冬凌草甲素诱导人胰腺癌SW1900细胞DNA损伤及对H2AX蛋白表达的影响

目的 研究冬凌草甲素(ORI)诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤对磷酸化组蛋白(H2AX)表达的影响.方法 彗星实验检测ORI诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤的程度.Western印迹检测不同浓度ORI作用胰腺癌SW1900细胞后H2AX蛋白的磷酸化.免疫荧光实验检测Phos-S1981 ATM和γ-H2AX焦点.结果 彗星实验结果表明不同浓度的ORI(20,40,80μmol/L)处理SW1900细胞48 h后,可发生DNA损伤,并且随浓度增加,DNA损伤加重.Western印迹检测不同浓度ORI作用胰腺癌SW1900细胞后,H2AX蛋白发生磷酸化,γ-H2AX随着浓度增加表达增大.免疫荧光实验发现Phos-S1981 ATM和γ-H2AX焦点随着浓度增加表达量增加.结论 ORI可以诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤;H2AX蛋白发生磷酸化,具体DNA损伤信号通路有待进一步研究.     

木犀草素对人胃癌细胞DNA双链断裂及同源重组修复的影响

目的 探讨木犀草素对人胃癌细胞DNA双链断裂(DNA double-strand breaks, DSBs)及同源重组(homologous recombination, HR)修复的影响。方法 采用流式细胞仪检测作用木犀草素后各组细胞内ROS水平变化及GFP阳性率；彗星实验检测木犀草素对DSBs的影响；Western blotting检测DNA损伤标志性蛋白γH2AX和HR修复蛋白Rad51的表达；免疫荧光检测DNA损伤修复相关蛋白表达的募集情况。结果 木犀草素以剂量依赖性方式增加胃癌细胞内ROS含量；用I-Scel质粒转染DR-GFP后木犀草素处理组GFP阳性细胞比例明显少于未加木犀草素组；但彗星实验表明，木犀草素处理后人胃癌AGS细胞后增加彗星尾炬；经木犀草素处理后，胃癌细胞中DNA的γH2AX上调，修复关键蛋白Rad51的表达下调；免疫荧光结果表明，在木犀草素处理人胃癌AGS细胞后HR修复蛋白Rad51在DNA损伤位点的募集减少。结论 木犀草素能够促进人胃癌细胞DSBs,并抑制其HR修复。     

冬凌草甲素通过激活ATM蛋白诱导人肝癌HepG2细胞G_2/M细胞周期阻滞

目的研究冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞的机制。方法不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,流式细胞仪检测冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞的细胞周期。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后H2AX蛋白的磷酸化。免疫荧光实验检测Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点。结果彗星实验结果表明不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,可发生G2/M细胞周期阻滞,并且随浓度增加细胞周期阻滞增加。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后,H2AX蛋白发生磷酸化,γ-H2AX随着浓度增加表达增大。免疫荧光实验发现Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点随着浓度增加表达量增加。结论冬凌草甲素可以诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞,H2AX蛋白发生磷酸化,诱导DNA损伤的发生。     

调控靶向Xklp2表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达的影响

目的探讨调控靶向Xklp2(TPX2)表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达及细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成的影响。方法利用前期构建的稳定转染TPX2 shRNA质粒的SK-MES-1细胞和稳定转染TPX2过表达质粒的NCI-H226细胞,采用Western印迹检测4 Gy照射后0～24 hγ-H2AX蛋白表达,免疫荧光技术观察4 Gy照射后4 h细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成情况。结果 4 Gy照射后0～24 h,TPX2干扰的SK-MES-1细胞和TPX2过表达的NCI-H226细胞中γ-H2AX蛋白表达水平均出现显著增加后逐渐下降的趋势,但在TPX2干扰的细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著高于单纯照射组(P<0. 05),而在TPX2过表达细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著低于单纯照射组。②照射后4 h,下调TPX2表达则γ-H2AX和MDC1核内斑点形成增加,而过表达TPX2则γ-H2AX和MDC1核内斑点增加幅度降低(P<0. 05)。结论照射后H2AX磷酸化及γ-H2AX和MDC1核内斑点形成变化,提示TPX2参与DNA损伤修复。     

敲低Spectrinβ Ⅱ加重棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的 研究血影蛋白β Ⅱ（Spectrin βⅡ）在棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用。 方法 ①Western blot检测棕榈酸处理后小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ表达量变化。②分别用Ad-sh-scramble（对照组）和Ad-sh-Spectrin β Ⅱ（Spectrin β Ⅱ干涉组）的腺病毒感染小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观察病毒的感染效率。利用Western blot和qPCR检测Spectrin β Ⅱ的干涉效率。③Western blot检测棕榈酸处理后Ad-sh-scramble组和Spectrin β Ⅱ干涉组小鼠原代心肌细胞DNA损伤指标γ-H2AX及凋亡蛋白剪切型半胱天冬酶3(cleaved-caspase 3)的表达,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。 结果 ①给予棕榈酸处理的小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.05）。②与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组Spectrin β Ⅱ的蛋白和mRNA水平均显著降低（P<0.05）③给予棕榈酸处理后,与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组的γ-H2AX2和cleaved-caspase 3蛋白表达显著升高（P<0.05）,并且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论 敲低Spectrin β Ⅱ加重棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡。     

隐匿性乙肝患者转化生长因子、干扰素及部分细胞因子表达情况分析

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)和人可溶程序性死亡分子1(sPD-1)、可溶性B7-H2(sB7-H2)、可溶性B7-H3(sB7-H3)细胞因子在隐匿性乙肝病毒感染(OBI)形成过程中的作用。方法:选取OBI标本20例、乙肝患者标本16例、乙肝携带者标本16例及健康献血者标本16例,同时检测血清中TGF-β1、IFN-γ、sPD-1、sB7-H2、sB7-H3,对检测结果进行统计分析。结果:sB7-H2、sPD-1和IFN-γ在不同人群血清中的含量差异无统计学意义(P0.05),而sB7-H3、TGF-β1在不同人群血清中的含量差异有统计学意义(P0.05),OBI人群血清中sB7-H3含量与乙肝患者及乙肝携带者比较均差异无统计学意义(P0.05),与健康献血者比较有所增高(P0.05),OBI人群血清中TGF-β1含量与乙肝患者人群及乙肝携带者比较差异无统计学意义(P0.05),与健康献血者比较有所降低(P0.05)。结论:sB7-H3和TGF-β1在OBI发生和发展中起着比较重要的作用,由于sB7-H3和TGF-β1均为免疫调节性细胞因子,因此免疫因素是OBI形成过程中的重要影响因素。     

活性氧在亚砷酸钠诱导Chang肝细胞凋亡中的作用

目的研究在亚砷酸钠（NaAsO2）诱导人Chang肝细胞株的凋亡过程中细胞内活性氧（ROS）和还原型谷胱甘肽（GSH）的作用。方法通过流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,采用2′,7′-二乙酰二氯荧光素（DCFH-DA）检测细胞内ROS水平,应用DTNB法测定细胞内GSH含量。结果与对照组相比,在5～30μmol/LNaAsO2浓度范围内,随着NaAsO2浓度的增高,Chang肝细胞凋亡率、细胞内ROS水平及GSH含量均升高（P〈0.05） 5mmol/L N-乙酰半胱氨酸（NAC）可显著抑制NaAsO2诱导的细胞凋亡的发生（P〈0.05）及细胞内ROS水平的升高（P〈0.05）,但细胞内GSH含量继续升高（P〈0.05）。结论砷诱导的Chang肝细胞的凋亡可能主要取决于细胞内ROS的产生,而不是细胞内GSH含量的下降。     

罗格列酮对同型半胱氨酸硫内酯所致内皮细胞损伤的保护作用与PPARγ介导的抗氧化相关

目的探讨罗格列酮对同型半胱氨酸硫内酯(HTL)所致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法在培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用HTL与HUVEC共孵,用罗格列酮、卡托普利、夹竹桃麻素、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662、核因子κB(NF-κB)信号传导通路抑制剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)进行预干预,MTT比色法检测细胞活力,逆转录聚合酶链反应检测PPARγm RNA的表达,荧光探针DCFADA检测细胞内活性氧簇(ROS),免疫荧光检测法测定NF-κB P65,酶标法检测可溶性细胞间黏附分子1(s ICAM-1)。结果 HTL与HUVEC共孵育24 h,明显降低内皮细胞活力,增加细胞内ROS水平和NF-κB的活化,升高细胞培养液中s ICAM-1的浓度(P0.01)。罗格列酮(0.001、0.01、0.1 mmol/L)能浓度依赖性地拮抗HTL所致的内皮细胞活力降低,抑制细胞内ROS水平的增加和NF-κB的活化,降低细胞培养液中s ICAM-1的浓度,与单独HTL损伤组比较,差异有显著性(P0.05或P0.01)。上述保护作用可被选择性的PPARγ拮抗剂GW9662所拮抗。夹竹桃麻素、卡托普利、PDTC对HTL引起的上述指标改变也有明显改善作用。结论罗格列酮对HTL所致的HUVEC损伤有显著保护作用,其机制可能与PPARγ介导的氧化应激反应的抑制有关。     

AKR1B10基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Western Blot法验证HCC患者癌组织与癌旁组织中AKR1B10蛋白表达差异。使用慢病毒分别敲减HepG2及Huh7细胞中的AKR1B10,分为对照组和AKR1B10敲减组(shAKR1B101#、shAKR1B102#)。采用AnnexinV-APC/PI双染法、细胞克隆实验、皮下移植肿瘤的方法检测敲减AKR1B10后HCC细胞凋亡、克隆形成、皮下成瘤体积的变化。过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA以及Western Blot检测敲减AKR1B10后HCC细胞内活性氧(ROS)以及p-ATMser1981、γ-H2AX、c-Caspase-3和c-RARP等蛋白的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果CCLE数据库提示AKR1B10 mRNA在HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞;Oncomine数据库显示,与癌旁组织相比,HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达增加了10倍以上;UALCAN数据库提示AKR1B10基因在HCC组织中高表达;本研究的6例HCC患者中AKR1B10在HCC组织中的表达高于癌旁组织。与对照组相比,AKR1B10敲减组中HCC细胞的克隆形成能力明显下降(P值均<0.001),细胞凋亡率明显增加(P值均<0.001)。与对照组相比,AKR1B10敲减组ROS的水平升高,DNA损伤指标p-ATMser1981、γ-H2AX蛋白,细胞凋亡指标c-Caspase-3和c-RARP蛋白增加。此外,在BALB-c/Nude小鼠模型中,从异体移植后第13天开始,与对照组相比,AKR1B10敲减组肿瘤体积明显缩小(P值均<0.05)。结论AKR1B10可能是治疗HCC的有效治疗靶标。     

14-3-3γ对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用

目的研究14-3-3γ在异丙肾上腺素(Iso)诱导的大鼠心肌损伤中的保护作用。方法构建pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ重组载体,使用pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ或pc DNA3.1对体外培养的H9c2(2~(-1))细胞进行转染。实验分为四组:pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ+Iso损伤组,pc DNA3.1+Iso损伤组,Iso损伤组及空白对照组(未经任何处理细胞组)。Western印迹检测心肌细胞中14-3-3γ的表达情况;MTT法检测心肌细胞增长率;取培养液检测各组细胞丙二醛(MDA)含量变化和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;流式细胞法检测重组质粒转染对心肌细胞凋亡的影响。结果 Iso损伤使心肌细胞的MDA含量显著增加、SOD活性降低、细胞增长率降低、细胞凋亡增加,转染pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ重组质粒后再进行Iso损伤,则MDA含量显著减少、SOD活性增高、细胞增长率增高、细胞凋亡减少(P0.05)。结论 14-3-3γ对Iso诱导的大鼠心肌细胞损伤有明显的对抗和保护作用。     

抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸和维生素E在人肺癌细胞生长中的作用

目的探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和维生素(Vitamin)E对人肺腺癌细胞NCI-H1395生长的作用及其分子机制。方法 CCK-8和5-溴脱氧尿苷嘧啶(Brd U)掺入实验检测NAC和Vitamin E对肺腺癌细胞NCI-H1395增殖的影响,荧光显微镜下和免疫组化检测NAC和Vitamin E对细胞活性氧(ROS)生成和对细胞DNA损伤的影响,Western印迹检测NAC和Vitamin E对细胞中p53和γ-H2AM蛋白水平的影响,CCK-8进一步检测加入p53 shRNA后NAC对肺腺癌细胞NCI-H1395增殖的影响。结果与对照组相比,NAC组和Vitamin E组对肺腺癌细胞NCI-H1395具有促增殖的作用(P0.05)。与对照组相比,NAC组和Vitamin E组显著降低ROS生成量(P0.05)。与对照组比较,NAC组和Vitamin E组8-羟基鸟嘌呤阳性表达率显著降低(P0.05)。与对照组比较,NAC组和Vitamin E组肺腺癌细胞NCI-H1395中p53和γ-H2AM蛋白磷酸化水平表达均显著降低(P0.05),基本降低到零表达。加入p53后,抗氧化剂NAC不能引起肺腺癌细胞的增殖。结论抗氧化剂NAC和Vitamin E对肺腺癌细胞NCI-H1395具有促增殖的作用,其机制可能与p53的失活相关。     

罗格列酮预处理能减轻小肠缺血再灌注损伤

背景:肠缺血再灌注(I/R)是外科急腹症,不仅导致肠道局部组织坏死,还会引发全身炎症反应,对其他器官组织产生严重影响。目的:探讨罗格列酮(ROS)对小肠I/R损伤的作用及其机制。方法:18只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、I/R损伤组和ROS预处理组。ROS预处理组造模前30 min静脉注射ROS 0.3 mg/kg,以血管夹夹闭肠系膜上动脉30 min、再灌注4 h诱导I/R损伤模型。处死所有小鼠,以HE染色观察小肠黏膜病理学变化,实时定量PCR法检测小肠组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-1β、转化生长因子(TGF)-β和Smad3 mRNA表达,蛋白质印迹法检测TGF-β、Smad3蛋白表达,ELISA法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-1β水平。结果:与假手术组相比,I/R损伤组小肠黏膜病理评分显著升高(P0.05),TNF-α、IFN-γ和IL-1βmRNA表达水平明显上调(P0.05),TGF-β、Smad3 mRNA和蛋白表达均明显上调(P0.05),血清TNF-α、IFN-γ和IL-1β水平明显上调(P0.05)。经ROS预处理后,上述指标均明显改善(P0.05)。结论:ROS预处理可通过抑制TGF-β/Smad3信号通路减轻炎症反应,从而减轻小肠I/R损伤。     

小鼠脑缺血/再灌注损伤皮质区超氧化物歧化酶、丙二醛、活性氧表达与细胞凋亡的关系及姜黄素的干预作用

目的探讨姜黄素对小鼠皮质区缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及与超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)表达的关系。方法采用线栓法阻塞小鼠大脑中动脉(MCAO),建立小鼠局灶性脑缺血/再灌注实验模型,90只昆明小鼠被随机分为假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I组)和姜黄素(缺血前30 min腹腔给予10、20、40 mg/kg)组(C1、C2和C3组),每组18只。各组于缺血2 h分为再灌24、48、72 h等三个亚组。在预定时间点观察小鼠神经功能缺失的评分;TTC染色测定脑梗死体积;TUNEL法检测细胞凋亡变化。测定各组小鼠血浆中SOD活性,MDA、ROS含量。结果 24 h神经功能评分及脑梗死体积I组明显高于S组,C1、C2、C3组神经学评分及脑梗死体积低于I组(P0.05)。SOD活力I组与S组相比较明显下降。C1、C2、C3组与I组相比SOD活力升高(P0.05)。ROS、MDA含量I组与S组相比较明显上升,C1、C2、C3组与I组相比ROS、MDA含量明显下降(P0.05)。结论姜黄素对脑缺血再灌注氧自由基损伤具有保护作用,其抗氧化作用机制可能与调节相关凋亡基因表达减轻细胞凋亡有关。     

沉默信息调控因子1介导褪黑素抗阿霉素致心肌细胞氧化应激损伤的机制研究

目的研究沉默信息调控因子1(sirtuin 1,SIRT1)及氧化应激在介导褪黑素(melatonin,MEL)抗心肌H9c2细胞阿霉素(doxorubicin,DOX)毒性损伤中的作用。方法常规培养H9c2细胞,给予褪黑素与阿霉素共处理24 h后检测细胞活力、活性氧(ROS)水平及丙二醛(MDA)含量、SIRT1和凋亡相关分子表达水平。随后,通过SIRT1 siRNA抑制SIRT1表达,重复上述检测。结果褪黑素共处理能够显著抑制阿霉素所致的H9c2细胞活力下降、 ROS水平及MDA含量升高、SIRT1表达下降及凋亡指标上调。然而,应用SIRT1 siRNA抑制SIRT1表达后,褪黑素的上述抗阿霉素心肌损伤作用被部分逆转。结论褪黑素通过上调SIRT1并抑制氧化应激损伤,进而有效减轻阿霉素所致心肌H9c2细胞毒性损伤。     

库普弗细胞条件培养基对原代培养肝细胞的细胞毒性

目的 探讨内毒素血症时库普弗细胞激活对肝细胞损伤的作用机制.方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Percoll密度梯度离心分离、纯化SD大鼠肝细胞和库普弗细胞,制备内毒素(LPS)刺激的库普弗细胞的条件培养基(KCCM)并作用于肝细胞,检测肝细胞培养基丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KCCM对大鼠原代肝细胞活性的影响.结果 KCCM作用于肝细胞2 h后,肝细胞培养基中ALT、AST及LDH含量均明显升高(P＜0.05),在2～4 h内随时间延长ALT、AST及LDH含量均逐渐增加,呈明显的时间-效应关系;MTT结果显示,KCCM作用后12 h、24 h时间点对肝细胞具有明显损伤作用(P＜0.05).结论 内毒素诱导库普弗细胞释放的可溶性因子作用一定时间后可直接对肝细胞造成损伤.     

Ⅰ-Sce I系统的建立及其在诱导肝癌细胞DNA双链断裂中的应用

目的 建立Ⅰ-Sce I系统并应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的HepG2细胞模型,为进一步研究DSB与HBV DNA整合奠定基础.方法 通过分子克隆技术构建携带Ⅰ-Sce I内切酶识别序列的pEGFP2真核表达载体,并将其转染入肝癌细胞株HepG2,经G418筛选出稳定转染株,随后瞬时转染表达归位内切酶Ⅰ-Sce I的质粒pCMV-3NSL-Ⅰ-Sce I.24 h后采用免疫荧光法和Western blot检测DNA双链损伤效应分子γ-H2AX的表达,了解DSB情况.结果 酶切鉴定和测序证实pEGFP2构建成功;Ⅰ-Sce I系统引入后HepG2细胞中的γ-H2AX表达明显上调,提示DSB细胞模型构建成功.结论 Ⅰ-Sce I系统能够成功地诱导HepG2细胞株基因组发生DSB,该系统有望为进一步探讨DSB是否为HBV整合的潜在靶位提供有效的研究工具.     

Twf1基因对心肌细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响研究

目的探讨抑制Twf1基因表达对高糖诱导的心肌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号的影响。方法高糖刺激H9c2细胞,将H9c2细胞分为对照组(5.5 mmol/L的葡萄糖处理细胞)、NC组(瞬时转染无干扰作用的si RNA后用5.5 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)、高糖组(瞬时转染无干扰作用的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)和Twf1-siRNA组(瞬时转染干扰Twf1表达的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)。Western blotting检测蛋白表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量。结果高糖可引起H9c2细胞Twf1表达升高,转染Twf1-siRNA后H9c2细胞Twf1的表达明显降低;高糖组细胞活力低于NC组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均高于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);Twf1-siRNA组的细胞活力高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均低于高糖组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论抑制H9c2细胞Twf1基因表达可逆转高糖诱导的细胞活力降低及凋亡的增加,其机制可能与细胞内ROS含量降低及NF-κB信号下调有关。     

~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响

目的观察~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响。方法用不同剂量~(60)Coγ射线照射人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),通过细胞生长曲线和克隆形成实验观察细胞增殖存活情况;流式细胞术检测照射后细胞周期的变化;中性单细胞凝胶电泳及蛋白印迹法(Western blot)观察细胞照射后DNA分子损伤及修复情况。结果 ~(60)Coγ射线照射后,HUVEC细胞生长速度及增殖率降低,降低程度与照射剂量呈正相关;HUVEC细胞周期出现G_2/M期阻滞;HUVEC细胞出现明显的DNA双链断裂,γH2AX和DNA-PKcs表达增加。结论 ~(60)Coγ射线照射抑制血管内皮细胞增殖,导致G_2/M期阻滞,促进DNA断裂,相关修复蛋白表达增加。     

一氧乙酰旋覆花内酯对缺氧心肌细胞的作用研究

目的:探讨一氧乙酰旋覆花内酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)在心肌细胞缺氧损伤中的作用及其机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞,构建缺氧损伤模型,分为对照组、缺氧组、1μmol/L ABL组和10μmol/L ABL组。采用CCK-8法检测心肌细胞活力,采用RT-PCR检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症指标及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p67phox亚基、NADPH氧化酶gp91phox亚基、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等氧化应激相关指标的mRNA表达水平,采用活性氧检测试剂盒进行活性氧(ROS)水平检测,用缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)及核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB抑制蛋白α(IKBα)的蛋白表达水平。结果:(1)不同浓度ABL对心肌细胞存活率的影响:1、2、5、10μmol/L的ABL均未影响心肌细胞存活率(P均0.05)。(2)各组心肌细胞缺氧损伤后炎症因子的表达:与对照组相比,缺氧组细胞内IL-1、IL-6、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平均明显升高(P均0.05),ABL预处理后上述促炎性因子表达水平呈浓度依赖性降低(P均0.05),但仍高于对照组(P均0.05),且1μmol/L和10μmol/L ABL组组间差异有统计学意义(P均0.05)。(3)各组心肌细胞缺氧损伤后氧化应激的变化:与对照组相比,缺氧组细胞ROS水平明显升高,p67phox、gp91phox的mRNA表达水平均明显升高,ABL预处理后上述改变呈浓度依赖性降低(P均0.05);与对照组相比,缺氧组细胞SOD、GSH-Px的mRNA表达水平均明显降低(P均0.05),ABL预处理后上述抗氧化物的表达呈浓度依赖性升高(P均0.05)。(4)各组心肌细胞缺氧损伤后凋亡的变化:与对照组相比,缺氧组细胞凋亡率、Bax和Cyt C的蛋白表达水平均明显升高,Bcl-2的蛋白表达水平则明显降低(P均0.05),ABL预处理后逆转了上述细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的改变(P均0.05),且作用呈浓度依赖性(P均0.05);(5)各组心肌细胞缺氧损伤后相关信号通路的变化:与对照组相比,缺氧组细胞的磷酸化p65、IKBα蛋白的表达水平均明显升高(P均0.05),ABL预处理后上述蛋白表达水平呈浓度依赖性降低(P均0.05)。结论:ABL可通过抑制NF-κB p65/IKBα信号通路对缺氧损伤的心肌细胞发挥保护性作用。     

运动预适应通过调节Nrf2/Keap1通路发挥对力竭大鼠心脏的保护作用

目的研究运动预适应(EP)对力竭大鼠心肌缺血情况和心功能的影响。探讨EP是否通过调节力竭大鼠心肌组织转录因子E2相关因子(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)表达量,增加下游抗氧化酶含量起到心脏保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为4组(n=15):对照组(C)、力竭组(EE)、短期、长期运动预适应组(SE,LE)。C组不做运动,EE组一次游泳至力竭。SE和LE组进行间歇性游泳运动,分别持续3天和3周,于末次运动预适应次日游泳运动至力竭。苏木素碱性复红苦味酸(HBFP)染色观察心肌缺血情况。Millar压力容积导管检测心功能参数。酶联免疫检测大鼠心肌损伤标记物及氧化应激水平。蛋白印迹检测心肌组织Nrf2及Keap1蛋白表达水平。结果长短期EP均能改善力竭运动所致心肌缺血面积增加及血清cTnI、NT-proBNP含量升高(P0.05)。EP对力竭运动所致心脏舒缩功能下降具有改善作用。力竭运动使ROS含量升高,CAT、GSH、SOD含量降低(P0.05),长期EP可增加抗氧化酶含量(P0.05)。EP升高大鼠心肌Nrf2蛋白表达,降低Keap1表达,此作用较力竭运动更明显(P0.05)。结论长期和短期运动预适应均能通过诱导心肌Nrf2/Keap1通路增加抗氧化酶含量来改善力竭所致心功能降低及缺血损伤,且以长期运动预适应效果为佳。