Th17淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制。方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组。哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替。HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况。结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化。结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关。     

Th17淋巴细胞及相关细胞因子加重哮喘小鼠气道炎症

目的:研究Th17淋巴细胞及其相关的细胞因子在加重哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分率情况.将外周血各T淋巴细胞亚群与BALF的中性粒细胞数作相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P＜0.05),BALF上清中IL-4和IL-17的水平显著增高(P＜0.05),而IFN-γ的水平显著降低(P＜0.05),外周血Th2、Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著增高(P＜0.05),而Th1淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著降低(P＜0.05).相关性分析显示Th1淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著负相关(rThl=-0.446,P＜0.05),Th17淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著正相关(rTh17=0.394,P＜0.05).结论:Th17淋巴细胞可促进中性粒细胞及炎性介质在哮喘小鼠气道内的聚集,加重气道炎症.     

全氟化合物与儿童哮喘及Th1/Th2免疫应答平衡相关性研究

目的 采用病例对照探讨全氟化合物(PFAAS)暴露与儿童哮喘及Th1型细胞因子白细胞介素(IL)-2,干扰素(IFN)-γ和Th2型细胞因子(IL-4,IL-5)分泌水平的关系.方法 选择231名台北医院就诊的哮喘儿童作为病例组,来自社区的225名自然儿童作为对照组.采用双抗体酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测儿童血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的分泌水平;高效液相色谱仪分析血清中全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸(PFOA)水平.结果 哮喘儿童机体PFOS(33.9μg/L比28.9 μg/L)和PFOA(1.2μg/L比0.5 μg/L)暴露负荷显著的高于对照组儿童,且随着机体PFAAs的增高,儿童患有哮喘的风险呈增高趋势.对哮喘儿童而言,血清PFAAs水平与Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)存在显著的负相关,而与Th2型细胞因子(IL-4,IL-5)呈正相关关系.结论 PFOS暴露可诱导机体免疫应答平衡紊乱,并向Th2型免疫应答极化.     

哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平及其功能初步研究

目的:观察哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平和功能状态,初步探讨Th17在儿童哮喘发病中的作用.方法:以正常儿童(对照组,n=20)为对照,流式细胞术(FCM)检测哮喘急性发作期患儿(哮喘组,n=26)外周血Th17以及Th1,Th2细胞百分率,ELISA方法检测外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清IL-17,IFN-γ以及血浆IL-17,IL-23,IgE水平.结果:(1) 哮喘组和对照组外周血CD4+T中CD4+IL-17+T比例[(1.25±0.66)% vs (1.27±0.66)%(P>0.05)];CD4+IL-4+T比例[(2.40±2.55)% vs(2.52±1.26)%(P>0.05)];两组比较无统计学意义.哮喘组CD4+IFN-γ+T比例低于对照组[15.79±7.48 vs 24.10±12.70(P<0.05)].(2) PHA活化的PBMC体外培养72 h上清中,哮喘组IL-17水平为17.53(0～245.57)ng/L,低于对照组101.74(25.12～500.60)ng/L(P<0.01);IFN-γ水平与对照组比较无统计学意义[3507±2788 ng/L vs 3027±2737 ng/L];两组血浆中IL-17均<2 ng/L,IL-23均<15 ng/L.(3) 哮喘组血浆总IgE 499.26(2.3～945.1)IU/mL,高于对照组54.57(1.7～318.26)IU/mL(P<0.001);IgE阳性(>150 IU/mL)和阴性(<150 IU/mL)哮喘患儿体外PBMC培养上清中IL-17,IFN-γ水平比较无统计学意义.结论:哮喘急性发作期患儿外周血Th1细胞以及PHA活化的IL-17表达水平降低,Th1水平和Th17功能异常的机制及其在儿童哮喘发病中的作用值得进一步研究.     

Thl7淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化.结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关.     

当归对阴虚哮喘小鼠模型Th17优势免疫应答的影响

目的探讨当归对阴虚哮喘Balb/c小鼠模型Th17细胞优势免疫应答的影响。方法通过注射OVA致敏后吸入OVA激发的方法来复制Balb/c小鼠哮喘模型,实验后期灌胃甲状腺素复制阴虚哮喘模型,通过观测小鼠哮喘行为学、血清及BALF中IL-17A、TNF-α的水平、肺组织及BALF中炎性细胞的含量、肺组织中RORγt蛋白表达水平,探讨当归的平喘作用及对Th17细胞优势免疫应答的影响。结果 2~8 g/kg当归可明显减少阴虚哮喘小鼠哮喘发作的鼠数及其发作症状,缓解肺组织病理学变化而减少肺组织及BALF中炎性细胞的数量,降低血清及BALF中IL-17A及TNF-α的水平,抑制肺组织中RORγt蛋白的表达(P0.05,0.01);同时,当归与地塞米松配伍后对嗜酸粒细胞、IL-17A及RORγt的抑制作用具有一定的协同作用(P0.05,0.01)。结论当归具有一定的平喘作用,抑制IL-17、TNF-α与RORγt而缓解Th17优势免疫应答是其作用机制之一。     

苦参碱通过下调SOCS3表达抑制支气管哮喘大鼠炎性反应并调节Th1/Th2平衡

目的探讨苦参碱减轻支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1/Th2失衡的作用,以及SOCS3在此过程中的表达变化。方法将大鼠分为对照组、模型组(卵清蛋白致敏法构建大鼠急性哮喘模型)和药物干预A组及B组(建模成功后,分别接受60和120 mg/kg的苦参碱治疗)。计算支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸粒细胞(EOS)绝对值、EOS百分比及肺组织中的杯状细胞百分比和炎性细胞浸润积分。酶联免疫法分析BALF中的IFN-γ和IL-4水平,并计算IFN-γ/IL-4。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分析肺组织中细胞因子传导抑制因子3(SOCS3)mRNA与蛋白的表达。结果模型组大鼠BALF中EOS计数、EOS百分比、杯状细胞百分比、炎性细胞浸润评分和IL-4水平,肺组织中的SOCS3 mRNA及蛋白表达均较对照组显著增高(P0.05)。而BALF中IFN-γ水平显著降低(P0.05)。低剂量和高剂量苦参碱分别显著缓解模型组的上述变化(P0.05)。结论苦参碱可以抑制支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1/Th2的失衡,该过程中存在SOCS3的表达变化。苦参碱可能通过降低SOCS3表达调节Th1/Th2的平衡。     

抗IgE抗体对哮喘模型小鼠的气道高反应和Th2类细胞因子的影响

目的探讨抗IgE抗体在哮喘小鼠模型中对气道高反应及Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法雌性Balb/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和抗IgE抗体干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量以及蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果抗IgE抗体治疗组与哮喘模型组比较气道阻力明显降低。哮喘模型组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达明显升高,与正常对照组比较,显著差异(P<0.05)。抗IgE抗体干预组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13含量和蛋白表达水平均明显降低;IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达水平上升不明显,与哮喘模型组比较,没有显著差异(P>0.05)。结论抗IgE抗体对哮喘小鼠的治疗作用,其机制可能与调节Th2细胞所分泌的炎症细胞因子有关。     

Th17/Treg在中性粒细胞哮喘发病中的作用及临床意义

目的:分析Th17/Treg在中性粒细胞哮喘发病中的作用及临床意义.方法:选择2021年3月至2022年3月于医院治疗的支气管中性粒细胞哮喘患者50例,记为观察组.另选择同期于本院进行体检的健康志愿者50例,记为对照组.检测支气管哮喘患者缓解期、急性期及对照组Th17细胞、Treg细胞及其相关细胞因子白细胞介素(IL)-22、IL-21、IL-17、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,并计算Th17/Treg.比较两组患者Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子水平.比较支气管哮喘患者缓解期、急性期Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子水平.评估观察组哮喘控制情况(ACQ),分析中性粒细胞哮喘患者ACQ评分与Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg的相关性.结果:观察组Th17细胞、Th17/Treg、IL-22、IL-21、IL-17水平显著高于对照组(P<0.05),观察组Treg细胞、IL-10、TGF-β1水平显著低于对照组(P<0.05).支气管哮喘患者急性期Th17细胞、Th17/Treg、IL-22、IL-21、IL-17水平显著高于缓解期(P<0.05),支气管哮喘患者急性期Treg细胞、IL-10、TGF-β1水平显著低于缓解期(P<0.05).支气管哮喘患者ACQ评分与Th17细胞、Th17/Treg呈正相关(P<0.05),与Treg细胞呈负相关(P<0.05).结论:在健康人群、中性粒细胞哮喘急性期及缓解期中Treg细胞、Th17细胞、Th17/Treg及其相关细胞因子存在差异,可作为中性粒细胞哮喘诊断、病情判断指标,为临床诊疗提供参考.     

转录因子T-bet/GATA-3比率评价哮喘患者Th1/Th2失衡及CpG ODN干预机制的研究

目的: 探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系及体外CpG干预后T-bet/GATA3比率的变化及其对Th1/Th2细胞平衡的调节作用。方法: 用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者（哮喘组）及20例慢性阻塞性肺病患者（COPD组）及20例正常人（对照组） PBMCs中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，用ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFNγ的表达水平，以观察哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系。将20例发作期哮喘患者的PBMCs分为2部分，一份加入CpG ODN和PHA（CpG组），一份仅加入PHA（对照组），培养48 h后分别收集培养液和细胞，采用RT-PCR法测定细胞中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，ELISA法测定培养液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果： 哮喘患者PBMCs中T-bet/GATA-3的比率显著低于COPD患者和正常人，IL-4、IL-5、IL-13的水平显著高于COPD患者和正常人，与T-bet/GATA-3的比率呈负相关，而IFN-γ的水平显著降低，与T-bet/GATA-3的比率呈正相关。哮喘组TLR9的表达强度显著弱于COPD患者和正常人。CpG干预组细胞培养液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分别显著低于对照组，IFN-γ的水平显著高于对照组。CpG干预组细胞中T-bet mRNA和TLR9 mRNA的表达强度显著强于对照组，GATA-3 mRNA的表达强度显著低于对照组；T-bet/GATA-3的比率显著高于对照组。结论: 哮喘患者T-bet/GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1/Th2细胞失衡的精确指标。CpG ODN可以上调T-bet的表达，下调GATA-3的表达，从而上调T-bet/GATA-3的比率，逆转Th1/Th2细胞失衡，是一种很有前景的哮喘治疗手段。     

地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2失衡及嗜酸性粒细胞凋亡的作用

目的　观察地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2 (T辅助细胞 1/T辅助细胞 2 )平衡、嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡率的影响作用 ,探讨糖皮质激素治疗哮喘的机制。方法　清洁级雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 3组 :正常对照组 (C)、哮喘组 (A)、地塞米松治疗组 (T)。卵清白蛋白复制大鼠哮喘模型 ,检测大鼠血、支气管肺泡灌洗液 (BALF)中IL 4、IFN γ水平及气道壁EOS凋亡率。结果　A组大鼠BALF中IFN γ水平明显低于C组 (P <0 0 1) ,血中及BALF中的IL 4水平则明显高于C组 (均为P<0 0 1) ,表现出明显的Th1/Th2失衡。T组大鼠IL 4的表达明显低于A组而IFN γ的表达则明显高于A组 (均为P <0 0 1)。在A组 ,大鼠气道壁EOS的浸润明显增多 ,但凋亡细胞却很少看到 ,EOS凋亡率明显低于C组 (P <0 0 1) ,T组EOS凋亡率则明显高于A组 (P <0 0 1)。结论　纠正哮喘Th1/Th2失衡和促进气道壁EOS凋亡可能是糖皮质激素减轻哮喘气道炎症的重要机制之一。     

LAG-3-Ig对过敏性哮喘小鼠的Th1/Th2型细胞因子水平和气道反应性的影响

目的:研究淋巴细胞活化基因-3-Ig(LAG-3-Ig)对哮喘小鼠Th1和Th2型细胞因子的比例和气道反应性的影响,为防治哮喘提供实验依据。方法:经卵蛋白(OVA)致敏的雌性BALB/c小鼠于激发前腹腔注射LAG-3-Ig50g,末次激发24h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以ELISA法测定BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ水平。同时观察哮喘小鼠气道反应性的变化。结果:与治疗前比较,经LAG-3-Ig治疗后,哮喘小鼠BALF中IL-4和IL-5的水平显著降低(分别减少了27.9%和29.6%);而IFN-γ的水平显著增高(增加30.8%,P<0.01)。LAG-3-Ig治疗组小鼠气道螺旋条对组织胺的反应性降低,各个密度的组织胺所诱导的气管螺旋条收缩张力显著低于哮喘对照组(P<0.05)。结论:LAG-3-Ig可抑制哮喘小鼠IL-4和IL-5的分泌并能降低小鼠气道的反应性,对哮喘的治疗具有临床意义。     

慢性乙肝、肝硬化和肝癌患者Th1/Th2细胞因子检测及临床应用

目的:应用流式微球技术(cytometric bead array,CBA)技术检测慢性乙肝、肝硬化及肝细胞性肝癌(hepatic cellular cancer,HCC)患者血浆中Th1/Th2细胞因子水平,探讨其临床应用。方法:选择慢性HBV感染者71例,HBV阳性肝硬化患者33例,HBV阳性肝癌患者25例,用CBA方法检测其血清中Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2,Th2类细胞因子IL-4、IL-5、IL-10的表达情况。结果:肝癌患者血清中Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2,Th2类细胞因子IL-5表达显著高于慢性乙肝和肝硬化患者,而IL-4、IL-10在三组患者中的表达无显著性差异。结论:肝癌患者机体强势分泌Th1类细胞因子,处于高免疫反应状态。检测乙肝患者Th1/Th2类细胞因子对于肝病慢性化的进展成为一项新的临床预测指标。     

内毒素对慢性HBV感染者Th1/Th2类细胞因子的影响

目的 通过研究慢性HBV感染者血浆内毒素(Endotoxin,ET)与Th1、Th2类细胞因子的关系,进而探讨其各自对慢性乙型肝炎(CHB)患者免疫功能的影响.方法 无菌收集HBV感染者和正常对照者血浆、血清,以鲎试剂法测定血浆ET水平,同时测定血清补体活性及Th1、Th2类细胞因子水平.分析ET与Th1、Th2类细胞因子的关系.结果 CHB患者IL-4与IL-10水平明显升高,IL-2、IL-12和IFN-γ水平明显降低;ET阳性组患者IL-4与IL-10水平明显高于阴性组,IL-12水平在阳性组明显低于阴性组;ET与AP50呈显著正相关.结论 CHB患者均有不同程度的Th1/Th2类细胞因子失衡,主要表现为:Th1类细胞因子减少而Th2类细胞因子增加,ET主要影响Th2类细胞因子,进而影响患者的免疫功能.     

以T-bet/GATA-3的比率作为评价哮喘患者Th1/Th2失衡指标的探讨

目的：探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-beL／GATA-3的比率与Th1／Th2细胞失衡的关系。方法：采用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者(哮喘组)及20例慢性阻塞性肺病患者(COPD组)及20例正常人(对照组)PBMCs中T-bet和GATA-3的活性，ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果：哮喘组PBMCs中T-bet／GATA-3的比率较COPD组和对照组明显降低，Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的水平增高，与T-bet／GATA-3的比率成负相关，而Th1细胞因子IFN-γ的水平降低，与T-bet／GATA-3的比率成正相关。结论：哮喘患者T-bet／GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1／Th2细胞失衡的精确指标。     

支气管哮喘患儿治疗前后外周血Th1／Th2相关细胞因子的临床分析

目的：探讨支气管哮喘患儿治疗前后外周血Th1／Th2相关细胞因子水平的变化及临床意义。方法i应用放射免疫分析和酶联法对31例支气管哮喘患儿进行了外周血中Th1型细胞因子（IL-2、IFN-1）和Th2型细胞因子IL-4、IL-10浓度,并与35名正常人组作比较。结果i支气管哮喘患儿在治疗前血清IL-2、IFN-^y水平均非常显著地低于正常儿组（P〈0．01）,而血清IL4、IL-10水平又非常显著地高于正常儿组（P〈0．01）。经治疗1个月后则与正常儿组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：支气管哮喘患儿存在Th1／Th2细胞免疫失衡。Th1免疫功能低下。IFN-1下调可能是参与哮喘发病机制的重要原因,对哮喘有负向调节作用。哮喘患儿存在Th2细胞免疫功能亢进,以IL-4、IL-10为代表的Th2免疫功能在儿童哮喘的发病中发挥正性促炎作用。     

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响北大核心CSCD

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。     

不同Th1/Th2细胞免疫应答支气管肺泡灌洗液中细胞学的变化

目的 探讨不同Th细胞优势应答下支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞学变化，了解Th1/Th2细胞免疫应答的细胞和分子机制。方法 用鸡卵清蛋白（OVA）致敏Wistar大鼠（每组10只），制作致敏大鼠哮喘模型；用“冻干BCG”皮内注射制作BCG免疫大鼠模型。收集BALF并做HE染色，进行细胞分类计数。采用流式细胞术，测定BALF中，CD2^ ,CD28^ 及γδTCR^ T细胞占总淋巴细胞的百分率及平均荧光密度（MIF）。用原位杂交法，检测肺组织中IL－4mRNA的IFN－γmRNA的表达。用ELISA法检测血清IL－4和IFN－γ的浓度。结果 哮喘组BALF中淋巴细胞，嗜酸性粒细胞（EOS），浆细胞和中性粒细胞的总数，均显著多于正常组（P＜0．01）；BCG免疫组BALF中，淋巴细胞和巨噬细胞的总数也显著高于正常组（P＜0．001）。哮喘组BALF中，CD2^ T 细胞的明显增加。但哮喘组CD2^ T细胞的F1显著高于正常组及BCG组（P＜0．05）；BCG组BALF中，CD^2 T细胞的百分率与正常组相比产无显著差异（P＞0．05），其CD2^ T细胞的MFI显著高于正常组(P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，CD28^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著多于正常组（P＜0．01）；BCG组CD28^ 细胞的MFI高于哮喘组（P＜0．01）。两组的CD28^ 细胞的MF1均显著多于正常组（P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，γδTCR^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著高于正常组（P＜0．01）。结论 支气管哮喘患者Th2细胞的优势应答，与BALF中的B细胞，EOS，浆细胞和中性粒细胞等APC数的增加及T细胞上CD2的高表达有关；而BCG免疫组中的Th1细胞的优势应答与BALF中巨噬细胞，T细胞增加及T细胞上CD28的高表达有关。γδT细胞可能存在Th1/Th2细胞免疫模式，既参与哮喘免疫也参与BCG免疫过程，可能是调节Th0细胞分化的重要始动细胞。     

大鼠发育早期接触变应原对Th1/Th2亚群功能及哮喘发生的影响

目的探讨妊娠期母鼠及其子代接触尘螨点刺液（Derp）对发育后期个体Th1/Th2平衡及哮喘发生的影响。方法Wistar大鼠根据母体妊娠期及新生早期是否接触Derp随机分为对照组、母Derp-仔Derp-组（母鼠和其子代均未接触Derp）、母Derp＋仔Derp＋组（母鼠和其子代均接触Derp）和母Derp＋仔Derp-组（母鼠接触Derp,其子代未接触Derp）,分别皮下注射Derp或生理盐水,30d龄时除对照组外,其余3组以卵白蛋白（OVA）为变应原致敏并雾化吸入,诱发哮喘发生。取血浆检测OVA特异性IgE抗体、收集外周血单个核细胞（PBMC）用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ水平,行支气管肺泡灌洗记录支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞的计数,留取肺组织行病理学检查。结果母Derp＋仔Derp＋组在哮喘建模后PBMC培养上清中IFN-γ水平显著低于母Derp-仔Derp-组,IL-4水平显著升高,IL-4/IFN-γ比值升高,OVA特异性IgE、BALF中嗜酸性粒细胞计数显著高于母Derp-仔Derp-组;母Derp＋仔Derp-组与母Derp-仔Derp-组IL-4和IFN-γ水平差异均无统计学意义,OVA特异性IgE水平虽有增高,但差异不具统计学意义,BALF中嗜酸性粒细胞计数差异无统计学意义。母Derp＋仔Derp＋组Th2优势显著高于母Derp＋仔Derp-组。结论胎鼠对于Derp跨胎盘的致敏作用可通过母体妊娠期间的免疫来完成,这一过程会根本上导致Th2优势免疫的发生,增加了变态反应性疾病的危险性。     

过敏原对支气管哮喘患者Th1/Th2作用影响的研究

目的：通过测定哮喘患者外周血及外周血单个核细胞（PBMC）受特异性过敏原刺激后细胞因子IFN-γ/IL-4、转录因子T-bet/GATA-3的表达变化,探讨Th1、Th2与过敏性哮喘之间的关系。方法：①采用ELISA法检测发作期过敏性哮喘患者血浆IFN-γ/IL-4及PBMC在粉尘螨（Df）刺激下产生IFN-γ/IL-4的水平,并以正常人为对照。②采用半定量RT-PCR反应检测过敏性哮喘患者PBMC受过敏原刺激前后T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达水平,并以正常人为对照。结果：①哮喘患者血浆IL-4水平较正常人升高（P=0.0017）,IFN-γ与正常人无明显差异（P=0.7600）,IFN-γ/IL-4的比值显著低于正常人（P=0.0001）。②经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC产生的IL-4、IFN-γ水平均较正常人显著升高（t=3.5644,P=0.0010;t=3.3500,P=0.0020）,但哮喘患者IFN-γ/IL-4的比值仍显著低于正常组（t=6.3640,P=0.0001）。③哮喘患者PBMC中GATA-3的表达量较正常人显著增高（t=2.2743,P=0.0280）,而T-bet的表达量与正常人比较无显著变化（t=0.3823,P=0.7044）,哮喘患者T-bet/GATA-3比值与正常人也未见显著差异（t=1.1152,P=0.2834）。④经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC中T-bet、GATA-3表达水平较正常人显著增高（t=2.2982,P=0.0276;t=3.7887,P=0.0006）,但T-bet/GATA-3的比值与正常人比较仍无显著差异（t=1.1959,P=0.2491）。结论：在细胞因子及转录因子水平上,过敏性哮喘患者不仅存在着Th2反应增强,也存在着Th1反应的增强,因此用Th1/Th2平衡失调学说尚不能满意解释过敏性哮喘的发病机制。