LOX-1介导ox-LDL诱导的血管内皮细胞MCP-1的表达

目的：观察血凝素氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）对氧化LDL（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞(human unbilical vein endothelial cells, HUVECs)表达单核细胞趋化蛋白（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）基因及蛋白的影响。 方法： 用RT-PCR和Western blot的方法观察ox-LDL对培养的HUVECs表达LOX-1和MCP-1基因及蛋白的影响，然后用LOX-1的受体阻滞剂爱兰苔胶（carrageenan） 和聚肌苷酸［polyinosinic acid，poly(I)］与HUVECs预先作用后，再观察内皮细胞表达LOX-1和MCP-1基因和蛋白的变化。 结果： 用不同浓度的ox-LDL（0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 、50 mg/L、100 mg/L）与HUVECs培养24 h后，LOX-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达明显增加，呈浓度依赖性；用Carrageenan 和polyinosinic acid与HUVECs预先作用2 h后，再加入50 mg/L的ox-LDL培养24 h，与未加Carrageenan和polyinosinic acid相比，HUVECsLOX-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达明显减少。 结论： ox-LDL可以调节培养的HUVECsLOX-1和MCP-1基因和蛋白的表达，LOX-1作为ox-LDL的特异性受体，可能介导了ox-LDL诱导血管内皮细胞分泌MCP-1，从而在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要的作用。     

LOX-1在2型糖尿病大鼠肾小管间质中的表达及其意义

 目的：探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在糖尿病肾病（DN）中的作用及其机制。方法：SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组。以高脂高糖饮食加低剂量注射链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型。动态观察：生化指标和24 h尿白蛋白排泄率（UAER）;苏木素伊红（HE）和过碘酸-雪夫反应（PAS）染色观察肾脏病理,免疫组化检测LOX-1和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达,荧光定量聚合酶链反应检测LOX-1和TGF-β1 mRNA表达,ELISA检测血清单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、细胞间黏附分子（ICAM）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度。结果：随着造模时间的延长,血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量和UAER逐渐升高,高密度脂蛋白（HDL）在成模时升高,但随着病变进展含量减少;LOX-1和TGF-β1在肾小管中蛋白表达增加;与正常组比较,模型各组LOX-1和TGF-β1蛋白和mRNA表达逐渐增加;与正常组比较,模型各组血清MCP-1、ICAM和TNF-α水平均增高;LOX-1 mRNA表达与UAER、TNF-α和TGF-β1 mRNA表达量之间呈正相关（r值分别为0.509、0.649和0.800）（P<0.05）。结论：LOX-1在2型糖尿病肾小管中表达增加,使肾小管损伤,其作用可能通过炎症因子释放和炎症细胞浸润而实现,提示其在DN发生和发展过程中起重要作用。     

LOX-1在2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症中的表达及其作用

目的:观察2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA和蛋白表达,并探讨其作用机制。方法:对9例2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症患者(糖尿病组)和7例正常肾移植供肾者(对照组)动脉标本行HE染色,应用RT-PCR和Western-blot检测动脉组织匀浆中LOX-1的mRNA和蛋白水平。结果:与对照组相比,糖尿病组LOX-1mRNA和蛋白水平表达明显升高(P0.05)。结论:2型糖尿病患者可能通过上调LOX-1表达而更容易合并下肢动脉硬化闭塞症,LOX-1可能是动脉硬化闭塞症发生发展的一个关键因素。     

地塞米松对急性肺损伤中TREM-1表达的影响

目的　探讨地塞米松（Dexamethasone,Dex）对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠肺组织中髓样细胞表达的触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达的影响。 方法　以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立ALI模型,30 min后给予不同浓度的Dex（5、10、20、40 mg/kg）处理6 h;选用Dex(10 mg/kg)处理不同的时间（6、12、24、36 h）。HE染色法观察肺组织病理损伤程度; RT-PCR检测肺组织TREM-1mRNA的表达;ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液中可溶性TREM-1（sTREM-1）蛋白水平。 结果　Dex可减轻肺病理损伤;Dex呈时间依赖性地下调ALI小鼠肺组织的TREM-1 mRNA的表达,且在6 h即可降低;Dex呈剂量依赖地下调ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达,并在10 mg/kg时开始降低。Dex可降低ALI小鼠支气管肺泡灌洗液中sTREM-1的蛋白水平。 结论　Dex可呈剂量及时间依赖性下调ALI小鼠肺组织中的TREM-1mRNA的表达,并减少肺内髓样细胞胞膜TREM-1的脱落,提示Dex可能通过调节TREM-1的表达,从而抑制ALI早期的炎症级联反应,参与保护肺组织。     

油酸-脂多糖介导大鼠急性肺损伤及肺组织AP-1活性的变化

本文探讨了在油酸－内毒素（OA＋LPS）介导的大鼠急性肺损伤（ALI）模型肺组织中，转录因子AP－1活性变化的意义。有用OA＋LPS序贯性两次致伤，复制ALI大鼠模型；采用凝胶迁移率分析法（EMSA）检测肺组织AP－1活性。结果显示：OA＋LPS模型组大鼠呼吸窘迫，PaO2早期低于8kPa，死亡率升高，肺含水量显著增加，肺水肿、浸润等病变严重，伴透明膜形成，肺组织AP－1活性显著升高；并且，间隔4h两次致伤后，P aO2降低幅度最大，死亡率高达78.57%，肺含水量最大，肺病理改变最重，肺组织AP－1活性最高。结果表明：OA＋LPS序贯性两次致伤，可以介导大鼠发生严重的ALI；ALI的发生、发展与AP－1活性异常升高有关。     

急性胰腺炎大鼠肺组织TNF-α mRNA和P-STAT-1蛋白表达

目的:观察急性胰腺炎(AP)大鼠肺组织中信号转导与转录激活因子-1(STAT-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,探讨磷酸化STAT-1(P-STAT-1)在AP肺损伤中的作用。方法:40只Wistar大鼠随机分为假手术组(CON组)10只;AP模型组(AP组)30只,其中3、6、12h时间亚组各10只。CON组仅翻动胰腺数次后关腹,AP组以约0.1ml/min恒速逆行注射5%牛磺胆酸钠制备AP模型。术后3、6、12h分批处死大鼠收集标本,测定各组血清淀粉酶(AMY),聚合酶链反应(PCR)检测肺组织TNF-αmRNA表达,Western-blot检测肺组织P-STAT-1蛋白表达。结果:AP组各时间点AMY、TNF-αmR-NA和P-STAT-1蛋白的表达明显高于CON组(P0.05)。AP组P-STAT-1蛋白在3h表达升高,6h后达到高峰,12h明显下降。AP组TNF-αmRNA的表达3h开始增加,12h达到高峰。结论:AP大鼠肺组织中STAT-1蛋白的活化可能影响TNF-α等炎症因子的表达,并在AP合并肺损伤的发病过程中起一定作用。     

百合多糖抑制博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织MMP-9及TIMP-2的表达

肺纤维化死亡率高,百合对其治疗的研究鲜见.本实验观察百合多糖可否影响肺组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases,MMP-9)及其抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-2)的表达从而发挥干预肺纤维化形成的作用. 1材料与方法 1.1 材料:SPF级昆明种小鼠84只,雌雄各半.甘肃中医学院实验动物中心提供,质量合格证号SCXK(甘)2011-0001.博莱霉素(bleomycin,BLM)粉针剂购于哈尔滨莱博通药业,批号110424.0.9％氯化钠注射液溶解,终浓度为1.6 g/L.百合饮片购自甘肃兰州惠特药业,醇沉法提取百合多糖(lily polysaccharide,LP),纯度60％,蒸馏水配制为10 g/L.强的松(prednisolone acetate,PA)浙江仙琚制药股份有限公司生产,批号110428,蒸馏水配制为1.82 g/L.     

1-磷酸鞘氨醇受体2抑制脂多糖诱导的急性肺损伤

 目的: 探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2R)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法: 野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经气管滴注LPS,建立急性肺损伤动物模型。LPS注射24 h时观察肺组织的病理改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、总细胞数、中性粒细胞的比值及TNF-α、IL-6细胞因子的表达。为了观察S1P2R在肺损伤中的作用机制,LPS注射10 min前野生小鼠和S1pr2^-/-小鼠经尾静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,LPS注射12 h时,再观察肺的病理组织学变化以及BALF中的蛋白浓度,总细胞数及TNF-α、IL-6细胞因子表达的变化。结果: 与野生小鼠比较,S1pr2^-/-小鼠恶化LPS诱导的急性肺损伤,BALF中的蛋白浓度、总细胞数,中性粒细胞比值及炎症细胞因子表达显著增加。而L-NAME的预处理显著抑制在S1pr2^-/-小鼠LPS诱导加重的急性肺损伤。结论: S1P2R通过抑制NO合成,维持血管屏障,从而抑制急性肺损伤。     

利拉鲁肽抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞株TNF-a和ICAM-1表达

 目的 探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC) 中TNF-a和ICAM-1表达影响以及利拉鲁肽的干预作用。方法 将培养的RGMC 株分为6 组,分别为：对照组、高糖刺激组、Liraglutide（Li）低 、中和高浓度( 10、100和1 000nmol /L) 干预组,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐( PDTC) 干预组。用ELISA 法测定肾小球系膜细胞TNF-a 以及ICAM-1蛋白表达,用RT-PCR法测定系膜细胞TNF-a 以及ICAM-1基因表达。结果高糖可上调RGMC 中TNF-a、ICAM-1蛋白及基因表达（P均<0.05）,利拉鲁肽可抑制高糖诱导下RGMC 中TNF-a、ICAM-1蛋白及基因表达（P均<0.05）。与高糖刺激组比较,PDTC组TNF-a、ICAM-1表达量减少（P<0.05）。结论 利拉鲁肽在一定程度上减轻高糖诱导下RGMC 中TNF-a和ICAM-1的表达,可能发挥一定的肾脏保护作用。     

高糖诱导内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体表达

目的:研究高浓度葡萄糖对内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX-1) mRNA和蛋白表达的影响,探讨糖尿病易合并血管病变的可能机制。方法:用倒置相差显微镜观察细胞生长情况, RT-PCR检测不同浓度D-葡萄糖(7.5、15、30 mmol/L)作用48 h及15 mmol/L浓度作用不同时间0、12、24、48、72、96 h内皮细胞LOX-1 mRNA表达;免疫组化观察葡萄糖15 mmol/L作用48 h LOX-1蛋白表达。结果:高糖组细胞粗糙,轮廓增强,细胞内有许多发亮的颗粒;不同浓度高糖均可诱导LOX-1 mRNA表达,30 mmol/L作用最强(P＜0.01);同一浓度下作用不同时间,LOX-1 mRNA表达随时间延长而增加,48 h达高峰(P＜0.01),之后下降;免疫组化显示葡萄糖组细胞棕色着色颗粒位于胞膜和胞浆,与对照组差异明显(P＜0.01)。结论:高浓度D-葡萄糖呈浓度依赖性和时间依赖性地诱导内皮细胞LOX-1 mRNA的表达;也可诱导LOX-1蛋白表达,表达的蛋白存在于细胞浆中和细胞膜上。葡萄糖的这种作用可能是糖尿病容易合并血管病变的原因之一。     

CRP促进THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的表达

目的探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞株(THP-1)来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)蛋白和mRNA的表达及相关信号转导通路的影响。方法用佛波醇脂诱导THP-1分化为巨噬细胞。用不同浓度CRP在体外干预,分别采用RT-PCR和细胞酶联免疫测定干预后巨噬细胞LOX-1抗原蛋白和mRNA的表达。同时观察当NF-κB、AP-1和MARK信号通路抑制剂存在时,CRP对LOX-1抗原和mRNA表达的影响。结果CRP促进巨噬细胞LOX-1蛋白和mRNA表达增加。NF-κB的抑制剂BAY11-7085能抑制CRP对LOX-1蛋白和mRNA表达的诱导作用。结论CRP能在转录及转录后水平诱导THP-1来源的巨噬细胞表达LOX-1,这种调节作用可能是通过NF-κB信号传导通路实现的。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1与动脉粥样硬化的研究进展

Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 (LOX-1 } is a type-Ⅱ membrane protein belonging to the C-type lectin family molecules, which acts as a cell surface endocytosis receptor for atherogenic oxidized LDL (Ox-LDL）. LOX-1 supports the binding internalization and proteolytic degradation of oxidized LDL, but not of significant amounts of acetylated LDL. LOX-1 is initially synthesized as a 40 kD precursor protein with N-linked high mannose-type carbohydrate, which is further glycosylated and processed into a 48-kD mature form. In vivo, endothelial cells that cover early therosclerotic lesions, intimal macrophages and smooth muscle cells in advanced atherosclerotic plaques express LOX-1. LOX-1 is cleaved at membrane proximal extracellular domain and released from the cell surface. Measurement of soluble LOX-1 in vivo may provide novel diagnostic strategy for the evaluation and prediction of atherosclerosis and vascular diseases.     

血管紧张素II对巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:研究AngII对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)蛋白表达和基因转录的影响,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX-1相互之间的关系,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方法:将不同浓度AngII(1×10^-9-1×10^-5mol/L)与经0.1μmol/L佛波酯(PMA)诱导分化后的THP-1细胞共孵育24h,以及将1×10^-6mol/L浓度的AngII与诱导分化后的THP-1细胞作用不同时间0、3、6、12、24、48h后,用细胞酶联免疫法和半定量RT-PCR分别检测LOX-1蛋白和mRNA表达的情况。结果:未经诱导的THP-1细胞不表达LOX-1mRNA;而经PMA诱导后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞,并表达LOX-1mRNA。不同浓度的AngII作用诱导分化后的THP-1细胞24h,细胞LOX-1蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性显著增加。同一浓度的AngII作用THP-1细胞,可呈时间依赖性诱导LOX-1蛋白和mRNA表达,其趋势是3h左右开始增加,24h左右至最高峰,之后逐渐减低。结论:经PMA诱导分化后的THP-1细胞表达LOX-1;AngII能明显增强分化后的THP-1细胞表达LOX-1蛋白和mRNA,并呈浓度和时间依赖性。AngII这种作用可能是促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一。     

不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将其种植于载玻片上,放入流室系统分别施加以不同的剪切力.按施加剪切力的不同分为实验组和对照组:实验组分为低剪切力组(4.2 dyne/cm2,n=5)、中等剪切力组(8.4 dyne/cm2,n=5)和高剪切力组(15.0 dyne/cm2,n=5);对照组(n=5)静态条件下培养,不施加剪切力.剪切力加载1、2、4、8 h后RT-PCR测定各组内皮细胞LOX-1 mRNA的表达.结果 低剪切力(4.2 dyne/cm2)作用下,内皮细胞LOX-1表达随时间延长而增加.与对照组比较,中等剪切力(8.4dyne/cm2)作用2、4、8 h内皮细胞LOX-1的表达水平均降低[2 h:0.2346±0.0397比0.2948±0.0128,4 h:0.1747±0.0585比0.2985±0.0204,8 h:0.0256±0.0067比0.2968±0.0175,均P＜0.05].高剪切力(15.0dyne/cm2)作用下,血管内皮细胞LOX-1表达一直维持在极低水平.结论 不同剪切力可以影响内皮细胞的LOX-1表达水平.     

盐酸戊乙奎醚抑制脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶的活化

目的:观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)活化的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、LPS模型组（5 mg/kg LPS,iv）和LPS+PHC高、中、低(3.0、1.0和0.3 mg/kg)3个剂量组,每组6只,进行PHC对肺组织p38MAPK、JNK表达的量效性分析;另取大鼠在注入NS后即刻0（对照组）和注射LPS后2 h、4 h、6 h和12 h共5个时点,每时点6只,进行肺组织p38MAPK、JNK表达的时效性分析。蛋白免疫印迹法检测肺组织p38MAPK、JNK的表达。结果:LPS模型组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK、JNK的表达显著高于对照组（P＜0.05);PHC高剂量组显著抑制LPS诱导的大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达（P＜0.05);PHC在造模后6 h时最能有效抑制磷酸化p38MAPK上调。与LPS模型组相比,PHC高、中、低剂量组磷酸化JNK的表达均无显著差异(均P＞0.05);造模后不同时点,PHC对磷酸化JNK的表达均无抑制作用。结论:PHC抑制LPS诱导的ALI大鼠肺组织p38MAPK活化,但不能抑制JNK活化,PHC对LPS诱导大鼠ALI的拮抗作用可能与其抑制p38MAPK的活化有关。     

氧化低密度脂蛋白受体在人血管内皮细胞上的表达及其调控

采用放射配基结合及竞争抑制实验和反转录 聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)上血凝素样的氧化低密度脂蛋白受体 (LOX1)的表达 ,表明HUVECs存在LOX1的基因表达和高亲和力位点Bmax (5 4 5±2 0 3)ng/ 10 6cell,Kd (2 0 1± 0 6 )× 10 -8mol/L ,氧化低密度脂蛋白对其自身受体LOX1的基因表达为正反馈调节 ,应用LOX1抑制剂可抑制此作用。     

Ox-LDL通过LOX-1双重调节血管内皮细胞炎性分子的表达

目的： 探讨LOX-1/PPARγ信号途径对Ox-LDL诱导血管内皮细胞炎性分子表达的影响。方法： 用聚肌苷酸［poly(I)］、卡拉胶（carrageenan）、15脱氧前列腺素J₂（15d-PGJ₂）以及Ox-LDL与脐静脉内皮细胞（HUVECs）作用，用realtime RT-PCR测定LOX-1和PPARγ、RT-PCR测定ICAM-1和E-selectin的mRNA的表达；用Western blotting测定PPARγ、ICAM-1和E-selectin蛋白的表达。结果： Ox-LDL可以显著上调PPARγ mRNA和蛋白的表达（P<0.01），并呈明显的剂量效应关系，poly(I) 和 carrageenan可以显著抑制Ox-LDL对PPARγ的上调作用。在HUVECs中预先单独加入15 d-PGJ₂或与polyinosonic acid一起预先作用，然后再加入Ox-LDL。15d-PGJ₂可以降低Ox-LDL诱导的ICAM-1、E-selectin和LOX-1的表达；PPARγ的受体激动剂与LOX-1的受体阻断剂联合作用，其降低ICAM-1和E-selectin表达的作用比单独使用15d-PGJ₂或polyinosonic acid要显著。结论： Ox-LDL一方面引起血管内皮细胞的炎性损伤，另一方面启动细胞抗炎作用，在炎性反应过程中呈现双重的调节作用。     

肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义

目的 分析凝血酶受体(PAR-1)在肺癌组织及细胞中的表达情况，探讨PAR-1与人肺癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组织化学、Westem blot及RT-PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR-1的表达情况。结果 免疫组化S-P法检测PAR-1在52例肺癌组织中表达情况分别为：腺癌14／20例、鳞癌6／16例、大细胞癌6／10例、小细胞癌中4／6例。免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边，1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性，1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性。Westem blot及RT-PCR方法检测结果均显示PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的高表达明显高于其低转移株(PLA801C)。结论 PAR-1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达。PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的表达明显高于其低转移株(PLA801C)。PAR-1表达可能与肺癌的恶性表型及生物学行为有关。