~3H—酪氨酸与大鼠几种组织的细胞膜制备物的结合

将大鼠不同组织的细胞膜制备物与~3H-酪氨酸在24℃下孵育5 min,结果在肝脏、肾脏、脾脏、睾丸、黄体、垂体和肾上腺均发现了酪氨酸的高亲合力和低亲合力两类结合位点;在子宫、肌肉和下丘脑仅有低亲合力结合位点。这提示酪氨酸可能在多种组织发挥调节作用。     

细胞膜之间的蛋白颗粒计数

众所皆知 ,细胞膜之间的膜蛋白颗粒即脂质双分子中镶嵌的蛋白微粒 ,这些微粒用常规透射电镜技术则无法观察到。自 1970年电镜冷冻蚀刻法 (ｆｒｅｅｚｅｅｔｃｈｉｎｇ)发展以来 ,已成为研究包括膜间蛋白颗粒、细胞表面连接在内等生物膜结构的重要方法〔1〕。作者自 1993年以来利用该技术分别对正常人与Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症 (ＤＭＤ)及其携带者的红细胞及骨骼肌细胞膜间蛋白颗粒进行定量计数研究〔2 ,3〕,观察其在不同状态下颗粒数的变化 ,以进一步阐明其发病机制。本文主要探讨影响蛋白颗粒计数的因素及其意义。因各组的实验、颗…     

细胞膜脂多糖受体CD14研究进展

脂多糖结合蛋白／脂多糖受体是体内脂多糖增敏其细胞效应的重要系统。通过该系统，细胞对微量ＬＰＳ产生应答反应，这可能在内毒素血症致病中具有重要意义。     

特异性抗脂肪细胞膜蛋白抗体的制备

目的制备特异性抗脂肪细胞膜蛋白血清,探索防治肥胖症的新途径。方法用猪脂肪细胞膜蛋白作抗原免疫2月龄兔子,通过酶联免疫吸附试验检测其免疫学活性。结果膜蛋白与佐剂充分乳化后主动免疫3只兔子,3次免疫后第10天取血清,检测抗体效价为1:6 400;同样,用ELISA测定抗体与肾、脑细胞膜有交叉反应,但反应不高。结论用猪脂肪细胞膜蛋白免疫兔子制备的抗体效价高,批间、批内重复性好,特异性强,将会是一种有效调控体脂含量的新方法。     

红细胞膜蛋白非酶糖基化与糖尿病

高血糖状态时，红细胞膜蛋白非酶糖基化（ＮＥＧ）与糖尿病微血管病变之间存有一定关系。红细胞的血液流变学改变、红细胞膜脂质的改变、糖基化受体以及糖尿病慢性并发症等方面对红细胞膜蛋白ＮＥＧ具一定影响。     

人红细胞膜带3蛋白结构研究进展

人红细胞膜带3蛋白由911个氨基酸组成,可分为N端胞质域和C端跨膜域。最新研究结果表明,α螺旋含量较高的跨膜域往返跨膜12次。在细胞膜中,带3蛋白主要以二聚体和四聚体(二聚体的二聚体)形式存在;尽管其中的单体可独立地转运阴离子,然而二聚体中的两个单体之间存在着相互作用。     

酵母呈现SARS冠状病毒S蛋白受体结合区及其鉴定

目的获得能在酵母表面正确折叠的SARS病毒S蛋白的受体结合区。方法通过PCR技术从pVAX1／S质粒扩增出编码S蛋白318至520氨基酸残基的cDNA,酶切后克隆到酵母表面呈现载体pYD1,构建pYD1-RBD重组质粒,转化酵母细胞,流式细胞仪检测所呈现的RBD片段。结果通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有RBD片段的表达,并且此表面呈现的RBD片段与针对RBD不同表位的2株单抗均能结合,SAPS病毒免疫的小鼠血清抗体也能与该片段结合。结论酵母表面呈现的RBD保持了天然RBD分子的构象,为基于RBD的药物筛选和疫苗设计提供物质基础。     

人精子细胞膜结合型透明质酸酶在乳腺癌的表达及临床病理意义

目的 研究人精子细胞膜结合型透明质酸酶(PH20)在人原发、转移乳腺癌中的蛋白及mRNA表达,探讨其在肿瘤转移中的作用。方法 合成两个高抗原性人PH20多肽,免疫于兔皮下,检测、鉴定、纯化抗PH20抗体。应用免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法检测53例乳腺癌原发及淋巴结转移灶PH20的表达;Western印迹法检测5例新鲜乳腺癌组织PH20的表达。合成两条PH20寡核苷酸探针,应用原位杂交检测乳腺组织芯片,包括28例乳腺癌组织,5例乳腺癌旁组织,15例正常乳腺组织。结果 PH20免疫组织化学示：正常乳腺组织无表达(0／3),53例乳腺癌中31例呈阳性表达(58．4％),其中乳腺癌不伴有淋巴结转移阳性率48．2％,乳腺癌伴有淋巴结转移原发癌70．8％,转移癌83．3％。Western印迹法示5例乳腺癌均有PH20相应阳性条带的表达。寡核苷酸探针原位杂交显示75％(21／28)乳腺癌中有PH20 mRNA表达。17例正常乳腺组织中2例乳腺小叶呈弱阳性表达。结论 PH20的表达似乎与乳腺癌的浸润转移行为呈正相关,提示透明质酸酶可能消化乳腺癌周围组织,并释放纤维母细胞生长因子-2而促进其肿瘤生长和转移。     

红细胞膜与红细胞流变性

红细胞膜与红细胞流变性北京医科大学医学物理教研室陈亮，王鸿儒红细胞膜与红细胞流变性质的相关性研究，在国内已开始关注，但报道不多，作者仅就国外在这方面的研究进展作一简要介绍。红细胞膜的化学组成与分子模型红细胞膜包裹在红细胞胞浆的表面，它的主要成份是脂类...     

红细胞膜脂肪酸组成对膜脂区流动性的影响

采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和荧光偏振技术同时测定了４２例正常成人红细胞膜脂肪酸成分与膜流动性，并进一步探讨了膜脂肪酸组成对膜流动性的影响。结果表明：（１）正常人红细胞膜脂肪酸主要由廿二碳六烯酸（Ｃ２２：６ｎ—３）、花生四烯酸（Ｃ２０：４ｎ—６）、亚油酸（Ｃ１８：２ｎ—６）、油酸（Ｃ１８：１ｎ—９）、软脂酸（Ｃ１６：０）和硬脂酸（Ｃ１８：０）等六种脂肪酸组成，其中花生四烯酸含量最高（２９％）。其次为软脂酸（１６．９％），而不饱和酸占７１．６％。（２）红细胞膜微粘度与软脂酸和硬脂酸呈明显正相关；与廿二碳六烯酸和花生四烯酸呈明显负相关。提示红细胞膜脂肪酸构成对膜流动性有重要影响。     

P57kip2蛋白表达与水泡状胎块分型的关系

目的探讨P57kip2蛋白在水泡状胎块分型诊断中的作用。方法完全性和部分性水泡状胎块分别为78和42例,应用免疫组织化学SP法检测其P57kip2蛋白表达情况。结果P57kip2蛋白在完全性水泡状胎块中表达主要呈弱阳性,在部分性水泡状胎块中以强阳性为主,在部分性水泡状胎块中的阳性率为(92.86%),显著高于完全性水泡状胎块(P<0.01)。结论检测水泡状胎块中P57kip2蛋白表达,有助于水泡状胎块的分型和判断预后。     

P57和Ki-67在葡萄胎鉴别诊断中的作用

目的:探讨P57和Ki-67蛋白在完全性和部分性葡萄胎鉴别诊断中的作用.方法:分别收集正常胎盘绒毛、部分性葡萄胎和完全性葡萄胎石蜡标本各12例,应用免疫组织化学方法检测P57和Ki-67蛋白在这些病变中的分布及表达水平.结果:P57蛋白在正常绒毛及部分性葡萄胎组织中主要分布于绒毛的细胞滋养叶细胞及间质细胞,两组间阳性率...     

脑星形细胞瘤中P27kip1、P57kip2、CyclinE表达与恶性程度及预后关系

目的探讨P27^kip1、P57^kip2、CyclinE在脑星形细胞瘤的表达情况，并结合多种临床因素探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法采用S-P免疫组化技术，检测50例脑星形细胞瘤及10例正常脑组织中P27^kip1、P57^kip2、CycLinE的表达．结果P27^kip1、P57^kip2及CyclinE在脑星形细胞瘤阳性表达随恶性程度不同有显著差异（P〈0．01）。通过Spearman等级相关分析P27^kip1与P57^kip2，CyclinE与P57^kip^2表达联系之间具有相关性（P〈0．05）。通过单因素及多因素条件Logistic回归模型表明肿瘤的病理级别、星形细胞瘤中P27^kip1、CyclinE表达是影响脑星形细胞瘤预后的主要因素。结论脑星形细胞瘤中P27~ipl，P57“”及CyclinE表达与肿瘤恶性程度相关；P27^kip1、P57^kip2及CyclinE表达两两之间具有相关性；肿瘤的病理级别、星形细胞瘤中P27^kip1、CyclinE表达可作为评价脑星形细胞瘤预后的独立指标。     

PCNA和P57^kip2在葡萄胎中表达的研究

目的探讨PCNA（增殖细胞核抗原,proliferation cell nuclear antigen）和P57^kip2在CM（完全性葡萄胎,com-plete hydatidiform mole）及PM（部分性葡萄胎,partial hydatidiform mole）中的表达及意义。方法应用免疫组化的方法检测PCNA及P57^kip2蛋白在CM、PM及HA（水肿绒毛,hydrops trophonema）组织中的表达。结果 PCNA在所有组织切片中均见到。PCNA主要在细胞滋养层细胞及中间型滋养细胞表达。PI在HA中最低,于PM中增高,CM中达到最高。其中CM与PM及与HA之间,差异均有统计学意义（P〈0.05）。而PM与HA之间无显著性差异（P〉0.05）。P57^kip2在30例HA27例呈阳性表达（90%）,30例PM 25例呈阳性表达（83.33%）,28例CM 3例呈阳性表达（10.71%）,并且在CM中的阳性强度均较弱。3种病变P57^kip2染色阳性率统计分析显示CM与PM及HA之间均存在显著性差异（P〈0.01）,而PM与HA之间无显著性差异（P〉0.05）。结论 PCNA与P57^kip2能代表葡萄胎滋养细胞异常增生的客观指标,P57^kip2蛋白的低表达和PCNA的高表达可能在葡萄胎的的发生发展中起重要作用,两者的共同检测对早期CM的发现有重大作用。     

人肝癌P57~(kip2)基因失表达的遗传不稳定性

目的探讨肝细胞癌(HCC)P57kip2mRNA表达与遗传不稳定性之间的相互关系,以探索P57kip2基因失表达的机制。方法用原位分子杂交技术检测肝癌组织中P57kip2mRNA表达,用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测LOH和MSI。结果在正常肝组织未见P57kip2mRNA表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率均为26.7%(8/30)。3个位点均未发生LOH;在2个微卫星位点发生MSI,MSI总阳性率为16.7%。D11S1760位点发生MSI与P57kip2mRNA表达有关联性(P<0.05)。结论P57kip2mRNA表达异常提示其可能在HCC发生过程中起重要作用。MSI可能是肝癌发生过程中P57kip2mRNA表达异常的原因之一。     

p57与细胞膜上胆固醇的相关性分析

目的:检测生理状况下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间的相关性。方法:使用不同工作浓度的mβCD抽提U937细胞膜上的胆固醇,再利用超速离心分离细胞膜组分,并利用Western blot技术检测细胞膜上p57蛋白含量的变化。利用非连续蔗糖密度梯度离心制备脂筏,并利用Western blot技术检测脂筏上的p57蛋白含量。结果:在mβCD降低细胞膜上胆固醇含量之后,p57在膜组分中的含量的变化不大。此外,在脂筏中未检测到p57的存在。结论:与病原性分枝杆菌等所导致病理状态不同,在生理状态下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间尚未观察到相关性。     

P57kip2 immunohistochemical expression and ultrastructural findings of gestational trophoblastic disease and related disorders

Gestational trophoblastic disease (GTD) is a unique spectrum of diseases ranging from complete hydatidiform mole (CHM), partial hydatidiform mole (PHM), and invasive mole (IM) to choriocarcinoma (CC). Placental site trophoblastic tumor (PSTT) and epithelioid trophoblastic tumor (ETT) have been classified as related disorders. Mesenchymal dysplasia (MD) may be misdiagnosed as PHM; however, it is said to have a quite different histogenesis from PHM. P57kip2 is the protein product of a paternally imprinted or maternal gene that inhibits cyclin-dependent kinases (CDK), thus serving to inhibit cell proliferation and to suppress tumor growth. Its lack of expression in trophoblastic disease plays a role in its abnormal proliferation and differentiation. In this study, P57kip2 immunostaining was absent in the trophoblastic layers of CHM and was positive in the trophoblast layer of nonmolar villi and MD. Ultrastructure of complete molar cystic villi showed tree-like branching of microvillous processes and intracytoplasmic lacunae without capillaries in the stroma, whereas MD contained many newly formed blood vessels and collagen. Also, large lacunae with microvilli and polymorphic nuclei of syncytiotrophoblast cells with well-developed organelles were observed in IM. Lung ETT following CHM and normal deliveries showed two types of large mononuclear cells and binuclear cells with abundant organelles and bundles of intermediate-type filaments in the stroma.     

Identification of the predominant human NK cell effector subset mediating ADCC against HIV-infected targets coated with BNAbs or plasma from PLWH

The potential of immunotherapy strategies utilizing broadly neutralizing antibodies (BNAbs), such as 3BNC117 and 10-1074, to limit viral replication while also facilitating clearance of HIV infected cells has heightened interest in identifying the predominant NK effector subset(s) capable of mediating antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC). Utilizing advanced polychromatic flow cytometry, we identified that CD57 positive NK cells from ART-suppressed in People Living With HIV (PLWH) expressed significantly higher levels of the CD16 FcγR receptor, 2B4 ADCC coreceptor, and HLA-DR activation marker while NKG2C positive NK cells expressed significantly higher levels of the CD2 ADCC coreceptor (p < 0.001, n = 32). Functionally, CD57 positive NK cells from ART-suppressed PLWH with either high or low NKG2C expansion exhibited significantly enhanced degranulation and IFN-γ production against heterologous gp120-coated ADCC targets coated with HIV reference plasma compared to CD57 negative NK cells (p = 0.0029, n = 11). CD57 positive NK cells from control donors lacking NKG2C expansion also exhibited significantly more degranulation and IFN-γ production at every timepoint tested against both heterologous ADCC targets (p = 0.019, n = 9) and HIV-1 infected autologous CD4⁺ primary T cells coated with BNAbs. Together, our data support CD57 positive and NKG2C positive NK cells as the predominant ADCC effector subsets capable of targeting HIV-infected CD4⁺ cells in the presence of 3BNC117 and 10-1074 immunotherapy.     

A solid-phase assay of solubilized HeLa cell membrane receptors for binding group B coxsackieviruses and polioviruses

HeLa cell membranes were solubilized in sodium deoxycholate and adsorbed onto polystyrene microtiter plates to permit the measurement of receptors for binding group B Coxsackieviruses and polioviruses. Receptor activity was determined by measuring the amount of infectious virus attached to coated wells at 6°. Conditions for optimal binding of virus were determined. Receptor binding activity for group B Coxsackieviruses was detected from as few as 2.5 × 10⁴ cell equivalents/ml to provide a method which was over 400 times more sensitive than the virus eclipse assay used previously. The assay revealed a recovery of up to 7% of the receptor activity of whole cells based on virus saturation of receptors. The specificity of the binding activity of the immobilized receptors was demonstrated by virus attachment competition, as done previously for receptors on live HeLa cells. Application of this method to measure receptors in deoxycholate-solubilized fetal mouse brain revealed a 2500-fold increase in sensitivity from that obtained in a virus-binding assay used previously.     

应用噬菌体肽库技术获得与猪鼻支原体蛋白P37结合的多肽序列

本研究以猪鼻支原体P37蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示随机肽库进行亲和淘选。利用ELISA法鉴定亲和力高的阳性噬菌体克隆,对其进行DNA测序和分析,据此推导随机多肽的氨基酸序列,然后构建、表达GST-多肽重组蛋白,经GST-pull down进一步鉴定该多肽与P37的结合力。经过4轮筛选和单克隆检测,获得18个有较强特异反应的阳性克隆,18个克隆包括了5种不同的小肽序列,它们分别为ACAPKPPWLC(12/18)、RPLSIDP-WSPHL(3/18)、RPLSNDPWSPHL(1/18)、QNMMSPIEGVRI(1/18)和WAPEKDYMQLMK(1/18)。用ACAPK-PPWLC、RPLSIDPWSPHL与GST重组的融合蛋白进行GST-pull down实验表明,RPLSIDPWSPHL多肽能与P37相互作用。本研究为进一步筛选与P37相互作用的蛋白提供了实验依据和结构基础。