乙型肝炎患者血清sICAM-1、sVCAM-1含量的检测及其意义

目的：通过观察乙型肝炎患者血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平及其与ALT、AST相关性，探讨Ⅰ型超敏反应与乙型肝炎发病机制的关系。方法：应用酶联免疫吸附实验，检测45例乙型肝炎患者及15例对照组血清sICAM-1和sVCAM-1水平；应用全自动生化分析仪检测患者血清ALT和AST水平，并观察与sICAM-1和sVCAM-1的相关性。结果：①7例急性肝炎患者血清中sICAM-1和sVCAM-1含量明显高于正常对照组；②38例慢性肝炎患者血清中sICAM-1和sVCAM-1含量也明显高于正常对照组；③13例中度慢性肝炎患者的sICAM-1和sVCAM-1含量显著高于16例轻度慢性肝炎患者；④9例重度慢性肝炎患者的sICAM-1和sVCAM-1含量也明显高于轻度组和中度组：⑤sICAM．1水平与血清内ALT、AST含量呈显著正相关；⑥sVCAM-1水平与血清ALT、AST含量也呈显著正相关。总之，在以上几组中，急性乙型肝炎组的sICAM-1和sVCAM-1的升高最显著，并依次为慢性肝炎重度组、中度组和轻度组。结论：①急、慢性乙型肝炎患者血清中sICAM-1和sVCAM-1水平可反映肝损害程度；②检测急、慢性乙型肝炎患者血清sICAM-1和sVCAM-1水平，对判断患者的病情和预后有一定的参考价值；③作为Ⅰ型超敏反应性炎症的重要指标，sICAM-1和sVCAM-1可能参与了，乙型肝炎的发病和肝细胞的免疫损伤过程。     

单一庚型肝炎病毒感染的临床和病理与免疫组化的相关性探讨

目的 探讨单由庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染对肝脏的致病性。方法 用酶联免疫吸附法检测３６例血清抗－ＨＧＶ，用ＨＧＶ的ＮＳ５片段单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对２０例临床和病理确诊为单一庚型肝炎者行肝组织免疫组化，其中急性肝炎１０例，慢性肝炎７例，亚急性重型肝炎１例，慢性重型肝炎２例。结果 ①临床表现：急性肝炎呈急性起病，表现为发热、乏力、恶心、厌油等症状，个别有呕吐现象；慢性肝炎起病缓慢，症状轻；重型肝炎呈急性起病，有高度乏力、严重消化道症状，重者发生肝昏迷。②ＡＬＴ和ＡＳＴ改变：急性肝炎和重型肝炎呈中度升高，慢性肝炎呈轻度升高，重型肝炎可出现“酶胆分离”现象。③肝组织的病理损害：急性肝炎以肝细胞肿胀和汇管区炎症细胞浸润为主。慢性肝炎以肝细胞肿胀、小叶内碎屑样或灶状坏死、汇管区轻度炎症细胞浸润和／或纤维组织轻度增生为主。     

重症病毒性肝炎患者血清TNF-α和IL-6水平变化及其意义

应用双抗体夹心法检测 30例重症病毒性肝炎（SH）患者血清TNF-α和IL-6水平。结果显示,SH患者血清TNF-α和IL-6水平均显著高于急性肝炎、乙型慢性肝炎和乙型肝炎肝硬化患者（P<0.05和P<0.01）,其升高水平与血清胆红素和凝血酶原时间呈显著相关（P<0.001）,提示TNF-α和IL-6水平与肝细胞坏死程度密切相关,在SH的发病中有重要作用。重叠甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染的乙型SH患者血清TNF-α和IL-6水平显著高于单纯乙型SH患者（P<0.01和P<0.005）,合并严重细菌感染的SH患者血清TNF-α和IL-6水平也显著高于无感染的SH患者（P<0.05和P<0.02）,表明SH患者血清TNF-α和IL-6的显著升高与肝炎病毒的重叠感染和内毒素血症有密切关系。     

乙型病毒性肝炎患者血清IL-2、slL-2R、IL-13及PDGF测定的意义

目的：探讨乙型肝炎患者血清IL-2、sIL-2R、IL-13及PDGF水平的变化及测定的临床意义。方法：150例乙型肝炎患者分为3组（急性肝炎组20例、慢性肝炎组90例和重型肝炎组40例）;设健康人45名作为对照组。前2项血清标志物均采用放射免疫分析;后2项血清指标则采用酶联免疫吸附试验测定。将测定结果进行统计分析。结果：本文测定数值显示,血清IL-2水平急性肝炎患者组水平与对照组比较略有降低,但无统计学意义（P〉0.05）;慢性肝炎和重型肝炎2组患者该指标水平则均显著低于对照组（P均〈0.05）。sIL-2R水平显示急性、慢性及重型肝炎3组患者均非常显著地高于对照组（P均〈0.01）,且发现其递增规律与肝炎病情的严重程度呈明显的平行关系。IL-13水平测定结果也显示3组患者均显著高于对照组（P均〈0.05）。PDGF测定值显示,急性肝炎组水平显著高于对照组（P〈0.05）,慢性肝炎和重型肝炎2组水平则较对照组升高更为显著（P均〈0.01）。其水平的递增关系也与病情的严重程度相一致。结论：本文患者4项血清指标水平的变化与乙型肝炎的发病及病情进展有关;其测定有助于了解本病的发生机制和预后评估。     

抗组胺治疗对实验性肝炎大鼠肥大细胞浸润及c-Kit和SCF表达的影响

 目的：研究c-Kit和干细胞因子（SCF）在实验性肝炎大鼠肝脏组织的表达及抗组胺治疗后的变化。方法：取Wistar大鼠30只,随机分为3组：正常对照组（NC）、慢性肝炎组（CH）和抗组胺治疗组（AH）。CH组采用复合因素造模（用40%四氯化碳油溶液皮下注射,同时辅以低蛋白、低胆碱、高脂肪、高醇饮食）,AH组在CH的基础上给予抗组胺治疗（酮替芬）。4周末处死动物,取血分别检测血浆类胰蛋白酶（TS）和组胺（HA）水平,同时观察肝脏组织学变化及肥大细胞形态改变。应用免疫组织化学方法观察肝脏c-Kit和SCF的表达。用RT-PCR方法观察肝组织c-Kit和SCF mRNA的表达水平。结果：（1）与正常对照组比较,慢性肝炎组TS、血和肝组织HA水平均有明显升高（P<0.05）,经抗组胺治疗后,TS、血和肝组织HA水平均明显降低（P<0.05）。（2）光镜下,慢性肝炎组有脂肪变性和纤维化形成,而治疗组肝损伤明显减轻;甲苯胺蓝染色可见慢性肝炎组肝脏血管周围及纤维间隔内大量正在脱颗粒和已经脱颗粒的充满紫色颗粒的肥大细胞。治疗组仅见胞浆中充有少量紫色颗粒。定量统计发现,慢性肝炎组肥大细胞数目较正常对照组明显升高（P<0.05）,抗组胺治疗后,肥大细胞数目明显减少（P<0.05）。（3）RT-PCR结果显示抗组胺治疗可以下调c-Kit和SCF mRNA表达水平（P<0.05）。免疫组织化学染色显示慢性肝炎组高表达c-Kit和SCF（均P<0.05）,抗组胺治疗可以下调二者的表达（P<0.05）,而且二者的表达均与HA水平呈明显正相关。结论：肥大细胞参与了实验性肝炎的炎症过程。酮替芬可以通过下调肥大细胞膜受体c-Kit及其配体SCF的表达使肥大细胞脱颗粒减少,组胺释放减少,从而减轻肝脏炎症。     

免疫性食蟹猴肝纤维化模型的实验研究

目的：在食蟹猴上,通过皮下注射异种血清的方法建立免疫性肝纤维化模型,阐明该模型的特点。方法：选择雄性食蟹猴12例,随机分为模型组和对照组。模型组皮下注射小牛血清,剂量为0.4 ml/kg;对照组注射相同剂量的生理盐水。每周均注射两次。结果：造模第8周开始,模型组血清HA、PCⅢ、ⅣC、TGF-β1和α-SMA均较造模前显著升高（P<0.05,P<0.01）,模型组HA和PCⅢ比对照组显著升高（P<0.05）。造模第12周后,模型组血清ⅣC、TGF-β1和α-SMA均比对照组显著升高（P<0.05）,模型组血清LN和TCH水平较造模前显著升高（P<0.05）;模型组血清AST和ALT水平比对照组以及造模前均显著升高（P<0.05）,模型组ALB比造模前显著下降（P<0.05）。造模16周,模型组血清LN、TCH和TG水平比对照组显著升高（P<0.05）;模型组ALB水平明显低于对照组（P<0.05）;B超显示模型组肝脏光点较对照组粗糙,显示强光回声团;HE染色下显示,模型组肝细胞坏死和单核细胞浸润;Van-Gieson胶原染色下显示,模型组肝脏汇管区胶原纤维增生。结论：给予皮下注射小牛血清16周,成功建立食蟹猴肝纤维化模型。     

糖尿病非酒精性脂肪肝病大鼠肝组织胰岛素受体、瘦素受体 mRNA的表达

目的：观察2型糖尿病大鼠肝脏的病理变化,探讨肝组织胰岛素受体（insulin R）、瘦素受体（leptin R）mRNA表达在糖尿病性非酒精性脂肪肝病（NAFLD）发病机制中的作用。方法：SD大鼠随机分成2组：正常组与2型糖尿病组。2型糖尿病组在以高脂饮食4周后,加小剂量(30 mg/kg)链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病性非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,继续给予高脂饮食12周。分别采用HE染色、苏丹Ⅲ染色、Masson染色光镜下观察肝脏组织的病理改变;透射电镜观察肝脏超微结构改变;生化法检测血糖、血甘油三酯（TG）、血总胆固醇（TC）、丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）水平;放免法检测血清胰岛素水平;ELISA法检测血清瘦素水平;RT-PCR法检测肝组织磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）、insulin R、leptin R mRNA表达水平。结果：糖尿病大鼠肝细胞明显脂肪变性、碎片状坏死伴炎细胞浸润及肝纤维化病变,电镜下主要表现为肝细胞核固缩,胞浆内含大量脂滴,狄氏间隙胶原纤维增生;血糖、血胰岛素、TG、ALT、AST水平明显升高（P<0.01）,TC水平升高(P<0.05）,血清瘦素水平明显下降（P<0.01）;肝组织insulin R、leptin R mRNA表达显著升高（P<0.01）,PEPCK、G6Pase mRNA表达无显著变化。结论：2型糖尿病时的胰岛素抵抗是NAFLD发生的根源,由于胰岛素抵抗而致的低血清瘦素水平、肝组织insulin R、leptin R 表达上调参与了NAFLD的发生。     

C1型尼曼-匹克病小鼠肝脏功能及病理变化

目的 探讨晚期（P60）Npc1^-/-小鼠肝脏功能和病理变化,为C1型尼曼-匹克病（NPC1）患者肝脏的病理发生及临床治疗提供实验依据。 方法 小鼠称重后,眼内眦取血检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性变化,评价Npc1^-/-小鼠的肝功能变化;取肝组织进行石蜡和冷冻切片,通过HE染色和油红O染色评估肝脏组织的形态变化和脂肪储存情况,以及Masson染色评估肝脏组织胶原沉积情况;Real-time PCR和Western blotting分别检测肝脏组织促炎症因子,白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α的mRNA和蛋白水平表达情况;TUNEL染色评估肝脏组织凋亡情况。 结果 与Npc1^+/+小鼠相比,Npc1-/-小鼠的体重及肝脏系数显著降低（P<0.001）;LDH、ALT及AST活性显著升高（P<0.001）;HE染色发现,Npc1^-/-小鼠肝脏组织形态改变明显,出现大量泡沫细胞;油红O染色显示,Npc1^-/-小鼠肝脏脂肪含量显著降低;Real-time PCR显示,Npc1^-/-小鼠肝脏组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著升高（P<0.01,P<0.05和P<0.001）,同时,Western blotting也显示,3个因子的蛋白表达均显著升高（P<0.05,P<0.05和P<0.01）,证实Npc1-/-小鼠肝脏晚期发生炎症反应;Masson染色未发现Npc1^-/-小鼠肝脏纤维化的发生;TUNEL染色显示,Npc1^-/-小鼠肝脏组织凋亡细胞数量增加。结论 Npc1基因突变导致肝脏组织形态发生改变,大量的巨噬细胞聚集引发炎症反应,而炎症反应的发生可能是引起肝脏细胞凋亡和肝功能受损的重要途径之一。     

原发性肾病综合征并发急性肾损伤患者血清及肾组织中NGAL的表达及意义

 目的：检测原发性肾病综合征（PNS）患者血清及肾组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的水平,探讨PNS合并急性肾损伤（AKI）时患者血清及肾组织中NGAL浓度的变化。方法：72例PNS患者根据病理结果分为：(1) PNS合并急性肾小管坏死（ATN）组15例,其中微小病变（MCD）合并ATN 10例,系膜增生（MsPGN）合并ATN 5例;(2) PNS不合并ATN组57例,其中MCD组24例,膜性肾病（MN）组23例和MsPGN组10例。15例健康体检者的血液及5例正常肾组织作为正常对照组。采用ELISA检测血清NGAL的水平;采用免疫组化法检测肾组织中NGAL的表达。结果：(1) PNS患者血清NGAL水平及肾组织中NGAL表达明显高于正常对照组（P<0.05）,其中MN组较MCD组和MsPGN组血清NGAL水平明显升高（P<0.05）。(2) MCD合并ATN组和MsPGN合并ATN组血清NGAL水平及肾组织中NGAL表达较不合并ATN组显著升高（P<0.05）。(3)血清中NGAL与24 h尿蛋白定量、血尿素氮和血肌酐呈正相关（P<0.05）,与血清白蛋白和β2微球蛋白无明显相关性（P>0.05）;血清中NGAL与肾组织NGAL的表达呈正相关（P<0.01）。结论：血清NGAL可能作为判断原发性肾病综合征并发急性肾损伤的早期、无创、敏感指标。     

β-榄香烯对CLP诱导的脓毒症大鼠肝损伤的保护作用

目的：探讨β-榄香烯在盲肠结扎穿孔（CLP）诱导的脓毒症大鼠肝功能和炎症损伤中的保护作用。方法：50只Wistar大鼠分为健康对照组、模型组、模型+β-榄香烯25 mg/kg组、模型+β-榄香烯50 mg/kg组、模型+β-榄香烯100 mg/kg组。ELISA测定各组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、三酰甘油（TG）水平;HE染色观察肝脏病理损伤;Western blot检测肝组织中cleaved cas9、cleaved cas3蛋白表达水平,ELISA检测血清和肝组织中iNOS和IL-10含量,Western blot和免疫组化检测NF-κB P65蛋白表达水平。结果：与健康对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT、LDL、TG水平升高,HDL水平降低（P<0.05）,肝脏病理损伤严重,cleaved cas9、cleaved cas3蛋白表达水平升高,血清和肝组织中iNOS和IL-10含量增多,p-P65/P65水平升高（P<0.05）。与模型组相比,25 mg/kg β-榄香烯给药...     

肝再生增强因子的研究进展

肝再生增强因子的研究进展@黄志刚$邯郸医学高等专科学校医学检验系!河北邯郸056002 @刘殿武$河北医科大学公共卫生学院!河北石家庄050017肝再生增强因子;;基因克隆;;肝再生~~     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

肝细胞增殖因子促进受损肝细胞增殖的可能机制

目的： 探讨肝细胞增殖因子（ALR）促进受损肝细胞增殖的可能机制。方法: 采用细胞增殖试验（MTT法）观察经ALR刺激的大鼠肝枯否细胞(KC)的条件培养液(KCCM+)对受损肝细胞增殖的影响，同时用免疫组织化学方法检测正常大鼠肝脏组织中ALR的分布、大鼠枯否细胞膜表面结合的ALR以及ALR对枯否细胞IL-6表达的影响。结果: 受损肝细胞经枯否细胞条件培养液刺激后增殖明显。正常大鼠肝细胞内可表达合成ALR，枯否细胞膜表面可见ALR免疫反应颗粒，经ALR刺激后枯否细胞IL-6免疫反应信号增强。结论: ALR可能通过首先刺激枯否细胞，从而促进受损肝细胞增殖。     

Expression and localization of augmenter of liver regeneration in human muscle tissue

Mitochondrial DNA (mt-DNA) disorders and abnormal regulation of nuclear-derived proteins devoted to the cross-talk between the two cellular genomes have recently interested researchers in the field of neuromuscular diseases. We have identified, isolated and sequenced a new gene, augmenter of liver regeneration (ALR) that stimulates in vivo hepatocyte proliferation and up-regulates mt-DNA expression and ATP production. ALR protein (Alrp) is mainly located, in rat, in the mitochondrial inter-membrane space and its mRNA is particularly abundant in brain, muscle, testis and liver, tissues whose activity is mostly dependent on mitochondrial metabolism. Studies on rat Alrp sequence revealed the presence of homologous amino-acid sections into proteins derived from mouse, human, Drosophyla, plants and even DNA viruses. In this article, we evaluated ALR expression in normal human muscular tissues, both as protein and as mRNA. The data, obtained by molecular biology, immunohistochemistry and electron microscopy, demonstrated that: (i) Alrp and ALR mRNA are present in human muscular tissue; (ii) Alrp is particularly expressed in muscular fibres rich in mitochondria; (iii) Alrp is localized in the mitochondrial inter-membrane space or associated to mitochondrial cristae; and (iv) in subjects younger then 35 years of age, ALR mRNA expression is different between male and female subjects. In conclusion, the present data set Alrp, as a factor associated with mitochondria also in human tissue, call for future studies aimed at establishing Alrp as an important factor involved in the molecular events that trigger neuromuscular diseases.     

人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究

目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法，并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组：①ALR组；②ALR-FAD组；③ALR突变体-FAD组；④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物，于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降；其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法；并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性，且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。     

Expression of augmenter of liver regeneration (ALR) in human liver cirrhosis and carcinoma

AIMS: To determine the expression of a protein termed augmenter of liver regeneration (ALR), recently found to have a specific and beneficial effect on the process of liver regeneration in normal and diseased human liver. METHODS AND RESULTS: ALR expression in normal and cirrhotic human livers with various underlying diseases as well as in tissue samples of hepatocellular carcinoma (HCC) and cholangiocellular carcinoma (CCC) was analysed by immunohistochemistry and quantitative reverse transciptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Expression analysis of ALR in total liver protein extracts by Western blotting showed mainly dimeric ALR protein. Immunohistochemically, cytosolic and perinuclear immunosignals were found in hepatocytes and cholangiocytes in normal, cirrhotic or cancerous liver tissue and only weak signals in some endothelial cells in normal livers. Quantitative mRNA analysis revealed significantly increased ALR expression in cirrhosis compared with normal liver tissue. In HCC and CCC ALR mRNA expression was also significantly enhanced compared with normal liver tissue, but expression levels did not differ from the matching non-neoplastic tissue in the same patient. CONCLUSIONS: The findings suggest an important role for ALR in hepatocellular regeneration in liver cirrhosis as well as in hepatocarcinogenesis and therefore its potential value in the clinical diagnosis of hepatic cirrhosis and cancer.     

重组人肝再生增强因子可逆转免疫损伤性肝纤维化

目的:了解重组人肝再生增强因子(hALR)抗免疫损伤性肝纤维化的活性。方法:建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。模型完成后予hALR 腹腔注射。观察肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果:重组人肝再生增强因子(hALR)可降低肝纤维化大鼠的ALT、AST、LDH水平;肝组织胶原蛋白含量的测定表明hALR治疗组大鼠肝组织胶原含量明显低于模型组及阴性对照组;病理组织切片也发现hALR治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组及阴性对照组明显减轻。结论:重组人肝再生增强因子(hALR)可逆转免疫损伤性大鼠肝纤维化。     

一组抗重组人肝再生增强因子单克隆

目的:制备抗重组人肝再生增强因子(rhALR)单克隆抗体(McAb)。方法:以纯化的rhALR为抗原免疫小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以ELISA,Westernblot法分别筛选测其滴度及免疫特异性。结果:获得2株稳定分泌抗rhALR单克隆抗体杂交瘤株。其效价,腹水10^-3-10^-5,培养上清10^-2-10^-3,两株McAb针对不同抗原决定簇。结论:制备的抗体具有高特异性。对rhALR在体内组织器官的分布,示踪rhALR在体内的代谢及探索rhALR在翻译水平上对细胞发育的调控分布等研究具有重要的应用价值。     

人肝再生增强因子在体外可与Na+-K+-ATPase 特异性结合

目的： 用体外下拉实验证明人肝再生增强因子（hALR）与其相互作用蛋白Na+-K+-ATPase的体外结合作用。方法：将Na+-K+-ATPase β亚基部分基因片段定向克隆到pGEX-4T-1 中, 转化大肠杆菌DH5α，IPTG 诱导, 获得Na+-K+-ATPase β亚基部分蛋白与谷胱甘肽（GST）的融合表达，经GST偶联的琼脂糖珠纯化, 以GST下拉实验检测其与hALR蛋白的体外直接相互作用。结果：还原型SDS-PAGE 显示GST- Na+-K+-ATPase 融合蛋白泳道有hALR蛋白单体和二聚体条带，Western blotting 结果进一步证实为hALR蛋白。结论：Na+-K+-ATPase可在体外与hALR蛋白特异地结合。     

抗人肝再生增强因子抗体识别部位的确定

目的：确定抗人肝再生增强因子单克隆抗体所识别的抗原表位。方法：采用蛋白质预测软件预测人肝再生增强因子的抗原决定簇,根据预测结果合成肽进行竞争ELISA验证单克隆抗体所识别部位。结果：人肝再生增强因子的第6～15,68～80以及105～112位氨基酸残基是其抗原表位。结论：采用计算机软件预测,并在此基础上经合成肽验证的方法是一种可靠的抗原表位确定方法。