蚊媒感染日本脑炎病毒复合组病毒检测技术研究进展

近年来，日本脑炎病毒复合组病毒感染引起人类疾病的发病率在全球范围呈逐年上升趋势，已成为世界上分布广、发病率高、危害较大的一组虫媒病毒性疾病。检测蚊媒体内此类病毒将对虫媒病的预测和预警、及时采取防范措施具有重要意义。该文就近年来这方面的研究进展作一综述。     

蚊媒病毒研究概况与进展

虫媒病严重危害人类健康,蚊媒病毒性疾病种类多,临床表现复杂且不典型。目前从蚊虫体内分离到的蚊媒病毒已有250余种,本文仅对一些重要的蚊媒病毒的研究作如下综述。     

蚊媒疟原虫感染率检测方法研究进展

对感染疟原虫按蚊的检测方法进行了概述 ,内容涉及原理、使用时的优缺点 ,并简要讨论了其现场应用的前景。     

2021年兰州市蚊类生态学监测及携带乙型脑炎病毒分析

目的 了解2021年甘肃省兰州市蚊类生态学分布及携带乙型脑炎病毒（JEV）情况。方法 采用诱蚊灯法在兰州市各县（区）监测成蚊密度。使用特异性实时荧光PCR方法对采集的蚊虫进行JEV病原学检测。结果 共布灯486次,捕获成蚊1 798只,淡色（致倦）库蚊为优势种、占捕获总数的58.62%;公园蚊密度最高、平均成蚊密度8.95只/（灯·夜）,其次为牲畜棚、平均成蚊密度5.33只/（灯·夜）;蚊密度高峰出现在7—8月;检测100组1 986只雌蚊JEV核酸,均为阴性。结论 兰州市公园和牲畜棚蚊密度较高,但整体蚊密度不高,蚊传流行性乙型脑炎风险较低。     

蚊媒疟原虫感染率检测方法研究进展

对感染疟原虫按蚊的检测方法进行了概述，内容涉及原理、使用时的优缺点，并简要讨论了其现场应用的前景。     

云南景东县乙型脑炎流行状况调查

目的调查云南省景东县流行性乙型脑炎的流行现状。方法媒介蚊虫调查采用诱蚊灯通宵捕蚊方法,蚊虫乙脑病毒检测采取RT-PCR方法,健康人群血清乙脑病毒抗体检测采用ELISA。结果共采集到蚊虫4属15种6653只,其中三带喙库蚊和中华按蚊属于当地的优势种群,分别占总捕获蚊数的82.07%和10.46%。RT-PCR检测三带喙库蚊和中华按蚊共16批1310只,各有1株感染乙脑病毒;ELISA检测当地健康人群血清乙脑病毒抗体阳性率为72.96%,不同年龄组人群乙脑病毒抗体水平差异有统计学意义(χ2=51.589,P0.01)。结论云南景东县蚊虫种类较多,三带喙库蚊和中华按蚊有传播乙型脑炎的作用。     

疟疾蚊媒监测多重PCR方法的建立

目的 建立疟疾消除后高效的蚊媒监测多重PCR方法。方法 设计疟原虫属、人血、中华按蚊和蚊通用4对特异性引物,与通用引物（5′-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3′）连接后,形成4对嵌合特异性引物。常规PCR确定各引物对的最佳退火温度和引物工作浓度,多重PCR优化4对引物混合后的最佳反应条件,引入模拟风险感染阳性蚊虫样品,建立敏感的多重PCR反应体系。检测4种疟疾（间日疟、卵形疟、恶性疟、三日疟）患者全血样品的原虫密度梯度稀释样品的各基因扩增情况,评估检测灵敏度。用溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、田鼠巴贝虫、杜氏利什曼原虫、刚地弓形虫、日本血吸虫尾蚴、卫氏并殖吸虫、蛔虫、牛带绦虫、猪带绦虫等11种其他寄生虫虫体DNA或感染样品评价该方法的检测特异性。用畜圈周围采集的野生中华按蚊样品,评价所建PCR方法的应用效果。结果优化后的多重PCR反应体系各组分含量（体积比）为：DNA模板10%、引物Mix10%、三蒸水30%, Taq酶预混液50%。引物Mix中,蚊通用、按蚊、人血和疟原虫引物的用量配比为1∶1.75∶3∶5。反应体系的最佳循环条件为：95℃5 min; 94℃...     

疟疾及其蚊媒的预测方法研究进展

影响疟疾流行的因素复杂，对疟疾进行有效监测和预测具有重要意义。GIS/RS技术的出现为疟疾的监测和预测提供了新的手段。该文综述了疟疾的监测和预测方法以及GIS/RS技术在当前疟疾监测和预测中的应用现状。     

上海市猪感染流行性乙型脑炎病毒的血清学监测

流行性乙型脑炎 (以下简称乙脑 )是一种人兽共患的急性病毒性传染病 ,猪是乙脑最重要的传染源和乙脑病毒传播的主要宿主 ,在乙脑的流行环节上起重要作用〔1〕。因此 ,对猪感染乙脑病毒时间的血清学监测可反映乙脑病毒在自然界的循环情况 ,预测人群乙脑的流行趋势。猪感染乙脑病毒的情况可通过乙脑抗体阳转时间和乙脑抗体阳转率来反映。上海市分别在 1975年 4～ 10月、1985年 6月～ 1986年 8月和 1987年 6～ 12月对猪感染乙脑作了血清学监测。间断十几年后 ,我们于 1999年 4～11月对上海市猪感染乙脑的情况进行血清学监测 ,以了解目前乙脑病…     

丝虫蚊媒监测技术研究的进展

丝虫病严重危害人类健康。据ＷＨＯ最新估计 ,全球有淋巴丝虫感染者 1. 2亿[1] 。 1997年世界卫生大会通过“消灭作为公共卫生问题的淋巴丝虫病”的决议。ＷＨＯ要求到 2 0 2 0年全球淋巴丝虫病流行区人群微丝蚴或幼虫抗原血症率降至低于1‰ ,90 %淋巴肿患者得到照料和治疗[2 ] 。我国经过近 4 0余年的丝虫病防治工作取得了举世瞩目的成就[3 ] ,目前我国丝虫病防治工作已进入后期监测巩固阶段。检查蚊体内幼丝虫 ,确定其感染率和感染度 ,从而了解丝虫病传播强度和动态。评价丝虫病防治效果 ,是流行病学中非常重要的研究内容之一。长期以来 ,…     

新疆地区虫媒病毒调查研究状况

近年来新疆陆续发现的一些新的虫媒病毒与虫媒病毒病对当地人畜健康造成一定危害.新疆地理生态环境的复杂多样性为多种虫媒病毒的传播提供了有利条件,虫媒病毒在新疆分布广泛,存在地域差异性.随着分子流行病学的发展,基于核酸分子和细胞培养检测技术方法从新疆的多种昆虫媒介和宿主动物中鉴定并分离得到分属于黄病毒科,披膜病毒科,呼肠孤病毒科和布尼亚病毒科的多种病毒,部分病毒属在新疆系首次发现.本文对新疆多个地区近年来已报道的虫媒病毒在宿主中的检测和感染人畜引起的疾病的情况进行了汇总整理,有利于对新疆各地虫媒病毒的流行病学进行深入的调查与研究.     

A decade of Japanese encephalitis surveillance in Sarawak, Malaysia: 1997-2006

Japanese encephalitis virus (JEV) is an important encephalitis virus in Asia, but there are few data on Malaysia. A hospital-based surveillance system for Japanese encephalitis (JE) has been in operation in Sarawak, Malaysia, for the last 10 years. JEV is endemic in Sarawak, with cases occurring throughout the year and a seasonal peak in the last quarter (one-way anova , P  < 0.0001). Ninety-two per cent of 133 cases were children aged 12 years or younger; the introduction of JE vaccination in July 2001 reduced the number of JE cases (84 in the four seasons prior to vs. 49 in the six seasons after, McNemar's test, P  = 0.0001). After implementation of the programme, the mean age of infected children increased from 6.3 to 8.0 years (Student's t -test, P  = 0.0037), suggesting the need for a catch-up programme.     

Desiccated vector mosquitoes used for the surveillance of Japanese encephalitis virus activity in endemic southern India

To monitor Japanese encephalitis virus (JEV) activity in endemic areas of Tamil Nadu, southern India, desiccated vector mosquitoes were screened for JEV antigen using ELISA, from 1996. A total of 133 233 specimens from eight index villages comprising 2816 pools (mainly Culex vishnui subgroup) were tested. Of these, 59 pools (2.1%) were positive for JEV antigen. Control measures were undertaken in positive villages accordingly. The average annual minimum infection rate was 0.8 at the beginning of the study and remained lower for nearly 8 years. A declining trend in JE cases was recorded.     

Impact of COVID-19 Mitigation Measures on Mosquito-Borne Diseases in 2020 in Queensland,Australia

We describe the impact of COVID-19 mitigation measures on mosquito-borne diseases in Queensland, Australia, during the first half of 2020. Implementation of restrictions coincided with an atypical late season outbreak of Ross River virus (RRV) characterized by a peak in notifications in April (1173) and May (955) which were greater than 3-fold the mean observed for the previous four years. We propose that limitations on human movement likely resulted in the majority of RRV infections being acquired at or near the place of residence, and that an increase in outdoor activities, such as gardening and bushwalking in the local household vicinity, increased risk of exposure to RRV-infected mosquitoes. In contrast, the precipitous decline in international passenger flights led to a reduction in the number of imported dengue and malaria cases of over 70% and 60%, respectively, compared with the previous five years. This substantial reduction in flights also reduced a risk pathway for importation of exotic mosquitoes, but the risk posed by importation via sea cargo was not affected. Overall, the emergence of COVID-19 has had a varied impact on mosquito-borne disease epidemiology in Queensland, but the need for mosquito surveillance and control, together with encouragement of personal protective measures, remains unchanged.     

云南楚雄2014年蚊媒及其病毒感染调查

目的了解云南楚雄元谋、武定和双柏3县蚊虫及其主要虫媒病毒种类,为制定出有效的虫媒传染病防控对策提供依据。方法2014年6-7月采用诱蚊灯在调查点通宵捕捉蚊虫,对现场采集蚊虫进行形态分类鉴定;采用C6/36细胞培养法和RT-PCR扩增目的基因片段对蚊虫体内病毒进行分离、鉴定。结果共捕获4属15种12 384只蚊虫,三带喙库蚊、中华按蚊、致倦库蚊和微小按蚊分别占捕获蚊虫总数的59.95%、19.31%、10.90%和 4.13%;C6/36细胞培养处理116组蚊虫,其中29组发生细胞病变,经基因鉴定为版纳病毒(BAV)、Totivirus 病毒(TOV)、乙型脑炎病毒(JEV)和Nam Dinh病毒(NDiV)4种,其中,三带喙库蚊的JEV、BAV、TOV和NDiV基因扩增批阳性率分别为1.87%、11.32%、3.77%和9.43%;希氏库蚊的NDiV基因扩增批阳性率为25.00%;致倦库蚊和中华按蚊的BAV、NDiV批阳性率分别为20.00%、33.34% 和5.00%、7.50%。结论楚雄地区蚊虫种类多,且以三带喙库蚊和中华按蚊为优势蚊种,从两种蚊虫标本中能分离到JEV、TOV、BAV和NDiV病毒,表明调查地区发生乙脑及其它虫媒病毒性疾病流行的危险较大。     

1949-2018年石家庄市流行性乙型脑炎发病趋势分析

目的 分析流行性乙型脑炎(简称乙脑)流行特征的长期趋势。方法 对石家庄市疫情资料汇编((1949-2018年)、国家传染病报告信息管理系统(2004-2018年)与急性脑炎脑膜炎监测合作项目(2007-2018年)中的乙脑资料,采用年度变化百分比(annual percent change,APC)和圆形分布定量评估乙脑疫情变化特征。结果 1949-2018年,石家庄市累计报告乙脑病例5 884例,病死率为19.02%。职业中,农民占51.16%。2001-2018年,流动人口病例占40.85%。年发病率范围为0.03/10万~72.43/10万,年均发病率1.72/10万,APC为-2.57(t=6.38,P<0.001)。1949-1993年的1~14岁病例占62.59%,而2016-2018年的50岁及以上病例占76.56%。每20年左右出现一次明显的流行高峰。病例主要集中在7-9月份。1949-1999年的发病高峰为8月24日(8月1日-9月17日)(z=4712.17,P<0.001),2000-2018年的发病高峰为8月6日(7月18日~10月25日)(z=146.10,P<0.001),两阶段的发病高峰期差异具有统计学意义(t=2.03,P<0.05)。结论 石家庄市乙脑疫情明显下降,高发人群年龄呈上升趋势,流动人口成为新的易感人群,严格的季节性发病高峰特征有所减弱,高峰日提前,高峰期间增宽。     

新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地调查

目的 调查新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒。方法 通过家畜体表捡法采集寄生蜱;利用间接免疫荧光法检测当地健康人群血清中蜱传脑炎病毒IgG抗体;通过将蜱研磨液接种实验小鼠进行病原动物分离;通过接种BHK-21细胞对蜱传脑炎病毒进行分离培养;利用RT-PCR方法对病毒E蛋白基因片段进行扩增和测序,通过序列分析明确病毒系统进化特征。结果 新疆阿勒泰山地白哈巴地区分布有2种蜱,森林革蜱为优势种(55.6%),其次为边缘革蜱(44.4%);当地人群蜱传脑炎IgG抗体阳性率5.31%(6/113);通过动物试验和细胞分离培养,从森林革蜱中分离出一株森林脑炎病毒;对病毒E蛋白基因序列的系统进化分析表明,蜱传脑炎病毒阿勒泰分离株属于远东亚型。结论 首次从病原学上证实新疆阿勒泰山地存在蜱传脑炎疫源地,媒介为森林革蜱,病毒流行株为远东亚型。     

从云南省宾川县蝙蝠体内分离到乙型脑炎病毒

１９９１年９月，从捕自云南省宾川县的１３２只双色帝蝙蝠和棕果蝙蝠体内分离到４株病毒。经电镜观察、血凝抑制试验和单克隆抗体免疫荧光试验证实为乙型脑炎病毒。结果表明蝙蝠在乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用。     

三带喙库蚊胸腔接种乙型脑炎减毒活疫苗病毒的感染动态及致病力观察

目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SA14-14-2株,了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性,进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群,用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊虫,研磨制成悬液,用空斑试验检测蚊虫体内的病毒滴度。用感染蚊悬液接种乳鼠和感染蚊虫直接叮咬乳鼠的方法,观察对乳鼠的致病性。结果SA14-14-2、SA14和中山株病毒感染蚊虫后,第2~20d蚊虫体内均能检测到病毒,其中SA14-14-2株的滴度为2~3.72 logPFU/ml,SA14株为3~4.85 logPFU/ml,中山株为3~5.40 log-PFU/ml。中山株的感染滴度最高,其次是SA14株,SA14-14-2株的感染滴度最低,表明蚊虫对野毒株(中山株和SA14株)更为敏感。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊悬液接种乳鼠,未能引起乳鼠发病或死亡。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊叮咬乳鼠,未见乳鼠发病或死亡,也未从小白鼠血清中检测到乙脑病毒抗体。结论经胸腔接种,SA14-14-2病毒能在三带喙库蚊体内稳定繁殖。动物接种和蚊虫叮咬试验表明,经蚊体内繁殖的SA14-14-2病毒毒力仍保持原有的弱毒特性,表明该减毒活疫苗通过蚊虫体内繁殖后不会造成传播。     

中国首次分离的二株基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒全基因组序列分析

目的 分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法 设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年分离自云南蚊虫的M28和BN82215病毒株基因组全长分别为10 969 bp和10 970 bp,5′非编码区均含有96个核苷酸,3′非编码区含有573和574个核苷酸。它们的开放阅读框(ORF)都从97到10 396位,共10 299个核苷酸,编码3 433个氨基酸。M28和BN82215株与来自GenBank的5个基因型JEV株的全基因组核苷酸和氨基酸同源性分别为78.4％～96.3％和91.4％～99.6％,与近几年国内外基因Ⅰ型流行株的同源性最高,进化关系最接近,都属于基因Ⅰ型。这两株病毒与JEV疫苗株SA14-14-2相比,有56个氨基酸差异,其中E基因有11个氨基酸差异,但都不属抗原关键位点。结论 本研究阐明了中国首次分离的基因Ⅰ型JEV的全基因组分子特征,决定病毒抗原和毒力的E蛋白关键位点无明显变化。证实20世纪70和80年代云南省就有基因Ⅰ型JEV流行。