全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放NO＼TFPI及表达TF的影响

目的探讨全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放一氧化氮（N0）、组织因子途径抑制物（TFPI）及表达组织因子（TF）的影响。方法对传代培养的人脐静脉细胞（HUVEC）（2代～3代）分别给予不同的处理,取上清液测定N0、TFPI,取细胞冻融液测TF活性。结果与空白对照组比较,凝血酶组能明显抑制血管内皮细胞释放TFPI（P〈0．01）,与凝血酶纽比较,全蝎纯化液各剂量组能拮抗TFPI的降低（P〈0．05）。凝血酶促进血管内皮细胞表达TF,较对照组明显增高（P〈0．01）,全蝎纯化各剂量组较凝血酶组则明显降低（P〈0．01）。全蝎纯化液各剂量组促进血管内皮细胞释放N0,较对照组、凝血酶组明显增高（P〈0．01）。结论全蝎纯化液能抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达TF,可拮抗凝血酶抑制TFPI释放,促进血管内皮细胞释放N0,提示全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞的损伤具有保护作用。     

全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的观察不同浓度全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞(VEC)释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性的影响。方法以凝血酶和不同剂量的全蝎纯化液同时作用于培养的人脐静脉内皮细胞(VEC-340),12h后收集细胞液测定t-PA和PAI活性。结果与空白组比较,凝血酶组t-PA活性降低,PAI活性增高,差异有统计学意义(P0.01),与凝血酶组比较,全蝎大剂量、中剂量、小剂量组t-PA活性均增高,PAI活性降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论凝血酶对VEC-340细胞具有损伤作用,可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。全蝎纯化液可促进血管内皮细胞释放t-PA,抑制PAI分泌,对纤溶平衡具有调节作用。提示这可能与全蝎纯化液增加血管内皮细胞抗血栓能力有关。     

僵蚕抗凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的研究

目的研究僵蚕抗凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的影响。方法将不同浓度的僵蚕注射液（600μg/mL,300μg/mL,150μg/mL）加入凝血酶诱导的血管内皮细胞中,培养12h后收集细胞液,观察不同浓度的僵蚕注射液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的影响。结果僵蚕大、中、小剂量组较凝血酶组均能明显增加组织型纤溶酶原激活物（t-PA）活性,分别为（0.460±0.010）U/mL,（0.457±0.019）U/mL,（0.366±0.014）U/mL（P〈0.01）;同时也可降低纤溶酶原活化素抑制物（PAI）活性,降低血管性假血友病因子（vWF）含量,与凝血酶组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论僵蚕注射液可以明显抑制凝血酶诱导的内皮细胞释放作用,此作用与僵蚕的抗凝作用有关。     

连续性血液净化对多器官功能障碍综合征患者凝血功能的影响

目的：观察连续性血液净化治疗多器官功能障碍综合征（MODS）患者过程中血浆组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）的变化，并分析影响其变化的相关因素。方法：16例MODS患者随机分为两组，一组给予无肝素连续性静脉-静脉血液透析滤过（CVVHDF）治疗，另一组给予普通肝素抗凝的CVVHDF治疗。观察患者行CVVHDF治疗8h过程中的变化，在治疗0、15min、1h．2h．8h时检测血浆TF及TFPI水平，同时测定血清肿瘤坏死因子（TNF-α、IL-1β水平，并分析影响TF、TFPI水平变化的相关因素。结果：MODS患者TF、TFPI水平较正常对照组明显升高（P〈0．01），TFPL／TF水平较正常对照组显著降低（P〈0．01）。CBP治疗过程中，两组患者血浆TF呈下降趋势，而TFPI呈上升趋势。TFPL／TF水平随着CBP时间的延长呈上升趋势。肝素组TFPL／TF上升幅度更为明显，与无肝素组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。无肝素组CBP治疗MODS患者不同时间点血清TNF-α、IL-1β与血浆TF均呈正相关（P〈0．05）而在肝素组无明显相关（P〉0．05）。结论：MODS患者分泌TF、TFPI增加，TFPL／TF降低，CBP可部分改善TFPL／TF比例，与CBP清除TNF-α与IL-1β相平行。肝素可增加TFPI的分泌。     

Alpha-黑素细胞刺激素及其新型类似物对小鼠脑微血管内皮细胞产生组织因子的抑制作用

目的研究Alpha-黑素细胞刺激素(α-MSH)及其新型类似物(STY39)对原代小鼠脑微血管内皮细胞(MBMEC)在脂多糖(LPS)刺激下产生组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)的影响。方法选用雌性BALB/c小鼠,纯化并原代培养MBMEC,培养至5~7d,采用免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原,鉴定MBMEC模型。将MBMEC分为PBS对照组,LPS刺激组,LPS刺激后1、2、3 h加入10-7mol/L的α-MSH或STY39组(LPS+α-MSH,LPS+STY39),共8组,每组4孔。分别在LPS刺激后6h和8h收集细胞培养上清液和细胞,应用酶联免疫吸附法检测细胞上清液的TF和TFPI浓度,RT-PCR检测细胞TF mRNA表达水平。结果 (1)LPS可诱导MBMEC产生TF和TFPI蛋白,细胞培养上清液中TF水平于6 h达到高峰,TFPI水平于8 h达到高峰。(2)LPS刺激MBMEC后1、2、3 h给予10-7mol/L的α-MSH或STY39,均可显著降低细胞上清液中TF蛋白含量(P0.01),尤其在LPS刺激后1 h给予α-MSH或STY39的效果最显著(P0.05),STY39降低TF含量的作用较α-MSH明显(P0.05);但α-MSH和STY39对LPS诱导MBMEC产生TFPI均没有显著的上调作用。(3)在LPS刺激后不同时间点给予10-7mol/L的α-MSH或STY39,均可显著下调MBMEC TF mRNA的表达水平(P0.01),其中1 h时间点作用最显著(P0.05),但α-MSH与STY39的作用差异无统计学意义。结论α-MSH和STY39均能抑制LPS诱导原代MBMEC产生TF蛋白和表达TF mRNA,且LPS刺激1 h后给药效果较好;STY39对MBMEC产生TF蛋白的抑制作用优于α-MSH。     

重型颅脑外伤并脓毒血症患者的血清TF、TFPI、hs-CRP变化及意义

目的 探讨重型颅脑外伤并脓毒血症患者的血清组织因子途径抑制物（TFPI）、组织因子（TF）和高敏C反应蛋白（hs-CRP）变化及临床意义.方法 选择重型颅脑外伤并脓毒血症患者33例（观察组）,同期健康献血员15例（对照组）,采用ELISA法检测观察组感染早期（外伤后3d内）、中晚期（外伤后3～7d）血清TFPI、TF、hs-CRP,对照组在查体时检测上述指标.结果 与对照组比较,观察组感染早期TFPI、TF及hs-CRP明显升高,感染中晚期TF、hs-CRP升高（P均＜0.01）;与感染早期比较,感染中晚期TF、hs-CRP升高,TFPI降低（P均＜0.05）.结论 重型颅脑外伤并脓毒血症患者血清TF、TFPI及hs-CRP动态变化可作为脓毒血症病情变化的监测指标.     

外源性硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导组织因子和组织因子途径抑制物表达的影响

目的研究外源性硫化氢对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别以不同浓度NaHS(25、50、100及200μmol/L)和50 mg/L ox-LDL共孵育,RT-PCR和ELISA分别检测TF和TFPI mRNA表达和蛋白含量。结果用50mg/L ox-LDL孵育HUVEC 24 h后,TF mRNA表达上调8倍,蛋白含量增加7倍(P<0.01);而TFPI mRNA表达降低73%,蛋白含量减少65%(P<0.01)。用25、50、100及200μmol/L NaHS预孵育HUVEC 1 h,再与ox-LDL共同孵育,与ox-LDL组相比,加入不同浓度NaHS组TF mRNA分别降低12%、31%、63%和80%(P<0.05),蛋白含量分别降低13%、30%、62%和77%;TFPI mRNA表达分别升高0.6、1.2、2.0和2.6倍,蛋白含量分别升高0.3、0.7、1.1和1.6倍。结论 NaHS能抑制ox-LDL对内皮细胞TF表达的诱导作用,减轻ox-LDL对内皮细胞TFPI表达的抑制作用。     

厄贝沙坦对心肌梗死后大鼠心肌组织因子和组织因子途径抑制物的影响

目的观察大鼠心肌梗死后心肌组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）的mRNA表达及厄贝沙坦对其的影响。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死模型组,另设假手术组（20只）。模型组术后24h存活大鼠随机分为安慰剂组（20只）和厄贝沙坦组（50mg·kg^-1d^-1,20只）。用药4周后处死各组大鼠并分别称其心室重量,计算左心室重量指数及心肌梗死面积,应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测心肌TFmRNA和TFPImRNA。结果模型组左心室重量指数大于假手术组（F=7．83,P〈0．05）。模型组内药物组左心室重量指数明显低于安慰剂组（F=8．96,P〈0．05）,心肌梗死面积比较差异无统计学意义（F=0．96,P〉0．05）;模型组TFmRNA、TFPImRNA表达均高于假手术组（F：8．24,P〈0．05）,其中药物组＇IFmRNA较安慰剂组明显降低（F=8．57,P〈0．05）,药物组TFPI mRNA较安慰剂组增加（F=1．35,P〉0．05）。结论大鼠心肌梗死后心肌TF mRNA、TFPI mRNA表达均明显增高。厄贝沙坦可显著降低心肌梗死大鼠心肌TF mRNA的表达。     

胎盘早剥产妇母血及脐血TF、TFPI水平检测及意义

目的检测胎盘早剥产妇母血及脐血中组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）水平,探讨其对凝血功能的影响及临床意义。方法选择40例胎盘早剥产妇（观察组）及40例正常足月妊娠产妇（对照组）,采用ELISA法检测两组母血及脐血中TF、TFPI水平。结果观察组母血及脐血中TF水平均高于对照组,TFPI水平均低于对照组,P均〈0.05。结论TF和TFPI是体内重要的凝血和抗凝血因子,在胎盘早剥凝血过程中有重要意义。     

登革2型病毒调控血管内皮细胞凝血及抗凝系统相关蛋白的表达

目的观察登革2型病毒（DV2）对脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）表达组织因子（TF）、组织因子抑制物（TFPI）和血栓调节蛋白（TM）的影响.方法应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第二、三代细胞进行试验.应用CCK-8测定DV2感染对细胞活性的影响;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内TF、TFPI和TM mRNA水平.结果 DV2对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染HUVEC后6 h,TFPI mRNA水平显著下调（P＜0.05）,48 h恢复到正常水平.TF mRNA对照组不表达,DV2组各时相均有微量表达.而DV2组抗凝蛋白TM mRNA表达显著高于对照组（F=17.855,P=0.000）,24 h达到峰值（P＜0.05）,以后渐下降,72 h正常表达.结论 DV2急性下调TFPI mRNA和微量上调TF mRNA表达,启动外源性凝血途径,促进血液凝固;但DV2诱导高水平的TM可有效地增强抗凝活性,这有利于出血和血浆外渗.结果提示DV可诱导血管内皮细胞所调控的凝血系统失调,这可能在登革出血热/登革休克综合征（DHF/DSS）的出血机制中起重要作用.     

全蝎纯化液对内毒素休克大鼠TF、TFPI及TNF的影响

目的 探讨全蝎纯化液(PLIS)对内毒素休克大鼠的保护作用.方法 将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、PLIS大剂量组、PLIS中剂量组、PLIS小剂量组,每组10只.静脉注射脂多糖(LPS),复制大鼠休克模型.PLIS各剂量组于注射PLIS后15 min注射LPS,空白组注射等量生理盐水.监测LPS注射前及注射后60 min、90 min、180 min大鼠平均动脉压(MAP).LPS注射3 h后颈总动脉取血,测定血浆组织因子(TF)、肿瘤坏死因子(TNF)、组织因子途径抑制物(TFPI)含量.结果 全蝎各剂量组在注入LPS后,MAP下降不明显,TF、TNF含量显著降低(P＜0.01),TFPI含量差异无统计学意义(P＞0.05),但TFPI/TF比值各剂量组明显高于模型组(P＜0.01).结论 PLIS可能通过抑制TF和TNF升高,而对大鼠内毒素休克有保护作用.     

重组人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子对小鼠主动脉内皮舒张功能及凝血相关因子的影响

目的 采用重组人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子（rhTWEAK）经腹腔注射,诱导血管内皮损伤模型,观察rhTWEAK对小鼠主动脉内皮舒张功能和凝血相关因子的影响。方法 3～4周龄C57BL小鼠32只,随机分成4组,每组8只,腹腔注射各药物：①rhTWEAK组：rhTWEAK按5 μg/（kg·d）的量溶于生理盐水,共0.3 mL,腹腔注射,连续注射7天;②rhTWEAK＋抗rhTWEAK组：先给予抗rhTWEAK腹腔注射,15 min后再给予rhTWEAK注射;③IgG组：给予小鼠非特异性IgG腹腔注射;④对照组：给予0.3 mL生理盐水注射。分别在干预1周后眼球取血,分离上清;取小鼠胸主动脉段进行血管舒张功能的检测。酶联免疫吸附法检测血浆中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）、一氧化氮（NO）、组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）含量。结果 ①与对照组、rhTWEAK＋抗rhTWEAK组、IgG组相比,rhTWEAK组内皮依赖性血管舒张功能、血浆中eNOS、NO、TFPI水平明显降低,TF水平明显升高,均有统计学意义（均P<0.05）;血浆中hs-CRP含量未见明显改变（P>0.05）;②rhTWEAK组、IgG组与对照组相比,血管内皮舒张功能、血浆中NO、TF、TFPI、eNOS、hs-CRP含量变化均无统计学差异（均P>0.05）。结论 rhTWEAK可诱导内皮功能紊乱和凝血相关因子含量的改变,这可能是TWEAK参与动脉粥样硬化早期血管内皮损害的机制。     

大鼠肺血栓栓塞症组织因子与组织因子途径抑制物的变化

目的 建立大鼠肺血栓栓塞症(PTE)模型,观察不同阶段深静脉血栓产生的PTE组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)的变化及其相互关系.方法 通过季颖群改进的方法制备大鼠PTE模型.采用免疫组织化学分别检测TF、TFPI在PTE肺组织表达情况.运用DP70冷CCD专业数码图像分析系统对切片进行结果判定.结果 实验组D1P1和D7P1TF与TFPI相对值较对照组明显升高(P＜0.01,P＜0.05),其余组与对照组没有差异.实验组TF与TFPI呈正的直线相关.结论 PTE初期机体TF、TFPI都被激活,且TF与TFPI呈正相关.     

缬沙坦和卡托普利对兔血管平滑肌细胞组织因子和组织因子途径抑制物表达及活性的影响

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂对血管平滑肌细胞组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）表达和活性的影响。方法采用组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞,进行形态学和α-肌动蛋白（actin）免疫组化鉴定。在细胞水平,采用免疫组化、免疫荧光法检测ox-LDL和缬沙坦对TF、TFPI蛋白表达的影响,激光共聚焦法检测ox-LDL和缬沙坦对TF蛋白表达的影响,ELISA法检测ox-LDL、缬沙坦和卡托普利对TF、TFPI抗原表达的影响,发色底物法检测ox-LDL、缬沙坦和卡托普利对TF活性的影响,RT—PCR检测ox-LDL和缬沙坦对TF mRNA表达的影响。结果ox-LDL可增加兔血管平滑肌细胞TF抗原活性和mRNA的表达,在mRNA水平调节TF的表达。ox-LDL可降低兔血管平滑肌细胞TFPI抗原的表达。不同浓度的缬沙坦和卡托普利可明显减少ox-LDL刺激的平滑肌细胞TF抗原表达及活性,缬沙坦对TF表达的影响呈浓度依赖性,同时缬沙坦还可明显减少ox-LDL刺激的TF mRNA表达,证明缬沙坦在mRNA水平上调节TF的表达。不同浓度的缬沙坦和卡托普利可增加ox-LDL刺激的血管平滑肌细胞TFPI抗原的表达,缬沙坦对TFPI表达的影响呈浓度依赖性,该结果由ELISA法得出。结论本实验在细胞水平观察到ox-LDL对血管平滑肌细胞TF表达和活性有促进作用,血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂对其有抑制作用,但这两种药对TFPI的表达有促进作用。从一个新的角度说明这两种药对动脉粥样硬化斑块特别是斑块促凝性的影响,它们可能是通过部分调节TF和TFPI的表达水平而发挥作用的。     

血清瘦素与早发冠心病及血浆组织因子的关系

目的:探讨血清瘦素与早发冠心病及血浆组织因子的关系。方法:根据冠状动脉造影结果将200例患者分为早发冠心病组(120例)和对照组(80例)。应用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测患者血清瘦素、血浆组织因子(TF)及组织因子途径抑制物(TFPI)水平。结果:早发冠心病组血清瘦素、血浆TF、TFPI及TF/TFPI值均高于对照组(均P<0.01);Pearson相关分析显示,血清瘦素水平与早发冠心病患者血浆TF、TFPI、TF/TFPI均呈正相关(均P<0.01);多元逐步回归显示,血清瘦素和早发冠心病患者血浆TF水平呈独立正相关(P<0.01)。结论:早发冠心病患者表现为高瘦素血症,高瘦素水平与TF的表达及早发冠心病的发生有关。     

不稳定型心绞痛患者抗凝治疗前后血浆组织因子途径抑制物含量和活性变化

目的 :探讨不稳定型心绞痛 (UA)患者使用低分子量肝素 (LMWH)抗凝治疗前后血浆组织因子途径抑制物 (TFPI)含量和活性的变化及临床意义。方法 :采用ELISA法测定 5 1例UA患者血浆组织因子 (TF)、TFPI含量 ,采用发色底物法同时测定TF、TFPI活性 ,并与 2 2例正常人 (对照组 )比较。 5 1例UA患者又分为LMWH组 32例 ,用LMWH加常规治疗 5d后复查TFPI含量和活性 ;常规组 19例 ,用常规治疗 5d后复查上述指标。结果 :①UA组血浆TF含量和活性均较对照组明显升高 (P <0 .0 5 ) ;血浆TFPI含量较对照组明显降低(P <0 .0 5 ) ;TFPI活性较对照组明显升高 (P <0 .0 5 )。②LMWH组TFPI含量治疗后较治疗前明显升高 (P<0 .0 5 ) ,TFPI活性治疗前后无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,常规组TFPI含量和活性均无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论 :UA患者存在异常激活的高凝状态 ,LMWH有独特的TFPI释放特性 ,并通过TFPI途径发挥抗凝作用     

急性心肌梗死发作期间组织因子途径变化的观察

目的：观察急性心肌梗死（AMI）发作期间组织因子途径的变化。方法：69列临床确诊的AMI患和30例健康中老年人（作对照）被纳入研究对象。血浆中的组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）的活性测定采用发色底物法,TF和TFPI抗原采用ELISA法。激活的凝血因子Ⅶa采用重组可溶性TF法。凝血因子Ⅶ促凝活性采用活性测定法。结果：与对照组相比,AMI患血浆中TF、TFPI的活性均显增加[分别为5．67（1．77－54．95）mU/ml vs2.36(1.13-6.42)mU/ml,P＜0．01;224．85（86．65－512．12）％vs 138．75（51．72－297．2）％,P＜0．01]。同时TF、TFPI的抗原、凝血因子Ⅶa的活性亦有明显升高,但凝血因子Ⅶ促凝活性无显变化。结论：AMI发作期间体内组织因子途径被启动,血液呈现高凝状态。     

组织因子与冠心病

组织因子（TF）是一个分子量约47kD的跨膜糖蛋白，既是凝血因子Ⅶ（FⅦ）在细胞表面的受体，又是FⅦ或激活的因子Ⅶ（FⅦa）的辅因子。生理情况下与血液直接接触的细胞并不表达TF，当受到炎症介质等多种因素刺激时，血管内皮细胞和单核细胞表达TF，由此引起一系列病理过程。我们就TF的基因结构、表达调控、分子结构、作用机制及在冠心病中的研究进行综述。     

脂脉宁对香烟提取物诱导血管内皮细胞-304的NF-KB及热休克蛋白-70表达影响

目的：观察含脂脉宁血清对香烟提取物（CSE）诱导血管内皮细胞（VEC）～304的核转录因子-xB（NF—xB）及热休克蛋白-70（HSP-70）表达的影响。方法：将VEc-304细胞分为4组：CSE组、实验1组（脂脉宁大剂量）、实验2组（脂脉宁小剂量）及空白对照组。采用免疫组化方法,观察各组VEC-304细胞NF—KB及HSP-70的表达。结果：CSE组细胞NF—KB[（288±25）：（185±14）]、HsP-70[（370±28）：（258±20）]的表达均较空白对照组明显升高[P〈O．05～O．01],而脂脉宁两组NF—KB[1组（193±17）,2组（211±14）]、HSP-70[1组（262±21）,2组（282±23）]表达明显低于CSE组[P〈O．05～0．01],且1组作用更明显（P〈0．05）。细胞DAB显色：CSE组细胞NF—xB蛋白、HsP-70蛋白显色呈棕黄或棕褐色,明显较空白对照组色深;实验1组和2组显色虽较空白对照组为深,但明显较CSE组色浅。结论：香烟提取物可诱导血管内皮细胞核转录因子-kB、热休克蛋白～70表达．脂脉宁则可使其表达下调。     

原发性高血压患者血浆组织因子途径的变化及降压治疗的影响

目的 的发性高血压患者血浆组织因子途径，组织因子途径抑制物的变化及用依那普利，特拉唑嗪降压治疗后上述指标的变化。方法 发色底物法，I期凝固法检测1，2级原发性高血压患者55例，正常对照者28例的血乐组织因子（TF），组织因子途径抑制物（TFPI），FⅦ；C活性。55例高血压患者中27例接受依那普利治疗，28例接受特拉唑嗪治疗，疗程8周。结果 原发性高血压患者血浆TF，FⅦ：C，TFPI活性明显增高，与对照组相比差异有显著性（P＜0．001）；依那普利和特拉唑嗪治疗8周后血浆TF，FⅦ；C活性下降，与治疗前相比差异有显著性（P＜0．001）；两药均不影响TFPI的活性。结论 原发性高血压患者血浆组织因子途径活性增加，依那普利和特拉唑嗪在有效降压的同时可通过调节组织因子途径的活性改善血栓前状态。