西红花苷对成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响及机制初步研究＊

目的 探究西红花苷对与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响，并初步探究作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HCT116和人表皮成纤维细胞ESF-1共培养，再用低、中、高（50、100、200 μmol·L^-1）剂量西红花苷处理共培养后的HCT116细胞，实验分组包括对照组、ESF-1/HCT116组、ESF-1/HCT116 + Cro-L组、ESF-1/HCT116 + Cro-M组、ESF-1/HCT116 + Cro-H组；MTT法检测细胞增殖，PI染液法检测细胞周期分布情况，Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力，化学比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量；荧光探针DCFH-DA测定活性氧（ROS）水平，Western blot检测转化生长因子-β（TGF-β1）、上皮性钙粘附分子（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）与波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平。结果 与共培养体系下的HCT116细胞比较，共培养后再经各浓度西红花苷处理后的HCT116细胞存活率下降，G1期细胞比例减少，G2期细胞比例增加，细胞的侵袭数目和迁移数目均减少，TGF-β1、N-cadherin与Vimentin蛋白表达水平均下调，E-cadherin蛋白表达水平上调，此外，SOD活性下降而MDA含量升高，ROS水平也明显提高，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 西红花苷可抑制与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力，其机制可能与诱导细胞发生氧化应激损伤有关。     

小檗碱与吴茱萸碱联用对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的：观察小檗碱与吴茱萸碱联用对结直肠癌HCT116、RKO细胞迁移、侵袭能力的影响,并探究其可能机制。方法：细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测小檗碱(30μmol·L^-1)、吴茱萸碱(0.8μmol·L^-1)及两药联用(30+0.8μmol·L^-1)对HCT116及RKO细胞增殖的抑制作用;划痕实验、转移小室(Transwell)实验检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对HCT116及RKO细胞迁移、侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对HCT116及RKO细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达的影响。结果：与空白组比较,小檗碱组和吴茱萸碱组对HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭能力无明显抑制作用,两药联用组能显著抑制HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭能力(P<0.01);与空白组比较,小檗碱组和吴茱萸碱组对HCT116及RKO细胞中PI3K、...     

基于lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化探讨白花蛇舌草抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 研究白花蛇舌草（HDW）通过lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化（EMT）对结肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。方法 取对数生长期人结肠癌HCT-116细胞,分为空白组、药物组、病毒组和药物联合病毒组。空白组和药物组加入不含lncRNA MALAT1的空载慢病毒液,病毒组和药物联合病毒组加入含lncRNA MALAT1过表达慢病毒液,获得稳定转染的细胞系。空白组和病毒组用0 mg/mL HDW药液干预,药物组和药物联合病毒组用0.5 mg/mL HDW药液干预,均干预24 h。RT-qPCR法检测细胞lncRNA MALAT1mRNA相对表达水平;MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞锌指转录因子Slug、锌指转录因子Snail、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达量以及p-Smad/Smad。结...     

七叶皂苷对结直肠癌细胞增殖、侵袭的作用及机制研究

目的：探究七叶皂苷对氧化三甲胺（TMAO）诱导的结直肠癌细胞株增殖及迁移侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法：取结直肠癌HCT116细胞系,分为对照组、TMAO组、观察组3组,并分别进行处理。对照组不做处理,TMAO组仅使用100 μmol/L TMAO诱导,观察组使用同剂量TMAO诱导后再进行10 μmol/L七叶皂苷治疗处理。随后使用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、划痕愈合实验及细胞迁移侵袭试验技术(Transwell)实验分别检测细胞的增殖、迁移及侵袭行为,并使用蛋白质印迹（Western Blotting）实验检测SRC、pBTK、pTRIO蛋白表达情况。结果：TMAO诱导可增强HCT116增殖及迁移侵袭能力,并显著上调SRC-BTK-TRIO通路相关基因的mRNA水平,而七叶皂苷干预能抑制癌细胞增殖（P<0.01）并降低其迁移（P<0.001）、侵袭（P<0.01）能力,同时下调SRC（P<0.05）、BTK（P<0.01）、TRIO（P<0.05）蛋白的表达。结论:七叶皂苷可通过下调SRC-BTK-TRIO通路显著抑制HCT116细胞增殖及迁移侵袭能力。     

白杨素调控YAP介导的EMT进程抑制人结肠癌HCT-116细胞转移的机制研究

目的探讨白杨素在体内外对人结肠癌HCT-116细胞侵袭与转移作用及相关机制。方法本实验应用CCK-8法检测白杨素对HCT-116细胞增殖能力的抑制作用。利用划痕和Transwell法检测白杨素干预HCT-116细胞后对细胞迁移和侵袭能力的作用。通过Western blot检测白杨素干预后对HCT-116细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail表达水平的影响,并检测白杨素对HCT-116细胞内Yes相关蛋白(YAP)蛋白表达的作用。利用siRNA干扰实验考察YAP低表达对白杨素在HCT-116细胞侵袭作用和EMT进程中的影响。构建体内实验性肺转移模型考察白杨素对HCT-116细胞体内转移的作用。结果白杨素从8μmol·L^-1开始能够显著抑制HCT-116细胞的增殖,8μmol·L^-1以下对HCT-116细胞增殖没有显著抑制作用。划痕和Transwell实验显示,白杨素(1、2和4μmol·L^-1)能够剂量依赖性的抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭。West...     

紫花前胡素通过PI3K/Akt信号通路影响结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移

探讨紫花前胡素通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase, Akt)通路对结直肠癌HT29、HCT116细胞增殖、凋亡及迁移的影响。分别用紫花前胡素(10、30、60、90μmol·L^-1)对HT29和HCT116细胞进行干预处理，通过细胞增殖与活性检测-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测紫花前胡素对HT29和HCT116细胞增殖的抑制作用；通过克隆形成实验检测细胞的集落形成能力；通过Ki67免疫荧光染色检测细胞增殖情况；通过流式细胞术分析细胞凋亡作用；通过划痕实验法检测细胞的划痕愈合面积；通过Transwell迁移法检测细胞的迁移情况；通过蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2...     

健脾养正方通过抑制PKM2调控的有氧糖酵解对大肠癌HCT116细胞凋亡和EMT的影响

目的:观察健脾养正方通过下调丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)蛋白表达而抑制有氧糖酵解过程,从而对大肠癌HCT116细胞的促凋亡和抑制上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测健脾养正方对大肠癌HCT116细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测健脾养正方(2. 0,4. 0,8. 0 g·L-1)对HCT116细胞诱导凋亡的影响;通过细胞划痕和细胞侵袭实验(Transwell)观察健脾养正方(2. 0,4. 0,8. 0 g·L-1)对HCT116细胞的迁移和侵袭能力的影响;通过乳酸(LD)测试盒和葡萄糖测定试剂盒分别检测健脾养正方(2. 0,4. 0,8. 0 g·L-1)对HCT116细胞糖酵解代谢的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及糖酵解关键蛋白PKM2的表达;结果:MTT比色法显示,与空白组比较,健脾养正方作用HCT116细胞48 h,随着药物浓度增加,健脾养正方对HCT116细胞增殖抑制效应也增加,且在质量浓度为4. 0 g·L-1时,HCT116细胞抑制率在53. 87%左右,从而选取健脾养正方2. 0,4. 0,8. 0 g·L-1作为低、中、高剂量组进行研究;细胞流式结果显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组均明显诱导HCT116细胞凋亡(P0. 05),且随给药浓度增加,诱导细胞凋亡作用更明显(P0. 05);细胞划痕和Transwell显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组均具有抑制HCT116细胞迁移和侵袭作用(P0. 05),随给药浓度增加,作用更明显(P0. 05);乳酸和葡萄糖的测定显示,与空白组比较,随给药浓度增加,健脾养正方低、中、高剂量组细胞产生的乳酸量逐渐减少(P0. 05),葡萄糖利用量亦逐渐降低(P0. 05);Western blot显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组E-cadherin,Bax蛋白表达量上调(P0. 05),N-cadherin,Vimentin,Bcl-2及PKM2蛋白表达量下调(P0. 05)。结论:健脾养正方可有效诱导大肠癌HCT116细胞凋亡及抑制EMT,其机制可能与其通过下调PKM2蛋白表达而抑制HCT116细胞的有氧糖酵解途径有关。     

肉豆蔻醚抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究＊

目的 探讨肉豆蔻醚（myristicin）对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 MTT法检测肉豆蔻醚在体外对结肠癌细胞HCT116和LOVO增殖的影响；Annexin V/PI双染法检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞凋亡的影响；划痕试验和Transwell实验分别检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞迁移和侵袭的影响；western blot实验检测肉豆蔻醚对p-MEK1/2、p-ERK1/2、CyclinD1、E-cadherin、MMP-2以及MMP-9表达的影响。结果 肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞增殖、迁移和侵袭受到显著抑制，细胞出现显著凋亡；肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞内MEK1/2、ERK1/2、CyclinD1、MMP-2以及MMP-9蛋白表达水平显著降低，而E-cadherin蛋白表达水平显著增高。结论 本研究发现肉豆蔻醚在体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用，为临床用药提供一定的实验依据，为肿瘤治疗提供新的靶点和策略。     

白杨素调控YAP介导的EMT进程抑制人结肠癌HCT-116细胞转移的机制研究

目的 探讨白杨素在体内外对人结肠癌HCT-116细胞侵袭与转移作用及相关机制。方法 本实验应用CCK-8法检测白杨素对HCT-116细胞增殖能力的抑制作用。利用划痕和Transwell法检测白杨素干预HCT-116细胞后对细胞迁移和侵袭能力的作用。通过Western blot检测白杨素干预后对HCT-116细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail表达水平的影响,并检测白杨素对HCT-116细胞内Yes相关蛋白(YAP)蛋白表达的作用。利用siRNA干扰实验考察YAP低表达对白杨素在HCT-116细胞侵袭作用和EMT进程中的影响。构建体内实验性肺转移模型考察白杨素对HCT-116细胞体内转移的作用。结果 白杨素从8 μmol·L^-1开始能够显著抑制HCT-116细胞的增殖,8 μmol·L^-1以下对HCT-116细胞增殖没有显著抑制作用。划痕和Transwell实验显示,白杨素(1、2和4 μmol·L^-1)能够剂量依赖性的抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭。Western blot结果显示,白杨素能够上调E-cadherin的蛋白表达,下调N-cadherin,Vimentin及转录因子Snail的蛋白表达。同时还发现白杨素能够下调YAP蛋白表达水平,而利用siRNA下调YAP后能显著逆转白杨素对HCT-116细胞迁移与侵袭的抑制作用,并能逆转白杨素对HCT-116细胞EMT过程的促进作用。体内肺转移实验显示,白杨素显著抑制了HCT-116在肺上转移结节。结论 本实验表明,白杨素能够在体内外抑制人结肠癌HCT-116细胞的侵袭与转移能力,其作用机制与抑制YAP的蛋白表达,下调EMT过程相关。     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

异甘草素对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究异甘草素对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 10、20、40、60、80、100、120μmol/L异甘草素处理HCT116、HT29细胞后,MTT法检测细胞毒性,流式细胞术检测HCT116细胞凋亡,Western blot法检测HCT116细胞中cleaved caspase-3、pJNK、JNK、pERK1/2、ERK1/2、pP38、P38蛋白表达,Transwell实验检测HCT116细胞侵袭和迁移。结果异甘草素对HCT116、HT29细胞的IC_(50)值分别为22.45、23.69μmol/L。与对照组比较,异甘草素组呈浓度依赖性地显著诱导HCT116细胞凋亡(P0.05),显著上调cleaved caspase-3蛋白表达(P0.05),显著抑制HCT116细胞侵袭和迁移(P0.05),显著下调pJNK/JNK、pERK1/2/ERK1/2、pP38/P38(P0.05)。结论异甘草素能抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。     

黄芪甲苷对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探究黄芪甲苷对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法：将结直肠癌HCT116细胞分为空白组(DMSO)和黄芪甲苷低、中、高质量浓度组(15.7、31.4、62.8 mg·L^-1)。通过倒置显微镜观察给药后结直肠癌HCT116细胞形态的改变;细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测黄芪甲苷处理后细胞活性的改变;细胞划痕实验和Transwell实验观察黄芪甲苷处理后结肠癌HCT116细胞迁移及侵袭能力的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结直肠癌HCT16细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果：与空白组比较,黄芪甲苷低、中、高质量浓度组细胞生长速度慢,密度明显稀疏,细胞形态不一,细胞核逐渐缩小,细胞质逐渐降解,细胞死亡率高,细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),其抑制率与给药浓度呈正相关;与空白组比较,黄芪甲苷低、中、高质量浓度组...     

健脾消癌方对转化生长因子-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响

目的观察健脾消癌方对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响,探讨其防治结直肠癌的可能机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620。CCK-8法和Transwell小室实验测定细胞增殖、侵袭及迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin和Vimentin的基因和蛋白表达。结果健脾消癌方药物血清能抑制SW620细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;与空白组比较,TGF-β1诱导组细胞E-cadherin表达水平下降,Vimentin表达水平升高(P0.05);与TGF-β1诱导组比较,健脾消癌方+TGF-β1组细胞E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平下降(P0.05)。结论健脾消癌方可通过调控TGF-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化过程,抑制结肠癌的生长、侵袭和迁移能力,达到防止结直肠癌复发和转移的目的。     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】 探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】 ①体外研究：用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8（CCK8）测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子（VEGF）、上皮钙黏附蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达情况及信号通路蛋白Ca2+/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合 JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。②体内研究：建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】 选择低细胞毒性10、20、50 μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组（淫羊藿苷0 μmol/L）比较,淫羊藿苷10、20、50 μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低（P < 0.05）,E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高（P < 0.05）,均呈剂量依赖性。淫羊藿苷（10 μmol/L）可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降（P < 0.05）。【结论】 淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

白藜芦醇通过调控Notch信号通路诱导结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的:基于Notch信号通路探究白藜芦醇抑制人结直肠癌HCT116细胞增殖和诱导凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测白藜芦醇对HCT116细胞增殖的影响;显微镜观察白藜芦醇对HCT116细胞形态的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对HCT116细胞迁移能力的影响;Hoechst 33342/PI染色法和流式细胞术检测白藜芦醇对HCT116细胞凋亡的影响;Real-time PCR法检测白藜芦醇对细胞凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl2关联X蛋白(Bax)以及Notch信号通路相关因子缺口蛋白1(Notch1)、齿状蛋白1(Jagged1)、多毛增强子1(Hes1)、原癌基因蛋白(Cmyc)mRNA表达的影响;Western blot法检测白藜芦醇对细胞凋亡相关蛋白BCL-2、BAX以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Jagged1、缺口胞内域1(NICD1)、HES1、CMYC表达的影响。结果:与模型对照组相比,白藜芦醇80μg/mL~160μg/mL时间剂量依赖性地抑制HCT116细胞增殖(P<0.01),7.5、15、30μg/mL白藜芦醇干预改变HCT116细胞形态,明显降低其迁移能力(P<0.05或P<0.01),细胞Hoechst荧光强度从51.45±6.20增加到79.54±6.60(P<0.05),细胞总体凋亡率从(9.14±0.80)%增加到(64.74±3.36)%(P<0.01),此外促凋亡因子Bax mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01),抑凋亡因子Bcl2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),Notch信号通路中Notch1、Jagged1、NICD1、Hes1、Cmyc mRNA和蛋白表达显著下调,NICD1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论:白藜芦醇能够抑制HCT116细胞增殖、迁移,并诱导细胞发生凋亡,其机制可能与抑制Notch信号通路激活相关。     

新疆紫草中乙酰阿卡宁对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移及侵袭的影响

观察新疆紫草中乙酰阿卡宁对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移和侵袭的影响，同时探讨其可能的作用机制。设空白组以及乙酰阿卡宁低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0μmol·L^-1)分别作用于A375细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况，细胞划痕及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测迁移侵袭相关N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)以及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路相关Wnt1、轴蛋白2(Axin2)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)、β-catenin、细胞周期蛋白D₁(cyclin D₁)、p21蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、N-cadherin、vimentin、β-catenin、...     

青蒿琥酯通过Akt/Snail信号通路逆转结直肠癌细胞上皮间充质转化

目的 探讨青蒿琥酯（ART）对结直肠癌HCT-8细胞上皮-间充质转化（EMT）的作用,并探讨ART对结直肠癌细胞迁移,侵袭,EMT能力和蛋白激酶B（Akt）/Snail信号通路的影响。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同药物浓度的ART对HCT-8细胞增殖的影响,采用伤口愈合实验和transwell实验,检测ART对结直肠癌HCT-8细胞迁移侵袭能力的影响。免疫荧光双重染色法检测不同ART浓度对肿瘤细胞HCT-8细胞中EMT相关蛋白波形蛋白（vimentin）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）分布情况的影响。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白N-钙黏蛋白（N-cadherin）,vimentin,E-cadherin的蛋白表达情况的影响以及对Akt/Snail信号途径中相关蛋白Akt1,磷酸化Akt1（p-Akt1）和Snail1表达的影响。结果 不同浓度的ART作用于HCT-8后,计算细胞增殖抑制率,并绘制出量效曲线,得出ART对HCT-8细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为（16.67±1.95） μmol·L^-1,且与药物质量浓度呈剂量依赖关系,由此实验处理组分为4组,空白组（0 μmol·L^-1）,ART低剂量组（2 μmol·L^-1）,ART中剂量组（10 μmol·L^-1）,ART高剂量组（50 μmol·L^-1）;与空白组比较,ART组可显著抑制HCT-8细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）;与空白组比较,ART组中相关蛋白E-cadherin表达明显上调,vimentin和N-cadherin表达明显下调,且p-Akt1和Snail1的表达水平明显降低从而抑制EMT（P<0.05）。结论 ART可以抑制EMT引起的迁移和侵袭,其机制可能与抑制Akt/Snail通路活化从而逆转EMT有关。     

人参皂苷Rh2对结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP侵袭迁移能力的影响

目的:观察人参皂苷Rh_2(ginsenoside Rh_2,GRh_2)对结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP迁移、侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同质量浓度GRh_2(0,2. 5,5,10,20,40 mg·L~(-1))对HCT116/L-OHP细胞增殖抑制作用;划痕实验,Transwell实验及黏附实验分别检测GRh_2(0,2. 5,5,10 mg·L~(-1))对细胞迁移、侵袭及黏附能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GRh_2(0,5,10,20,30 mg·L~(-1))对HCT116/L-OHP细胞上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,GRh_2(5,10,20,40 mg·L~(-1))可显著抑制HCT116/L-OHP耐药细胞的增殖能力(P 0. 05,P 0. 01),并且呈浓度依赖性;与空白组比较,GRh_2组(5,10 mg·L~(-1))划痕愈合率明显减小(P 0. 05,P 0. 01),GRh_2组穿过小室的细胞数量明显减少(P 0. 05,P 0. 01),细胞的迁移和侵袭能力受到显著抑制,并且呈浓度依赖性; GRh_2组黏附细胞数量显著减少(P 0. 05,P 0. 01),细胞的黏附能力受到显著抑制,并且呈浓度依赖性;与空白组比较,GRh_2(10,20,30 mg·L~(-1))促进了E-cadherin的蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01),同时抑制了MMP-9蛋白表达(P 0. 01),呈一定的浓度依赖性。结论:GRh_2可显著抑制结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP的侵袭和迁移能力,其潜在机制可能与促进E-cadherin并抑制MMP-9的表达有关。     

健脾活血方阻止EMT,抑制LPS诱导的HepG2细胞迁移和侵袭研究

目的:探讨健脾活血方对LPS诱导的Hep G2细胞的迁移侵袭以及EMT的影响。方法:培养人肝癌细胞株Hep G2细胞,LPS诱导24 h后采用健脾活血方血清进行治疗,然后采用Transwell检测Hep G2细胞的迁移和侵袭,Western blot检测N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表达。结果:和Hep G2细胞相比,LPS+对照组中Hep G2细胞的迁移和侵袭显著增加(P均0.05),同时N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著增加,而E-cadherin蛋白表达显著降低(P均0.05)。进一步研究表明,和LPS+对照组相比,LPS+健脾活血方能够显著能够抑制Hep G2细胞的迁移、侵袭,降低Vimentin和E-cadherin蛋白的表达(P均0.05),而促进N-cadherin蛋白的表达(P0.05)。结论:LPS处理能够促进肝癌Hep G2细胞发生EMT、迁移和侵袭,而健脾活血方治疗能够阻止LPS诱导的Hep G2细胞发生转移侵袭以及EMT。     

芪术抗癌方对肝癌细胞上皮间质化的影响

【目的】探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞上皮间质化的影响。【方法】将HepG2细胞分为空白对照组,转化生长因子β1 （TGF-β1） 组,TGF-β1+芪术抗癌方1 mg/mL组,TGF-β1+芪术抗癌方2 mg/mL组等4组,显微镜下观察处理24 h后细胞的形态变化,划痕实验观察24 h细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测细胞上皮间质化相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、Vimentin、Snail、纤黏蛋白（Fibronectin）的表达情况。【结果】 HepG2细胞加入TGF-β1后出现上皮间质化样多形改变,而芪术抗癌方2个治疗组均能抑制这一细胞形态改变。划痕实验结果显示,TGF-β1组划痕愈合百分比较空白对照组显著增加（P < 0.05）,而芪术抗癌方2个治疗组划痕愈合百分比较TGF-β1组显著减小（P < 0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示：TGF-β1组E-cadherin表达水平较空白对照组降低,N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和Snail表达水平较空白对照组均升高,其中2组的Fibronectin表达水平比较,差异有统计学意义（P < 0.05）;与TGF-β1组比较,芪术抗癌方2个治疗组E-cadherin表达水平均升高,N-cadherin、Vimentin、Snail和Fibronectin表达水平均降低,其中,芪术抗癌方1 mg/mL组Vimentin、Snail 表达水平,与 TGF-β1 组比较,差异有统计学意义（均 P < 0.05）,芪术抗癌方 2 mg/mL 组 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Fibronectin表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。【结论】 芪术抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质化具有抑制作用。