1,25—二羟胆钙化醇与其受体基因表达关系的研究

目的：研究ＤＨＣＣ与其受体基因表达的关系，方法：幼年大鼠经腹腔注射ＤＨＣＣ后，在３、６、１２和２４ｈ处死，并分别提取小肠、肾脏、心脏、肝脏和脾脏等总ＲＮＡ，用生物素标记的ＤＨＣＣＲ基因为探针进行Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交与用＾３２Ｐ标记的ＤＨＣＣＲ基因为探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交检测ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ水平。结果：给药后第６ｈ靶器官中的ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ水平明显增高。检测ＤＨＣＣＲ分布时发现小肠     

维生素D受体mRNA在白血病患者外周血细胞中的表达

目的：检测白血病患者外周血维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达,探讨１,２５（ＯＨ）２Ｄ３诱导分子的分子学机制。方法：以ＲＴ－ＰＣＲ技术检测白血病患者外周血细胞中ＶＤＲｍＲＮＡ表达。结果：白血病患者外周血细胞中均有ＶＤＲｍＲＮＡ表达。结论：白血病患者外周血细胞是维生素Ｄ３（ＶＤ３）作用的靶细胞,１,２５（ＯＨ）２Ｄ３的作用可能是通过ＶＤ３核受体（ＶＤＲ）而介导,提示ＶＤ３能用于各种类型白血病的诱导分     

DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PGDF…

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ〔１０（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐〕对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣ ＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平     

PCR-ASO技术对苯丙氨酸羟化酶基因外显子突变的分析

目的：检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可疑患者的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７、１１、１２（Ｅ７、１１、１２）区域的点突变。方法：应用ＰＣＲ方法对６例可疑ＰＫＵ患者的ＰＡＨ基因Ｅ７、１１、１２区域进行扩增，再用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记的寡核苷酸探针（ＡＳＯ）杂交技术对其进行分析。结果：其中３例仅与含有Ｒ２４３Ｑ突变的异常探针杂交，不与正常探针杂交，说明其为Ｒ２４３Ｑ突变纯合子。结论：ＰＣＲ－ＡＳＯ探针可以特异地与ＰＡＨ突变位点杂交，是诊断ＰＫＵ的一种准确、可行的方法。     

应用原位杂交技术分析ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式

目的：获得ZNF216基因的表达模式。方法：体外转录方法合成地高辛标记的CRNA探针,利用原位杂交技术检测ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式。结果：在小鼠脑、心脏、骨骼肌和睾丸细胞内可检测到很强的ZNF216的杂交信号,在肾脏细胞内也可检测到杂交信号,但在脾脏和肝脏细胞内仅检测到少许杂交信号和未能检测到杂交信号。结论：ZNF16基因表达于几种组织细胞内,具有一定的组织特异性。     

PCR—ASO技术对苯丙氨酸羟化酶基因外显子突变的分析

目的：检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可疑患者的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７、１１、１２（Ｅ７、１１、１２）区域的点突变。方法：应用ＰＣＲ方法支６例可疑ＰＫＵ患者的ＰＡＨ患者Ｅ７，１１，１２区域进行扩增，再用γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记的寡核苷酸探针（ＡＳＯ）杂交技术对其进行分析。结果：其中３例仅与含有Ｒ２４３Ｑ突变的异常探针杂交，不与正常探针杂交，说明其为Ｒ２４３Ｑ突变纯合子。结论：ＰＣＲ－ＡＳＯ探     

白细胞介素－12 mRNA在移植物中的变化

应用反转多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及萤光标记ＤＮＡ探针技术检测ＩＬ－１２ｍＲＮＡ在纯系小鼠心移植物及宿主脾脏中的变化。结果表明：①移植的心脏在移植后（７．０±０．７）ｄ被排斥。②ＩＬ－１２ｍＲＮＡ在正常Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ－２￣ｄ）小鼠心脏中为阴性，在正常Ｃ＿３Ｈ／ＨｅＪ（Ｈ－２￣ｋ）小鼠脾脏中为弱阳性。③移植后第５ｄ，移植于Ｃ＿３Ｈ／ＨｅＪ的Ｂａｌｂ／ｃ心脏中和宿主Ｃ＿３Ｈ／ＨｅＪ的脾脏中ＩＬ－１２ｍＲＮＡ呈强阳性。提示ＩＬ－１２在排斥反应中起重要作用。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

Forskolin对1,25—二羟维生素D2受体mRNA表达的调节及其生物…

目的；研究腺苷酸环化酶激活剂ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｆ）对１，２５－二羟维生素Ｄ３「１，２５（ＯＨ）２Ｄ３」受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用人可能的生物学意义。方法；以人原始巨核白血病细胞系（Ｈ１Ｍｅｇ）为模型，ＶＤＲｍＲＮＡ的检测采用定量逆转录－聚合酶链反应；细胞增殖实验采用悬浮培养系统及甲基繁华等比例纱培养系统。结果；Ｆ对ＨＩＭｅｇ细胞ＶＤＲｍＲＮＡ的表达具有向上调节作用。具有明显的时间依赖性     

DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PDGF mRNA表达的影响

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度（ＯＤ）值。结果：ＨＥＣＣＭ组ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．４０、１．４９倍（Ｐ＜０．０１），分别是Ｎ组的１．８倍、１．７倍（Ｐ＜０．０１），ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组ＰＤＧＦ－Ａ、－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别为ＨＥＣＣＭ的０．７３倍、０．６５倍（Ｐ＜０．０１），与ＮＥＣＣＭ组相比，均无显著差异。提示ＤＤＰＨ在ＰＤＧＦ基因转录水平抑制ＨＥＣＣＭ诱导的ＰＡＳＭＣ的增殖。     

人参活性糖肽的荧光标记鉴定及其在小鼠主要脏器组织中的分布

目的：对人参活性糖肽（PGG）进行荧光标记,观察其在小鼠主要脏器组织中的分布情况及其靶向趋势。方法：以异硫氰酸荧光素（FITC）为探针对PGG进行荧光标记,采用紫外分光光度法和红外分光光度法对PGG荧光标记物（PGG-FITC）进行结构分析,采用荧光分光光度法测定其荧光取代度。将78只小鼠随机分为13组,每组6只,其中6组小鼠注射PGG-FITC,6组小鼠注射FITC,1组小鼠作为空白对照组。给药后0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和24.0 h,采集各组小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和胃组织,采用荧光分光光度法测定小鼠主要脏器组织中PGG-FITC和FITC水平,并计算药时曲线下面积（AUC）和靶向效率（Te）。结果：PGG与FITC通过共价键连接,其荧光取代度为1.435%;与FITC组比较,PGG-FITC组小鼠主要脏器组织中的药物水平均明显升高（P<0.01）,脑组织中药物水平升高更为明显;FITC组小鼠主要脏器组织中AUC值从高到低依次为肝、脑、胃、肾、肠、心、脾和肺组织,PGG-FITC组小鼠主要脏器组织中AUC值从高到低依次为脑、心、肝、肾、脾、胃、肺和肠组织。结论：利用FITC对PGG进行荧光标记,PGG经过尾静脉注射后主要富集在小鼠脑部,具有明显的脑靶向趋势。     

外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布影响的研究

目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响.方法大鼠正中开腹,肝动脉插管并固定,肝动脉注射125I-ADR-GHMN(相当于阿霉素0.5 mg/kg),左外叶加磁场,磁场应用30 min,移去磁场后,动物立即处死;对照组:肝动脉注射ADR-GHMN,左外叶不加磁场,30min后,移去磁场后,动物立即处死,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数.肝组织作病理切片.结果注入的纳米粒75～85%分布于肝脏,其它脏器极少.病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见.结论ADR-GHMN在正常肝组织中有明显的磁靶向性;在磁场作用下,ADR-GHMN主要分布于肝脏,其它脏器含量很少;试验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血于对照组的放射活性比较明显降低,表明磁性物质的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少.     

颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响

目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。     

脓毒症多器官损害与髓样细胞触发受体-1基因表达的关系

[摘要] 目的 探讨髓样细胞触发受体-1(TREM-1)基因表达与脓毒症所致多器官损害的关系。方法 采用小鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型造成脓毒症。将60只雄性小鼠随机分为正常对照组(n=10)、假手术组(n=10)和脓毒症组(n=40),并按不同的时间点留取肝、肺、肾及小肠组织及血液样本,分别用于检测TREM-1mRNA,TNF-αmRNA表达及测定丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、肺组织髓过氧化物酶(MPO)、小肠组织二胺氧化酶 (DAO)的活性。结果 与对照组及假手术组相比,CLP后6 h肝、肺、肾组织 TREM-1 mRNA 表达开始增多,肝组织24 h表达均达峰值(P＜0.01),肺、肾组织12 h表达达峰值(P＜0.01),小肠组织的TREM-1表达表现出了一定的升高趋势,但无统计学意义(P＞0.05)。TNF-αmRNA在各组织的表达在CLP后6 h开始升高(P <0.05或P <0.01),12 h降低,48 h再次升高(P<0.05)。相关分析结果显示,肝、肺、肾、小肠组织中TREM-1基因表达分别与TNF-αmRNA表达、ALT,Cr,MPO及DAO 水平显著相关。结论 脓毒症可导致多种组织 TREM-1 mRNA表达增加,其改变与多器官损害密切相关。 [关键词]　髓样细胞触发受体-1　脓毒症　多器官功能损伤     

半定量RT－PCR方法在基因表达研究中的应用

目的：定量检测Ｂ型内皮素受体（ＥＴＢ－Ｒ）基因在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录。多聚酶链反应技术（ＳｑＲＴ－ＰＣＲ），并以ＮｏｒｔｈｅｒｎＥＰ印迹法作对照。结果：ＥＴＢ－Ｒ基因在上述器官及ＭＣ均有表达，而表达水平依次为肺、心、肾和肝。结论：ＥＴＢ－Ｒ在不同器官有不同水平的基因表达，说明内皮素对不同器官的效应不同；ＭＣ是内皮素在肾内发挥作用的靶细胞。     

Quantitative Study of Iron Metabolism-related Genes Expression in Rat

Objective To investigate the multiple iron metabolism-related genes expression, its regulation by iron and the expression correlation among the genes in rat tissues. Methods Two groups （n=30） of Sprague-Dawley female weanling rats were fed with a control diet and an iron deficient diet respectively for 4 weeks. All rats were then sacrificed, and blood and tissue samples were collected. The routine blood examination was performed with a veterinary automatic blood cell analyzer. Elemental iron levels in liver, spleen and serum were determined by atomic absorption spectrophotometry. The mRNA expression of genes was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results After 4 weeks, the hemoglobin （Hb） level and red blood cell （RBC） count were significantly lower in the iron deficient group compared with those in the control group. The iron levels in liver, spleen and serum in the iron deficient group were significantly lower than those in the control group. In reference to small intestine, the relative expression of each iron-related gene varied in the different tissues. Under the iron deficiency, the expression of these genes changed in a tissue-specific manner. The expression of most of the genes significantly correlated in intestine, spleen and lung, but few correlated in liver, heart and kidney. Conclusion Findings from our study provides new regulation by iron and correlation among the mRNA divalent metal transporter 1, ferritin, iron regulation protein, hepcidin, ferroportin 1 and hephaestin in intesti understandings about the relative expression, expressions of transferrin receptors 1 and 2, proteins 1 and 2, hereditary hemochromatosis ne, liver, spleen, kidney, heart, and lung of rat.     

磁性Fe3O4纳米颗粒对大鼠脏器组织中Caveolin-1和Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响

目的：探讨磁性Fe₃O₄纳米颗粒对大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响,阐明其作用机制。方法：将24只Wistar大鼠按体质量随机分成对照组和低、中、高剂量磁性Fe₃O₄纳米颗粒组,尾静脉注射不同剂量磁性Fe₃O₄纳米颗粒24h后取脏器组织,Western blotting法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白的表达水平,荧光实时定量PCR法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平。结果：与对照组比较,中和高剂量组大鼠肝脏和脾脏组织中Clathrin Heavy Chain蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。高剂量组大鼠肾脏组织中Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平与其他3组比较明显升高（P<0.05）。Caveolin-1蛋白表达水平在各剂量组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,低、中和高剂量组大鼠肝脏、肺脏和脾脏组织中Caveolin-1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;各组肾脏组织中Caveolin-1mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：磁性Fe₃O₄纳米颗粒能够诱导大鼠肝脏、肺脏、脾脏中Clathrin Heavy Chain蛋白表达增强,通过Clathrin Heavy Chain蛋白的内吞作用是磁性Fe₃O₄纳米颗粒进入大鼠肝脏、肺脏和脾脏细胞的途径之一。     

UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布

目的 建立灌胃给药滇乌碱的大鼠中毒模型, 用高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 法测定大鼠血液及各组织中滇乌碱的含量, 研究滇乌碱在大鼠体内的分布情况.方法 将SD大鼠随机分为3组, 分别按2.2 mg/kg, 1.1 mg/kg和0.7 mg/kg剂量灌胃高、中、低剂量组大鼠, 给药2 h后处死, 迅速采取大鼠的心血、胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸和全脑, 液-液萃取法处理后, 用UPLC-MS/MS法测定各生物检材中滇乌碱的含量.结果 滇乌碱大鼠中毒模型给药剂量为1.1 mg/kg, 滇乌碱在大鼠体内分布由高到低的顺序为胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸、心血和大脑.结论 滇乌碱在大鼠体内分布广泛, 尤以胃、小肠和肝脏中含量最高, 该结论为黄草乌中毒的检验材料选取提供依据.     

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常大鼠体内的分布特征

目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征.方法使用放射示踪技术,用125I标记纳米粒.肝动脉注射,分别于注药后5、15、30、60、120min处死,立即取肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血作γ计数.结果半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在注射后5 min后最高,为15054.4 CPM/g,各时相前者的肝摄取率均为同时刻后者的2,3倍.两药在肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血的分布有高度显著性(P＜0.05).结论半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的主动靶向性,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布肝脏,其它的脏器含量少.     

缺血再灌可诱导新基因的克隆及其基本特性

目的：发现并克隆缺血再灌可诱导基因,方法：应用mRNA差异显示技术,在猪的心肌组织,分离缺血再灌可诱导基因的cDNA片段,随后筛选狸心脏cDNA文库,经克隆,测序,杂交后,分析克隆基因的基本特性,结果：发现和分离到一个缺血再灌上调基因的cDNA片段,通过筛选cDNA文库获得一个编码608个氨基酸开放式阅读框架的阳性克隆子。序列分析显示该克隆子的DNA和氨基酸序列与已知基因,蛋白质氨基酸均无同源性,Northern杂交分析显示该基因在缺血再灌猪心肌组织的表达明显增高,并且在正常猪的心,肝,肺,肾,脾,肠,脑和骨骼肌组织均可检测到其表达,Southern杂交分析显示该基因具有高度的进化保守性,结论：克隆的基因为缺血再灌可诱导新基因,它在缺血再灌的应答中可能起着重要的作用。