实验性自身免疫性重症肌无力大鼠T淋巴细胞IFN-γ及其受体表达水平的研究

目的探讨实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠T淋巴细胞γ-干扰素（IFN-γ）的分泌及其表面IFN-γ受体（IFN-TR）的表达水平。方法健康、雌性Lewis大鼠24只．随机分为正常对照组、完全福（氏）佐剂（CFA）对照组、EAMG组。EAMG组大鼠分别于足垫、腹部及背部皮下多点注射丁（氏）双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体（AChR）蛋白乳剂1mL，第4周再次注射上述乳剂免疫大鼠。CFA对照组只接受等量的CFA皮下注射。初次免疫后7周．分离各组大鼠脾脏T淋巴细胞并体外培养48h后，应用ELISA和免疫组织化学方法分别检测T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR的表达水平。结果（1）正常大鼠T淋巴细胞体外培养48h后，其上清液中IFN-γ水平很低，而EAMG组大鼠T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ水平较CFA对照组与正常组显著增高（P〈0.01）；（2）正常大鼠T淋巴细胞经过体外培养后可见少量IFN-γR阳性细胞．而EAMG组大鼠T淋巴细胞经体外培养后可见较多IFN-γR阳性细胞，其阳性细胞数及其平均吸光度D（λ）值均明显高于CFA对照组与正常组（P〈0.01）。结论EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR表达水平明显升高.IFN-γ／IFN-γR的异常表达可能在重症肌无力（MG）的发生过程中发挥重要作用。     

重症肌无力患者外周血乙酰胆碱受体特异性T细胞sIL-2R、IFN-γ、IL-4的表达和转录

目的了解ＭＧ患者的乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）特异性细胞免疫应答。方法采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测３０例ＭＧ患者和２０名健康对照者经ＡＣｈＲ刺激后外周血单核细胞（ＰＢＭＣ），辅助性Ｔ细胞１（Ｔｈ１）相关的干扰素（ＩＦＮ）γ、辅助性Ｔ细胞２（Ｔｈ２）相关的白细胞介素（ＩＬ）４及与细胞免疫活化密切相关的可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ２Ｒ）的分泌，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）结合狭缝印迹杂交检测ＩＦＮγ、ＩＬ４的信息核糖核酸（ｍＲＮＡ）转录。结果总ＭＧ患者组ＩＦＮγ显著高于健康对照组，尤以急性ＭＧ患者组（１４例）更明显，且其升高与其ｍＲＮＡ转录水平一致。虽然这两组ＭＧ患者的ｓＩＬ２Ｒ亦明显高于健康对照组，但患者组的ＩＬ４表达及其ｍＲＮＡ转录与健康对照组相比差异无显著意义。结论ＭＧ患者有Ｔｈ１和Ｔｈ２的失衡，ＭＧ患者有ＡＣｈＲ特异性细胞免疫活化，Ｔｈ１的细胞因子ＩＦＮγ可能作为效应因子参与了ＭＧ的发病。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞IFN-γ及IL-4的研究

目的　探讨重症肌无力 ( MG)患者乙酰胆碱受体 ( ACh R)特异性 T细胞免疫应答及其与乙酰胆碱受体抗体 ( ACh RAb)间的关系。方法　应用体外细胞培养和 ELISA方法检测 MG患者外周血单个核细胞 ( PBMNC)经 ACh R刺激后产生 IFN-γ和 IL-4的水平。结果　 MG患者 IFN-γ和 IL-4的诱生水平均比对照组明显升高( P<0 .0 1 ) ;ACh RAb阳性组 MG患者 IFN-γ和 IL-4的诱生水平明显高于 ACh RAb阴性组 ( P<0 .0 1和 P<0 .0 5 )。结论　MG患者无论为 ACh RAb阳性或阴性 ,均存在 ACh R特异性 T细胞激活 ,IFN-γ和 IL-4均与自身抗体的产生有关。     

TGF—β1基因修饰的树突状细胞移植对EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ／IFN-γR表达的影响

目的 探讨TGF-β1基因修饰的树突状细胞(DC)移植对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γ受体(IFN-γR)表达的影响.方法 近交系、8～10周龄、健康雌性Lewis大鼠25只,随机分为健康对照组、EAMG组、DC对照组、pcDNA3-TGF-β1表达质粒转染的DC(pcDNA3-TGF-β1-DC)组与生理盐水对照组5组.除健康对照组外,各组均采用丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白二次免疫方法复制EAMG大鼠模型.初次免疫后第5天分别皮下注射2×106 DC、pcDNA3-TGF-β1-DC及等体积生理盐水,健康对照组和EAMG组不接受任何治疗.初次免疫后7周,分离脾脏T淋巴细胞,分别应用酶联免疫吸附试验和免疫组化方法检测T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR表达水平.结果 (1)体外培养48 h后,健康对照大鼠T淋巴细胞上清液中IFN-γ水平很低,而EAMG组大鼠T淋巴细胞上清液中IFN-γ水平显著升高(P<0.001).pcDNA3-TGF-β1-DC治疗组IFN-γ水平与EAMG组差异无统计学意义(P>0.05).(2)健康对照大鼠T淋巴细胞经体外培养后可见少量IFN-γR阳性细胞,而EAMG组大鼠T淋巴细胞经体外培养后可见较多IFN-γR阳性细胞,其阳性细胞数及平均吸光度均明显高于健康对照组(P<0.001);pcDNA3-TGF-β1-DC组IFN-γR阳性细胞数较EAMG组明显增多,其阳性细胞平均吸光度亦明显高于EAMG组(均P<0.01).结论 EAMG组大鼠T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR表达水平明显提高;pcDNA3-TGF-β1-DC治疗可进一步诱导IFN-γR表达,调节T淋巴细胞IFN-γ/IFN-γR表达可能是TGF-β1基因修饰的DC治疗EAMG的机制之一.     

胸腺切除对重症肌无力患者T淋巴细胞亚型的影响

目的：观察胸腺切除(Tx)术对重症肌无力(MG)病人的临床疗效及对T淋巴细胞亚型的影响。方法：用许氏评分法观察30例伴胸腺增生或胸腺瘤的MG患者的病情严重程度及Tx术后2个月的临床疗效;采用直接免疫荧光染色和流式细胞仪技术测定60名志愿健康者和30例伴胸腺增生或胸腺瘤的MG患者Tx术前及术后2个月T淋巴细胞亚型的变化。结果：伴胸腺增生或胸腺瘤的MG病人Tx术前外周血中CD4＋T淋巴细胞的百分率较正常人显著增多(P＜0．01),CD8＋T淋巴细胞的百分率较正常人显著减少(P＜0．01),CD4＋/CD8＋T细胞的比例明显增高(P＜0．01)。伴胸腺增生MG病人Tx术后随着临床症状的改善,CD8＋T淋巴细胞的百分率较术前显著升高(P＜0．05),CD4＋/CD8＋T细胞的比例较术前显著下降(P＜0．05)。伴胸腺瘤MG病人Tx术后随着临床症状的改善,CD4+T淋巴细胞的百分率较术前显著下降(P＜0．05),CD4＋/CD8＋T细胞的比例较术前显著下降(P＜0．05)。结论：重症肌无力患者T淋巴细胞亚型的测定既可以为MG免疫病理学的发病机理的研究提供实验依据,也能为Tx治疗MG提供一个客观的实验室指标,为判断疾病的转归提供实验依据。     

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型的研究概况

通过主动或被动免疫方法可复制出实验性自身免疫性重症肌无力(ＥＡＭＧ)动物模型,该模型在临床表现、药理学、电生理、免疫学及组织学表现等方面与ＭＧ病人很相似,因此,它是研究ＭＧ的极佳工具。本文从ＥＡＭＧ的动物选择、制备方法及检测指标等方面作一综述。     

重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群凋亡的研究

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群凋亡在重症肌无力(MG)免疫发病机制中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术结合免疫荧光抗体法测定了45例MG患者和40例正常对照组外周血CD4~ T淋巴细胞、CD8~ T淋巴细胞百分数及其凋亡状况,并对24例MG患者在应用糖皮质激素治疗后外周血T淋巴细胞亚群凋亡状况进行了观察。结果MG患者组外周血CD8~ T淋巴细胞百分率较正常对照组明显降低,CD4~ /CD8~ 比值较正常对照组明显升高：MG患者组外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度较正常对照组明显降低；MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度与MG类型、预后密切相关：应用糖皮质激素治疗后MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度明显增强。结论MG患者存在T淋巴细胞亚群的分布异常及CD4~ T淋巴细胞凋亡功能障碍,其凋亡程度可能与MG类型、预后密切相关,糖皮质激素对MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡缺陷具有纠正作用。     

免疫抑制剂对重症肌无力病人T淋巴细胞亚型的影响

目的观察重症肌无力(MG)病人细胞免疫的异常改变和免疫抑制剂对重症肌无力(MG)病人的临床疗效及对T淋巴细胞亚型的影响。方法用许氏评分法观察60例MG病人的病情严重程度和免疫抑制治疗2个月后的临床疗效;采用直接免疫荧光染色和流式细胞仪技术测定60例病人和60名志愿健康者周围血中T淋巴细胞亚型的百分率,并测定糖皮质激素或环磷酰胺免疫抑制治疗前及治疗后2个月T淋巴细胞亚型的变化。结果未治疗MG组外周血中CD8 T淋巴细胞的百分率较正常对照组显著下降(P<0.01);CD4 T淋巴细胞的百分率和CD4 /CD8 T细胞的比例较正常对照组均显著升高(P<0.01)。经激素或环磷酰胺治疗2个月后MG组随着临床症状的改善,外周血中总T细胞(CD3 )和CD8的百分率较治疗前均显著升高(P<0.01;P<0.05);CD4 T淋巴细胞的百分率和CD4 /CD8 T细胞的比例较治疗前均显著下降(P<0.01)。结论MG病人有T淋巴细胞亚型的变化,免疫抑制治疗对T淋巴细胞亚群有明显影响,提示T淋巴细胞亚型的测定可为激素、环磷酰胺等免疫疗法提供一个客观的实验室指标,为判断疾病的转归提供实验依据。     

雷公藤多甙对重症肌无力患者外周血T淋巴细胞 …

目的 探讨雷公藤多甙（ＴⅡ）对重症肌无力（ＭＧ）的免疫调节机制,方法 将５２例ＭＧ患者随机分为ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组,观察ＴⅡ治疗组和非ＴⅡ治疗组治疗前后及４０例正常对照外周血Ｔ淋巴细胞亚群分布。结果 ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组治疗前外周血中ＣＤ３,ＣＤ８细胞较正常对照组明显降低,ＣＤ４与正常对照组比较我显著性差别,ＣＤ４／ＣＤ８比值较正常对照组显著升高,ＴⅡ治疗组治疗前后外周血中ＣＤ３无明显差别     

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(综述)

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型在临床表现、药理学、电生理、免疫学及组织学表现等方面已经证明与重症肌无力患者极为相似，是进一步研究人类重症肌无力的极佳工具。此文主要介绍实验性自身免疫性重症肌无力动物模型的各种制备方法、检测指标以及影响制备动物模型的因素。     

重症肌无力与人类嗜T淋巴细胞I型病毒抗原的关系

采用免疫荧光法检测２５例重症肌无力患者外周血细胞中人类嗜Ｔ淋巴细胞Ｉ型病毒（ＨＴＬＶ－１）抗原。结果显示，２０％（５／２５）的重症肌无力患者血细胞中ＨＴＬＶＩ抗原阳性，而对照组７１例全部为阴性。两组比较差异有极显著性意义。提示重症肌无力的发病可能与ＨＴＬＶ－１的感染有关。     

获得性自身免疫性重症肌无力

凡神经肌肉接头(NMJ)处突触后膜(PS)上乙酰胆碱受体(AChR)数量减少或功能减退,均可致活动后加重、休息后减轻等随意肌无力的临床表现,该病称为重症肌无力(MG)。MG病因众多,包括先天遗传、代谢障碍、中毒、药物(D-青霉胺等)、免疫障碍等。     

一氧化氮合酶抑制剂对实验性自身免疫性重症肌无力的作用

实验证明，一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS／NO)参与了自身免疫反应的多个环节，但关于它们在自身免疫性疾病发病中的作用，目前仍存在争议。Brenner等发现，NOS抑制剂治疗实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠可以取得肯定的疗效，而Gold等的研究却认为，NOS抑制剂可使主动免疫的EAE大鼠发病明显加重。     

细胞因子在实验性自身免疫性重症肌无力发生机制中的作用(综述)

重症肌无力（MG）及其动物模型实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）是自身免疫性疾病，研究表明细胞因子在EAMG的发生及发展过程中有重要作用。并可为MG的研究提供有益的启示，本文就近年来研究较多并在EAMG发生机制中有重要作用的部分细胞因子（干扰素-α、干扰素-γ，白细胞介素-12和白细胞介素-4）做一综述。     

眼肌型及全身型重症肌无力患者外周血T淋巴细胞Fas的表达

目的 探讨Fas介导的细胞凋亡与眼肌型(ocular myasthenia gravis,OMG)及全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)发病的关系.方法 采用流式细胞技术检测4例OMG、13例GMG患者及13例健康对照组外周血淋巴细胞中CD4、CD8及Fas的表达.结果 OMG、GMG组与对照组外周血T淋巴细胞表面CD4、CD8分子表达的差异无统计学意义(P>0.05).GMG组与对照组外周血T淋巴细胞中Fas+细胞比例的差异有统计学意义(41.72%±8.73%、31.22%±13.00%,P:0.017).GMG组与对照组Fas表达增高者比例的差异有统计学意义(61.5%、15,4%,P=0.041).Fas表达增高的GMG患者病情较重.病程较长.胸腺瘤发生率较高.OMG与GMG组外周血T淋巴细胞中Fa8+、CD4+Fas+、CD8+Fas+细胞比例差异无统计学意义(P>0.05).结论 GMG患者外周血T淋巴细胞中Fas的表达升高,OMG与GMG患者外周血T淋巴细胞中Fas的表达无显著差异,二者可能同属一种系统性疾病.     

雷公藤多甙对重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨雷公藤多甙（ＴⅡ）对重症肌无力（ＭＧ）的免疫调节机制。方法将５２例ＭＧ患者随机分为ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组,观察ＴⅡ治疗组和非ＴⅡ治疗组治疗前后及４０例正常对照外周血Ｔ淋巴细胞亚群分布。结果ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组治疗前外周血中ＣＤ３、ＣＤ８细胞较正常对照组明显降低,ＣＤ４与正常对照组比较无显著性差别,ＣＤ４／ＣＤ８比值较正常对照组显著升高;ＴⅡ治疗组治疗前后外周血中ＣＤ３无明显差别,ＣＤ４较治疗前明显降低,ＣＤ８明显增加,ＣＤ４／ＣＤ８比值则显著降低,而非ＴⅡ治疗组外周血ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８比值治疗前后则无显著性变化。结论ＴⅡ治疗ＭＧ的免疫抑制机制可能通过调节Ｔ淋巴细胞亚群分布而发挥作用。     

AChRAb阳性和阴性重症肌无力患者IL-4和IFN-γ分泌细胞的检测

将行胸腺切除术的重症肌无力（MG）患者分成乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）阳性和阴性2组，采用免疫酶点法检测其外周血、骨髓和胸腺白细胞介素-4（IL－4）分泌细胞和干扰素-γ（IFN－γ）分泌细胞的数量。结果表明AChRAb阳性组其外周血和骨髓中IL－4和IFN－γ分泌细胞数量均显著高于AChRAb阴性组（P＜0．05），而胸腺组织两组间差异无显著性意义（P＞0．05）。提示IL－4和IFN－γ在MG自身抗体的产生中均有重要作用，TH细胞的不同亚类都参与MG的免疫调节。     

复方参芪合剂治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型的研究

目的研究复方参芪合剂治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的有效性及其可能机制。方法将经纯化的电鳐乙酰胆碱受体(AChR)免疫的Lewis大鼠30只随机分为对照组、复方参芪组和地塞米松组(DXM)3组,每组各10只。治疗前后分别对3组鼠进行行为学评分,以放射免疫法检测血清AChR抗体(IgG)水平,ELISA法检测抗体亚型IgG1、IgG2a水平,以流式细胞技术检测各种细胞因子分泌型细胞的比例。结果 (1)行为学评分:复方参芪组与DXM组分别为(0.42±0.31)分和(0.26±0.15)分,两组间无统计学差异(P0.05),但均低于对照组[(0.83±0.43)分](P0.05);(2)AChR抗体水平:复方参芪组[(16.26±2.31)nmol/L]低于对照组[(24.15±2.45)nmol/L],但高于DXM组[(12.41±2.92)nmol/L](均P0.01)。(3)细胞因子分泌型细胞比例:IFN-γ及IL-4分泌型细胞比例复方参芪组[分别为(32.48±5.32)%、(21.58±7.17)%]和地塞米松组[分别为(24.74±3.19)%、(20.40±4.13)%]均低于对照组[分别为(39.20±4.17)%、(29.12±4.87)%](分别P0.01、P0.05),复方参芪组IFN-γ分泌型细胞比例高于地塞米松组(P0.05),但两组间IL-4分泌型细胞比例差异无统计学意义(P0.05);IL-10分泌型细胞比例,复方参芪组[(30.60±7.04)%]分别高于对照组[(23.90±4.72)%]和地塞米松组[(18.47±5.29)%](均P0.05),地塞米松组与对照组间无统计学差异(P0.05)。结论复方参芪合剂对EAMG有一定疗效,其机制可能与调节Th1/Th2细胞比例、促进免疫平衡有关。     

糖皮质激素受体阻断对大鼠实验性自身免疫性重症肌无力的影响

研究重症肌无力（ＭＧ）患者外周血白细胞糖皮质激素受体（ＧＲ）减少，而血浆皮质醇则在正常范围，探讨其与ＭＧ发病的关系。方法ＳＤ大鼠３２只，随机分成４组。实验组先以ＧＲ的竞争性拮抗剂米非司酮（ＲＵ３８４８６，ＲＵ４８６）阻断其ＧＲ，再以从人肌肉中粗提的乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）进行免疫；实验对照组单用ｎＡＣｈＲ，试剂对照组只用ＲＵ４８６，而正常对照组仅用福氏佐剂。以临床症状、血清抗ｎＡＣｈＲ抗体（ｎＡＣｈＲ－ａｂ），重复刺激坐骨神经递减幅度为观察指标。结果实验组的临床症状和ｎＡＣｈＲ－ａｂ滴度升高及肌电图递减幅度均较明显，经ｔ检验分析，均与实验对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而试剂对照组和正常对照组均无ＭＧ的表现。结论ＧＲ被阻断后，对大鼠的实验性自身免疫性ＭＧ（ＥＡＭＧ）发病有易化作用。     

重症肌无力患者外周血CD+4 CDhigh25 T细胞及其动态观察

目的 研究重症肌无力(myasthenia gravis, MG)患者外周血CD+4 CDhigh25 T细胞的水平,以及各种治疗方法对其的影响.方法 应用四色流式细胞仪检测55例MG患者(治疗前)与33名健康对照外周血CD+4 CDhigh25 T细胞百分率,对其中26例MG患者进行了治疗前后的动态检测.结果 MG患者与健康对照外周血CD+4 CDhigh25 T细胞百分率分别为6.22%±3.37%与5.16%±1.87%,两者差异无统计学意义(P=0.061),而21例非手术治疗患者其外周血CD+4 CDhigh25 T细胞百分率的变化与病情评分的变化呈负相关(r=-0.563, P=0.008).结论 这种非手术治疗前后短期内的CD+4 CDhigh25 T细胞的变化情况可能与病情相关,但胸腺切除前阶段观察的情况有所不同.