人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β_1信号转导中作用的研究

目的　观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 β1信号转导中的作用 ,探讨Smad2信号途径在TGF β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制。方法　原代培养人牙乳头细胞 ,Westernblot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF β1调控下的表达变化 ,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化。结果　培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白 ,TGF β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,而BMP 2无此功能 ;TGF β1或BMP 2刺激作用 6h、12h、2 4h和 48h ,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变。结论　人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达 ,Smad2能被TGF β1活化后转位至核内发挥作用 ,但Smad2基因的表达无明显变化 ,提示TGF β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中 ,Smad2信号途径可能发挥一定的作用。     

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的：观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子－β超家族信号转导中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞,分别以骨形成蛋白－2（bone morphogenetic protein-2,BMP－2）和转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1,TGF－β1）刺激,免疫组化检测Smad5的表达,图像分析仪半定量。结果：人牙乳头细胞（空白对照组）胞浆内可见Smad5阳性表达,胞核内未见阳性表达;BMP－2实验组胞核内Smad5强阳性表达,胞浆内为弱阳性表达;TGF－β1实验组细胞胞浆Smad5阳性,胞核未见表达。结论：人牙乳头细胞内存在Smad5的表达,Smad5能转导BMP－2信号至核内发挥作用,但不能TGF－β1信号,提示BMP－2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号途径实现的。     

Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达及其意义的探讨

目的：观察转化生长因子－β超家族特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ４在人牙乳头细胞内的表达,及其在转化生长因子－β１１（ＴＧＦ－β１）的骨形成蛋白－２（ＢＭＰ－２）作用下的变化,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法：原代培养人牙乳头细胞,用ＴＧＦ－β１和ＢＭＰ－２刺激培养的细胞,分别从刺激前后的细胞中提取总ＲＮＡ和总蛋白,采用Ｎｌｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交方法     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β1信号转导中作用的研究

目的观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1信号转导中的作用,探讨Smad2信号途径在TGF-β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制.方法原代培养人牙乳头细胞,Westernblot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF-β1调控下的表达变化,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化.结果培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白,TGF-β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集,而BMP-2无此功能;TGF-β1或BMP-2刺激作用6h、12h、24h和48h,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变.结论人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达,Smad2能被TGF-β1活化后转位至核内发挥作用,但Smad2基因的表达无明显变化,提示TGF-β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中,Smad2信号途径可能发挥一定的作用.     

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Ｓｍａｄ２蛋白的表达,以及Ｓｍａｄ２蛋白在转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）信号转导中的作用。方法原代培养工牙乳头细胞,用ＴＧＦ－β１和骨形成蛋白－２（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ＢＭＰ２）刺激培养的细胞,免疫化观察。结果：ＴＧＦ－β１和ＢＭＰ２刺激组均可见Ｓｍａｄ２蛋白表达,但与对照组相     

人牙乳头细胞内Smad4表达的免疫组化研究

观察转化生长因子－β超家族的细胞内信号转导分子Ｓｍａｄ４在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法：原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｎｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）和骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｎｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ｒｈＢＭＰ－２）刺激培养     

rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果: TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。     

骨形成蛋白-2对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量的影响

目的：观察人牙乳头细胞内Smad1蛋白的表达及骨形成蛋白－2（bone morphogenetic protein-2,BMP2)对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量影响，方法：原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理6h,12h,24h,48h后，提取总蛋白质，采用Western Bolt法，从翻译水平观察Smad1基因的表达变化。结果：从翻译水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达，但在BMP2作用48h内，Smad1蛋白表达量无显著变化，结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径，牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量不受MBP2影响。     

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad 1 mRNA表达的变化

目的：观察人牙乳头细胞内Smad1 mRNA的表达及在BMP2作用下,细胞内Smad1 mRNA的表达变化,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后,提取总RNA,采用Northern blot法,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果：从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达,但在BMP2作用6、12、24h后,Smad1 mRNA表达量无显著变化。结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达量不受BMP2调控。     

人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1信号转导中的作用

目的：探讨人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号转导过程中的作用。方法：原代培养人牙髓细胞，用激光共聚焦显微镜观察TGF－β1刺激初期牙髓细胞内Smad 2、3由胞质向胞核转位的现象，同时采用Western blot方法检测刺激后期Smad 2、3蛋白表达的变化。结果：TGF－β1刺激2h内，Smad2、3在胞质中表达渐弱，在胞核内表达渐强，呈现由胞质向胞核逐步转位的趋势。Smad 2蛋白总量在TGF－β1刺激前后几乎无变化，而Smad 3在刺激后24h表达量明显下降，48h后表达十分微弱。结论：Smad 2、3可能是人牙髓细胞内TGF－β1的信号转导分子。TGF－β1刺激初期Smad 2、3通过发生转位参与转导TGF－β1信号至核内，刺激后期Smad 3表达水平的下调可能与TGF－β1负反馈调节自身的信号有关。     

人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆

目的：从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白（BMP）细胞内信号转导基因Smad1的功能性结构域－－MH2结构域。方法：原代培养人牙乳头细胞,从培养的细胞中提取总DNA,逆转录合成cDNA第1条链;设计上下游引物,进行RT－PCR,扩增Smad1基因MH2结构域的基因片段;将所获得的基因片段定向插入PUC19载体;转化大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。结果：获得的Smad1 MH2结构域的cDAN片段大小为444bp,并且成功构建PUC19／MH2重组质粒。结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过Smad1信号途径实现的。     

转化生长因子β1和骨形成蛋白2体外诱导成牙本质细胞分化

目的 观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）和骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein2,BMP2)对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法 取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰蛋白酶消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组TGF-β1或BMP2与肝素，组织学观察。结果 TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胞外基质。TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化，但基质分泌增加。结论 TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能。     

MDPC-23细胞内Smad信号途径在转化生长因子β1调控Smad7基因转录中的作用

目的：研究成牙本质细胞系MDPC-23内Smad信号途径在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)调控Smad7基因转录调控中的作用，从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Smad7基因表达的分子机制。方法：培养MDPC-23细胞，通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad蛋白分子对Smad7启动子活性的影响，实验数据采用单因素方差分析。结果：当Smad7启动子(-408bp至 112bp)荧光素酶活性载体表达在MDPC-23细胞时，其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加，而骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)对其活性无明显影响。单独过表达Smad1、2、4、5对Smad7启动子活性无明显影响。Smad3过表达显著增强Smad7启动子活性，而Smad3与Smad4共转染进一步增强了Smad3的作用。过表达Smad3突变型载体或Smad3反义cDNA(AS-Smad3)均显著抑制TGF-β1对Smad7启动子活性的诱导作用。结论：在成牙本质细胞系MDPC-23内，TGF-β通过Smad3与Smad4协同调控Smad7基因转录。     

TGF—β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响

目的： 探讨ＴＧＦ－ β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响。方法：采用ＭＴＴ法和流式细胞仪观察ＴＧＦ－β对人牙乳头细胞增殖和细胞周期的影响。结果：５０μｇ／Ｌ 组显著刺激人牙乳头细胞增殖（Ｐ＜ ０．０５）,Ｇ１ ％ 显著降低,Ｓ％ 明显升高（Ｐ＜ ０ ．０１）,反映细胞增殖活力的增殖指数ＰｒⅠ值（Ｓ＋ Ｇ２ Ｍ） 也明显增高（ Ｐ＜０ ．０１）。结论：ＴＧＦ－β可能通过促进人牙乳头细胞增殖参与牙胚发育和牙髓损伤修复。     

MDPG-23细胞内Smad信号途径在转化生长因子β1调控Smad7基因转录中的作用

目的研究成牙本质细胞系MDPC-23内Smad信号途径在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)调控Smad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Smad7基因表达的分子机制.方法培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad蛋白分子对Smad7启动子活性的影响,实验数据采用单因素方差分析.结果当Smad7启动子(-408 bp至+112bp)荧光素酶活性载体表达在MDPC-23细胞时,其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加,而骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对其活性无明显影响.单独过表达Smad1、2、4、5对Smad7启动子活性无明显影响.Smad3过表达显著增强Smad7启动子活性,而Smad3与Smad4共转染进一步增强了Smad3的作用.过表达Smad3突变型载体或Smad3反义cDNA(AS-Smad3)均显著抑制TGF-β1对Smad7启动子活性的诱导作用.结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,TGF-β通过Smad3与Smad4协同调控Smad7基因转录.     

afgf和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

转化生长因子β受体在体外培养的人牙乳头细胞中的表达

目的 探讨体外培养的人牙乳头细胞中转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦ－β）受体的表达情况和外生的ＴＧＦ－β对人牙乳头细胞ＴＧＦ－β受体的表达情况和外源性培养、ＳＰ免疫组织化学及图像分析法,检测培养的人牙乳头细胞ＴＧＦ－β受体的表达情况和外源性ＴＧＦ－β对人牙乳头细胞ＴＧＦ－β受体的影响。结果 ＴＧＦ－βⅠ、Ⅱ型受体力强阳性表达,Ⅲ型受体为弱阳性表达。图     

TGF—β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的影响

目的： 探讨ＴＧＦ－ β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ） 的影响。方法：采用酶动力学方法,测定不同浓度的ＴＧＦ－ β在不同时间内对体外培养的人牙乳头间充质细胞ＡＬＰａｓｅ 的影响。结果：５μｇ／Ｌ 组促进细胞内ＡＬＰａｓｅ 活性;５０μｇ／Ｌ组抑制细胞内ＡＬＰａｓｅ 活性;ＴＧＦ－ β不影响细胞外ＡＬＰａｓｅ 活性。结论：ＴＧＦ－ β可调节人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性,在牙乳头间充质细胞分化和矿化过程中可能具有重要意义。     

TGF β1、TGF β2 和TβRⅡ在口腔鳞癌中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子TGFβ1、TGFβ2及其Ⅱ型受体TβRⅡ与口腔鳞癌发生和发展的关系。方法：采用SABC免疫组化法检测40例口腔鳞癌术后标本和20例正常口腔粘膜中TGFβ1、TGFβ2及其受体TβRⅡ的表达。结果：口腔鳞癌和正常口腔粘膜中均表达TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ，但程度不同。与正常口腔粘膜相比，TGFβ1、TGFβ2在口腔鳞癌中呈过表达，而TβRⅡ则表达下降，口腔鳞癌临床分期，在无颈淋巴结转移及病理分级与TGFβ1、TGFβ2过表达及TβRⅡ表达下降有关。结果：TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ可能参与了口腔鳞癌的发生发展及颈淋巴结转移过程，是口腔鳞癌发生发展及预后的一个指标。     

TGF—β与BMP在牵张成骨中的分布与作用

牵张成骨是通过牵张装置牵拉离断的骨段，来促使新骨形成进而达到矫治畸形或缺损的一项技术。骨组织的再生与修复受多种生长因子的调控。本文就牵张成骨过程中TGF－β与BMP的时间与空间分布及其作用作一简要综述。