不同核酸提取方法用于HBVDNA定量检测的比较

目的 探讨两种国产乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量检测试剂的临床应用价值。方法 选取于该院就诊的慢性乙型肝炎患者共176例,分别用两种国产HBV核酸定量检测试剂测定其HBV DNA水平。比较分析“煮沸法”的A试剂与“一步法”的B试剂的线性范围及其灵敏度。结果 176例慢性乙型肝炎患者血清标本用两种试剂检测,A试剂检测为阳性的样本有71例,阳性率为40.3%(71/176);B试剂检测为阳性的样本有120例,阳性率为68.2%(120/176)。阳性率的一致性为100%,阴性率的一致性为53.3%,总的一致性为72.2%。结论 两种国产HBV DNA检测试剂盒对于HBV载量在低复制水平的血清标本具有很好的可比性,B试剂的扩增效率高、操作简便、定量结果准确、线性范围广等优点,具有较好的临床应用价值。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司LightCycler仪器和国产达安试剂,PCR酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBASAmplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBVDNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0.890。结论应用国产试剂配合LightCycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

两种HBV DNA荧光定量PCR检测试剂的比较与评价

目的探讨A、B两种乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量PCR检测试剂盒检测结果之间的差异及各自临床应用的优缺点。方法分别用两种试剂检测100例覆盖HBV DNA浓度测量区间的5组标本,每组20例,比较各组结果之间的差异;分别用黄疸、脂血、溶血标本做两种试剂的干扰试验,比较两者的抗干扰能力。结果两种试剂检测高、中、低、临界值标本的结果符合率(偏倚在±7.5%以内)分别为95%、80%、55%、30%。20例A试剂检测为阴性的标本中有6例B试剂检测为临界值或低浓度阳性值。B试剂检测结果受高黄疸标本影响较大,A试剂检测结果未受明显干扰。结论采用"一步法"的B试剂检测灵敏度较高,范围宽,操作简便,易标准化,省时省力,临床应用价值高;而A试剂抗干扰性相对较好。     

建立一种高灵敏的HBV核酸定量检测方法

目的 建立一种高灵敏度的TaqMan实时荧光PCR法用于HBV核酸定量检测,并评估其临床性能。方法 针对HBV保守序列设计引物探针,收集来自国内3家医院共计631例样本,利用本文建立的方法进行HBV核酸定量检测,评估其灵敏度、特异性和重复性,并与普遍采用的对照试剂盒进行比较,评价该方法的临床性能。结果 本文建立的HBV核酸定量检测方法对5 IU/mL的HBV血清和血浆样本的检出率均为100%,且对HBV强阳性、弱阳性和临界阳性样本的阳性检出率均为100%;该方法对于可能存在交叉的15种病原体、内源干扰物及外源干扰物均无交叉反应;与对照试剂的检测结果比较基本相同,对于不一致的样本,经过复检均和本文建立的检测方法结果一致。结论 该方法具有较高的灵敏度,稳定性和重复性好,特异性强,具有较高的临床应用价值。     

国产全自动HIV-1核酸定量检测试剂盒的性能评价

目的探讨国产NEPG全自动人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量检测试剂[荧光聚合酶链反应(PCR)法](简称国产NEPG HIV-1试剂)临床应用的可行性。方法采用灵敏度/定量参考品评估国产NEPGHIV-1试剂的定值准确性及灵敏度。收集210例临床血液样本,以cobas AmpliPrepcobas TaqManHIV-1 Testv2.0试剂盒(简称进口HIV-1试剂)为参比试剂,评估2种试剂检测结果的一致性。结果低、中、高浓度样本测定结果的绝对偏差分别为0.05、0.08、-0.06,均符合要求(绝对偏差≤±0.5个对数数量级)。国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度为50 IU/mL(约30拷贝/mL)。国产NEPG HIV-1试剂与进口HIV-1试剂定性结果的符合率均为100.00%,定性结果一致(Kappa值=1.00)。国产NEPG HIV-1试剂检测HIV-1载量结果与进口HIV-1试剂比较差异无统计学意义(P>0.05),2种试剂的相关性良好(r=0.953),低值样本的相关性也较好(r=0.823)。结论国产NEPG HIV-1试剂的灵敏度和准确性均符合临床要求,定量及定性检测结果与进口HIV-1试剂一致,且相关性良好。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应(PCR)与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清标本中乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA 定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应（PCR）与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测血清标本中乙型肝炎病毒（HBV）DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

两种国产HBV-DNA荧光定量PCR试剂盒检测结果比较

目的探讨两种国产乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量试剂的临床检测结果相互之间是否存在差异。方法 80例慢性乙型肝炎患者标本分别用两种国产HBVDNA荧光定量试剂检测,然后对检测结果进行比较,分析相互之间是否存在差异。结果 A、B两种国产荧光定量试剂的HBVDNA定量检测结果相互之间相差小于一个数量级的占95%,大于一个数量级小于两个数量级的占5%。经统计学分析,差异无统计学意义(P=0.883)。40例A试剂检测完全阴性的标本有6例经B试剂检测为阳性,B试剂检测的阳性率高于A试剂(P=0.034)。结论两种国产试剂对于定量结果大于3次方的标本具有很好的可比性。     

荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (PCR)与普通定性 PCR检测血清 HBV DNA结果的差异。方法　同时采用荧光标记 (Ampli Sensor)定量 PCR方法及普通定性 PCR方法对 10 0例乙型肝炎血清样品进行 HBV DNA检测 ,并分析其相关性 ,比较其差异。结果　 10 0例荧光定量 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 74.0 % (74/ 10 0 ) ,定性 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 5 2 .0 % (5 2 / 10 0 ) ,两种方法的 HBV DNA检出率比较具有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　荧光定量 PCR与普通定性 PCR相比具有一定的优势 ,完全可以取代定性 PCR方法 ,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测     

乙型肝炎病毒SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的 建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法 根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR Green I实时荧光定量PCR检出限范围为5×10²copies/ml～5×10⁸copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

国产荧光定量PCR与COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan v 2.0检测HBV DNA结果比较

目的针对不同HBV分型,比较某国产实时荧光定量PCR试剂与Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan v 2.0试剂检测HBV DNA的结果。方法根据HBV分型结果,抽取72份慢性乙型肝炎患者血清标本,用Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan v 2.0(试剂A)和某国产实时荧光定量PCR(试剂B)对72份慢性乙型肝炎患者血清标本进行HBV DNA定量检测,以分析针对不同HBV分型样本,国产试剂与试剂A的相关性。结果试剂A和B测得的HBV DNA结果 (IU/mL)以10为底数取对数分别为5.67±1.67和5.72±1.75,两者结果差异无统计学意义(P0.05)。共检测72份样本,其中63例A、B两种试剂检测结果有数值。此63例总相关系数(r)为0.94(P0.01),试剂A与试剂B对63例样本中HBV基因型B型、C型和B/C混合型样本检测结果 r分别为0.94、0.95和0.92(P0.05)。对于HBV DNA定量结果 104IU/mL标本,试剂B与试剂A相关性较低(r=0.31,P=0.35)。结论对于不同的HBV基因型,试剂B与试剂A在检测HBV DNA方面有较好相关性,适用于HBV DNA的临床检测,但在低HBV载量时试剂B与试剂A相关性较低。建议结合临床诊治进程和检测的效率及检测费用等因素,选择适当的检测试剂。     

乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检出限范围为5×10~2copies/ml~5×10~8copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论 SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的对Roche Light Cycler 480Ⅱ型荧光定量PCR仪(Roche 480)和ABI 7500检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)结果进行比对和偏倚评估,探讨不同检测系统间检测结果的可比性和偏倚的可接受性。方法按照美国临床实验室标准化委员会EP9-A2标准要求,以Roche 480为参比仪器,ABI 7500为实验仪器,对患者HBV DNA项目进行检测,通过比较这两种荧光定量PCR仪器间的系统误差,判断检测结果的可比性。结果Roche 480及ABI 7500检测HBV DNA具有良好的相关性(r=0.993 1),偏差在可接受范围内,系统误差临床可接受。结论 Roche 480及ABI 7500检测结果具有较好的一致性,可同时用于肝炎病毒DNA的检测。     

检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

目的建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法。方法从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性。结果成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5%,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致。结论成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测。     

实时荧光定量PCR法与基因芯片法检测HPV的比较

目的 比较基于PCR的基因芯片方法和实时荧光定量PCR方法检测女性子宫颈脱落细胞HPV DNA的相关性. 方法 收集2050份样本采用基因芯片法和实时荧光定量PCR方法进行比对试验,两者结果不符的进行测序验证,并对检测结果进行一致率及阳性率统计分析. 结果 两种方法总一致率、阳性一致率及阴性一致率都在95.0%以上;荧光定量PCR法检测HPV16阳性率50.0%,HPV18阳性率13.9%. 结论 两种方法检测的一致性良好,本实验中所使用的新型12＋2高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒适合应用于育龄期妇女的宫颈癌筛查及随访.     

临床检验中乙型肝炎病毒检测方法的应用评价

目的 比较临床检验中乙型肝炎病毒检测方法,并探讨其临床应用价值.方法 收集2011年12月期间临床酶免HBV阳性样本共50例,使用PCR荧光探针法进行确证;同时用新创、Ortho两种HBV酶免试剂以及Architect HBV Reagent化学发光试剂进行检测,比较三者结果的差异.结果 统计学分析显示,三种检测方法的检测结果有差异.PCR实验测出HBV阳性44例,阴性6例,与Architect化学发光法结果相符,新创酶免法测50例全为阳性,Ortho酶免法测阳性42例,阴性8例.结论 Ortho试剂对HBV检测的特异性高于新创试剂,化学发光法对HBV检测的特异性高于酶免法,化学发光法与酶免法联合检测能提高临床检验中HBV的阳性检出率,对可疑样本再作PCR实验分析.     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义分析

目的研究荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床意义。方法对2017年7月-2018年7月期间收治的25例乙型肝炎病毒(HBV-DNA)患者实施回顾性分析,均开展Roche Light Cycler 480荧光定量PCR检测仪器以及ABI7500荧光定量PCR检测仪器检查,分析不同仪器检测情况。结果两种仪器两次平均检测结果相关性,均>0.976,表示两台仪器荧光定量PCR检测均符合线性要求符合,两仪器存在一致性的较好定量检测结果,存在处于临床能接受范围内的系统误差。结论在检测HBV-DNA中Roche Light Cycler 480荧光定量PCR检测仪器以及ABI7500荧光定量PCR检测仪器检查的一致性均比较高。     

两种荧光定量PCR 仪检测HBV、HCV核酸结果的一致性

目的 探讨不同荧光定量PCR仪检测肝炎病毒 DNA 及RNA结果的一致性。 方法 参照美国NCCLS EP9-A2文件,以MJ Opticon 2为参比仪器,ABI 7300为实验仪器,检测HBV DNA 及 HCV RNA,分析结果的相关性及预期偏倚,评价两种仪器检测结果的一致性。 结果 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测HBV DNA 及 HCV RNA具有良好的相关性 （rHBV=0.995;rHCV=0.993）,预期偏差在可接受范围内。 结论 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA或HCV DNA。     

一种新型肠道病毒核酸检测试剂的初步评价

目的评价新型磁珠法肠道病毒核酸检测试剂(以下简称"磁珠法试剂")的灵敏度和精密度。方法对204份标本分别用磁珠法试剂和Trizol法试剂进行肠道病毒RNA定性检测,评价其一致性和等效性,并比较两种试剂的灵敏度和精密度。结果磁珠法试剂与Trizol法试剂的阳性符合率为97.58%,阴性符合率为100.00%,总符合率为98.53%,Kappa值为0.969 4。磁珠法试剂的灵敏度高于Trizol法试剂。对两个中、低浓度标本各重复检测10次,磁珠法试剂的变异系数(CV)为0.84%、0.96%,Trizol法试剂为2.01%、1.43%。结论新型磁珠法试剂盒与Trizol法试剂盒具有较高的一致性,其灵敏度、精密度优于Trizol法试剂盒,可以用于临床肠道病毒核酸检测。