MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用

目的研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制。方法用4 mmol/L的Al Cl3·6H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂z VAD-fmk(20μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变。结果与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P0.05)。结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡。     

JNK信号通路在二甲基肿酸所致人胚肺成纤维细胞DNA损伤与凋亡中的作用

[目的]探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在二甲基胂酸（DMA）所致人胚肺成纤维（HELF）细胞DNA损伤与凋亡中的作用。[方法]以0、2．5、5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，检测HELF细胞生长、DNA损伤、细胞凋亡、JNK磷酸化水平；并用20μmol／LJNK抑制剂SP600125预处理30min后，再用DMA处理HELF细胞48h，观察上述指标变化情况。[结果]10和20μmol／LDMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用（P〈0．05）；2．5、5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞γ-H2AX表达水平明显增强（P〈0．05），并具有一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=-0．982，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞断裂，caspase3表达水平明显增强（P〈0．05），呈一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．945，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，JNK磷酸化的表达水平明显增加（P〈0．05），呈现一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．988，P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125能明显降低10、20μmol／LDMA的生长抑制作用（P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125可明显阻滞DMA所致HELF细胞对DNA损伤和诱导的凋亡作用（P〈0．05）。[结论]DMA可引起HELF细胞DNA损伤和凋亡；在此过程中JNK信号通路激活起到正调控作用。     

mTOR信号通路在细胞自噬和凋亡调节中的作用

自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发...     

人巨细胞病毒感染与婴儿肝炎综合征及肝功能异常的相关性研究

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与婴儿肝炎综合征(HIS)及肝功能异常的相关性,并对有HCMV毒感染的婴儿、HIS及肝功能异常的患儿进行随访,判断其预后。方法选取2016年4月-2017年4月该院收治的100例(HIS)患儿为肝炎组,并选取同期在医院体检的健康婴儿100例为对照组,收集两组婴儿晨尿行HCMV DNA检测,采集静脉血行人巨细胞病毒Ig M的检测。同时选择医院同期收治的HCMV患儿132例为HCMV组,对HCMV组和对照组婴儿行肝功能5项指标检测。结果肝炎组患儿HCMV DNA阳性60例,检出率为60%,HCMV Ig M阳性39例,检出率为39%,PCR法检出率显著高于ELISA法,两组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组两种方法阳性均为1例,检出率为1%,显著低于肝炎组患儿;HCMV组和对照组进行肝功能5项指标检测,HCMV组5项指标均值显著高于正常值参考范围,对照组5项指标均值均在正常值参考范围内,两组肝功能5项指标检测结果差异有统计学意义(P<0.05);对HCMV引起的肝炎综合征及肝功能异常患儿随访1~2年,发现其远期预后均良好。结论 HCMV感染是婴儿HIS重要的病原体,其与婴儿肝功能损害具有相关性。     

蛋白激酶C信号通路在温石棉致肺成纤维细胞的细胞周期和凋亡改变中的作用

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）信号通路与温石棉致人胚肺成纤维细胞（HEPF）的细胞周期及细胞凋亡改变的联系。方法 流式细胞技术测定PKC的抑制剂或激活剂对温石棉处理兔肺泡巨噬细胞（AM）的培养上清液致HEPF的细胞周期和凋亡改变的影响。同时设立空白对照、正常对照（不加粉尘的AM）、阴性对照（标准TiO2)和阳性对照（标准SiO2）。结果 温石棉处理AM的上清液刺激HEPF增殖时,HEPF的G／M期细胞百分比为7．2％,高于各对照组,而细胞凋亡百分率为3．5％,低于各对照组,差异均有显著性（P＜0．01）。PRKC抑制剂C25H24N4O2使温石棉所致HEPF增殖时的S期细胞百分比由37．8％减少到27．3％,凋亡百分率由3．5％增加到22．7％,差异均有显著性（P＜0．01）,而PKC激活剂PMA能使此S期细胞百分比增加。结论 温石棉所致HEPF增殖时的细胞周期变化与其上游PKC信号通路有关,PKC抑制剂和激活剂主要是作用 于S期DNA的合成和诱导细胞凋亡。     

线粒体在铝致神经细胞凋亡中的调控作用

目的探讨线粒体在铝致神经细胞凋亡中的调控作用。方法体外培养出生后0-3 d大鼠神经细胞,并用不同浓度氯化铝染毒,光学显微镜和电镜下观察神经细胞的凋亡现象及线粒体的形态学改变,并检测线粒体酶和凋亡相关蛋白的含量。结果光学显微镜及电镜下可以见到凋亡细胞的特征性改变,线粒体在电镜下肿胀变形并有结构的改变。线粒体酶在染毒低浓度组有代偿性活力升高,但中、高浓度组酶的活力仍然下降,高浓度组各酶活力显著低于对照组(P<0.01)。凋亡相关蛋白Caspase的含量随染毒浓度的增加而增多,且与染毒浓度有显著相关(P<0.01,r为0.963,0.859)。细胞色素C(CytC)在染毒组从线粒体释放至胞浆,3个染毒组间CytC的含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论线粒体的结构和酶活力的改变及其释放的促凋亡因子在铝致神经细胞凋亡的过程中起着重要的作用。     

不同标本巨细胞病毒检测在诊断小儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的探讨尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA检测以及血清HCMV-IgM检测在小儿人巨细胞病毒(HCMV)感染诊断中的意义。方法用实时荧光定量PCR检测189例疑似HCMV感染患儿尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA,用化学发光法检测其血清HCMV-IgM,并分年龄分性别对其阳性率进行分析比较。结果新生儿组母乳HCMV-DNA阳性检出率(60.3%)显著高于尿液(5.2%,P<0.001)和淋巴细胞(12.1%,P<0.001),也显著高于血清HCMV-IgM阳性率(3.4%,P<0.001);婴儿组母乳(48.1%)与尿液(55.0%)HCMV-DNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但两者均显著高于淋巴细胞HCMV-DNA阳性率(22.1%,P<0.001)和血清HCMV-IgM阳性率(24.4%,P<0.001);婴儿组的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM阳性率均显著高于新生儿组(P<0.01);两组各指标男女阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);母乳HCMV-DNA阳性率与尿液、淋巴细胞HCMV-DNA阳性率及血清HCMV-IgM阳性率均呈显著正相关(r=0.630,P=0.000;r=0.413,P=0.000;r=0.341,P=0.000)。结论联合尿液、淋巴细胞HCMV-DNA和血清HCMV-IgM检测有助于患儿HCMV感染的辅助诊断;在无法联合检测的条件下,婴儿首选尿液HCMV-DNA检测可获得较高检出率;母乳HCMVDNA检测并正确喂养有助于预防HCMV感染。     

caspase-3基因在染铝小鼠神经细胞凋亡中的作用

[目的]通过观察染铝小鼠海马的线粒体膜电位、组织形态以及脑组织内活化的caspase-3蛋白含量表达的变化,研究caspase-3 siRNA在铝致神经细胞凋亡中的作用。[方法]取3月龄雄性昆明小鼠,按体重随机分为4组,即空白对照组（生理盐水4μL）、染铝组（0.5%AlCl3.6H2O 4μL）、Al＋RNAi组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋目的siRNA表达载体1μL）、空载体组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋对照siRNA表达载体1μL）,通过侧脑室注射进行染毒,连续染毒5 d,各组小鼠海马的凋亡率用流式细胞术检测;线粒体膜电位用罗丹明123（Rhl23）染色流式方法检测;观察小鼠组织学变化;脑组织中活化的caspase-3蛋白的含量用蛋白印迹（Western blot）技术检测。[结果]凋亡率结果显示：与空白对照组相比,染铝组、空载体组的细胞凋亡率升高有统计学意义（P〈0.05）,Al＋RNAi组凋亡率尚无差别（P〉0.05）;线粒体经Rhl23染色呈现明亮绿色的荧光,染铝组和空载体组荧光强度较对照组明显减弱（P〈0.05）,Al＋RNAi组与空白对照组差异无统计学意义;常规HE染色镜下可见空白对照组小鼠海马神经元排列整齐,染铝组细胞排列零乱,细胞连接松解,空载体组细胞数量减少,siRNA处理后细胞状态与空白对照组相似;活化的caspase-3蛋白表达量结果显示染铝组高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组、空载体组、Al＋RNAi组之间尚无差别（P〉0.05）。[结论]RNA能通过下调caspase-3基因的表达,从而对铝致小鼠神经细胞凋亡产生抑制作用。     

Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用。方法 采用体外细胞实验方法,以宫颈癌细胞Hela（HPV阳性）和C33A（HPV阴性）为研究对象,施加Src激酶选择性抑制剂（PP2）对Src激酶进行抑制。于抑制前后采用流式细胞术（FCM）检测各组细胞的周期及凋亡情况,分别采用Real-time PCR法和Western-blot法检测各组细胞ERK 1/2、c-Fos和c-Jun的mRNA和蛋白表达水平。应用SPSS 20.0软件进行数据录入和分析。结果 Src抑制后,Hela和C33A细胞均显示增殖指数降低,凋亡率升高,处于G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低,ERK 1、ERK 2、c-Fos和c-Jun的mRNA含量升高,ERK 1/2、磷酸化ERK 1/2（p-ERK 1/2）和磷酸化c-Fos（p-c-Fos）蛋白表达水平降低,c-Jun和磷酸化c-Jun（p-c-Jun）蛋白表达水平升高。Hela细胞凋亡率、p-ERK 1/2和c-Fos蛋白在Src抑制前后的变化低于C33A细胞。结论 Src活化可以上调ERK信号通路中关键因子ERK 1/2和c-Fos磷酸化蛋白的表达,促进宫颈癌细胞的生长与增殖,在宫颈癌变中发挥重要作用。HPV感染可能对Src介导的ERK信号通路调节具有调节作用。     

线粒体在细胞凋亡中的作用的研究进展

细胞凋亡是细胞为维持自身内环境稳态,主动进行的连续、动态的经由基因控制的自主有序死亡过程。线粒体是真核细胞内极为重要的含有两层膜结构的细胞器,其膜结构的完整性对维持线粒体的结构和功能完整性有着极为重要的作用,细胞凋亡过程中多个关键事件与线粒体相关,本文就线粒体和细胞凋亡之间的关系进行概述。     

大负荷运动通过NO信号通路降低高血压的机制研究

目的探讨大负荷运动通过一氧化氮（NO）信号通路降低高血压的可能机制。方法利用大鼠高血压模型进行大负荷运动。采用酶化学方法检测大白鼠血液中一氧化氮合酶（NOS）活性及NO水平变化,反转录多聚酶链反应检测大白鼠大动脉组织中NO和NOS的mRNA水平,免疫印迹实验检测大白鼠大动脉组织中VEGF蛋白水平的变化及动脉血管组织Akt,P13K水平。结果运动组血液中NOS活性及NO的蛋白表达水平显著高于静息组（P〈0．05）;运动组大动脉组织中NOS活性、NO的mRNA水平、激活型Akt、P13K水平显著高于静息组（P〈0．05）,而总Akt、P13K蛋白水平没有明显增高（P〉0．05）。结论大负荷运动可增强组织中的Akt、P13K活性,从而调节血液中NOS活性,调节血液中NO水平,并最终降低高血压。     

胰高糖素样肽-1受体激动剂通过JNK信号通路促进肝星形细胞凋亡的机制研究

目的 探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)通过JNK信号通路促进肝星形细胞(HSC)凋亡的机制.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,将HSC样本随机分成对照组(20份)、GLP-1RA组(20份)和JNK阻断组(20份).对照组HSC在常规培养基础上加入高糖(终浓度25 mmol/L),GLP-1RA组在对照组基础上加入GLP-1RA利拉鲁肽(终浓度10 mmol/L),JNK阻断组在GLP-1RA组基础上加入JNK信号通路阻断剂SP600125(终浓度20 μmol/L)进行培养;培养120 h后用流式细胞术检测各组的HSC凋亡情况.同时采用Western印迹法检测各组的p-JNK蛋白表达水平.结果 三组的平均凋亡率和平均p-JNK的表达水平差异均有统计学意义(F=19.412和66.451,P均＜0.01).GLP-1RA组的凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(30.61±4.07)％和(22.79±3.80)％,均高于对照组,差异均具有统计学意义(t=0.530和9.854,P均＜0.01);JNK阻断组的细胞凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(23.48±4.41)％和(10.66±4.15)％,均低于GLP-1RA组,差异有统计学意义(t=-5.428和-8.757,P均＜0.01).结论 JNK信号通路在GLP-1RA介导的HSC凋亡中起着关键作用,GLP-1RA可以通过JNK信号通路促成经高糖诱导活化的HSC发生凋亡.     

腹主动脉瘤腔内修复术后感染病原菌及Hippo信号通路基因改变

目的探讨腹主动脉瘤腔内修复术(EVAR)后医院感染病原特点及Hippo信号通路基因、白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、IL-23改变。方法选择天津医院血管外科2017年5月-2020年3月收治腹主动脉瘤EVAR术后医院感染患者49例作为感染组,选择同期医院进行EVAR术后未发生医院感染患者60例作为非感染组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Hippo通路基因yap、taz、mst1相对表达水平,采用酶联免疫吸附法检测其辅助型T细胞17(Th17)促炎细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平。结果49例患者共发生肺部感染33例(67.35%),尿路感染10例(20.41%),手术切口感染4例(8.16%),移植物感染2例(4.08%);感染病原以革兰阳性菌为主,共25株,占51.02%,革兰阴性菌共22株,占44.90%,真菌2株,占4.08%;感染组yap、taz、mst1基因相对表达水平和IL-17、IL-23水平高于非感染组(P<0.05)。结论腹主动脉瘤EVAR术后医院感染以肺部感染、尿路感染为主,应及时予以针对性预防;Hippo通路参与了感染发生过程,通过Th17促炎途径诱导炎症反应,其机制仍有待研究。     

TLRs信号通路和炎症因子的表达与反复呼吸道感染的关系分析

目的 研究Toll样受体(TLRs)信号通路和炎症因子的表达与反复呼吸道感染的关系,为临床治疗提供监测靶点.方法 将汕头市龙湖区第二人民医院儿科2019年1-12月门诊收治的150例反复呼吸道感染患儿纳入研究,记作病例组,另取同期于本院进行体检的健康儿童150例作为对照组.比较病变组和对照组儿童TLRs信号通路和炎症相...     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

脑梗死合并肺部感染患者TNF-α、HMGBl、TLR4-NF-κB信号通路改变研究

目的探究脑梗死合并肺部感染患者的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和高迁移率族蛋白Bl(High mobility group protein Bl,HMGBl)水平及其临床价值研究。方法2018年1月-2019年2月儋州市人民医院收治的急性脑梗死患者作为研究对象,其中急性脑梗死合并肺部感染患者30例作为感染组,急性脑梗死无肺部感染患者80例作为非感染组,选择同期于此医院体检的健康者30名作为对照组。采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测血清HMGB1和细胞因子IL-6、TNF-α水平,采用Western Blot法检测血清Toll样家族受体-4(Toll like receptor-4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)表达水平。结果感染组的血清HMGB1、TLR4、NF-κB、MyD88表达及细胞因子IL-6、TNF-α水平均高于非感染组和对照组(P<0.05);感染组患者大梗死灶、中等梗死灶、小梗死灶各指标总体水平差异具有统计学意义(P<0.05)。大梗死灶、中等梗死灶两亚组患者的血清HMGB1、TLR4、NF-κB、MyD88表达及细胞因子IL-6、TNF-α水平均高于小梗死灶亚组(P<0.05);急性脑梗死合并肺部感染患者的血清HMGB1和TNF-α水平呈正相关(r=0.523,P<0.001)。结论脑梗死合并肺部感染患者伴随TNF-α、HMGBl、TLR4-NF-κB信号通路的明显改变,且与梗死灶大小具有相关性,其机制有待进一步研究。     

三氧化二砷诱导子宫内膜癌细胞凋亡的研究

目的 在体外实验中，探讨三氧化二砷（As2O3）诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法 采用TUNEL染色法，定性、定量地研究As2O3与子宫内膜癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 As2O3在体外能诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡，下调bcl-2的表达，增强bax的表达。结论 诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡是As2O3抗子官内膜癌作用的机制之一，As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡。     

全氟辛烷磺酸盐通过线粒体途径诱导N9细胞凋亡

目的 以小胶质细胞株(N9)作为靶细胞,观察全氟辛烷磺酸盐(PFOS)通过线粒体途径诱发N9细胞凋亡效应。方法 设定5、10、50、100、200 μmol/L PFOS染毒组及对照组。PFOS染毒24 h后流式细胞术分析凋亡细胞率,罗丹明123检测线粒体膜电位,荧光定量PCR检测染毒24 h后凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达。结果 与对照组(2.24%)比较,50、100、200 μmol/L PFOS组细胞凋亡率(分别为20.81%、33.26%、48.72%)均增加(P<0.05);PFOS染毒降低了线粒体膜电位,200 μmol/L组细胞出现明显核周小斑点状荧光;此外,随剂量增加,PFOS染毒组p53、Bax、caspase-3和caspase-9基因表达水平呈上升趋势,Bcl-2表达水平呈下降趋势,但未见浓度依赖性。结论 PFOS暴露可破坏神经小胶质细胞自稳态,破坏线粒体,影响凋亡相关基因表达,诱导神经细胞凋亡。