两种核酸提取方法对HBV DNA定量检测结果的影响

目的研究磁珠法和煮沸法两种核酸提取方法对血浆乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测结果的影响。方法采用磁珠法和煮沸法同步处理106例"小三阳"或"大三阳"乙型肝炎患者血浆,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)定量检测,比较两种方法的阳性率、定量检测结果并分析两者的关系。结果 106例乙型肝炎患者血浆经磁珠法和煮沸法处理后的HBV DNA阳性率分别为81.1%和71.7%,其中"小三阳"患者的HBV DNA阳性率分别为76.9%、66.7%,"大三阳"患者的阳性率分别为92.8%、85.7%;磁珠法中HBV DNA荧光定量PCR测得其载量为(3.93±2.43)log10copies/mL,而煮沸法为(3.35±2.76)log10copies/mL,且"小三阳"和"大三阳"患者标本经磁珠法提取均明显高于煮沸法提取的PCR检测结果;上述结果经统计学分析差异均有意义(P0.05);此外,两种核酸提取方法处理条件下的HBV DNA载量呈较好的线性关系(R2=0.869 3,P0.05)。结论磁珠法提取核酸阳性率高,检测灵敏度高,值得实验室推广,可用于临床诊断。     

不同核酸提取方法对母乳HBV DNA定量检测结果的影响

目的评价不同核酸提取方法对母乳乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测结果的影响。方法采用聚乙二醇(PEG)病毒沉淀浓缩法(PEG法)和碱液直接裂解法提取HBV DNA阳性产妇乳汁HBV DNA,并进行荧光定量聚合酶链反应检测,以酚-氯仿提纯法作为核酸提取对照方法。结果当母乳HBV DNA≥104 copy/mL时,PEG法、碱性直接裂解法提取标本的检测阳性率均为100.00%(21/21);当母乳HBV DNA水平为103～<104 cop-y/mL时,PEG法提取标本检测阳性率为93.75%(30/32),高于碱液直接裂解法提取标本的检测阳性率71.88%(23/32)(P<0.05)。结论 PEG法提取母乳HBV DNA能提高母乳HBV DNA检测阳性率,能够为科学、安全的母乳喂养提供可靠的实验室依据。     

磁珠分离纯化技术在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用

目的 评价磁珠分离纯化技术(简称磁珠法)提取核酸的重复性、提取效率一致性、线性范围、灵敏度及抗干扰性,初步探讨其在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用价值.方法 采用磁珠法提取HBV DNA log值分别为4.16,5.23和7.04的质控血清进行重复性试验,HBV DNA阳性血清10倍梯度稀释的系列标本评价其提取效率一致性,HBV DNA强阳性血清作10倍系列稀释后检测其线性范围,HBV DNA标准血清与含干扰成分(溶血、黄疸和脂血)的HBV DNA 阴性血清,按4∶0,3∶1,2∶2,1∶3和0∶4比例分别混合成5个不同浓度标本用于干扰试验.以提取方法为沉淀煮沸法的PCR 荧光诊断试剂作对照,应用磁珠法及配套扩增试剂检测288份乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,并比较测定结果.结果 磁珠法批内和批间平均变异系数分别为3.66%和4.75%;HBV DNA含量不同的血清提取效率均在98%以上;在1.28×102IU/L～1.28×109IU/L之间有良好的线性关系;最低检出限为60.5 IU/L;不同浓度的黄疸和脂血对扩增曲线和实验结果无明显影响;血清中血红蛋白浓度至50 g/L时,HBV DNA结果相差约0.5～1.0个数量级.磁珠法和沉淀煮沸法的阳性率分别为88.19%和82.64%.当沉淀煮沸法检测结果log值处在2.699～4.000之间时,两法检测相应标本结果差异有统计学意义.结论 磁珠法高效、快速和易于自动化,应用于HBV DNA检测对乙型肝炎患者的临床诊断和疗效监测将有十分重要的意义.     

血清HBV—DNA模板不同提取方法的比较和选择

目的比较直接煮沸法、碱裂解法、浓缩碱裂解法和碱裂解3倍量提取法四种提取法提取样本核酸的差异;选择简便、可靠的检测乙肝病毒DNA（HBV—DNA）提取方法。方法运用中山医科大学达安基因股份有限公司生产的HBV—DNA试剂盒中推荐的浓缩碱裂解法,与直接煮沸法、碱裂解法、碱裂解3倍量提取法,分别提取血清样本核酸模板,用美国MJ实时荧光定量PCR仪检测HBV—DNA,对结果进行对比分析。结果共89例乙肝表面抗原（HB—sAg）阳性患者血清,浓缩碱裂解法和碱裂解3倍量提取法检测,两者均有62例HBV—DNA阳性（〉1000拷贝／ml定性为阳性）阳性率69．6％,阳性拷贝／ml均值用对数形式表示分别为（6．652±1．301）和（6．601±1．282）,两者间结果无明显差异（P〉0．05）;直接煮沸法检测出47例阳性（均在上述62例中）阳性率52．8％;碱裂解法测出57例阳性（均在上述62例中）阳性率64．0％,阳性拷贝／ml均值与浓缩碱裂解法和碱裂解3倍量提取法相比较,阳性检出率较低,有非常显著性差异（P〈0．01）和显著性差异（P〈0．05）。结论碱裂解3倍量提取法操作简单,省时、省材料,重复性好,阳性检出率与浓缩碱裂解法一致,建议使用碱裂解3倍量提取法检测HBV—DNA。     

不同核酸提取方法用于HBVDNA定量检测的比较

目的 探讨两种国产乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量检测试剂的临床应用价值。方法 选取于该院就诊的慢性乙型肝炎患者共176例,分别用两种国产HBV核酸定量检测试剂测定其HBV DNA水平。比较分析“煮沸法”的A试剂与“一步法”的B试剂的线性范围及其灵敏度。结果 176例慢性乙型肝炎患者血清标本用两种试剂检测,A试剂检测为阳性的样本有71例,阳性率为40.3%(71/176);B试剂检测为阳性的样本有120例,阳性率为68.2%(120/176)。阳性率的一致性为100%,阴性率的一致性为53.3%,总的一致性为72.2%。结论 两种国产HBV DNA检测试剂盒对于HBV载量在低复制水平的血清标本具有很好的可比性,B试剂的扩增效率高、操作简便、定量结果准确、线性范围广等优点,具有较好的临床应用价值。     

不同标本对荧光实时定量PCR法测定HBV0-DNA结果的影响

目的　利用沉淀煮沸裂解法提取HBV核酸 ,探讨不同的临床标本和贮存条件对荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒核酸(HBV NDA)结果的影响 ,为临床标本的收集和贮存提供依据。方法　按不同要求收集特定的临床标本 ,用本实验室使用的HBV DNA提取方法提取DNA模板 ,再用荧光实时定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果　经EDTA、中等含量肝素、枸橼酸钠抗凝血浆标本与相应血清标本测定HBV DNA的含量无显著性差别均 (P >0 0 5 ) ,但高浓度肝素 (10 0 0U/ml)抗凝管结果显著降低 (F值为 2 5 96 ;P <0 0 5 ) ;溶血、高血脂标本、标本反复冻融、血浆 (清 )标本在室温下短期贮存 (48h内 )对HBV DNA含量均无明显影响 (P >0 0 5 )。结论　用本实验室使用的HBV DNA提取方法 ,可使抗凝剂及其它PCR反应抑制物质对HBV DNA测定结果影响降到最低 ,从而使临床无污染标本一般均可接受     

溶血对检测不同含量乙肝病毒DNA干扰作用的研究

目的 研究不同程度的溶血对荧光定量PCR检测不同含量的HBV DNA的干扰作用.方法 采用PEG沉淀法和直接煮沸法提取血清中HBV DNA,用荧光定量PCR方法研究不同程度的溶血对检测不同含量HBV DNA的干扰作用.结果 采用沉淀法提取HBV DNA,重度溶血明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBV DNA的扩增;中度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBV DNA含量明显降低;轻度溶血降低了低拷贝组的HBV DNA含量.采用直接煮沸法提取HBV DNA,重度及中度溶血均明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBV DNA的扩增;对低拷贝103组的抑制最显著,完全抑制其HBV DNA的扩增.轻度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBV DNA含量明显下降.结论 重度溶血对低拷贝组到高拷贝组的HBV DNA 的荧光定量检测均有明显的抑制作用,对于重度溶血标本,临床应重新留样检测HBV DNA,轻度溶血主要影响低拷贝组HBV DNA的检测结果,对低拷贝的轻度溶血样本,临床应重新留样检测,对高拷贝的轻度溶血样本,可以不重新留样.溶血对直接煮沸法的影响比沉淀法更大.     

核酸提取方法在聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸中的评价

目的 对不同核酸提取方法在荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）检测血清乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）含量中应用进行评价，为临床方法学选择和实验结果的评价提供理论依据。方法 选用直接煮沸裂解法、NP－40煮沸裂解法、沉淀煮沸裂解法、磁珠核酸提取法等4种核酸提取方法提取乙型肝炎血清标本和含不同含量肝素的血清标本中HBV DNA模板，用荧光实时定量PCR法对其进行准确定量，从提取效率、抗干扰能力方面进行评价。结果 4种核酸提取方法中磁珠核酸提取法提取效率为最高，对数换算后，以此相对提取效率为100％，则直接煮沸裂解法为最低81％（P＜0．05）、NP－40煮沸裂解法为95％（P＞0．05）、沉淀煮沸裂解法为88．7％（P＜0．05）；从抗干扰能力方面，当肝素含量为500U／ml时，磁珠核酸提取法抗干扰能力最强，沉淀煮沸裂解法次之、直接煮沸裂解法和NP－40煮沸裂解法为最差，其HBV DNA含量抑制率分别为9．4％、13．5％、35．4％、52．7％。结论 本实验结果认为磁珠核酸提取法为实验室首选的核酸提取方法。     

浓缩裂解煮沸法在荧光定量PCR测定HBV DNA中的应用

目的探讨浓缩裂解液煮沸法提取乙型肝炎病毒（HBV）DNA对荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV DNA的影响。方法通过浓缩裂解液煮沸法和直接裂解液煮沸法同时提取血清HBV DNA,在不同浓度梯度比较FQ-PCR测定结果的差异。结果浓缩裂解液煮沸法所得HBV DNA量高于直接裂解液煮沸法,二者差异有统计学意义（P〈0．05）,比例约为（20-40）：1。结论浓缩裂解液煮沸法较直接裂解液煮沸法具有更高的灵敏度,在低浓度范围内与临床上的诊断较相符。     

核酸提取仪在肝炎病毒核酸定量检测中的应用研究

目的 比较核酸提取仪和手工法核酸提取对荧光定量PCR准确定量的影响.方法 血清样本分别用NP968核酸提取仪和手工法提取DNA和RNA,提取产物作为模板,用ABI 7500进行荧光定量PCR分别检测HBV和HCV,对比CT值,比较两种核酸提取方法的效率.结果 核酸提取仪提取的核酸PCR扩增的CT值明显低于手工法的CT值,处理大批量样本的时间也明显短于手工法.结论 核酸提取仪具有速度快、提取效率高的优点,值得在临床实验室推广应用.     

基于磁珠核酸提取方法对现有国产HBV DNA试剂盒分析灵敏度的改进

建立一种基于纳米磁珠为介质的核酸提取和富集方法,提高国产HBV核酸检测试剂的分析灵敏度,用于痕量HBV DNA的测定.方法选择经抗病毒治疗HBV DNA浓度≤1×104 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本50份.标准品采用WHO HBV DNA标准品.通过纳米磁珠实现对HBV核酸的吸附浓缩,提高提取的HBV核酸模板的浓度.以瑞士罗氏公司HBV DNA检测试剂和4种国产试剂原有的核酸提取检测方法为对照,评价该方法对国产核酸检测试剂的改进效果.结果纳米磁珠核酸提取方法与国产试剂结合后,国产试剂的分析灵敏度分别达到10和50 IU/ml,与罗氏试剂的分析灵敏度12 IU/ml基本相当.4种国产试剂盒内自带提取试剂检测临床乙型肝炎患者血清中痕量HBV DNA阳性检出率分别为64%(32份)、56%(28份)、62%(31份)和58%(29份),与罗氏试剂阳性检出率88%比较,差异具有统计学意义(x2值分别为7.895、12.698、9.013、11.416,P均＜0.05).纳米磁珠核酸提取方法与国产试剂结合后,阳性检出率分别为88%(44份)、88%(44份)、88%(44份)和86%(43份),与罗氏试剂(88%)比较,阳性检出率差异无统计学意义(x2值分别为0.000、0.000、0.000、0.088,P均＞0.05).HBV核酸浓度为101～103 IU/ml时,病毒核酸浓度对数值与循环阈值呈负相关,但是比103～106 IU/ml浓度范围的相关性下降.结论以纳米磁珠为介质建立的核酸提取方法可显著提高国产HBV DNA检测的分析灵敏度,对监测乙型肝炎患者血液中痕量HBV DNA含量具有重要意义.     

标本处理方法对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响

目的为提高标本检出率,比较煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法等3种不同标本处理方法对荧光定量聚合酶链反应（FQPcR）技术检测乙型肝炎（简称乙肝）病毒（HBV）DNA的影响。方法收集36例乙肝确诊患者和14例非乙肝患者的血标本,分别经煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法平行处理后,采用FQ-PCR进行检测。结果经3种方法处理的标本HBVDNA的检出率分别为52．78％、55．56％和100．00％。核酸纯化法的检出率明显高于其他2种方法（P〈0．01）。结论标本处理质量对进行HBVDNAFQ-PCR检测十分重要,煮沸法和Chelex 100树脂法不适用于临床标本检测,用核酸纯化法处理标本可保证FQ-PCR检测结果的准确性。     

磁珠法和煮沸法核酸提取在HPV-DNA分型中的比较

目的比较基于Pre-NAT全自动核酸提取系统的磁珠法与基于手工的煮沸法核酸提取在人乳头瘤病毒(HPV)-DNA分型中的应用。方法收集96份宫颈脱落细胞标本用于两种DNA提取方法检测结果的比对;利用同一混合阳性标本分装后加入系列水平的血红蛋白(Hb),评价抗Hb干扰能力;收集30份临床棉拭子标本,分析两种方法对皮肤破溃或男性生殖道分泌物DNA的提取效率。结果 96份临床标本,两种方法检测结果一致率为91.7%(88/96);磁珠法内参Globin及HPV各亚型的信号值均显著高于煮沸法(t=8.807、4.676,P0.05)。Hb水平17g/L时煮沸法HPV-DNA分型失败,而磁珠法信号值不受Hb干扰。30份棉拭子标本,磁珠法和煮沸法检测成功率均为80.0%,阳性率分别为54.2%、41.7%(P=0.564)。结论相比手工提取的煮沸法,基于Pre-NAT全自动病毒核酸提取系统的磁珠法具有操作简便、规范、通量高等优点。两种方法具有一定可比性,磁珠法核酸提取效率高于煮沸法,且不受Hb干扰,更适于临床应用。     

三种HBV DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果影响的比较

目的 研究3种核酸提取方法对黄疸、溶血和脂血标本HBV DNA荧光定量结果的影响,为进一步提高临床检验质最和改进检测技术提供理论依据.方法 采用目前临床常用的多聚糖病毒沉淀浓缩法(PEG法)、碱液直接裂解和微量核酸释放剂(Micro-Nucleic-Releaser,MNR)等3种核酸提取方法,对含有HBV的黄疸、溶血和脂血标本进行荧光定量PCR检测,研究不同标本对荧光PCR定量结果和扩增效率的影响.选择酚一氯仿提纯法作为核酸提取对照方法.结果 黄疸、溶血和脂血标本,对3种不同核酸提取方法的荧光PCR定量结果和扩增效率都产生不同程度的影响,其中完全溶血的标本对PCR扩增效率的影响最大,如定量值为4×103拷贝/ml的低拷贝完全溶血标本,MNR法测定结果为2.21×103拷贝/ml,PEG法为1.02×103拷贝/ml,碱性直接裂解法的定量值为阴性,临床自然溶血较重的标本对荧光定量检测影响较小,脂血和黄疸标本对荧光定量PCR扩增效率有明显抑制作用,但对实际定最值无明显影响;其中,MNR法在不同标本的定量重复性和荧光PCR扩增效率最好,碱液直接裂解法较差.酚.氯仿提纯法虽然获得较高的扩增效率,但存在大约有1个数量级的核酸丢失.结论 基于MNR核酸提取方法的荧光定量PCR检测,对不同的临床标本均可获得较好的扩增效率、敏感性和重复性,操作简便、快速且无核酸丢失和污染,适合临床检验应用.     

不同核酸提取方法在HBV DNA荧光定量检测中的比较

目的研究不同核酸提取方法在HBVDNA荧光定量检测中的提取效率、重复性、抗干扰性及对扩增试剂的兼容能力。方法运用两种具有不同启动温度的Taq酶的扩增试剂分别扩增经一步法、煮沸法和磁珠法提取HBVDNA强阳性血清的模板,比较不同提取方法对扩增试剂的兼容能力。采用3种方法提取3份HBVDNA含量不同的标本各10次,进行扩增,比较不同方法的提取效率和重复性;对HBVDNA阳性标本用HBVDNA阴性的黄疸血清和溶血液进行10倍稀释后分别用前述方法提取进行干扰试验。结果 3种提取方法中,磁珠法和煮沸法提取的模板对两种扩增试剂具有良好的兼容性;重复性比较以一步法最佳,磁珠法次之,煮沸法较差;提取效率比较以磁珠法最理想,一步法次之,煮沸法最差;对黄疸和溶血的抗干扰能力以磁珠法最佳,溶血对煮沸法有一定影响,在无5-羧基-X-罗丹明(5-ROX)校正的情况下,黄疸对一步法影响较大,有5-ROX校正系统分析则可以消除这种影响。结论磁珠法具有良好的重复性和提取效率,对黄疸和溶血有较强抗干扰能力,对扩增试剂的兼容性好,是一种理想的核酸提取方法;相对而言,一步法快捷且重复性更佳。     

两种方法检测HBV基因分型比较及基因型检出率与HBV DNA定量的关系

目的分析磁珠法与煮沸法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的优势,进一步分析基因型检出率与HBV DNA定量的关系。方法选取2013年10月至2016年7月、2017年1月至2018年1月该院感染病科就诊的1 943例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。其中2013年10月至2016年7月采用提取HBV DNA,进一步采用荧光探针聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎基因分型。2017年1月至2018年1月采用Abbot m2000提取的HBV DNA(磁珠法),进一步采用荧光探针PCR检测乙型肝炎基因分型。比较两种检测方法的结果差异。根据基因分型结果分析基因分型的检出率与HBV DNA定量水平的关系。结果磁珠法提取的HBV基因型检出率显著提高(P0.05),但是磁珠法检测C型检出率降低,B、D型检出率更高(P0.05)。HBV基因型检出率随着HBV DNA水平的升高而升高(P0.05)。结论相对于煮沸法提取的HBV DNA,磁珠法更能够提高乙型肝炎基因分型阳性率,并且能够提高非C型以及低病毒载量的患者检出率,更值得应用于临床。     

巢式聚合酶链式反应检测布鲁氏菌核酸DNA方法的建立

目的建立一种具有灵敏性高,特异性强的巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测血液标本中布鲁氏菌核酸DNA。方法使用细菌基因组提取试剂盒提取纯菌核酸DNA;使用血液等组织基因组核酸DNA提取试剂盒提取血液标本核酸DNA,对提取的核酸DNA先行常规PCR预扩增,以扩增的PCR产物为模板进行荧光定量PCR第二次扩增(即巢式PCR)。对纯菌提取的核酸DNA进行灵敏度和和特异性测试,构建巢式PCR的Ct值与核酸DNA拷贝数之关系曲线;检测临床血液标本核酸DNA,同时比较常规两种PCR方法检测结果。结果常规PCR检测的灵敏度为512个核酸DNA拷贝数;巢氏PCR检测有效范围为921.6 ng/μl^6.8 fg/μl,对应的Ct值为12.04~37.50,其指数关系为:y=(e-0.695x)×1012;R2=0.9986,巢式PCR扩增效率为2.28×109倍,检测限为2个布鲁氏核酸DNA拷贝数。巢式PCR的灵敏度为91.67%,特异度为93.10%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为93.10%。对一起羊养殖场采集的25份血液标本应用巢式PCR方法检测,结果阳性率为92.00%(23/25);27份健康人群血液标本没有检测出(无Ct值)。结论巢式PCR具有较好的灵敏性和特异性,特别适合于血液标本布鲁氏菌核酸DNA的检测。     

不同标本对荧光实时定量PCR法测定HBV—DNA结果的影响

目的 利用沉淀煮沸裂解法提取HBV核酸，探讨不同的临床标本和贮存条件对荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒核酸（HBV－NDA）结果的影响，为临床标本的收集和贮存提供依据。方法 按不同要求收集特定的临床标本，用本实验室使用的HBV－DNA提取方法提取DNA模板，再用荧光实时定量PCR法检测HBV－DNA的含量。结果 经EDTA、中等含量肝素、枸橼酸钠抗凝血浆标本与相应血清标本测定HBV－DNA的含量无显著性差别均（P＞0．05），但高浓度肝素（1000U／ml)抗凝管结果显著降低（F值为25．96；P＜0．05）；溶血、高血脂标本、标本反复冻融、血浆（清）标本在室温下短期贮存（48h内）对HBV－DNA含量均无明显影响（P＞0．05）。结论 用本实验室使用的HBV－DNA提取方法，可使抗凝剂及其它PCR反应抑制物质对HBV－DNA测定结果影响降到最低，从而使临床无污染标本一般均可接受。     

二种分子杂交技术定量检测临床标本中HBV DNA的比较

目的第2代核酸杂交捕获系统(HCⅡ)与分枝链DNA信号放大系统(bDNA)定量检测HBV DNA的临床应用比较.方法40例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者临床血清标本共79份,采用2种杂交方法定量检测HBV DNA.结果HCⅡ与bDNA定量检测HBV DNA的阴阳性符合率为85.9%,相关系数r=0.96,P＜0.001;经敏感性比较,HCⅡ灵敏度较bDNA提高101拷贝/ml～102拷贝/ml.HCⅡ与bDNA定量检测HBV DNA结果的换算方程为HCⅡ(HBV DNA拷贝/ml)=1.014×[bDNA(HBV DNA Eq/ml)]0.9632;或bDNA(HBV DNA Eq/ml)=4.034×[HCⅡ(HBV DNA拷贝/ml)]0.9574.在操作上HCⅡ比bDNA更为简便、快速.结论HCⅡ与bDNA法检测HBV DNA具有较好的相关性,可用于临床HBV DNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核.     

聚合酶链反应检测SEN病毒的方法学探讨

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增SEN病毒(SENV)核酸的优化条件。方法将标本分别以Acupure DNA／RNA提取法(方法1)、SDS-蛋白酶K方法(方法2)及裂解液提取’兀V核酸法(方法3)抽提SENV DNA模板，并用3组针对SENV DNA不同区的引物进行扩增，比较不同模板提取方法、不同扩增引物及不同体积标本对SENV DNA检出率的影响。结果在191份血清中，方法1、方法2和方法3提取核酸后可分别检测出15份、9份和7份。采用方法1提取SENV DNA的基础上，采用2组套式引物分别扩增出15份和11份，一次PCR引物仅检出2份SENV DNA阳性标本；应用引物2扩增至少需要50μl血清。结论不同引物扩增方法和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素。