熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响

目的探讨熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响。方法用不同浓度的UA处理SMMC-7721细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞周期相关基因p21、p53及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 UA对SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;UA可以诱导SMMC-7721细胞阻滞在S期,RT-PCR结果显示其能够上调p21和p53基因,下调PCNA基因。结论 UA能明显抑制SMMC-7721细胞的生长,引起细胞周期阻滞;细胞周期阻滞的发生与p21、p53、PCNA基因变化相关。     

人剪切修复基因XPD对肝癌细胞中p8/TTDA基因的调控作用

目的 探讨人剪切修复基因XPD对p8/TTDA基因的调控作用.方法 用pEGFP-N2/XPD重组质粒、pEGFP-N2空载质粒分别稳定转染人肝癌细胞SMMC-7721,并用具有相同遗传背景和代数的SMMC-7721细胞作为空白对照.用RT-PCR、Western blot法检测转染前后p8、XPD、p53、c-myc表达量的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖活力.结果 (1)RT-PCR检测示:p8 mRNA在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的,稳定转染野生型XPD后,p8 mRNA和XPD mRNA表达量明显增高(P<0.001).稳定转染重组质粒细胞组p53 mRNA表达量亦明显增高(P<0.05),c-myc mRNA表达量则明显下降(P<0.001).(2)Western blot法检测示:p8蛋白在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的.稳定转染野生型XPD后,p8蛋白、XPD蛋白、p53蛋白表达量明显增高(P<0.05),c-myc蛋白表达量则明显下降,差异有统计学意义(P<0.001).(3)MTT检测示:稳定转染重组质粒细胞组细胞增殖率明显减弱(P<0.001).结论 人剪切修复基因XPD可调控p8/TTDA基因的表达.野生型XPD转染后亦可上调p53表达,下调c-myc表达,从而在分子途径上抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡.     

甘草酸二铵对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和p53表达的影响

目的探讨甘草酸二铵(DG)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及对p53表达的影响。方法实验分对照组及DG干预组,采用MTT比色法测定细胞的生长情况,检测DG对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测DG对p53mRNA表达水平的影响;通过Western blot测定DG对p53蛋白表达的影响。结果 DG(0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00mg/L)呈浓度依赖性降低人肝癌细胞存活率,作用48h时IC50值为(4.31±0.21)mg/L;DG可明显抑制肝癌细胞增殖,剂量为4.00、8.00、16.00mg/L时,其抑制率分别为44.52%、66.78%、91.24%;低、中、高浓度组DG(2.0、4.0、8.0mg/L)可明显提高肝癌细胞中p53mRNA及其蛋白表达,并呈浓度依赖性增强。结论 DG对人肝癌细胞SMMC-7721具有明显细胞毒性和抑制增殖作用,其机制可能与上调p53表达有关。     

槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC-7721的研究

目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC-7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用;半定量RT—PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。RT—PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度,发现0.100mg／mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后,P53 mRNA表达的相对强度增高（P〈0．01）。结论：擗寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。     

重组腺病毒介导的p53基因对肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的探索p53基因在肝癌基因治疗方面的可行性.方法以人肝癌细胞系SMCC-7721为实验对象,将载有人野生型p53 cDNA的重组腺病毒(Ad-p53)感染SMCC-7721细胞及肿瘤组织,体外体内实验观察Ad-p53对SMCC-7721细胞生长的影响.结果Ad-p53对SMMC-7721细胞的抑制作用与感染浓度有关,MOI值越高,抑制作用越强.当Ad-p53在100 MOI效靶比时,SMCC-7721细胞基本达到完全抑制.感染2 d后P53蛋白表达达到高峰,SMCC-7721生长受到明显的抑制.瘤内注射Ad-p53后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小.结论Ad-p53转导野生型p53基因可能是一种有效的肝癌基因治疗途径.     

白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用

目的观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制。方法用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况。RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平。结果倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强。WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07%,66.14%,83.23%。细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系。结论白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制。     

SUMO-1基因沉默对肝癌细胞株SMMC-7721bcl-2及c-myc基因表达的影响

目的 探讨SUMO-1基因沉默后对肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2及c-myc表达的影响.方法 将人工合成的针对人SUMO-1基因的siRNA片段转染人肝癌细胞株SMMC-7721,采用RT-PCR、Western blot方法检测siRNA沉默SUMO-1基因的效果及SUMO-1基因沉默后对bcl-2及c-myc基因表达的影响.结果 人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段能显著地抑制SMMC-7721 SUMO-1基因的表达,24、48、72 h沉默率分别为9.80%、73.43%、46.56%.SUMO-1基因表达下调后SMMC-7721 细胞内bcl-2及c-myc基因表达也明显下调,差异有统计学意义.结论 siRNA是一种理想的沉默SMMC-7721 SUMO-1基因表达的方法,SUMO-1基因沉默后SMMC-7721细胞内的bcl-2及c-myc基因表达均明显下调,说明SUMO-1基因控制癌基因bcl-2及c-myc的表达.     

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721 细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨雷氏大疣蛛Macrothele raveni毒素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的抑制作用，进一步探讨其作用的分子机制。方法 采用MTT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMMC一7721细胞增殖作用的影响；采用[^3H]TdR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMMC7721细胞DNA合成的变化；采用流式细胞术（FCM）探讨雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响；采用Western Blot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-myc蛋白表达的影响。结果 MTT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞增殖有较强的抑制作用（P〈0．05），时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMMC-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMMC-7721细胞凋亡率增加，细胞周期阻滞在G2／M期。Western Blot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMMC7721细胞72h后，c-myc蛋白表达减弱。结论 雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和DNA的合成，其机制可能是诱导细胞凋亡，使细胞周期相关c-myc蛋白表达减弱，导致细胞周期的变化。     

ADFMCHR激活PPARγ抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)激活过氧化物酶活化因子受体γ(PPARγ)抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞。台盼蓝拒染法检测细胞生长;平皿克隆形成法检测细胞锚定依赖性生长;软琼脂克隆形成法检测细胞集落形成能力。结果:细胞计数结果显示,ADFMChR延长SMMC-7721细胞倍增时间,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量依赖性。但是对预先用PPARγ阻断剂GW 9662孵育30分钟的SMMC-7721细胞,ADFMChR的生长抑制作用明显降低;平皿克隆、软琼脂克隆形成法结果显示,ADFMChR抑制SMMC-7721细胞的锚定依赖性生长能力和锚定非依赖性生长能力,而GW 9662可以降低ADFMChR对SMMC-7721细胞的增值抑制作用。结论:ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长作用,其机制与激活PPARγ有关。     

地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株的去甲基化机制研究

目的 探讨地西他滨（Decitabine,DAC）联合三氧化二砷 (Arsenic Trioxide ,AS2O3)对肝癌SMMC-7721细胞株的增殖抑制作用,了解其可能的去甲基化机制。方法 采用MTT法观察药物对肝癌SMMC-7721细胞株的增殖抑制作用。采用RT-PCR方法检测P15INK4B、甲基转移酶,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B（DNA methyltransferases,DNMT）的mRNA的表达。结果 地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株的生长抑制具有协同性,并具有时间和剂量依赖性。地西他滨和As2O3作用细胞72小时后P15INK4B抑癌基因表达增强,甲基化转移酶表达下降,联合组同单药组比较具有统计学意义（P&amp;amp;amp;amp;amp;lt;0.05)。结论 地西他滨联合三氧化二砷可以抑制肝癌SMMC-7721细胞株的增殖,其机制可能与抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B,增强p15抑癌基因表达有关。     

毛喉萜对人肝癌细胞增殖影响的实验研究

目的　探讨毛喉萜 (Forskolin)的抗肝癌作用。方法　采用克隆形成、MTT比色法观察毛喉萜对SMMC 772 1细胞的作用 ,并利用免疫细胞化学方法检测其对rasp2 1、p5 3蛋白表达的影响。结果　毛喉萜可明显抑制SMMC 772 1细胞的增殖 ,其抑制率与剂量呈正相关 (P <0 .0 1 ) ,经毛喉萜处理后 ,rasp2 1、p5 3蛋白表达均有明显下降。结论　毛喉萜能明显抑制肝癌SMMC 772 1细胞增殖 ,其作用可能与降低rasp2 1、p5 3蛋白表达有关。     

Ursolic acid induces human hepatoma cell line SMMC-7721 apoptosis via p53-dependent pathway

Background Ursolic acid （UA） is a ubiquitous molecule in the plant kingdom with specific anticancer effects that have been shown in vitro and in vivo. Although UA can inhibit the proliferation of liver cancer cells and induce apoptosis of many types of tumor cells, the molecular mechanism of its anti-hepatoma activity is still not well defined. The objective of this study was to investigate the inhibitory effect and mechanisms of UA on the human hepatoma cell line SMMC-7721. Methods After treatment with UA, the growth inhibition of SMMC-7721 cells was assessed by MTT assay. Cells were also evaluated by flow cytometric analysis, Wright-Giemasa staining, Hoechst 33258 staining and transmission electron microscope after they were induced by UA. DNA microarray technology was used to investigate the gene expression pattern of SMMC-7721 cells exposed to UA 40 pmol/L. The molecular mechanism of cells death was analyzed by real-time RT-PCR and Western blotting. Results The proliferation of SMMC-7721 cells was significantly inhibited in a dose- and time-dependent manner after UA treatment. UA induced cell cycle arrest and apoptosis. The DNA microarray analysis indicated that 64 genes were found to be markedly up- or down-expressed, including GDF15, SOD2, ATF3, and fos. The result of Western blotting showed the apoptotic proteins p53 and Bax were up-regulated while the anti-apoptotic protein Bcl-2 was down-regulated. Real-time RT-PCR confirmed UA could up-regulate the mRNA expressions of GDF15, SOD2, ATF3 and down-regulate the mRAN expression of fos. Meanwhile these effects were partly blocked by pretreatment with the p53 inhibitor Pft-a. Conclusion Activation of the p53 pathway is involved in UA inhibition of SMMC-7721 human hepatocellular carcinoma cell growth and induction of apoptosis.     

重组腺病毒载体转染p16基因对肝癌细胞的生长抑制作用

目的：通过腺病毒转染p16基因观察对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤作用。方法：克隆人p16基因全长cDNA序列，构建携带p16基因的增殖缺陷型重组腺病毒p16(AdV-p16)，以AdV-p16感染人肝癌SMMC-7721细胞，观察p16基因的表达及其对细胞的生长抑制或杀伤作用。结果：AdV．p16能介导外源基因p16在肝癌SMMC-7721细胞系中高效表达。在感染AdV-p16后随重复感染度(MOI)升高p16基因阳性表达率升高，四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)实验结果表明，SMMC-7721细胞的生长受抑制。结论：腺病毒能够介导p16基因在肝癌细胞中高效表达，促进细胞周期阻滞和诱导肿瘤细胞凋亡。     

氯胍通过下调FASN/SREBP-1c通路抑制肝癌细胞增殖、集落形成及迁移

目的探讨氯胍对肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成和迁移的影响及可能机制。方法用不同浓度的氯胍分别处理Hep-G2及SMMC-7721细胞。采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测脂肪酸合成酶(FASN)及调节元件结合蛋白(SREBP-1c)的表达情况。结果氯胍抑制Hep-G2及SMMC-7721的增殖、集落形成及迁移能力;Western blotting显示氯胍下调FASN及SREBP-1c的表达。结论氯胍能抑制肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成及迁移,其作用机制可能与下调FASN/SREBP-1c通路有关。     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制及细胞凋亡的诱导作用

目的探讨槲皮素体外对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法以10、30、60、100#mol／L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,Annexi—V／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测bcl-2、bax蛋白表达的变化。结果30、60、100umol／L槲皮素可显著地抑制SMMC-7721细胞的生长（P〈0．01）,诱导细胞发生凋亡（P〈0．01）,并呈现量墩和时-效关系;槲皮素作用48h后,免疫组化染色法检测显示bcl-2蛋白表达降低和bax蛋白表达上调。结论槲皮素体外通过引起人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达下调和bax蛋白表达上调诱导细胞发生凋亡,抑制细胞生长,槲皮素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

腺病毒介导的ING4基因对SMMC-7721人肝癌细胞生长的抑制效应

目的研究腺病毒介导的ING4（Ad-ING4）基因对体外SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法将腺病毒空载体Ad-GFP及重组腺病毒Ad-ING4分别感染SMMC-7721细胞,采用RT-PCR法及间接免疫荧光检测ING4基因的转录和表达;荧光显微镜观察Ad-ING4对SMMC-7721细胞的细胞毒作用;MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞术（FCM）检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;DAPI核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR及间接免疫荧光显示Ad-ING4能在SMMC-7721细胞内稳定表达;Ad-ING4感染72h和96h后对细胞的生长抑制率达33.82%和50.70%;FCM检测有明显的凋亡峰,凋亡率可达46.7%;DAPI染色结果显示SMMC-7721细胞胞核呈现核深染、固缩、断裂等细胞核凋亡的形态改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

褪黑素、顺铂协同抑制人肝癌细胞SMMC-7721的机制研究

目的 研究褪黑素(melatonin，MLT)、顺铂(cisplatinumum，DDP)联用对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用机制。方法用不同浓度的褪黑素、顺铂及二者联用处理人肝癌细胞株SMMC-7721，采用MTT法测定细胞抑制率；流式细胞仪分析细胞周期及凋亡；通过酶解可见光底物DEVD-pNp测定Caspase3的活性；Western blot分析p27^kipl蛋白表达。结果 ①褪黑素、顺铂单独应用和联合应用均能抑制SMMC-7721生长，且低浓度联合应用可达到甚至超过单用高浓度顺铂的抑制效果。②褪黑素无论与顺铂联用与否均能激活Caspase3，诱导细胞凋亡，而顺铂单独使用无此效应。③褪黑素与顺铂均可导致细胞周期阻滞，二者联用更明显。④褪黑素无论与顺铂联用与否均明显诱导p27^kipl的表达，而顺铂单独使用无此作用。结论 褪黑素能够通过诱导细胞凋亡和促进p27^kipl表达协同增强顺铂抑制肝癌细胞作用。