龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究

目的 探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制.方法 将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(...     

龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用

目的 研究龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。方法 体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第二代后分5组培养:正常组、地塞米松（10-8mol/L）组、骨化三醇含药血清组、龟鹿二仙胶含药血清低剂量组、龟鹿二仙胶含药血清高剂量组。MTT法检测骨髓间充质干细胞活力,检测细胞上清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、炎症因子白介素-6（IL-6）、小鼠白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。采用Western blot检测Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路蛋白表达。结果 龟鹿二仙胶能显著提高细胞活力,增加SOD水平、降低MDA水平、降低炎症因子水平,增加蛋白Nrf-2、HO-1蛋白表达水平,降低NF-κB信号蛋白表达。结论 龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤有保护作用,且作用与调控Nrf-2/HO-1/NF-κB信号相关。      

龟鹿二仙胶汤治疗膝骨性关节炎的临床研究

观察龟鹿二仙胶汤对膝骨性关节炎的临床疗效.选择符合中西医诊断标准的临床患者120例,按就诊顺序随机分为2组,以龟鹿二仙胶汤和壮骨关节丸对照治疗.结果治疗组总有效率为98.3%,对照组为88.3%,治疗组的疼痛缓解、活动范围、步行能力、日常动作等指标明显优于对照组,2组比较有显著性差异（P＜0.01）.说明龟鹿二仙胶汤能有效的改善膝骨性关节炎的临床症状.     

加味龟鹿二仙汤对乳腺癌患者化疗骨髓毒性的影响*

目的：观察加味龟鹿二仙汤对乳腺癌化疗骨髓毒性的影响。方法：将96例乳腺癌患者分为两组,治疗组（n=49）化疗同期服用加味龟鹿二仙汤,对照组（n=47）化疗同期服用鲨肝醇。连续6个疗程,比较化疗前后两组患者重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）使用率、毒副反应。结果：治疗组较对照组G-CSF使用率低（P<005）;治疗组白细胞、中性粒细胞、血红蛋白、血小板下降程度轻,恢复快,单个核细胞对乳腺癌细胞杀伤活性增强。结论：化疗联合使用加味龟鹿二仙汤不仅可以减少升白药物使用频率,同时有效减轻化疗所致的骨髓毒性,提高患者的免疫力。     

当归补血汤对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响及作用机制

目的 研究当归补血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响及其作用机制.方法 以不同生药浓度的当归补血汤作用于小鼠BMSCs,MTr法检测其对BMSCs增殖的作用,流式细胞仪检测其对BMSCs细胞周期与细胞凋亡的影响;RT-PCR及ELISA方法探讨BMSCs的增殖机制.结果 当归补血汤质量浓度为0.5、1.0 mg/mL作用于BMSCs 24 h、48 h后,可明显促进BMSCs细胞增殖;作用48 h后可明显降低BMSCs细胞的G0/G1期,升高S期,抑制细胞凋亡;质量浓度为0.5、1.0 mg/mL的当归补血汤能促进EPO基因表达量升高;质量浓度为1.0 mg/mL时EPO含量相对空白对照组明显升高.结论 当归补血汤具有促进BMSCs增殖的作用,其增殖机制可能与影响细胞周期、抑制细胞凋亡、促进EPO基因的表达以及蛋白分泌有关.     

补阳还五汤对神经干细胞缺氧性损伤保护作用的实验研究

目的：观察补阳还五汤载药血清对神经干细胞缺氧性损伤的保护作用。方法：从孕11.5d（E11.5d）大鼠获得神经干细胞,经无血清培养基悬浮培养并传代,对所获细胞的自我增殖、自我更新及其多分化潜能进行检测。取传3代神经干细胞,添加不同浓度的药物血清,在5%O2三气培养箱中培养120h。通过MTT法检测神经干细胞的增殖情况。用兔抗人神经元特异性烯醇化酶（NSE）和兔抗人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学染色观察神经干细胞的分化情况。结果：药物血清组神经干细胞MTT检测的OD值显著增高,NSE和GFAP阳性细胞的比例明显升高。结论：补阳还五汤药物血清对神经干细胞缺氧性损伤具有明显的保护作用,并可促进缺氧性神经干细胞的分化。     

龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老作用研究

【目的】探讨龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老的作用及机制。【方法】以秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）为模型生物,观察不同浓度龟鹿二仙胶（0.5、2.5、5.0 mg/mL）对线虫健康寿命、行动力、生殖能力、吞咽频率、应激能力和体内活性氧自由基（ROS）、脂褐质水平及抗氧化酶活性的影响。【结果】龟鹿二仙胶能显著提高线虫行动能力、吞咽能力,延长其平均寿命,并对氧化损伤有显著改善作用。此外,不同浓度的龟鹿二仙胶均能显著提高线虫体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH）活性,降低机体内丙二醛（MDA）含量和脂褐质的堆积水平。【结论】龟鹿二仙胶可能是通过减缓细胞氧化损伤,进而起到延长秀丽隐杆线虫寿命的作用。     

痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响

目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定。鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5%、10%、15%、20%)和空白血清处理软骨细胞(5×10³个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验。用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称“含药血清组”)。干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测...     

正交试验优选加味龟鹿二仙膏提取工艺研究

目的：优选加味龟鹿二仙膏的最佳提取工艺。方法：以浸膏得率和松果菊苷为评价指标,采用L9（33）正交表优选加味龟鹿二仙膏的制备工艺。结果：最佳工艺为15倍量的水煎煮3次,每次2 h。结论：优选的工艺设计合理,符合实际生产,可操作性大,稳定可靠。     

共培养大鼠内皮祖细胞对白体骨髓基质干细胞成骨作用的影响

目的探讨体外培养大鼠外周血内皮前体细胞（EPCs）与自体骨髓基质细胞（BMSCs）共培养时对BMSCs成骨作用的影响。方法采用密度梯度离心法分离、培养大鼠BMSCs和EPCs,培养细胞分为四组：A组（BMSCs组）、B组（EPCs组）、C组（BMSCs成骨诱导组）及D组（BMSCs和EPCs联合培养组）。通过观察细胞克隆形态、免疫细胞化学、细胞增殖、碱性磷酸酶活性,从酶学、组织学及生化等不同方面观察EPCs对BMSCs成骨活性及生长情况的影响。结果免疫细胞化学染色证实C组培养的细胞具有晚期EPCs的特性。倒置相差显微镜、HE染色均证实共培养的BMSCs和EPCs生长良好,并能够形成与单纯成骨诱导培养的BMSCs相似的钙结节。MTr检测结果：各组细胞增殖差异无统计学意义（P〉0．05）。碱性磷酸酶活性检测结果：C、D组显著高于A、B组（P〈0．05）。结论EPCs和BMSCs联合培养具有良好的细胞相容性,EPCs能够增强成骨细胞的ALP活性,提高成骨细胞的增殖能力。     

当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达和黏附功能的影响

目的：研究当归多糖（APS）对小鼠骨髓基质细胞（BMSCs）生长、粘附分子ICAM-1和VCAM-1表达及其对骨髓单个核细胞黏附功能的影响．方法：观察APS对小鼠BMSCs消化时间的影响;MTT法检测APS对小鼠BMSCs增殖及对骨髓单个核细胞黏附功能的影响;流式细胞术检测APS对BM—SCs表面ICAM-1和VCAM-1表达的影响．结果：100,200mg／LAPS使BMSCs达80％贴壁后消化时间明显缩短（P〈0．05）;50,100mg／LAPS组BMSCs增殖能力较对照组增强（P〈0．05）;200,300mg／LAPS能使BMSCs表面ICAM-1表达降低,而50,100,200,300mg／LAPS均可使VCAM-1表达降低（P〈0．05）;体内注射APS后BMSCs表面ICAM-1和VCAM-1表达均降低（P〈0．05）;100,200,300mg／LAPS使小鼠BM．SCs对单个核细胞黏附率减弱（P〈0．05）．结论：APS能促进小鼠BMSCs增殖,降低其表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,进而使小鼠BMSCs达80％贴壁后消化时间明显缩短,对骨髓单个核细胞的黏附率减弱．     

陶瓷样异种骨对骨髓基质细胞生长及附着影响的实验研究

目的：探讨陶瓷样异种骨(CXB)与骨髓基质细胞的生物相容性，为CXB复合骨髓移植修复骨缺损提供依据．方法：将理化处理制得的陶瓷样异种骨(CXB)与兔骨髓基质细胞体外复合培养，用倒置相差显微镜及扫描电镜观察CXB对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖的影响．结果：CXB对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖均无不良影响，显示出良好的生物相容性．结论：CXB具有良好的生物相容性，可望与骨髓复合移植修复骨缺损．     

五羟色胺促进骨髓基质细胞生长初探

目的:探讨五羟色胺(serotonin,5-HT)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)体外生长的影响.方法:采用骨髓基质细胞集落培养技术(CFU-F)检测不同浓度5-HT以及5-HT分别与碱性成纤维细胞生长因子(basic-fibroblast growth factor,bFGF),血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF),血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对小鼠及人BMSC体外培养的生长促进作用,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人BMSC表面5-HT2型受体mRNA表达.结果:5-HT不同浓度(50,100,200,500nM)对小鼠及人BMSC体外培养均有生长促进作用(P＜0.05),显示最大作用浓度为200nM.5-HT可增强bFGF,PDGF和VEGF对BMSC生长促进作用.人BMSC表面有5-HT2A,2B,2C受体mRNA表达.结论:5-HT具有BMSC生长促进作用,并可增强bFGF,PDGF,VEGF促进BMSC的生长,其作用途径可能通过BMSC表面5-HT2型受体,从而促进细胞生长.     

聚己内酯电纺纤维支架材料对骨髓基质细胞增殖及分化的影响

目的:观察聚己内酯(PCL)电纺纤维支架材料对骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及分化特点的影响,评价其作为骨组织工程的支架材料的应用前景.方法:将兔BMSCs与PCL电纺纤维支架材料在培养板内共培养.采用形态学观察、MTT法及ALP检测等方法检测BMSCs在PCL电纺纤维表面的粘附、增殖和分化能力.结果:体外培养的BMSCs能在PCL电纺纤维表面正常粘附和增殖,并且表达较高的碱性磷酸酶活性.结论:PCL电纺纤维适合作为支架材料应用于BMSCs为种子细胞的组织构建.     

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的：观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况，探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法：无菌条件下行骨穿术，密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞，利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导，用免疫细胞化学方法进行鉴定。结朵：骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团，进一步分化，部分细胞胞体增大并出芽，逐渐发育成为较成熟的长突起细胞，长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论：骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能，易于取材、体外培养和增殖，在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。     

骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞Angiogenin1，Angiogenin2基因的表达

目的：研究骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞表达成熟血管内皮细胞特异性基因,探讨为组织工程血管化提供种子细胞的可行性．方法：从SD大鼠后肢获取骨髓基质干细胞,进行体外扩增培养,取生长良好的第3代细胞体外诱导培养14d．细胞分诱导组（含内皮诱导因子VEGF和bFGF的完全血管内皮细胞条件培养基）和对照组（含M199普通培养基）．MTT法检测两组细胞增殖活性．免疫细胞化学法检测CD31,CD34蛋白的表达;RT—PCR检测细胞血管生成素1（Ang1）、血管生成素2（angiogenin2,Ang2）mRNA的表达．结果：MTT法检测发现,诱导组与对照组在1,2,3,4,5d5个时间点内,其细胞增殖活性无显著性差异（P1d=0．855,P2d=0．053,P3d=0．249,P4d=0．059,P5d=0．174）．免疫细胞化学检测结果CD34,CD31呈阳性表达．RT—PCR结果显示,诱导的血管内皮细胞表达成熟内皮细胞特异性基因Ang1,Ang2．结论：骨髓基质干细胞在一定诱导条件下可以表达血管内皮细胞特异性标志,可作为组织工程血管化理想的种子细胞．     

人骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞过程中免疫原性改变的实验研究

目的 探讨人骨髓来源间充质干细胞（BMSCs）诱导分化成软骨细胞过程中协同刺激分子的表达及其对细胞免疫原性改变的影响。方法 用密度梯度离心法分离骨髓,体外培养BMSCs,经形态学观察、流式细胞仪鉴定后诱导成软骨样细胞,用流式检测细胞表面协同刺激分子的表达情况;将未分化的BMSCs及诱导后的成软骨样细胞分别与T细胞共培养,采用3H-TdR法检测T细胞的增殖情况。结果 人BMSCs不表达或低表达协同刺激分子CD28、CD80、CD83、CD86,抑制T细胞增殖;而诱导后的成软骨细胞上调表达CD28、CD80、CD83、CD86,并促进T细胞增殖。结论 人BMSCs对T细胞增殖有抑制作用;而诱导后的成软骨细胞免疫原性增强,促进T细胞增殖。     

Wnt信号通路在骨髓间充质干细胞神经分化中的综述

背景：骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多分化潜能,在特定的体内外环境下,具有向多种类型细胞分化的能力,可以分化为骨、软骨、神经、肌腱、脂肪、心脏、肝脏、上皮等多种细胞[1,2]。近年研究BMSCs可以跨胚层向神经细胞分化,在脊髓损伤修复等再生医学领域具有广阔应用前景。目前对Wnt信号在BMSCs神经分化中的调控机制少有研究。探讨BMSCs神经分化的Wnt信号调控机制,为细胞靶向治疗脊髓损伤等神经系统疾病提供理论依据。 目的：wnt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖和神经分化中作用的综述。 方法：检索时间：中文文献：1990/2010,英文文献：1990/2010。中文检索词“骨髓间充质干细胞,神经分化,Wnt信号通路”,英文检索词“bone marrow mesenchymal stem cells,neural differentiation,Wnt signaling pathway”,检索数据库：重庆维普资讯,中国期刊网,CNKI博硕士论文数据库。检索文献类型：研究原著,基础研究,综述等。检索文献量：中文文献15篇,英文文献42篇。 结果与结论:本文概述了Wnt信号通路的组成及BMSCs在增殖和神经分化中的作用,探讨Wnt信号转导通路在BMSCs神经分化调控机制,深入了解BMSCs的本质,优化神经诱导方法,更有利于促使BMSCs沿着神经元方向分化并促进其发育为成熟的功能性神经元。这将推动BMSCs在细胞靶向治疗中的应用走上一个新台阶。     

全骨髓贴壁培养兔骨髓间充质干细胞的初步研究

目的：探讨兔骨髓间充质干细胞作为组织工程种子细胞修复骨缺损的可能性。方法：选取2月龄约2．5kg重健康新西兰兔8只,采用全骨髓贴壁培养法体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,通过倒置相差显微镜观察、MTT检测、细胞贴壁率检测观察细胞生物学特性。结果：全骨髓贴壁培养法培养出的原代骨髓间充质干细胞活力良好,细胞数量经传代后扩增,且细胞纯度提高,但细胞扩增速度较慢。结论：全骨髓贴壁培养法简便易行,能有效的在体外获得原代骨髓间充质干细胞。所提取的细胞活性良好、纯度较高,能用作组织工程种子细胞治疗骨缺损。