金匮肾气丸调控FNDC5、BMP2对BMSCs成骨分化的作用

目的研究金匮肾气丸通过调控FNDC5、BMP2基因对BMSCs成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,分别用大鼠空白血清和高、低剂量金匮肾气丸干预BMSCs成骨分化过程。采用CCK8检测金匮肾气丸对BMSCs的增殖、毒性作用;AKP活性检测细胞上清成骨分化活性;ALP染色检测细胞成骨分化能力;反转录-实时荧光定量技术(RT-q PCR)检测FNDC5、BMP2 mRNA表达;Western-blotting检测FNDC5、BMP2蛋白表达。结果 CCK8结果示,从第1天到第7天,各组细胞增殖整体呈上升趋势,7天后各组细胞增殖呈下降趋势,且各组增殖(OD值)无统计学差异。含药血清干预BMSCs 3天时,SG组AKP活性明显高于CON(P0.01),SD组与CON组差异虽无统计学意义,但高于CON组;7天时,SG和SD两组AKP活性均高于CON组(P0.05);ALP染色结果示:SG组和SD组ALP染色阳性率均高于CON组,而SG组ALP染色率高于SD组。干预3天时,SD组FNDC5 mRNA表达较CON、SG组显著上调(P0.05);7天时,SD、SG组FNDC5mRNA表达均较CON组显著上调(P0.05),SD组高于SG组(P0.05)。3、7天时SG、SD组BMP2 mRNA表达均较CON组显著上调(P0.01)。干预第3、7天时,SG、SD组FNDC5、BMP2蛋白水平均明显高于CON组(P0.05)。结论金匮肾气丸含药血清可能通过上调FNDC5、BMP2基因水平来促进BMSCs成骨增殖、分化。     

辛伐他汀经p38 MAPKMAPK信号通路调控BMSCs中晚期成骨分化的研究

目的探讨在成骨诱导环境下,辛伐他汀对BMSCs成骨分化中晚期的作用和对p 38 MAPK信号通路的影响。方法取20只雌性SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓,全骨髓培养法分离培养BMSCs并传代,取第2代细胞进行实验。实验分为5组,对照组(CM组):完全培养基培养;辛伐他汀组(SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀的完全培养基培养;成骨诱导培养基组(OM组):含10 mmol/Lβ甘油磷酸钠和50μg/m L抗坏血酸的成骨诱导培养基培养;辛伐他汀和成骨诱导培养基组(OM+SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养;阻断剂组(OM+SIM+SB组):先用p 38 MAPK信号通路阻断剂SB 203580干预30 min后,再采用含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养。MTT法检测CM组和SIM组细胞活性;ELISA法检测OM组及OM+SIM组培养7、14 d细胞ALP含量。应用实时定量PCR和Western blot方法检测OM组和OM+SIM组第21、28天开始成骨诱导培养1、12、24 h后,骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白和m RNA表达水平,从而确定辛伐他汀作用最佳时间点,随后检测该时间点OM组、OM+SIM组和OM+SIM+SB组p 38、磷酸化p 38(phospho-p 38,p-p 38)蛋白表达,计算p-p 38/p 38。结果 MTT检测示各时间点,SIM组与CM组吸光度(A)值比较差异无统计学意义(P0.05),提示辛伐他汀对BMSCs活性和增殖能力无明显影响。与OM组相比,OM+SIM组7、14 d ALP含量均明显增高,且两组组内7 d ALP含量均高于14 d,差异均有统计学意义(P0.05)。实时定量PCR及Western blot检测示,第21、28天开始成骨诱导培养后,各组OCN m RNA及蛋白在12 h时表达量高于其他时间点(P0.05),且OM+SIM组明显高于OM组(P0.05);确定辛伐他汀诱导成骨干预的最佳起效时间为12 h。阻断剂干预后,12 h时OM+SIM+SB组p-p 38/p 38明显低于其他两组(P0.05),OM+SIM组高于OM组(P0.05)。结论辛伐他汀的最佳起效时间为给药后12 h,其可以提高BMSCs成骨分化中晚期OCN蛋白、m RNA和p-p 38蛋白表达量。     

Hedgehog信号通路调控骨形成及BMSCs成骨分化的研究进展

目的综述Hedgehog信号通路对骨形成及BMSCs成骨分化的调控及其分子机制。方法查阅近年来Hedgehog通路在体内、体外及离体研究中对骨形成及BMSCs成骨分化调控的相关文献,并对其作用机制进行分析总结。结果 Hedgehog信号通路在体外研究中可通过激活下游关键分子Smoothened(Smo)及Gli1促进BMSCs成骨分化,并可通过IGF激活m TORC2-Akt信号产生类似作用;Hedgehog信号特殊结构鞭毛内运输蛋白80通过激活经典Hh-Smo-Ptch1-Gli信号、抑制非经典Hh-Gαi-Rho A应力纤维信号,调节成骨细胞的分化;应用新型Hedgehog信号激动剂Oxy133可激活Hedgehog信号。Hedgehog信号还可协同BMP及Wnt信号通路调控成骨关键分子Runx2促进细胞的成骨分化和基质矿化,并在体内研究及骨移植模型中促进骨形成及骨缺损修复愈合。结论 Hedgehog信号通路通过对自身或对其他信号及关键分子的调节对骨形成及BMSCs成骨分化进行调控,对Hedgehog信号进行靶向调控或可作为治疗某些骨相关疾病(如骨质疏松症和骨折愈合)的潜在研究方向及新靶点。     

微小RNA-424-3p和5p对人前列腺癌细胞LNCaP增殖和迁移影响的比较

目的观察微小RNA-424-3p和5p在LNCaP中的表达,并比较其对LNCaP生物学行为的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测miR-424-3p和5p的表达量。利用细胞计数盒,平板克隆试验,Transwell小室,流式细胞仪检测LNCaP的增殖、迁移及细胞周期变化。结果 miR-424-3p和5p在LNCaP中的表达量高于RWPE-1;miR.-424-3p和5p下调后,LNCaP的增殖、迁移受到抑制,早期凋亡细胞比例增加,S期细胞比例增加。结论miR-424-3p和5p在LNCaP中高表达且5p升高更为显著,但比较两者对LNCaP生物学行为影响的大小,差异无统计学意义(P0.05),提示miR-3p和5p对肿瘤细胞的生物学行为影响大小与其丰度并不一定成正比例关系。     

微小RNA-376b-3p和微小RNA-654-5p在大肠癌中的表达及临床意义

目的:本研究旨在探讨微小RNA(miR)-376b-3p和miR-654-5p在大肠癌中的表达水平及其临床意义。方法:荧光定量PCR检测34组来自2018年6月至2019年1月淮安市肿瘤医院大肠癌及癌旁组织中miR-376b-3p和miR-654-5p的表达。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-376b-3...     

BMP-2活性多肽体外定向诱导大鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

[目的]骨形成蛋白-2（BMP-2）具有较强的诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP-2数量有限，结构复杂，限制了其广泛应用。本实验设计合成了BMP-2活性多肽，体外试验探讨其对BMSCs向成骨方向定向诱导成骨分化的能力，评价BMP-2活性多肽的诱导成骨效应。[方法]实验分2组，诱导组和非诱导组。取4周的Wistar大鼠分离培养BMSCs，传至第3代时，实验组，改用成骨诱导培养基（DMEM完全培养基＋BMP-2活性多肽200μg／ml）。非诱导组，仍采用DMEM完全培养基。继续培养2～4周，采用细胞爬片培养、碱性磷酸酶活性和钙含量测定、实时定量PCR检测Ⅰ型胶原（Col—Ⅰ）及骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达，评价BMP-2活性多肽的体外诱导成骨能力。[结果]诱导组BMSCs生长良好，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，ALP活性上升，钙含量增加，Col-Ⅰ和OPN的mRNA呈高表达。非诱导组，成骨特性不明显。[结论]合成的BMP-2活性多肽能有效地促进BMSCs向成骨方向分化，是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子。具有与天然BMP-2类似的骨诱导活性，具有广阔的应用前景。     

miR-187-5p 对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用

目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-187-5p在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法通过切除雌性小鼠双侧卵巢构建小鼠骨质疏松模型;应用qRT-PCR技术检测组织和细胞中miR-187-5p的表达;应用基因转染技术观察过表达或敲减miR-187-5p对BMSCs向成骨分化的影响;应用茜素红和碱性磷酸酶染色检测BMSCs中矿化结节的数量和矿化区域的染色面积。结果 qRT-PCR结果显示miR-187-5p在骨质疏松模型小鼠的骨组织及BMSCs中均表达下降。过表达miR-187-5p可提高ALP、Collagen-1、Runx2、BMP4、OCN和OPN等成骨分化相关基因mRNA的表达,促进BMSCs向成骨分化;而敲减miR-187-5p降低ALP等成骨分化相关基因mRNA的表达,抑制BMSCs向成骨分化。在体实验同样证实,过表达miR-187-5p可以显著促进骨质疏松小鼠BMSCs向成骨分化,改善小鼠的骨质疏松表型。结论过表达miR-187-5p促进BMSCs向成骨分化,敲减miR-187-5p抑制BMSCs向成骨分化。     

人脐带间充质干细胞体外成骨分化对骨折局部BMP-2表达的影响

[目的]探讨体外不同程度诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)成骨分化对大鼠股骨骨折局部骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)表达的影响。[方法](1)选用120只成年Wistar大鼠制作股骨不全骨折模型,随机分为A、B、C、D、E、F六组;(2)利用组织块贴壁法分离培养h UC-MSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,给予体外成骨分化诱导,采用茜素红S染色鉴定,将未诱导和诱导3、7、11、15 d的h UC-MSCs分别注入A、B、C、D、E组实验动物骨折处,F组注射生理盐水作为空白对照组,于移植后1、2、3、4周分别切取标本,采用免疫组化显示BMP-2并行统计学分析。同时检测实验大鼠血常规。[结果]h UC-MSCs成骨诱导3周时细胞内出现大量钙结节。细胞移植各组BMP-2表达在第1、2、3、4周时均明显强于空白对照组。A、B、C、D、E各组BMP-2表达在第1周和第4周时没有显著性差异,在第2、3周时B、C两组显著强于A、D、E三组。BMP-2表达在第2周时出现最高峰,之后下降,在第4周时仅少量表达。六组之间血常规差异无统计学意义。[结论]h UC-MSCs具有较好的免疫相容性,移植前体外诱导h UCMSCs成骨分化能提高骨折愈合早期BMP-2的表达,诱导3、7 d效果最佳。     

微小RNA-23a-3p负调控Runx2基因抑制骨髓间充质干细胞成骨分化诱导绝经后骨质疏松的研究

目的:观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法:绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例,检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs,将miR-23a-3p inhibitor和miR-阴...     

不同状态BMP-2对体外EMSCs成骨分化的作用

[目的]探讨骨形成蛋白(BMP-2)与组织型谷氨酰胺转氨酶(tTG, TG2)交联形成固化型和BMP-2游离型细胞生长因子,两种不同状态的BMP-2对鼻粘膜间充质干细胞(EMSCs)向成骨细胞分化的影响;[方法]体外培养、扩增并鉴定EMSCs;实验分四组:TG2+BMP-2、BMP-2、TG2和空白对照;四组细胞均采用定向成骨诱导培养基培养7 d;检测各组碱性磷酸酶活性及形成的钙结节面积大小;免疫印迹法检测成骨诱导相关蛋白表达水平;MTT法检测TG2、BMP-2和TG2+BMP-2对EMSCs增殖的影响。[结果]成骨诱导7 d后,TG2+BMP-2组细胞碱性磷酸酶活性较高,形成的钙结节较大,骨相关蛋白表达水平较高;TG2+BMP-2,TG2和BMP-2对EMSCs增殖能力无明显影响。[结论] TG2+BMP-2交联固化型细胞生长因子对EMSCs向成骨细胞分化表现出较强的促进作用,是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子,具有广阔的应用前景。     

LncRNA DANCR靶向调控对绝经后骨质疏松BMSCs成骨分化的作用

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）分化非蛋白编码 RNA（DANCR）靶向微小RNA（miR）-19a-3p对绝经后骨质疏松（PMOP）骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的调控作用。方法 选择健康女性志愿者4例和PMOP患者4例,分离培养BMSCs;PMOP患者BMSCs进行分组,转染阴性对照（NC）siRNA、lncRNA DANCR siRNA、miR-NC抑制物、miR-19a-3p抑制物。检测lncRNA DANCR、miR-19a-3p、PTEN的表达水平,成骨诱导分化后检测茜素红染色的OD405水平、碱性磷酸酶（ALP）活力、骨钙素（OCN）及骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达水平。结果 PMOP患者BMSCs中lncRNA DANCR、PTEN的表达水平高于健康女性,miR-19a-3p的表达水平及成骨诱导后的OD405水平、ALP活力、OCN及OPN的表达水平均低于健康女性。在PMOP患者BMSCs中,si-DANCR组的lncRNA DANCR、PTEN的表达水平低于si-NC组,成骨诱导后的OD405水平、ALP活力及miR-19a-3p、OCN、OPN的表达水平高于si-NC组;si-DANCR+miR-19a-3p抑制物组成骨诱导后的OD405水平、ALP活力及miR-19a-3p、OCN、OPN的表达水平低于si-DANCR+miR-NC抑制物组,PTEN的表达水平高于si-DANCR+miR-NC抑制物组。结论 LncRNA DANCR靶向miR-19a-3p调控PMOP患者BMSCs的成骨分化。     

FBS对成骨生长肽促进BMSCs增殖分化的影响

目的探讨培养液中不同浓度FBS对成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)促进BMSCs增殖和分化的影响。方法取8只5周龄SD大鼠四肢骨,贴壁法分离纯化BMSCs并传代,倒置相差显微镜下观察细胞形态。取第3代BMSCs分组培养:分别采用浓度为1×10-10、1×10-9和1×10-8 mol/L的OGP进行培养,以正常培养细胞作为对照组;同时每组设FBS浓度为0、2%、5%、8%和10%5个梯度。培养后1、3、5、7、9、12 d采用MTT法检测细胞增殖,9 d时采用对硝基苯磷酸二钠法测定早期分化指标细胞内ALP活性。结果倒置相差显微镜下观察BMSCs贴壁生长,增殖迅速,呈纤维状涡旋生长,形态典型。MTT检测示,FBS低于5%时各组细胞不能持续增殖,当FBS浓度为8%以上时细胞可持续增殖;OGP 1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L组在FBS各浓度中促增殖效果均大于对照组(P0.05);FBS浓度低于10%时,OGP 1×10-8 mol/L组促增殖效果显著优于其余OGP浓度组(P0.05),但FBS浓度为10%时OGP 1×10-8 mol/L组无促增殖优势。ALP检测示,各组组内随FBS浓度增加,ALP活性增加(P0.05);当FBS浓度为5%、8%时,各OGP浓度组ALP活性均大于对照组(P0.05),且OGP 1×10-8 mol/L组最高(P0.05);当FBS浓度为10%时,各OGP组ALP活性仍大于对照组(P0.05),但OGP1×10-8 mol/L组与OGP 1×10-9 mol/L组差异无统计学意义(P0.05)。结论 8%FBS浓度为OGP促进BMSCs增殖分化的最佳血清浓度,且OGP促进BMSCs增殖分化的最适浓度为1×10-8 mol/L。     

组织界面刚度变化对大鼠BMSCs成骨分化的影响

目的探讨组织界面刚度变化对大鼠BMSCs铺展、增殖和成骨分化的影响,寻找适合其成骨分化的刚度范围。方法取4周龄SPF级雄性SD大鼠骨髓,采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs并鉴定。取第3代BMSCs,按1×10~5个/mL密度接种于覆盖弹性模量分别为1、4、10、40、80 kPa聚丙烯酰胺水凝胶(polyacrylamide hydrophilic gel,PA)的普通培养皿(细胞接种于PA基底上),普通培养皿(弹性模量75 MPa)作为对照,光镜下观察细胞在不同刚度PA上的铺展状态。选取4、10和40 kPa PA覆盖作为研究对象(分别为A、B、C组),以普通培养皿为对照组(D组),细胞计数检测BMSCs生长情况,ALP试剂盒检测BMSCs的ALP浓度,茜素红染色法检测BMSCs的钙沉积状况,实时荧光定量PCR检测BMSCs的骨钙素(bone gla protein,BGP)、Runx2、Ⅰ型胶原mRNA表达。结果随着PA刚度的提升,BMSCs铺展面积增加,尤其在10、40 kPa PA上铺展较好。生长曲线示,培养1、2 d各组间细胞增殖情况差异无统计学意义(P0.05),3~5 dB、C组增殖情况明显优于A、D组(P0.05),5 d时C组显著高于B组(P0.05)。A、B、C、D组ALP浓度分别为(53.69±0.89)、(97.30±1.57)、(126.60±14.54)、(12.93±0.58)U/gprot,A、B、C组显著高于D组,C组高于A、B组,差异均有统计学意义(P0.05)。茜素红染色示,C组钙结节百分比为20.07%±4.24%,显著高于A、B、D组,差异有统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测示,A、B、C组BGP、Ⅰ型胶原m RNA相对表达量均高于D组,C组高于A、B组,差异均有统计学意义(P0.05)。B、C组Runx2 mRNA相对表达量高于D组,C组高于B组,差异均有统计学意义(P0.05);A、D组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 10~40 kPa范围的PA能促进大鼠BMSCs增殖及成骨分化,刚度越高,作用越强。     

透明质酸对BMP-2转染的羊BMSCs增殖、分化的影响

目的观察透明质酸（HA）对携带人骨形态发生蛋白-2的腺病毒（Adv-BMP-2）转染的羊骨髓基质干细胞（BMSCs）体外增殖、分化的影响。方法将羊骨髓体外分离、扩增BMSCs,分成5组：转染Adv-BMP-2的BMSCs＋HA组（Ⅰ组）,转染Adv-BMP-2的BMSCs组（2组）,BMSCs＋HA组（3组）,BMSCs组（4组）,转染携带β半乳糖苷酶的腺病毒（Adv-β-gal）的BMSCs组（5组）。采用细胞计数、绘制细胞生长曲线和流式细胞分析观测细胞增殖;采用碱性磷酸酶（ALP）检测以及RT-PCR检测Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、骨连接素（ON）和骨涎蛋白（BSP）的mRNA表达。结果①细胞增殖：3 d后各组细胞增殖无显著差异,1周后第1组和第3组的细胞增殖明显高于其他组。②ALP活性：3 d后第3组ALP活性明显低于第4、5组,而第1、2组则显著高于第4、5组;7 d后前3组ALP活性较后两组均显著增加,而第1、2组ALP活性增加更为显著。③Col-Ⅰ、ON和BSP的mRNA表达：3 d和7 d后前3组较后两组均有不同程度的增多。结论HA与BMSCs体外复合培养后可促进BMSCs的增殖、增加ALP的活性以及Col-Ⅰ、ON和BSP基因的表达。     

辛伐他汀对 BMSCs 成骨分化早期β-catenin 及 Runx2表达的影响

目的：观察辛伐他汀体外给药对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化早期β-catenin、Runx2表达的影响,探讨辛伐他汀在此过程中的作用及其作用机制。方法20只4周龄雌性SD大鼠应用颈椎脱位法处死,无菌条件下取双侧股骨和胫骨骨髓细胞向成骨方向诱导培养。取相同第二代细胞随机分为实验组和对照组,实验组加入10-7 mol/L的辛伐他汀（ Simvastatin, SIM）（SIM溶于DMSO后制成母液再用完全培养基进行稀释）,对照组加入含有等量DMSO的完全培养基。两组细胞在加入SIM 12 h和36 h后分别提取蛋白质和RNA,采用Western Blot法检测两组细胞β-catenin、Runx2蛋白的表达。采用实时定量-PCR法检测β-catenin、Runx2mRNA的表达。结果（1） Western Blot 结果：辛伐他汀干预12h后β-catenin 和Runx2蛋白表达水平实验组与对照组相比无显著增高,两组间的差异均无统计学意义（ P＞0.05）;辛伐他汀干预36h后实验组与对照组相比β-catenin 和Runx2蛋白表达水平显著增高,两组间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）实时定量-PCR结果：辛伐他汀干预12 h和36 h后β-catenin mRNA的表达水平实验组与对照组相比表达增高,两组间的差异有统计学意义（ P＜0.05）;辛伐他汀干预12 h和36 h后Runx2 mRNA的表达水平实验组与对照组相比表达有一定程度的增高,但两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论辛伐他汀体外给药对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化早期有一定作用,这涉及到Wnt信号通路的活化,但是在不同的时间点所起作用有所差别。     

微小RNA-205-5p调控轴抑制蛋白2基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制的临床研究

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法:收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反...     

补肾活血方调控 microRNA-210促进 BMSCs 成骨分化的研究

目的研究补肾活血方促进骨髓间充质干细胞(Bone Mesenehymal Stem Cells,BMSCs)成骨分化的分子机制。方法贴壁培养法分离纯化大鼠BMSCs,将培养成功的BMSCs分为空白组、成骨诱导组和中药组,培养7d、14d行矿化结节茜素红染色(Alizarin Red S,ARS),倒置显微镜观察矿化骨结节形成情况,采用real-time PCR检测miR-210的表达变化。结果与空白组比较,成骨诱导组和中药组BMSCs钙化结节数量明显增多,差异有非常显著的统计学意义(P0.01)。在成骨诱导剂、补肾活血方水提液的作用下,与空白组比较,miR-210表达明显降低,且中药组较成骨诱导组更明显降低miR-210表达。结论补肾活血方通过降低miR-210表达促进BMSCs成骨分化。     

Lnc RNACCAT1通过调控miR-335-3 p对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖、凋亡和成骨分化的影响及可能机制.方法 以成骨诱导液诱导hBMSCs,分别于诱导后0 d和1、3、7、14 d采用RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙...     

辛伐他汀通过p38MAPK信号通路诱导BMSCs成骨分化的研究

目的观察辛伐他汀(SIM)体外单独给药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法取第二代大鼠BMSCs随机分为4组,对照组(CM):完全培养基培养;诱导组(OM):成骨诱导培养基培养;辛伐他汀组(SIM):含终浓度为10-7mol/L的辛伐他汀的完全培养基培养;阻断剂组(SB+SIM):先用p38MAPK通路阻断剂SB203580干预30min后,加入等浓度辛伐他汀。给药4 h后,Western Blot检测p-p38MAPK、p38MAPK蛋白的表达。给药7d后,进行碱性磷酸酶(ALP)染色和比活性测定。给药7、14d后,采用Real-time PCR法检测ALP、Ι型胶原(COLΙ)、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2(Runx2)m RNA的表达。结果 1Western Blot检测:OM组和SIM组p-p38MAPK表达水平显著高于CM组和SB+SIM组(P0.05)。2ALP比活性测定:OM组和SIM组显著高于CM组,与相比,SB+SIM组显著低于SIM组(P0.05)。3ALP染色:OM组和SIM组细胞胞浆内出现棕色颗粒,而SB+SIM组和CM组未见明显阳性染色颗粒。4Real-time PCR检测:在第7d、14d,OM组和SIM组ALP、COLΙ和Runx2 m RNA表达水平均显著高于CM组,SB+SIM组明显低于SIM组(P0.05);第7d,OM组OCN m RNA表达水平明显高于CM组(P0.05);在第14d,OM组和SIM组OCN m RNA表达水平高于CM组,SB+SIM组低于SIM组(P0.05)。结论辛伐他汀可以在缺乏成骨诱导成分的环境下,通过活化p38MAPK信号诱导大鼠BMSCs向成骨细胞分化。     

微小RNA-564基因下调对滑膜间充质干细胞成软骨分化的影响

目的探究下调微小RNA-564(miR-564)基因对滑膜间充质干细胞成软骨分化的作用。 方法取第3代的人滑膜间充质干细胞(SMSCs)作为实验细胞,实验设计为3组：SMSCs空白对照组(空白组);miRNA抑制剂转染SMSCs对照组(对照组);miR-564抑制剂转染SMSCs实验组(实验组)。将3组SMSCs同时成软骨诱导培养,观察诱导后软骨细胞的组织形态,并检测诱导前7 d内的3组细胞增殖曲线,和软骨分化特异性基因和蛋白[Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)、母亲DPP同源物4(Smad4)];本次实验所有数据均采用单因素方差分析(one-way ANOVA)检验。 结果甲苯胺蓝染色观察细胞形态与特点基本符合软骨细胞,实验组细胞数量更多,蓝染更明显;细胞增殖曲线表明实验组细胞增殖速度明显快于对照组(F＝0.842, P <0.01);RT-PCR检测与Western Blotting检测表明实验组软骨细胞分化特异基因和蛋白表达较对照组明显升高(F＝2274.75, F＝447.31, F＝30476.22; P <0.01),并且实验组TGF-BMP关键基因及蛋白Smad 4有所升高(F＝457.02, P <0.01)。 结论下调miR-564基因的表达可促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞增殖与分化,并且有可能是通过作用于TGF-BMP通路实现。