影响AML1-ETO阳性急性髓系白血病患者预后的相关因素分析

目的探讨影响急性髓系白血病1-ETO融合基因(AML1-ETO)阳性AML患者预后的相关因素。方法回顾性分析承德医学院附属医院2012年1月～2017年12月收治的92例初治AML1-ETO阳性AML患者(观察组)临床资料,另选择同期50例AML1-ETO阴性AML患者的资料作为对照组,比较两组基因临床资料,以Kaplan-Meier法筛选出对AML1-ETO阳性AML患者总生存时间(OS)、无复发生存时间(RFS)有影响的因素,并采用Cox回归模型分析影响预后的相关因素。结果观察组初治时红细胞(RBC)、血小板(PLT)、CD19阳性率、微小残留病(MRD)下降对数级值低于对照组,CD34阳性率、CD56阳性率、骨髓原粒细胞百分比(NC)、C-KIT突变率高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。两组患者诱导化疗后疗效及生存率比较差异无统计学意义(P 0.05),诱导治疗后达完全缓解者的AML1-ETO融合基因定量下降值对数级值高于诱导治疗未达CR者,差异有统计学意义(P 0.05)。Cox回归分析结果显示,男性、年龄 45岁、CD56阳性率、C-KIT突变为OS的独立预后不良因素,CD19阳性率、诱导治疗后AML1-ETO融合基因定量下降≥2对数级、采用IA诱导方案为OS独立预后良好因素(P 0.05);而男性、年龄 45岁、C-KIT为RFS独立预后不良因素,诱导治疗后AML1-ETO融合基因定量下降≥2对数级为RFS的独立预后良好因素(P 0.05)。结论 AML1-ETO阳性AML患者的预后受性别、年龄、AML1-ETO融合基因定量下降值、C-KIT突变、CD56及CD19阳性率、诱导方案等因素影响,应加以监测。     

巢式RT-PCR分析急性髓系白血病患者融合基因

目的:探讨巢式RT-PCR在急性髓系白血病(AML)融合基因检测中的应用价值。方法:收集2008年1月-2010年1月在我院初治的227例AML患者的骨髓细胞,提取RNA转录cDNA后,以多重巢式RT-PCR进行融合基因检测。结果:227例患者中共检出融合基因95例(41.9%),包括AML1/ETO,CBFβ/MYH11,MLL基因重排,PML/RARα,CBFβ/MYH11,PLZF/RARα,MLL/AF6,BCR/ABL。结论:巢式RT-PCR可以较为快速准确的对融合基因进行检测,为AML的诊断和治疗提供依据。     

基于时间序列的急性髓系白血病融合基因表达网络差异分析

目的  探讨急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia, AML)不同融合基因的时间序列基因表达数据的网络差异, 识别靶基因。 方法  采用网络差异分析的方法, 针对AML的不同融合基因相关的基因表达数据构建网络, 对联合网络的全局属性进行统计分析, 使用邻域相似性指数(CompNet neighbor similarity index, CNSI)分析不同融合基因对应的网络间的相似性, 使用“fast-greedy”算法检测联合网络中的社区, 最后识别枢纽基因。 结果  通过网络差异分析确定了网络的相似性:NUP98-HOXA9-3 d和NUP98-HOXA9-8 d间的CNSI值为0.73, AML1-ETO-6 h和PML-RARA-6 h间的CNSI值为0.25;并识别出了10个AML的枢纽基因, 其中有7个已在文献中报道:TNF, VEGFA, EP300, EGF, CD44, PTGS2, SMAD3。 结论  网络差异分析揭示了AML的基因表达的时间转化模式及网络中基因表达的异质性, 为不同融合基因类型的AML治疗提供了靶基因。     

硒化壳聚糖对NB4细胞增殖的影响及其与PML-RARα融合蛋白激活的Ras信号途径的关系

[目的]研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。[方法]NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot法检测两种细胞株蛋白含量的变化。[结果]Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P﹤0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。[结论]Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

PML-RARα反义核酸增强NB4细胞对硒化壳聚糖诱导分化作用敏感性的探讨

[目的]研究PML-RARα反义核酸(antisense oligodexynucleotide,ASODN)对硒化壳聚糖诱导的NB4细胞分化敏感性的影响. [方法]人工合成PML-RARαASODN经阳离子脂质体包裹后瞬时转染NB4细胞,采用RT-PCR检测转染后PML-RARα基因表达情况,通过镜下观察细胞形态改变,NBT法观察细胞功能变化及流式法检测细胞膜CD11抗原表达来观测细胞分化. [结果]经PML-RARαASODN处理的NB4细胞PML-RARα基因表达明显下调,PML-RARα基因的反义核酸和硒化壳聚槠均能提高细胞NBT还原率,升高CD11b抗原,二者合用,则NBT还原率和CD11b抗原表达进一步增强.[结论]阳离子脂质体转染PML-RARαASODN具有促进硒化壳聚糖诱导NB4细胞分化作用的敏感性.     

实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在101例白血病融合基因检测中的比较

目的探讨实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在白血病融合基因检测中的价值并进行比较。方法对101例白血病患者分别应用定时定量PCR法和巢式PCR法进行融合基因的检测,主要包括BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO三类,并结合病人骨髓细胞形态学及临床表现予以分析。结果 RT-PCR和nPCR对融合基因的检出率比较:40例慢性粒细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为91.2%和88.4%;21例急性淋巴细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为41.2%和35.5%;26例急性早幼粒细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测PML/ARa融合基因阳性率分别为66.4%和61.2%;14例急性粒细胞白血病M2患者中,RT-PCR与nPCR检测AML/ETO融合基因阳性率分别为49.3%和31.2%。结论定时定量PCR较巢式PCR有更强的敏感性、更为准确,另外RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,对临床早期干预治疗具有重要价值。     

微小R-125b在初发急性髓系白血病中的表达情况及临床意义

目的分析微小R-125b(miR-125b)在初发急性髓系白血病(AML)中的表达情况及临床意义。方法选取初发急性髓系白血病患者48例和非恶性血液病患者20例作为对照组,采用实时荧光定量PCR检测骨髓细胞中的miR-125b表达水平。整理患者的临床资料,追踪初发急性髓系白血病患者的治疗效果。结果在初发AML的不同亚型中,M3的miR-125b表达水平高于其他亚型,差异有统计学意义(P0.05)。初发患者、难治复发患者及化疗缓解患者miR-125b表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。PML/RARA融合基因阳性的初发APL患者的miR-125b表达水平显著高于PML/RARA融合基因阴性患者,差异具有统计学意义(P0.01)。初发AML患者miR-125b表达水平与骨髓原始幼稚细胞呈正相关(r=0.773,P0.05)。结论 miR-125b水平在急性髓系白血病患者中存在着过度表达,其表达水平与疾病状态有关。通过连续监测PML/RARA融合基因阳性者的miR-125b表达水平,预测miR-125b也许可作为急性早幼粒细胞白血病治疗预后分子。     

天津160例急性B淋巴细胞白血病儿童常见融合基因检测分析

目的了解天津160例B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿常见融合基因的检出情况,为儿童B-ALL诊疗提供基础资料。方法选择天津市血液病医院2015年全部住院B-ALL患儿共160例为研究对象,采用实时定量聚合酶链反应方法对160例B-ALL患儿进行TEL/AML1、E2A/PBX1、BCR/ABL和MLL/AF4共4种常见融合基因检测。用SPSS20.0进行t检验和χ2检验。结果 160例儿童ALL中,47例检测出融合基因阳性,阳性率为29.4%,其中TEL/AML1阳性29例(18.1%),E2A/PBX1阳性12例(7.5%),BCR/ABL阳性6例(3.8%),未检出MLL/AF4阳性病例。结论天津160例B-ALL患儿常见融合基因为TEL/AML1、E2A/PBXI和BCR/ABL,其中TEL/AML1融合基因检出率最高。     

细胞免疫表型检测在急性白血病分型诊断中的应用价值

目的：探讨细胞免疫表型检测在急性白血病（AL）免疫分型和亚型诊断中的应用价值。方法：选择临床常用的12种单抗,应用流式细胞术（FCM）对形态学分型初诊的56例急性髓细胞白血病（AML）和28例急性淋巴细胞白血病（ALL）进行免疫表型检测与分析。结果：（1）有54例AML与免疫表型检测结果相符（符合率为96.4%）,且各型均表达3种及以上髓系抗原,约90%以上AML不表达淋系抗原。（2）在2例与免疫表型检测结果不符的AML中,1例以巨核细胞抗原特异表达为主,被纠正为M7;另1例因同时表达2种髓系和淋系抗原而确诊为急性混合性白血病（HAL）。（3）经免疫表型检测能将28例ALL精确区分为T-ALL、B-ALL和T/B-ALL 3型,除后者外,B系抗原与T系抗原均不互相表达,具有较强系列专一性表达特点;T/B-ALL同时表达T系与B系抗原。结论：细胞免疫表型检测能为AL分型和亚型诊断提供客观而精确的依据,弥补并纠正形态学分型的不足与误诊,并在AML与ALL鉴别、ALL亚型区分和发现HAL、M7等方面具有较高的特异性和独特的临床应用价值。     

使用Taqman技术监测慢性粒细胞白血病患者微小残留病灶

目的动态的监测bcr-abl融合基因mRNA表达水平以及评估经格列卫治疗后的慢性粒细胞白血病(CML)患者微小残留病灶。方法荧光定量RT-PCR法(Q-RT-PCR)检测bcr-abl融合基因mRNA表达水平,收集来自广州金域的34例CML患者(包括经格列卫治疗后缓解病人17例,未经治疗病人17例)。CML患者的检测结果与其他良性血液病患者进行比较,并且结合临床表现,得到CML和其它非白血病病人中bcr-abl L表达信息,以及在慢性粒细胞白血病的治疗中微小残留病灶的重要意义。结果在CML病人中bcr-abl融合基因表达阳性率为88.3%(30/34),在其他的良性血液病中无表达。我们也能观察到经格列卫治疗的病人有一定的治疗效果,经格列卫治疗的病人bcr-abl融合基因的表达水平较未经治疗者明显降低(P<0.05)。结论 Q-RT-PCR法是检测慢性粒细胞白血病微小残留病灶的重要方法,BCR-ABL融合基因可以做为CML的分子标志。     

ABI7900实时荧光PCR系统检测腺病毒DNA性能验证

目的:评估实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测腺病毒(ADV)DNA的性能。方法:采集16名健康者咽拭子标本(16例),选取其中10例阴性标本。阳性标本取自1例ADV4型培养液。采用RT-PCR法检测ADV DNA,并依次对检测试剂的准确性、重复性、检测下限、抗干扰能力和特异性等性能参数进行验证及评价。结果:RT-PCR试剂检测ADV DNA的准确性和重复性均为100%,检测下限为5×10^2 copies/ml。加入100 g/L血红蛋白,药物阿莫西林(5μg/ml)、对乙酰氨基酚(0.15μg/ml)和布地奈德混悬液(0.5 mg/ml)干扰物质后,ADV DNA的Ct均值小于未加入干扰物质的ADV DNA Ct均值的95%的置信区间(95%CI)上限25.51,加入干扰物质未对ADV DNA检测结果造成显著影响。该试剂检测甲型H1N1流感病毒、巨细胞病毒、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、流感嗜血杆菌和鼻病毒等常见的呼吸道病毒和细菌无交叉反应,具有较好的特异性。结论:RT-PCR法检测ADV DNA的准确性高、重复性好且灵敏度高,抗干扰能力和特异性均符合相关标准的要求,是临床检测ADV的首选方法。     

核酸快速检测系统在新型冠状病毒检测中的应用评价

目的:探讨核酸快速检测系统在新型冠状病毒（SARS-CoV-2）检测中的性能与应用评价。方法:收集北京市疾病预防控制中心和中日友好医院检验科2020年2至7月的临床样本,评价核酸快速检测系统对SARS-CoV-2检测的敏感度、特异度、抗干扰能力、精密度以及临床样本检测符合率。分析敏感度的评价通过检测浓度梯度稀释的SAR...     

急性髓系白血病细胞表面趋化因子受体CXCR4表达情况研究

摘要:目的　通过研究急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达情况,探讨CXCR4在AML中表达的意义。方法　收集初诊未治疗的130例AML患者,根据FAB分型标准进行分类,以急性淋巴细胞白血病（ALL）患者和非血液系统疾病患者作为对照,检测3组之间及不同FAB亚型之间CXCR4表达情况,分析CXCR4在白血病尤其是AML中表达的意义。结果　AML实验组和ALL对照组细胞表面CXCR4相对荧光强度明显高于非血液系统疾病对照组,且ALL对照组荧光强度最高（P＜0.05）。M3和M4/M5亚型组白血病细胞CXCR4 表达明显高于其他亚组（P＜0.05）。结论　CXCR4的高表达可能与白血病的发病、浸润及病情发展有关,可为预防白血病细胞迁移及髓外浸润,提高难治性AML疗效和减少AML复发等方面提供新的思路。     

荧光免疫层析法定量检测CHI3L1的性能评价及其在肝纤维诊断中的应用

内容提要:目的:对采用荧光免疫层析法定量检测CHI3L1的试剂盒进行性能评价,以及评估CHI3L1在辅助肝纤维诊断的临床价值.方法:对厂家提供的CHI3L1试剂盒从空白检测限、精密度、准确度、特异性以及与肝组织活检结果的符合率等方面进行全面的方法学评价.结果:该试剂盒空白检测限<5ng/mL;批内CV<8.7％,批间C...     

基于cfb和scpb基因的无乳链球菌PCR检测方法比较及临床应用

目的 比较基于cfb和scpb基因检测无乳链球菌(GBS)的两种PCR方法,建立合理的实时荧光PCR检测体系,实现快速检测生殖道无乳链球菌的目的.方法 通过对60株临床分离的无乳链球菌和15株非无乳链球菌进行PCR扩增,对比和验证cfb和scpb基因的敏感性和特异性,选择检测性能更好的基因为靶标,建立实时荧光定量PCR...     

水果中噻螨酮残留量检测技术研究

目的：通过对水果中噻螨酮残留量的测定达到建立检测技术的目的。方法：采用超声波提取-固相萃取-高效液相色谱法对方法的检出限、精密度和准确度进行了研究。结果：方法的检出限为0．05mg／kg，回收率为84．0％-92．6％，相对标准偏差为7．17％。结论：该方法具有准确度高，精密度好，能够满足水果中噻螨酮残留量的检测要求。     

The aryl hydrocarbon receptor pathway: a key component of the microRNA-mediated AML signalisome

Recent research has spotlighted the role of microRNAs (miRNAs) as critical epigenetic regulators of hematopoietic stem cell differentiation and leukemia development. Despite the recent advances in knowledge surrounding epigenetics and leukemia, the mechanisms underlying miRNAs' influence on leukemia development have yet to be clearly elucidated. Our aim was to identify high ranking biological pathways altered at the gene expression level and under epigenetic control. Specifically, we set out to test the hypothesis that miRNAs dysregulated in acute myeloid leukemia (AML) converge on a common pathway that can influence signaling related to hematopoiesis and leukemia development. We identified genes altered in AML patients that are under common regulation of seven key miRNAs. By mapping these genes to a global interaction network, we identified the "AML Signalisome". The AML Signalisome comprises 53 AML-associated molecules, and is enriched for proteins that play a role in the aryl hydrocarbon receptor (AhR) pathway, a major regulator of hematopoiesis. Furthermore, we show biological enrichment for hematopoiesis-related proteins within the AML Signalisome. These findings provide important insight into miRNA-regulated pathways in leukemia, and may help to prioritize targets for disease prevention and treatment.