本细胞株SWl990和胰腺癌细胞株MiaPaCa-2中的表达,分析MKP-1在SW1990／Fu产生获得性耐药前后的变化。结果 Northern印迹杂交结果显示,在SWl990／Fu、SWl990和MiaPaCa~细胞株中均检测到2400bp的MKP-1mRNA,MKP-1在SWl990／Fu的表达水平明显低于SWl990和MiaPaCa-2。在蛋白水平上,Western蛋白免疫印迹杂交结果也表明,与SWl990和MiaPaCa4相比,MKP-1蛋白在SWl990／Fu细胞中的表达水平明显降低。结论 MAPK家族的关键调节酶MKP-1可能参与SWl990／Fu获得性耐药的产生,推测细胞信号转导系统的改变可能是导致胰腺癌细胞产生获得性耐药的机制之一。     

生长激素对胰腺癌细胞株增殖活性的调控

目的探讨生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc-3增殖活性的影响。方法MTT法检测生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc-3增殖活性,Tunel法标记凋亡阳性细胞、免疫组化法标记增殖细胞,激光共聚焦显微镜计数免疫荧光双标Tunel阳性细胞和增殖细胞。结果10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L浓度的生长激素在第2天明显的抑制胰腺癌细胞生长,伴随作用时间的延长这种抑制作用逐渐减轻,且出现了加速胰腺癌细胞生长的作用,第4天、第5天胰腺癌细胞的生长同正常对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论本实验研究从细胞学的角度证实生长激素在开始阶段具有抑制胰腺癌细胞生长的作用,但是这种作用伴随时间的延长逐渐消失,且出现加速了肿瘤细胞的生长的现象,为临床肿瘤病人应用生长激素提供了一定的理论依据。     

MMP-3在退变腰椎间盘组织中的表达及意义

目的研究MMP-3在退变腰椎间盘髓核和纤维环组织中的表达及其临床意义。方法用半定量RT—PCR和免疫组织化学法检测实验组1（30例退变腰椎间盘髓核）、实验组2（30例退变腰椎间盘纤维环）和对照组（10例创伤腰椎间盘髓核）中MMP3mRNA和蛋白表达。结果实验组1MMP-3mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组（P均〈0．01）,实验组1与2之间MMP-3mRNA和蛋白的表达没有显著差异（P均〉0．05）。结论MMP-3的表达增加可能参与腰椎间盘退变的进程。