流式细胞术检测石见穿多糖诱导的肝癌细胞凋亡率

目的 探讨石见穿多糖抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的机制. 方法 利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度石见穿多糖作用的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡率.结果石见穿多糖各浓度组平均细胞凋亡率为(7.87±1.860)%、(13.63±2.87)%、(21.05±2.68)%,显著高于对照组(0.67±0.28)%. 结论 石见穿多糖能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,且凋亡率随着石见穿多糖浓度的增加而增高.     

加热诱导肝癌细胞系HepA凋亡的研究

用细胞培养结合流式细胞仪检测 ,观察加热不同温度、不同作用时间对肝癌细胞系 Hep A的细胞凋亡的影响。结果发现 4 4℃时处理 1h和 2 h细胞凋亡最明显 ,经方差分析有显著意义 (P<0 .0 5 ) ,更高的温度和更长的作用时间都不能使凋亡率上升。这一结果说明 ,加热处理能诱导肿瘤细胞凋亡 ,但对于不同的肿瘤细胞而言 ,可能存在不同的热疗最佳条件 ,因此有必要分别研究不同肿瘤细胞对热疗的敏感程度     

石见穿水溶性多糖提取工艺的研究

石见穿为唇形科鼠尾草植物紫参Salvia chinensis Benth．的全草，广泛分布于华东、广西、湖北、湖南等地，民间主治噎嗝、痰喘、肝炎、赤白带、痈肿、瘰疬等症。近年来研究发现其在抗肿瘤尤其在抑制肝癌、胃癌细胞等方面具有显著的作用。石见穿全草含有甾醇、三萜、酚酸、多糖等化学成分。其中多糖是石见穿的重要活性成分之一，具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤等功能。本研究选取提取溶剂体积比、提取时间、浸提温度、提取次数4个因素，采用正交试验设计，对石见穿水溶性粗多糖的提取工艺进行研究。     

石见穿中两个酸性多糖的化学研究

目的　研究石见穿 Salvia chinensis全草中的多糖组份。方法　采用 DEAE-纤维素柱色谱和凝胶渗透色谱进行分离纯化 ,化学和光谱方法分析其结构特征。结果　分别从石见穿水提取物和稀碱提取物中分得 2个均一多糖组份 SC5和 SC6 ,其相对分子质量分别为 4 .8× 10 4和 >1.0× 10 6 ,二者均为结构复杂的酸性多糖组份。结论　SC5和 SC6都是首次从该植物分得的酸性杂多糖。     

野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;PI染色法,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用,IC50为471.53mg/L;倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态,表现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体;流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74.926%。结论野西瓜多糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。     

斑蝥酸钠体外诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨斑蝥酸钠体外诱导肝癌细胞的凋亡。方法 :应用MTT法、流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳综合分析肝癌细胞的变化。结果 :斑蝥酸钠作用 4 8h使肝癌细胞生长明显抑制 ;细胞凋亡率达 4 0 .0 2 %±2 .0 5 % ,并出现典型的凋亡峰 ,细胞增殖于G2 +M期阻滞 ;细胞核染色质出现凝集、边集等超微结构变化 ;细胞DNA电泳也显示了凋亡特有的“梯子”状条带。结论 :斑蝥酸钠体外可诱导肝癌细胞的凋亡 ,细胞生长阻断在G2 +M期。     

中药诱导肝癌细胞凋亡的实验研究进展

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率呈上升趋势,全世界每年新增30万-100万病例,且已居我国癌症的第二位,在城市仅次于肺癌,在农村次于胃癌,年病死率为1.46-4.60／万,平均2.04／万。我国每年因肝癌而死亡的人数约20余万,约占世界肝癌死亡人数45％^[1]。     

神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡

目的:观察C2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究肝癌细胞凋亡信号的传导提供实验依据.方法:将C2-神经酰胺作用于肝癌细胞SMMC-7721及BEL-7402后,分别行H-E染色、荧光染色、TUNEL方法检测及流式细胞仪Sub-G1法,检查细胞的凋亡.结果:10 μmol/L C2-神经酰胺作用肝癌SMMC-7721细胞,48 h后发生凋亡,H-E染色及荧光染色检测可见典型的细胞凋亡表现,细胞核固缩、碎裂,以及碎裂的细胞核浓染成为凋亡小体.经流式细胞仪检测可见典型的Sub-G1凋亡峰,凋亡细胞占细胞总数(9.20±0.73)％.在BEL-7402细胞也观察到相似的结果.结论:C2-神经酰胺可诱导肝癌SMMC-7721及BEL-7402细胞的凋亡.     

红景天苷对肝癌细胞凋亡的诱导实验研究

目的：以HepA小鼠为实验对象,通过红景天苷对肿瘤细胞凋亡的诱导实验,探讨其在诱导小鼠肝癌细胞凋亡过程中的作用。方法：将小鼠肝癌模型随机分为三组,分别为对照组、环磷酰胺组、红景天苷组,通过一系列细胞生物学实验,观察和测定各组细胞周期的变化及p53、Bcl-2、Bax蛋白表达的程度。结果：与对照组比较,红景天苷组在细胞凋亡指数、G。／G,期肿瘤细胞数量、相关蛋白表达程度等方面,差异有统计学意义（P〈0．01）,Bax表达水平提高,Bcl-2表达水平降低。结论：红景天苷可干扰细胞周期、抑制肿瘤细胞生长,在肝癌细胞凋亡的诱导实验中,红景天苷可激活线粒体途径,诱导凋亡的过程还受到p53的调节。     

中药诱导肝癌细胞凋亡的实验研究进展

中医药或中西医结合是治疗肝癌的一种重要辅助手段,对辨证施治的治则研究,对中药抗肿瘤机制的研究,在实验和临床领域已广泛开展[1～3].在研究抗癌中药作用机制方面,诱导肿瘤细胞凋亡已成为人们普遍关注的"热点",兹就近年来中药诱导肝癌细胞凋亡的实验研究进展概述如下.     

中药诱导肝癌细胞凋亡

凋亡(apoptosis)一词由Kerr于1972年首先提出.细胞凋亡是指在特定时空中发生的、受机体严密调控的细胞"自杀"现象,它呈现其独特的、有别于细胞坏死的形态学和生物化学特点,被普遍认为是有机体维持个体内稳态恒定的极其重要的机制之一.它与有丝分裂相反而又互补,并共同参与调控细胞群落、细胞数量的恒定,其调控机制的失常则是包括肿瘤在内的一系列疾病的产生根源.因此,细胞凋亡已成为当前细胞生物学,尤其是肿瘤学基础与临床研究的前沿与热点.近年来,有关中药诱导肝癌细胞凋亡的研究报道逐年增多.作者简介:李柏(1964-),男,博士研究生,副教授.     

姬松茸多糖诱导Bel-7402细胞凋亡的实验研究

目的研究姬松茸多糖(PAB)对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的PAB与小鼠脾淋巴细胞共同培养制备上清;应用流式细胞术分析各组Bel-7402细胞凋亡情况、细胞内p53蛋白的表达以及肿瘤细胞内Ca2 水平的变化;应用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化;应用荧光显微镜观察细胞内p53蛋白表达的变化。结果与阴性对照组相比较,通过流式细胞仪检测,治疗组细胞凋亡率和细胞内Ca2 水平显著升高(P<0.01);通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内p53蛋白的表达无显著差异,透射电子显微镜观察显示出细胞凋亡的典型形态学变化。结论PAB具有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。     

丹参酮ⅡA抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的　研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞系BEL 740 2的生长抑制及凋亡诱导作用。方法　 0～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞 72h后 ,用MTT比色法观察其细胞毒性 ,荧光显微镜、透射电镜检测细胞凋亡 ;流式细胞术 (Flowcy tometry ,FCM )定量检测 5 μg/ml丹参酮作用不同时间后的细胞凋亡率。 结果　丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞的生长 ,其IC50 值为 6.2 8μg/ml。 1～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用 72h后 ,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂、细胞出芽以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,5 μg/ml浓度作用12、2 4、3 6、48、72h后的细胞凋亡率分别为 ( 2 .3 2± 0 .16) %、( 3 .0 1± 0 .3 5 ) %、( 3 .87± 0 .43 ) %、( 6.73± 0 .5 8) %和 ( 2 0 .85±1 74) % ,与对照组 ( 1.0 7± 0 .13 ) %比较均有显著性差异。结论　在体外丹参酮ⅡA能诱导人肝癌细胞系BEL 740 2凋亡 ,这可能为丹参酮ⅡA抑制其生长的机制     

半边莲通过钙信号诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

观察半边莲通过影响胞内游离钙离子浓度进而诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡。通过荧光分光光度法检测胞内游离钙离子浓度,并采用AO-EB荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果显示半边莲可提高HepG2细胞胞内游离钙离子浓度,与对照组相比,差异显著(P<0.01),且荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳的结果表明经半边莲处理过的肝癌细胞出现典型的凋亡特征。结论:半边莲可通过提高肝癌细胞胞内游离钙离子浓度诱导癌细胞凋亡     

白英诱导肝癌细胞凋亡的研究进展

白英为多年生茄科植物(solanum lyratum thunb,SLT)的干燥全草,又称白毛藤,味苦,性微寒,主产浙江、江苏、安徽等地.白英主要含有甾体皂苷类、甾体生物碱类、有机酸等多种化学成分,具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗真菌等药理作用[1-3].近年研究显示白英可诱导肝癌细胞的凋亡,本文就白英诱导肝癌细胞凋亡的研究进展作一综述.     

大黄素在体外诱导人肝癌细胞smmc-7721凋亡的实验研究

目的:研究Emodin(大黄素)对人肝癌细胞smmc-7721的作用及探讨其诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制.方法:肝癌细胞smmc-7721经emodin(大黄素)处理后,用MTT法观察emodin对肝癌细胞株smmc-7721细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析诱导凋亡作用,采用western blot 检测p53、p21蛋白水平变化,采用细胞免疫组化方法检测Fas的表达变化.结果:与对照组相比,emodin能明显抑制smmc-7721细胞的生长,其IC50为49.6umol/L.荧光显微镜观察示emodin处理的肝癌细胞胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核.DNA凝胶电泳可见典型的梯状条带,细胞凋亡与emodin作用的浓度和时间相关.流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰 ",emodin能浓度依赖地诱导smmc-7721细胞发生G2/M期阻滞.Emodin处理smmc-7721细胞后,western blot 检测结果显示p53、p21蛋白表达明显增加,免疫组化方法检测结果显示Fas的表达明显增强.结论: emodin对人肝癌细胞smmc-7721株有强烈的增殖抑制作用,其分子机制可能是诱导smmc-7721细胞发生凋亡.Emodin 诱导smmc-7721细胞发生凋亡是p53依赖性的,即与p53、p21有关,并且Fas表达水平的上调在此过程中也起了一定作用.     

氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究

目的：探讨氧化砷（As2O3)对人肝癌细胞诱导凋亡作用的分子机制。方法：以As2O3作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，通过免疫组化技术对bcl-2,bax,p53,Fas及c-myc五种基因编码蛋白的表达进行检测。结果：经As2O3作用的人肝癌细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，bax,Fas基因编码蛋白表达增加，p53,c-myc基因编码蛋白表达改变不明显，结论：As2O3诱导肝癌细胞凋亡分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强box,Fax基因编码蛋白表达。     

5-Fu,HCPT诱导人肝癌细胞凋亡的对比性实验研究

用不同浓度的传统的化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、羟基喜树碱(HCPT)作用人肝癌SMMC-7721细胞,于不同时间,用定性的方法观察有无细胞凋亡的产生,用定量的方法对两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果进行比较.结果:5-Fu,HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,两药物诱导人肝癌细胞产生的最高凋亡率的作用时间为48 h,最佳浓度为7.5 μg/mL,1 mg/mL,最高凋亡率分别为38.7%,42.6%.经统计学处理,两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异.结论:小剂量的5-Fu,HCPT均可作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗.     

Fas转导大肠癌细胞诱导其凋亡的实验研究

目的：观察Fas转导大肠癌细胞株诱导大肠癌细胞凋亡效应，可望为进一步研究大肠癌的Fas基因治疗提供实验依据。方法：以流式细胞术(FCM)及琼脂糖凝胶电泳法捡测Fas转导大肠癌细胞调亡效应。实验分四组：a.LoVo细胞组b．LoVo细胞 Fas抗体组c.LOVo转导细胞组dLoVo转导细胞 Fas抗体组。结果：Fas转导大肠癌细胞株 Fas抗体组(d)细胞凋亡率明显高于a,b,c组。结论：Fas表达细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。     

螺旋藻多糖诱导BEL7404细胞凋亡的研究

目的：研究螺旋藻多糖对肝癌细胞凋亡的影响,以探讨其抗肝癌的机制。方法：以不同浓度（300、500、1000mg/L）的螺旋藻多糖处理BEL7404细胞,用倒置显微镜观察BEL7404细胞的形态变化;并以流式细胞仪测定BEL7404细胞的凋亡情况;免疫细胞化学法检测螺旋藻多糖处理BEL7404细胞后凋亡相关蛋白bax、bcl-2、Apaf-1表达的变化。结果：在形态学观察试验中,螺旋藻多糖使BEL7404细胞24h后出现凋亡,其凋亡率随着浓度的增加而增加;螺旋藻多糖也可使凋亡相关蛋白bcl-2表达降低,bax、Apaf-1蛋白表达增加。结论：螺旋藻多糖具有诱导肿瘤细胞凋亡作用,其作用机制可能是通过下调bcl-2蛋白表达,上调bax、Apaf-1表达来诱导细胞凋亡。