转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞株生物学特性的影响

目的:观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为三组:对照组、rhCTGF 5.0 ng/ml, rhCTGF 10.0 ng/ml.应用MTT法检测CTGF对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接酶标免疫组织化学方法检测E-钙粘蛋白(E-Cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测α-SMA阳性的HK-2细胞百分数.结果:在一定的浓度范围内,CTGF能促进HK-2细胞的增殖, CTGF促使HK-2细胞由椭圆形转变为梭形状,可下调E-Cadherin,上调α-SMA, 流式细胞测得三组细胞阳性百分率依次为1.54%,10.24%,25.8%(P＜0.05).结论:CTGF在体外促进HK-2转分化的同时促进HK-2的生长.     

结缔组织病血清肿瘤坏死因子的检测

结缔组织病血清肿瘤坏死因子的检测谷丽红梁再赋１白兆震（第一临床学院皮肤科，沈阳１１０００１）关键词肿瘤坏死因子；结缔组织病我们应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测了３０例结缔组织病患者及１３例正常人血清中的肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）水平，旨在观察ＴＮＦα与...     

肿瘤坏死因子与晶状体上皮细胞增殖

白内障是致盲的常见眼病 ,而白内障手术后的后囊混浊是影响术后视力恢复的常见并发症。残留的晶体上皮细胞的增生是形成后囊混浊的主要原因。白内障手术操作及人工晶体植入不可避免地影响机体免疫系统 ,被激活的炎性细胞可释放多种细胞因子。其中 ,肿瘤坏死因子 (TNF)在晶体上皮细胞增生中可能起重要作用。本文就此加以综述。TNF是具有多种生物学活性的生长抑制因子 ,该因子能使肿瘤出血坏死而得名。1TNF的基本特性TNF包括两型 ,即TNF -α和TNF - β。TNF-α和TNF - β基因系单一复制基因 ,与MHC基因相连 ,二者结构相似 ,均含有 …     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

缺氧复氧后肾小管上皮细胞肿瘤坏死因子α的表达及胡黄连提取物对其的作用

目的观察缺氧复氧后肾小管上皮细胞肿瘤坏死因子α（TNFα）的表达及胡黄连提取物对其的影响。方法建立人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤模型,分别用不同浓度胡黄连提取物（10μg／mL、100μg／mL、1000μg／mL）进行预处理,采用流式细胞术检测不同组细胞内氧化应激水平,ELISA法检测细胞上清TNFα蛋白表达、RT—PCR法测定细胞TNFα mRNA表达。结果缺氧复氧后肾小管上皮细胞内氧化应激水平提高,细胞TNFα蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,TNFα表达逐渐增强;胡黄连提取物呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制TNFα表达的上调。结论缺氧复氧导致肾小管上皮细胞内氧化应激增强,进而诱导TNFα表达上调;胡黄连提取物可以通过抑制细胞内氧化应激抑制TNFα的上调。     

血管紧张素Ⅱ对的人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mR NA表达的影响。方法 :采用体外培养人近端肾小管上皮细胞株 (HPTC) ,分别观察不同浓度(0、10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ处理 48h ,或用AngⅡ (浓度为 10 -7mol·L-1)处理不同时间 (0、12、2 4、48、72h)对HPTC结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA表达的影响 ,CTGFmRNA表达采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定。结果 :AngⅡ (10 -7mol·L-1)作用于HPTC12h后 ,细胞CTGFmRNA的表达开始增加 ,72h达最高水平 ,与对照组相比 ,AngⅡ作用 48h后显著增加〔(0 0 97± 0 0 15 )vs(0 63 2± 0 0 41) ,P <0 0 1〕 ;无AngⅡ的DMEM培养HPTC ,72h内细胞CTGFmRNA水平未见明显改变 (P >0 0 5 )。不同浓度 (10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ作用于HPTC 48h ,CTGFmRNA的表达均有增加 ,分别是对照组 (0mol·L-1)的 1 5、5 5和 7 4倍 (P <0 0 1) ,对扩增产物进行测序证实与基因库中人CTGF的cDNA序列一致。结论 :AngⅡ呈时间和剂量依赖性地刺激HPTCCTGFmRNA表达 ,此结果提示AngⅡ可能通过促进CTGF表达而参与小管间质纤维化的发生     

丹参对大鼠烟熏支气管损伤影响及局部结缔组织生长因子表达变化及意义

目的 探讨丹参对大鼠烟熏支气管损伤作用的影响及局部结缔组织生长因子表达变化及意义.方法 48只大鼠分为对照组24只和丹参组24只,观察时相点为烟熏后1、2、4、8周,比色法进行支气管组织羟脯氨酸、MDA含量、SOD活性和TNF-α水平的检测,免疫组织化学染色、RT-PCR进行大鼠支气管中CTGF定位检测及转录水平变化观察.结果 丹参组大鼠支气管组织羟脯氨酸、MDA含量和TNF-α水平显著低于对照组,SOD活性显著高于对照组.丹参组CTGF表达水平及表达强度显著低于对照组.结论 丹参对大鼠具有显著的抗烟熏损伤及胶原合成作用,其作用与CTGF的表达水平下降密切有关.     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞转分化

目的探讨转化生长因子β-1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中结缔组织生长因子(CTGF)的表达和作用.方法在用MTT比色、荧光分析证明阳离子脂质体(DOTAP)介导CTGF反义寡核苷酸(AS)转染HKC可行的基础上,将培养的HKC分为4组正常对照组(C组);TGFβ1组(T组);TGFβ1加AS组(T+AS组);4、TGFβ1加CTGF错义寡核苷酸组(T+SC组).分组处理96h后,分别采用免疫组化、Western blot和RT-PCR技术检测各组CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并分析CTGF和α-SMA表达量的相关性.结果C组CTGF和α-SMA表达阴性;T组CTGF和α-SMA表达阳性;T+AS组CTGF和α-SMA表达阳性,但皆显著低于T组(P＜0.01)T+SC组CTGF和α-SMA表达皆和T组无显著差异(P＞0.05).相关分析CTGF和α-SMA在表达量上皆呈较强的线性相关性.结论CTGF的AS能有效地抑制TGFβ1所诱导的TEMT,提示CTGF是TGF β1诱导TEMT所必需的成份.     

血管紧张素Ⅱ对培养的人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响.方法:采用体外培养人近端肾小管上皮细胞株(HPTC),分别观察不同浓度(0、10-9、10-7、10-5mol*L-1)Ang Ⅱ处理48 h,或用Ang Ⅱ(浓度为10-7mol*L-1)处理不同时间(0、12、24、48、72 h)对HPTC结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,CTGF mRNA表达采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定.结果:Ang Ⅱ(10-7mol*L-1)作用于HPTC 12 h后,细胞CTGF mRNA的表达开始增加,72 h达最高水平,与对照组相比,Ang Ⅱ作用48 h后显著增加[(0.097±0.015)vs(0.632±0.041),P<0.01];无Ang Ⅱ的DMEM培养HPTC,72 h内细胞CTGF mRNA水平未见明显改变(P>0.05).不同浓度(10-9、10-7、10-5mol*L-1)Ang Ⅱ作用于HPTC 48 h,CTGF mRNA的表达均有增加,分别是对照组(0 mol*L-1)的1.5、5.5和7.4倍(P<0.01),对扩增产物进行测序证实与基因库中人CTGF的cDNA序列一致.结论:Ang Ⅱ呈时间和剂量依赖性地刺激HPTC CTGF mRNA表达,此结果提示Ang Ⅱ可能通过促进CTGF表达而参与小管间质纤维化的发生.     

糖尿病肾病患者血清结缔组织生长因子和肿瘤坏死因子表达及其临床意义

[目的]探讨结缔组织生长因子（CTGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在糖尿病肾病（DN）患者不同阶段的表达水平及相关性。[方法]根据24 h尿白蛋白排泄率率（UAER）将94例DN 患者分为无蛋白尿（NRU组）、微量蛋白尿（MIU组）及大量蛋白尿（MAU组）三组,同时以89例健康体检者作为对照组（CON组）,检测各组血清中CTGF、TNF-α水平并比较分析。[结果]NRU 组、MIU 组及MAU 组血清CTGF和TNF-α水平显著高于 CON 组,其差异有统计学意义（ P ＜0．01）。 NRU 组、MIU 组及 MAU 组患者中UAER与CTGF（ r ＝0．924,P ＜0．01）和TNF-α（ r ＝0．861,P ＜0．01）呈正相关;血清中CTGF与 TNF-α水平呈正相关（ r ＝0．432,P ＜0．05）。[结论]血清中CTGF和TNF-α水平在DN患者中均有不同程度的增高,与UAER呈正相关,有可能成为监测DN病情变化的有效指标。     

尿毒血清对HK-2细胞增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的探讨尿毒血清对人肾上管上皮细胞侏（HK-2）增殖和胶原蛋白分泌的影响。方法在HK-2细胞培养液中加入正常人血清及不同浓度的尿毒血清，采用四氮甲基唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术测定HK-2细胞增殖活性的变化；采用消化法检测细胞培养上清中羟脯氨酸的含量，换算成总胶原分泌量。结果5％-20％浓度尿毒血清组A490值均高于正常对照组，10％-20％浓度尿毒血清组G1期细胞均低于正常对照组，P1指数均高于正常对照组，但不同浓度尿毒血清组组间差异无统计意义；各浓度尿毒血清组羟脯氨酸和胶原蛋白含量较正常对照组增高，且随着尿毒血清浓度的升高而增高。结论慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症素可能通过促进肾小管上皮细胞增殖，促进细胞外基质的分泌，从而加速肾小管一间质纤维化进程，导致肾功能进行性恶化。     

肿瘤坏死因子对鼠甲状腺细胞增殖的影响

肿瘤坏死因子对鼠甲状腺细胞增殖的影响王坚罗国春巴建明肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）除具有免疫调节作用外，并能影响内分泌细胞尤其是甲状腺细胞的生长、形态和功能变化。对此研究以往多采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法检测细胞增殖。我们采用四氮唑蓝（ＭＴＴ...     

肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮样细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响

目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养的人脐静脉内皮样细胞株ECV304增殖及syndecan-4蛋白表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮样细胞株ECV304,分别应用1、10、20、100 ng/ml的TNF-α作用24 h及36 h并设立对照组进行比较,采用MTS/PES法确定人脐静脉内皮样细胞的增殖状态.利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定细胞syndecan-4蛋白的表达情况.结果 24 h各组细胞增殖率分别为对照组(1.956±0.214),TNF-α100 ng/ml组(2.154±0.250),TNF-α20 ng/ml组(2.26±0.151),TNF-α10 ng/ml组(2.118±0.205),TNF-α1 ng/ml组(2.106±0.136).统计分析显示低至1 ng/ml的TNF-α仍能明显刺激人脐静脉内皮样细胞的增殖(P＜0.05),其中以TNF-α 20 ng/ml组细胞增殖最显著P＜0.05).36 h各剂量组的细胞增殖率均明显低于24 h的细胞增殖率(P＜0.05).TNF-α对人脐静脉内皮样细胞的syndecan-4蛋白表达有显著的增强作用(P＜0.05).结论 TNF-α对体外培养的人脐静脉内皮样细胞的增殖及syndecan-4蛋白表达均有明显的促进作用,但随着时间的改变,这种作用有所变化.     

针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响

目的 观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响.方法 细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1 g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1 g,L、甘露醇3.5 g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5 g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中).收集各组培养至24、48、96 h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量.结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,使停留于G_1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加:而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低.细胞增殖活力增强,更多的细胞由G_1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低.结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质.针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据.

Abstract：

Objective To observe the effect of transfection with small interfering RNA (siRNA) targeting connective tissue growth factor (CTGF) on human tubular epithelial hypertrophy induced by high glucose. Methods HK-2 cells were cultured in DMEM/F12 medium containing 1 g/L glucose (normal control group), 4.5 g/L glucose (high glucose group), or 1 g/L glucose + 3.5 g/L mannitol (iso-osmolar control group). The cells were transfected with pGenesil-1, pGenesil/neg, or pGenesil/siRNA-CTGF and then cultured in DMEM/F12 medium containing 4.5 g/L glucose as the high glucose + blank control group, high glucose +negative control group and high glucose+ interference group, respectively. After cell culture for 24, 48 and 96 h, the cells were collected to detect the mRNA and protein levels of CTGF by real-time PCR and Western blotting, respectively. The proliferative activities of the cells were evaluated with MTT assay, and the total cellular protein contents were determined with Bradford method. Flow cytometry was employed to analyzed the cell cycle changes. Results High-glucose significantly up-regulated the CTGF mRNA and protein levels in HK-2 cells. The cell proliferation was inhibited after high-glucose exposure with increased cell percentage in G, phase and total cellular protein content suggesting cellular hypertrophy. Transfection with siRNA targeting CTGF significantly inhibited high glucose-induced up-regulation of CTGF mRNA and protein and promoted the cell proliferation, resulting also increased cells in S phase and lowered total cellular protein contents. Conclusion CTGF is an important mediator of high glucose-induced tubular epithelial hypertrophy, and transfection with siRNA targeting CTGF can alleviate the hypertrophy, suggesting the potential value of CTGF-targeted treatment in the management of diabetic nephropathy.     

虫草菌液拮抗人白蛋白致HK-2细胞增殖及TGF-β1、FN表达的影响

目的 初步探讨虫草菌液能否拮抗人白蛋白致HK-2细胞的促纤维化效应.方法 人白蛋白组(albumin,ALB 5g/L)加或不加虫草茵液(hirsu-tella sinensis,HS 10mg/L)与HK-2细胞孵育,然后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖水平;使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清FN、TGF-β1的分泌水平.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HK-2中TGF-β1及Fn的mRNA表达.结果 虫草菌液可抑制人白蛋白所致HK-2增殖(P＜0.01),虫草茵液干预人白蛋白孵育的HK-2,可使TGF-β1和Fn mRNA和分泌及表达明显下调(P＜0.05).结论 虫草菌液可抑制人白蛋白刺激的HK-2细胞增殖和TGF-β1、FN表达.     

肿瘤坏死因子对鼠甲状腺细胞增殖的影响

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对甲状腺细胞生长增殖有何影响尚未定论。本文采用四氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定ＴＮＦ－α对ＦＲＴＬ－５细胞生长增殖的影响，结果显示在不存在ＴＳＨ条件下，ＴＮＦ在２００～２０００Ｕ／ｍｌ范围内对ＦＲＴＬ－５细胞既可明显细胞癌溶解作用，亦无明显促增殖作用，在ＴＳＨ存在条件上，上述剂量ＴＮＦ对ＦＲＴＬ－５细胞增殖有轻－中度抑制作用，说明ＴＮＦ对甲状腺细胞增殖的抑制作用可能主要通过抑制Ｔ     

激素对鼻息肉组织肿瘤坏死因子α、血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF)α、血管内皮生长因子(VEGF)在鼻息肉组织中的表达,以及全身应用糖皮质激素对两种细胞因子表达水平的影响。方法:采用免疫组化SP法,检测鼻息肉组织在糖皮质激素治疗前和治疗后TNF α、VEGF的表达,运用HPIAS 1000高分辨率彩色图像分析系统分别对治疗前、后鼻息肉组织的粘膜上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞、粘膜下浸润炎性细胞、细胞间基质进行光密度测定分析。结果: ① TNF α在鼻息肉粘膜上皮细胞、血管内皮细胞、腺上皮细胞、粘膜下浸润炎性细胞均有阳性表达;VEGF在粘膜上皮细胞、血管内皮细胞、腺上皮细胞、粘膜下浸润细胞、基质有阳性表达;②激素治疗后 TNF α、VEGF表达下降,其中 TNF α在血管内皮细胞表达下降,治疗前后有显著性差异。VEGF表达在治疗前、后无明显差异。结论:全身应用激素可能通过以下机制起到治疗鼻息肉的作用:①降低鼻息肉组织中 TNF α、VEGF的含量,影响鼻息肉形成的微环境,改变其它细胞因子的表达从而调节上皮细胞的增生、血管的生成及通透性;②降低TNF α在鼻息肉血管内皮细胞的表达,减弱粘附分子、吸附分子的作用从而减轻嗜酸性粒细胞在鼻息肉组织的浸润。     

苦参素对肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察苦参素对肝星状细胞(HSC)增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的作用机制.方法 利用胶原酶/链蛋白酶灌注梯密度离心分离大鼠HSC,用噻唑蓝(MTT)比色法观察苦参素对HSC增殖的影响,利用qRT PCR观察对CTGF表达的影响.结果 体外实验表明苦参素可以呈剂量依赖关系抑制HSC增殖,并抑制其CTGF的表达.结论 苦参素可能通过抑制HSC增殖及CTGF的表达介导其抗肝纤维化作用机制.