IL-17在小鼠肾移植急性排斥反应早期诊断中的作用

目的:研究Th17细胞及相关因子白细胞介素17 (IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组;在移植术后3,7d分别应用ELISA检测2组小鼠血清中IFN-γ和IL-17的含量,应用流式细胞技术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th1和Th17细胞数量,取移植肾经10％甲醛固定后行常规病理检查.结果:与同系移植组相比,急性排斥反应组术后第3天血清IFN-γ含量无明显差异而II-17含量显著增高(P＜0.05),术后第7天血清IFN-γ和IL-17含量均显著增高(P＜0.05);急性排斥反应组中血清IFN-γ和IL-17含量术后第7天较第3天均显著增高(P＜0.05);急性排斥反应组移植肾中浸润淋巴细胞中Th1与Th17细胞比例在术后第3天及第7天较同系移植组均明显增多(P＜0.05);急性排斥反应组中移植肾中浸润淋巴细胞中Th1与Th17细胞比例术后第7天明显高于第3天(P＜0.05);病理组织学检查急性排斥反应组随着移植时间的延长,排斥反应逐渐增强.结论:Th17细胞在肾移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对受体血清中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标.     

IL-17与Th17细胞在小鼠心脏移植 急性排斥反应中的作用

目的：研究辅助T细胞17(T helper cell 17, Th17)细胞及其相关因子白细胞介素17(interleukin-17, IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法：建立小鼠心脏移植模型,实验动物随机分为急性排斥反应组(n=12)和同系移植组(n=12),应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分别检测2组小鼠移植术后第3天和第7天血清中IL-17的含量;应用流式细胞技术检测移植心脏中浸润淋巴细胞中Th17细胞数量,并取移植心脏经10%甲醛固定后行常规病理检查。结果：急性排斥反应组术后第3天及第7天血清中IL-17表达明显高于同系移植组(P<0.05),且急性排斥反应组术后第7天IL-17表达明显高于第3天(P<0.05);与同系移植组相比,急性排斥反应组移植心脏浸润淋巴细胞中Th17细胞比例在术后第3天及第7天明显增高(P<0.05),且术后第7天时Th17细胞比例明显高于第3天(P<0.05);病理组织学检查急性排斥反应组随着移植时间的延长,排斥反应逐渐增强。结论：Th17与心脏移植排斥反应的发生、发展密切相关,移植脏器中细胞因子IL-17的检测可望成为急性排斥反应早期诊断的预测指标。     

白细胞介素-17与Th17细胞在小鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义

目的研究Thl7细胞及相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组,在移植术后3 d和7 d,分别应用酶联免疫吸附实验检测两组小鼠血清中IL-17含量,应用流式细胞术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th17细胞数量,取移植肾经10%福尔马林固定后行常规病理检查。结果与同系移植组相比,急性排斥反应组术后第3天及第7天血清中IL-17含量均升高(P<0.05),且术后第7天时IL-17含量明显高于第3天(P<0.05);急性排斥反应组移植肾中浸润淋巴细胞中Th17细胞比例在术后第3天及第7天较同系移植组均明显增多(P<0.05),且术后第7天时Th17细胞比例明显高于第3天(P<0.05);病理组织学检查急性排斥反应组随着移植时间的延长,排斥反应逐渐增强。结论 Thl7细胞在肾移植排斥反应发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。     

Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用

目的 通过对大鼠小肠移植FK506预处理模型研究,探讨Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的表达。根据病理表现及相关细胞因子表达,进一步探究Th17细胞相关因子在大鼠小肠移植急性排斥的作用机理,试图为预防小肠移植急性排斥损伤提出新思路。方法 雄性健康F344大鼠5对及Lewis大鼠10对,6~8周龄,采用数字表法随机分为对照1组(F344 5只、Lewis 5只)、对照2组(Lewis大鼠5对)和实验组(F344 5只、Lewis 5只)。采用供体肠系膜上动脉-受体腹主动脉端侧、供体门静脉-受体下腔静脉端侧吻合法,供体肠管近端旷置远端回肠-回肠端侧吻合的异体全段性小肠移植术式。实验组:FK506按2 mg/Kg的剂量实验前3日每日肌肉注射,手术当日及术后7 d,按0.3 mg·kg^-1·d^-1肌肉注射。术后7 d处死受体大鼠或濒死大鼠,取供体肠管行HE染色及免疫组织化学染色观察病理变化,右心室穿刺取血用ELISA方法检测血清中IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β、IFN-γ的含量。结果 在大鼠小肠移植急性排斥反应模型中,移植肠管的黏膜发生明显的病理形态学改变。对照1组小肠黏膜的病理形态学改变最明显,实验组病理学改变相对较轻,对照2组大鼠小肠黏膜改变最轻。免疫组织化学染色提示巨噬细胞浸润以对照1组最明显,其次为实验组,对照2组浸润最轻。实验组和对照组的大鼠静脉血血清中的IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β平均浓度大体趋势相同,各种细胞因子以对照1组最高,实验组次之,对照2组最低。结论 在大鼠小肠移植模型中,FK506预处理能减轻小肠移植急性排斥反应造成的黏膜损伤,有利于移植受体的存活。其机理与减少移植肠管巨噬细胞的浸润有关。对照1组和实验组大鼠血液中IL-17、IL-23等细胞因子水平均值都高于对照2组,提示Th17相关因子参与急性排斥反应过程。阻断Th17相关因子产生可能会减轻小肠移植急性排斥反应损伤。     

肾移植急性排斥的免疫学研究

用间接免疫荧光法对７６例肾移植术后１０个月内的病人外周血Ｔ淋巴细胞亚群进行了监测，发现该组病人外周血Ｔ淋巴细胞亚群发生了明显的变化，为早期诊断急性排斥提供了依据。     

肾移植急性排斥反应早期诊断尿液蛋白质组学研究

目的 利用二维凝胶电泳和生物信息学技术,从严格筛选的2例肾移植术后发生急性排斥反应患者尿液标本中,寻找急性排斥反应早期标志物.方法 在pH值为4～7范围,采用Sypro-Ruby染色,对发生急性排斥反应过程的不同时间点(-3,-2,-1,7,14,21 d)的患者尿液二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)图谱进行比较,挑选了30个有上调或者下调趋势的蛋白点.将这些蛋白点进行切胶、胰酶消化后用MALDI-TOF-MS/MS分析.结果 得到了重复性好、分辨率高的肾移植术后尿蛋白2-DE图谱.30个差异蛋白点经质谱分析和数据库检索,鉴定了16个蛋白点,对应13种蛋白质.根据蛋白功能查询结果,发现了3个蛋白含量变化趋势与排斥反应密切相关的蛋白,分别是α-1抗胰凝乳蛋白酶(alpha-1-antichymotrypsin,AACT)、肿瘤排斥抗原gp96(tumor rejection antigen gp96)和锌-α2糖蛋白(Zn-Alpha-2-Glycoprotein).结论 肾移植术后发生急性排斥反应患者的不同时间点尿液2-DE图谱存在明显差异.AACT、肿瘤排斥抗原gp96和锌-α2糖蛋白可能作为临床诊断肾移植术后急性排斥反应的标志物候选蛋白.     

miR-663在肾移植急性排斥反应中的调控作用

目的比较肾移植急性排斥（acute rejection, AR）病人及非AR病人血清miR-663表达水平,在细胞水平上探讨miR-663参与肾移植AR的调控作用,为临床早期诊治AR提供新思路。方法Real time PCR 检测肾移植AR病人及非AR病人血清miR-663表达水平。设置miR-663 mimic组、miR-663 inhibitor组、阴性对照组及空白对照组;MTT及Annexin V-FITC分别检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对人肾小球内皮细胞（HRGEC）生存率和凋亡率的影响;ELISA检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对IL-6、IFN-γ、CCL-2及TNF-α表达水平的影响;Transwell 实验检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对巨噬细胞趋化性的影响。结果AR组患者血清miR-663表达水平明显较非AR组的肾移植患者升高（4.73±0.28 vs 1.06±0.04;P<0.01）。MTT显示过表达miR-663可以降低HRGEC的生存率并且明显增加其凋亡率,而抑制miR-663则可以降低HRGEC凋亡。过表达miR-663可以明显提高相关炎症因子的表达,同时明显增加巨噬细胞的趋化性。结论miR-663在肾移植AR过程中发挥着重要作用,可做为早期诊断AR的外周血标志物,并有望成为治疗肾移植AR的一个潜在分子靶点。     

放射治疗在肾移植急性排斥反应中的应用价值

自1980年4月~1994年10月作者对进行同种异体肾移植后发生急性排斥反应,对药物治疗效果不佳者或作为治疗急性排斥反应的辅助治疗措施行钴~(60)放射治疗,照射野边界超过移植肾周围lcm~2cm,一般为10cm×10cm~12cm×l2cm,每次组织量100~150CGY,每日1次或隔日1次,总剂量300~450CGY。结果:照射后病人自觉症状很快缓解,移植肾体积缩小,其中20例尿量很快增加,肾功能渐恢复,2例无效．表明放射治疗是治疗肾移植后急性排斥反应的一种有效的辅助治疗方法,有助于提高移植肾急性排斥反应的逆转率。     

Impact of acute rejection episodes on long-term renal allograft survival

Objective To assess the impact of the number, and time of acute rejection (AR) and outcome of anti-rejection therapy on the long-term survival of renal allografts and the relative risk factors. Methods The Kaplan-Meier analysis and log-rank test were used to calculate the survival rates of patients and grafts in no acute rejection group (NAR, 895 patients), 1 rejection episode group (1AR, 183), 2 and more than 2 rejection episodes group (2AR, 17), acute rejection group ［AR (1AR+2AR), 200］, early acute rejection group (within 90 days after transplantation, EAR, 125), late acute rejection group (91 days later, LAR, 58), completely AR reversed group (CAR, 105), and incompletely AR reversed group (IAR, 68). The relative risk factors were analyzed by the Cox proportional hazards regression. Results The 5- and 10-year survival rates of renal allografts were 75.4% and 17.1% in AR and 93.2% and 86.5% in the NAR group (P&lt;0.0001). The long-term graft survival was much lower in the 2AR group than in the NAR or 1AR groups (P&lt;0.0001 and P=0.002, respectively). It was similar in either the NAR or CAR groups (P=0.31), but it was significantly lower (P&lt;0.0001) in the IAR group. Multivariate Cox regression analysis revealed that the outcome of anti-rejection therapy is an important risk factor affecting the long-term survival of allografts. Conclusions AR is significantly associated with poor long-term survival of renal allografts. But the long-term graft survival of patients with one acute rejection but completely reversed is not significantly different from that of patients without acute rejection.     

肾移植术后早期耐激素急性排斥反应的临床研究

目的探讨肾移植术后早期耐激素急性排斥反应(early steroid-resistant acute rejection ESRAR)的原因、诊断及治疗方法.方法回顾分析我科1999年10月-2002年10月肾移植术后18例诊断为ESRAR患者的临床资料.经临床表现、彩超及移植肾穿刺病理诊断为急性排斥反应.随后采用ATG FK506 MMF Pred免疫抑制方案、早期血液透析及支持等治疗.结果在术后甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)冲击治疗过程中,15例患者第2天即无尿,3例第2～5 d肾功能改善后又出现血尿、少尿.经治疗14例(77.8%)分别在15～78 d逆转,肾功能恢复正常,随访1～4年,肾功能维持正常.3例好转,随访2～3年血肌酐波动在150～280μmol/L,1例(5.6%)无效恢复血液透析.结论术后ESRAR极易导致移植肾功能不全;早期诊断并采用强有力的免疫抑制方案,结合血液透析和支持治疗可以有效逆转ESRAR,挽救肾功能.     

可溶性CD30联合血清肝细胞生长因子检测诊断移植肾急性排斥

目的 探讨肾移植术前可溶性CD30(sCD30)联合术后第5天血清肝细胞生长因子(HGF)检测诊断肾移植术后急性排斥反应(AR).方法 采用酶联免疫吸附法对65例肾移植患者术前sCD30水平及术后第5天的HGF水平进行检测.依据术前sCD30水平将患者分为sCD30阳性受者及sCD30阴性受者.通过分析特征工作曲线(ROC)评价第5天的HGF水平诊断移植肾AR的意义,进一步分析sCD30联合HGF诊断AR的价值.结果 65例患者术后26例发生AR为排斥反应组,39例顺利恢复,为无排斥反应组.以sCD30值120U/ml为界限值,排斥反应组sCD30阳性率为61.5%,无排斥反应组阳性率为17.9%,有显著差异(P＜0.05).排斥反应组和无排斥反应组肾移植术后第5天的HGF水平差别有统计学意义(P＜0.05),ROC证明HGF界限值90μg/L可较好的诊断移植肾急性排斥反应,敏感度84.6%,特异度76.9%.联合术前sCD30的结果.可提高AR的诊断效果.结论 sCD30联合HGF检测分析可有效诊断肾移植AR.     

大鼠原位肾移植技术的改进及急性排斥反应观察

目的:对大鼠原位肾移植模型进行技术改进,并观察异基因肾移植大鼠急性排斥发生的规律.方法:从供体的切取及血管吻合等方面进行技术改进,供肾取自SD大鼠,受体为Wistar大鼠,共进行肾移植手术46例,将手术成功病例随机分为FK506[FK506, 0.1 mg/(kg·d),术后第1日至第7日皮下注射]治疗组(18例)和对照组(18例),观察移植术后急性排斥发生情况.结果:共进行手术46次,36只动物存活时间超过7 d,10只死亡,手术成功率为78.3%,手术时间2～2.5 h,其中热缺血时间5～10 min,冷缺血时间15～30 min,静脉吻合时间为5.0～10.5 min,动脉吻合时间为8.5～12.0 min,对照组大鼠术后7～14 d全部死亡,组织病理学检查提示有急性排斥反应发生,而FK506治疗组生存良好(存活时间大于14 d).结论:对大鼠肾移植技术进行改良后可明显提高移植大鼠的生存率,术后2 wk是大鼠急性排斥反应高发时期,运用免疫抑制治疗可诱导大鼠移植物的长期存活.     

舒莱预防肾脏移植物急性排斥反应的随机对照试验研究

目的：探讨白细胞介素2受体单克隆抗体——舒莱（Simulect）对移植肾急性排斥反应的预防作用以及用药的安全性与药物的毒副作用。方法：将我器官移植移植中心1999年3月～2002年10月共46例肾移植受者为研究对象，随机分成舒莱组（23例）和对照组（23例），两组肾移植术后均接受以Neoral为基础的三联免疫抑制剂。舒莱组术前2h和术后4d各给予舒莱20mg静脉滴注。观察急性排斥反应、Neoral、皮质激素和硫唑嘌呤用量及药物的毒副作用。实验室检测血CsA浓度和肝肾功能。结果：研究结果表明，舒莱组无1例发生急性排斥反应，对照组术后8周内发生3例4次急性排斥反应。两组均未发生明显的毒副作用。两组间Neoral用量及血CsA浓度无明显差异。对照组因发生急性排斥反应，8周内皮质激素用药量总量大于舒莱组。结论：舒莱对移植肾急性排斥反应具有明显的预防作用，且用药方法简便，疗程短，无明显的毒副作用。