高危型人乳头瘤病毒对宫颈癌及癌前病变诊断价值的探讨

为了探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈癌及癌前病变中的诊断价值,采用第2代杂交捕获(HC-2)技术对325例妇科疾病患者[慢性宫颈炎56例,宫烦上皮内瘤变(CIN)Ⅰ41例,CIN Ⅱ 33例,CIN Ⅲ 91例,宫颈癌104例]进行HPV DNA阳性率和含量浏定.慢性宫颈炎、CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ～Ⅲ级和宫颈癌患者HPV阳性感染率分别为35.7%,61.0%,91.0%和100.0%o;宫颈癌前病变(CIN I～Ⅲ)和宫颈癌的HPV DNA含量均明显高于慢性宫颈炎,差异有统计学意义,P＜0. 05;宫颐癌的HPV DNA含量明显高于宫颈癌前病变(CINⅠ～Ⅲ),差异有统计学意义,P＜0.05.初步研究结果提示,HPV DNA阳性感染率随宫颈病变程度的加重而升高;高危型HPV在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌中的病毒含量随宫颈病变程度的加重呈上升趋势.高危型HPV可以作为宫颈癌及癌前病变的重要检测指标.     

同源结构域相互作用蛋白激酶2在宫颈癌中的表达及其与人乳头瘤病毒感染和细胞凋亡的关系

目的 探讨宫颈癌中同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)的表达及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染和细胞凋亡的关系.方法 取50例宫颈癌组织和15例正常宫颈组织,采用免疫组化法测定HIPK2和HPV的表达,采用DNA原位末端标记(TUNEL)技术检测了细胞凋亡情况.结果 15例正常宫颈组织中,HIPK2、HPV和PCNA阳性表达者分别有1、3和4例,而50例宫颈癌组织中分别有44、39和45例,官颈癌组织HIPK2、HPV和PCNA的表达明显高于正常官颈组织(均P<0.05).宫颈癌组凋亡指数(AJ)为(1.6±0.7)%,正常宫颈组AI为(5.7±0.2)%,差异有统计学意义(P<0.01).在宫颈癌组织中,HIPK2表达与HPV表达呈正相关(r=0.467,P=0.0006),与AI呈负相关(r=-0.370,P=0.0083).结论 在宫颈癌中,HIPK2的表达与HPV感染和细胞凋亡密切相关,可能在宫颈癌发生、发展中起重要作用.     

高危型人乳头瘤病毒及雌、孕激素受体在宫颈癌及癌前病变中的表达及临床意义

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒及甾体类激素受体ER、PR在宫颈癌及癌前病变中的表达及临床病理意义。方法:采用原位杂交及免疫组织化学染色方法检测HPV、ER、PR在不同程度的宫颈病变组织中的表达情况。结果:HPV16/18在正常宫颈组织表达率为0,随着病变严重程度的增加,HPV16/18的表达率逐渐升高,至高度上皮内瘤变组(CINII、III级)达高峰。HPV16/18在各组间的表达差异具有显著统计学意义(P<0.01)。HPV31/33主要在低度上皮内瘤变组中表达。ER、PR的表达率及表达强度随着病变程度的增加逐渐降低,各组间的差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:HR-HPV感染是诱发宫颈癌的首要启动因素,ER、PR在HPV感染引起的宫颈癌早期起促进作用,但PR也可能起抑制作用。     

宫颈癌相关抑癌基因及其与人乳头瘤病毒的关系

人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生最主要的危险因素,其中心环节是HPV E6、E7蛋白与细胞癌基因和抑癌基因相互作用引起细胞永生化而癌变,其中癌基因的表达和抑癌基因功能的丧失是细胞癌变的分子基础.在已发现的数个抑癌基因中,p53、ING1、FHIT、survivin、p16INK4A与HPV相关宫颈癌关系密切,使得在检测宫颈癌及其癌前病变、预测病变进展、判断预后和宫颈癌的基因靶向治疗等方面有潜在的临床应用价值.     

Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Toll样受体8(TLR8)在人官颈癌细胞株HeLa中的表达,探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测13种肿瘤细胞系中TLR8 mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2(COX-2)、Bcl-2和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察;采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HeLa细胞的增殖状态。结果 与其他肿瘤细胞株相比,HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高,达703.7±20.6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0.1、0.5和1.0 μg/ml的CL075分别作用于HeLa细胞48 h后,G2/M+S期细胞所占的比例逐渐增高,其中1.0μg/ml CL075作用组G2/M+S期细胞所占的比例最高,达(57.67±1.73)％,明显高于空白对照组[(39.02±2.33)％,P＜0.01]。经不同浓度的CL075处理后,HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比,无明显改变(P＞0.05);但经顺铂处理后,凋亡细胞明显增多(P＜0.01)。MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,CL075作用于HeLa细胞48和72 h后,HeLa细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01)。CI075作用于官颈癌HeLa细胞24和48 h后,COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高(P＜0.05)。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号,可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。     

金属硫蛋白对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的 探讨金属硫蛋白（metallothionein，MT）对人宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响并初步分析其机制。方法 以不同浓度的MT（0．001、0．01、0．1和1ng／m1）干预HeLa细胞，MTT法测定其对细胞 增殖的促进作用，流式细胞仪分析凋亡率，免疫细胞化学法和RT-PIER法测定p53和PCNA的表达。结果 （1）MT对HeLa细胞增殖表现出浓度依赖性的促进作用，以1ng／ml时作用最明显（P〈0．05）。（2）MT可抑制细胞凋亡，其浓度为0、0．01和1ng／ml时，凋亡指数（AJ）分别为（6．35±1．08）％、（4．45±0．95）％和（2．15±0．77）％。（3）MT作用后细胞p53表达显著减弱，PCNA表达显著增强，两者均呈浓度依赖性。结论 MT对人宫颈癌HeLa细胞具有显著地促进增殖和抑制凋亡作用，其机制可能与抑制p53基因表达有关。     

凋亡抑制蛋白Livin在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变表达

[目的]探讨凋亡抑制蛋白Livin在宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌中的表达及意义。[方法]采用免疫组织化学SP法检测81例宫颈癌、74例CIN和20例正常宫颈组织中Livin的表达情况。[结果]Livin在正常宫颈组织中不表达,在CIN和宫颈癌中表达上调,阳性率分别为31.08%（23/74）和67.90%（55/81）。Livin在CINⅢ组织中的阳性率高于CINⅠ～Ⅱ。Livin表达与肿瘤临床分期、分化程度及淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与病理类型、肿块生长类型无相关性（P〉0.05）。[结论]Livin过表达可能与CIN和宫颈癌的发生发展有关,提示肿瘤的恶性程度及不良预后。     

人乳头瘤病毒感染与宫颈癌前病变和宫颈癌及其预后的关系

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (humanpapillomavirus ,HPV)与宫颈癌前病变 (cervi calintraepithelialneoplasia ,CIN)和宫颈癌的关系以及与它们的预后关系。方法 :采用第 2代杂交捕获试验法检测我院门诊和住院患者 994例随访手术治疗患者 99例 ,随访患者同时行宫颈细胞学、阴道镜检查 ,以病理结果为金标准 ,按宫颈病变严重程度比较高危型HPV的检出率 ,以及比较术前术后宫颈癌前病变、宫颈癌感染高危型HPV变化情况。结果 :以HPVDNA≥ 1 0pg/mL为阳性标准 ,慢性宫颈炎、CIN各组及宫颈癌分别为 46 92 % ( 2 0 6/4 3 9)、65 71% ( 2 3 /3 5 )、81 82 % ( 3 6/4 4)、 98 41%( 62 /63 )、82 3 2 % ( 3 40 /4 13 )。随访患者细胞学 ,阴道镜检查除 1例CIN3患者为阳性 ,其余均为阴性 ,术后HPV持续阳性率为 2 1 18% ,其中 1例诊断为宫颈原位癌。结论 :高危型HPV感染与宫颈癌前病变和宫颈癌有明显相关性 ;宫颈锥切术后HPV持续阳性患者为复发的高危人群 ,应严密随访     

岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:研究岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞形态改变的影响。方法:用不同浓度的岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞进行处理,采用CCK8法检测SiHa细胞体外增殖情况和半抑制浓度(IC 50)。设置不做药物处理的对照组与药物浓度为IC 50值处理的实验组。Transwell小室...     

高危型人乳头状瘤病毒的病毒负荷量与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的关系

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV)的病毒负荷量与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)的相关性。方法选取2013年6月至2016年6月间北京市健宫医院收治的1056例行宫颈癌筛查的患者,对高危型HPV的脱氧核糖核酸(DNA)行第2代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)半定量检测,予以受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,对CINⅡ及以上宫颈病变理想RLU/CO界值进行判定。结果慢性宫颈炎592例(56.1%);CIN395例(37.4%),CINI级110例(10.4%),CINⅡ~Ⅲ级285例(27.0%);宫颈癌69例(6.5%)。高危型HPV病毒负荷量随着宫颈病变程度的加深而增高,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性宫颈炎、CINI级、CINⅡ~Ⅲ级及宫颈癌患者高危HPV-DNA病毒负荷量中位数分别为33.24、58.37、103.48和172.56。ROC曲线分析,预测CINⅡ级及以上宫颈病变的最佳RLU/CO值为3.173,其灵敏度和特异度分别为89.0%和58.0%,Youden指数为0.587。结论高危型HPV病毒负荷量与宫颈癌及前期病变有着显著的相关性,会随着病情严重程度的加深而增加,预测CINⅡ及以上宫颈病变高危HPV最佳负荷量值为3.173。     

人乳头瘤病毒水平与宫颈局部免疫功能对高危型人乳头瘤病毒感染宫颈癌患者的影响

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)水平与宫颈局部免疫功能对高危型HPV感染宫颈癌患者的影响.方法 收集76例宫颈癌患者(宫颈癌组)、40例慢性宫颈炎患者(慢性宫颈炎组)和40例宫颈上皮内瘤变患者(宫颈上皮内瘤变组)临床资料.检测并比较3组患者HPV水平和免疫功能指标[CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+和调...     

孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖、凋亡的影响

[目的]探讨孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的影响.[方法]体外培养Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用,流式细胞仪及流式细胞仪间接免疫荧光技术检测其细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl-2蛋白的表达,光、电镜观察其形态学和超微结构变化.[结果]当孕酮浓度为0.10μmol/L～10.00umol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用(P＜0.01),并具有剂量依赖性.流式细胞仪分析,实验组G0/G1期上升,S期下降,凋亡率上升,细胞内bcl-2蛋白表达率明显降低(P＜0.01),并呈现剂量依赖性.倒置显微镜、光学显微镜和透射电子显微镜可观察到细胞增殖情况及凋亡的形态学改变.[结论]孕酮抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导其凋亡,同时可使抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达下降.     

高危型人乳头状瘤病毒第二代杂交捕获试验筛查宫颈癌及其癌前病变的验证研究

[目的]验证高危型人乳头状瘤病毒第二代杂交捕获试验(hybridcaptureⅡ,HC-Ⅱ)作为初筛方法检出宫颈病变(≥CINⅡ)的灵敏度和特异度,从而评价HC-Ⅱ检测的临床有效性。[方法]分别以自然人群(山西省襄垣县、沁县)和医院门诊(中日友好医院、北京大学第三医院)妇女为筛查对象的横断面研究,以病理诊断为金标准,开展HC-Ⅱ检测方法的临床验证。筛查对象接受检查时,依次留取Autocyteprep液基细胞学(LCT)和HC-Ⅱ检测标本,并对以上任一项异常者召回行阴道镜下检查和/或活检。[结果]1285例中高危型HPV感染339例,占26.4%;阴性946例,占73.6%。其中在1059例自然人群中高危型HPV感染163例,占15.4%;阴性896例,占84.6%;而在226例医院门诊病例中高危型HPV感染176例,占77.9%;阴性50例,占22.1%。最终参加HC-Ⅱ验证统计分析的共1273例,其中病理诊断≥CINⅡ的160例,HPV阳性同时病理诊断≥CINⅡ的157例。HC-Ⅱ检测样本的灵敏度和特异度分别为98.1%(157/160)和84.5%(941/1113)。阴性预测值和阳性预测值分别为99.7...     

高危型人乳头瘤病毒及液基细胞学联合应用于宫颈癌筛选中的临床价值

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)及液基细胞学(TCT)联合应用于宫颈癌筛选中的临床价值。方法选取2016年5月至2019年5月间陕西省地质矿产勘查开发局职工医院收治的452例宫颈病变患者的临床资料进行回顾性分析,所有患者均行HR-HPV及TCT检查。统计检查结果,比较HR-HPV、TCT单独及联合诊断宫颈癌的诊断效能。结果 452例宫颈病变患者,阴道镜下宫颈组织活检确诊宫颈癌25例,HR-HPV单独检出宫颈癌15例,TCT单独检出17例,二者联合检出24例,HR-HPV联合TCT诊断宫颈癌的灵敏度为96. 0%,高于二者单独诊断,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 HR-HPV及TCT联合应用能显著提高宫颈癌诊断灵敏度,利于减少漏诊,可为宫颈癌的早期检出及治疗提供参考。     

导流杂交基因芯片技术在宫颈癌人乳头瘤病毒分型检测中的应用

目的:探讨导流杂交基因芯片技术在宫颈癌人乳头状瘤病毒(HPV)分型检测中的临床应用.方法:采用导流杂交基因芯片技术对1 169例宫颈癌脱落细胞标本进行HPV检测并分型.结果:1 169例宫颈癌中HPV感染率为91.70%(1 072/1 169),其中单一感染占77.16%(902/1 169),多重感染占14.54%(170/1 169),检出率较高的HPV基因型有HPVl6(62.10%)、HPV18(10.95%)、HPV58(10.52%)、HPV52(7.96%)和HPV33(3.93%).结论:导流杂交基因芯片技术可检测HPV多种基因型,对HPV感染基因型的鉴别及宫颈癌的预防和治疗具有较好的临床应用价值.     

人乳头瘤病毒DNA在人喉癌细胞中表达的研究

为研究喉癌与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的关系,本研究探讨了HPV在喉癌中的致病作用和基因组型的分布与表达。应用共有引物和多重引物PCR的方法,对160例喉不同病变的新鲜组织标本,进行HPV6、11、16、18、31、33、35、42、58共9型HPVsDNAs感染的检测。结果在喉癌组HPV感染的阳性率为49.3％(35/71),喉癌颈转移淋巴结组为22.7％(5/22),喉癌前病变组为11.8％(2/17),声带息肉组为6.7％(2/30),癌周正常喉组织为0％(0/20)。HPV DNA型别分布在喉癌中以HPV16、18型为主,喉良性病变中以HPV6、11型为主。表明喉癌发生发展与HPV感染相关。     

两种用药方式对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 比较去甲斑蝥素(noreantharidin,NCTD)单独用药和联合ABT-737 2种用药方式对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测NCTD单药或联合ABT-737 2种用药方式对宫颈癌细胞株HeLa和SiHa增殖的影响;应用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响.结果 NCTD单独用药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa和SiHa的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈剂量依赖性,而且NCTD与ABT-737联用后对宫颈癌细胞增殖的抑制作用明显增强.NCTD和ABT-737联合用药的促凋亡作用比单独用药效果显著增强(P＜0.05).结论 体外单独使用NCTD对宫颈癌细胞HeLa和SiHa的增殖具有明显抑制作用,联合使用ABT-737后对其增殖抑制以及促凋亡作用更明显.     

宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中热休克蛋白70表达与人乳头瘤病毒感染的关系

目的　为了探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变 (CIN )组织中热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达与人乳头瘤病毒(HPV )感染的关系。方法　用免疫组化和原位PCR技术对 66例宫颈癌和 2 5例CIN组织进行检测。结果　宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中HSP70表达率为 80 .3 %、72 .0 %和 2 0 .0 % (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。 5 2例HPVDNA阳性的宫颈癌组织中有 45例 (86.5 % )HSP70表达阳性 ,明显高于HPVDNA阴性组织 (5 7.1% ,P <0 .0 5 )。结论　HSP70与宫颈癌、CIN的发生发展有密切关系 ,HPV可以诱导宫颈癌和CIN细胞中HSP70的高表达。     

硫化砷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡及COX-2表达的作用

目的:体外研究中药雄黄的主要成分硫化砷(As4S4)对子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)表达的关系.方法:以不同浓度的As4S4 (7.5～60 mg/L),分12～60 h 5个时间点处理HeLa细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;DNA梯状电泳检测凋亡的发生; Western blot检测COX-2蛋白的表达;放射免疫法检测细胞前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)释放水平.结果: As4S4可抑制HeLa细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,P＜0.01;As4S4可诱导HeLa细胞凋亡,DNA电泳呈梯状条带;As4S4可明显抑制COX-2的表达,P＜0.01,并呈浓度依赖性;As4S4明显抑制HeLa细胞PGE2释放水平,其值分别为(70.56±2.03)、(48.58±2.28)、(29.25±1.57)和(18.02±1.04) μg/L,与对照组(83.15±1.01) μg/L比较差异有统计学意义,P＜0.01.结论: As4S4 体外对HeLa细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白表达有关.     

FOXP3过表达对HPV感染阳性宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)过表达对人乳头状瘤病毒(HPV)感染阳性宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞免疫的影响。方法:利用脂质体介导转染方法,建立Foxp3过表达HPV感染阳性SiHa细胞株,作为Foxp3过表达阳性细胞,同时利用pcDNA3.1空载体转染SiHa细胞株,作为本研究阴性对照,同时设置空白对照组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法及Western blot法检测三组Foxp3 mRNA及蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SiHa细胞中白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测SiHa细胞增殖能力,采用利用流式细胞仪(FCM)检测SiHa细胞周期及凋亡率情况。结果:过表达组Foxp3 mRNA及蛋白表达水平明显高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组及空白对照组Foxp3 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与阴性对照组及空白对照组比较,各时间点过表达组IL-8水平明显降低,36 h、48 h IL-10水平明显升高;MTT结果显示,Foxp3过表达可明显促进SiHa细胞增殖,FCM检测显示,Foxp3过表达可明显抑制SiHa细胞凋亡,抑制G0/G1期阻滞。结论:Foxp3过表达可促进HPV感染阳性宫颈癌细胞增殖,抑制细胞凋亡。