水杨酸钠中耳灌注对庆大霉素耳毒性的防护作用

目的 观察水杨酸钠经中耳局部灌注给药对庆大霉素耳毒性的防护作用。方法 24只健康杂色豚鼠均接受圆窗置管术，然后随机分成3组：Ⅰ组为生理盐水对照组；Ⅱ组为庆大霉素组，腹腔注射庆大霉素，经听泡灌注生理盐水；Ⅲ组为庆大霉素加水杨酸钠组，腹腔注射庆大霉素，经听泡灌注水杨酸钠。观察各组给药前后听性脑干反应阈的变化和给药后4周毛细胞损失情况。结果 听泡置管术后ABR反应阈无明显改变；给药后2周和4周，庆大霉素组ABR反应阈较庆大霉素加水杨酸组显著增高（P〈0．01），对照组ABR反应阈无显著变化。耳蜗铺片、毛细胞计数显示庆大霉素组外毛细胞严重缺失，以底回最明显，庆大霉素加水杨酸钠组外毛细胞损失较庆大霉素组轻（P〈0．05）。对照组无明显外毛细胞缺失。结论 水杨酸钠经中耳局部给药途径可减轻庆大霉素所致听功能损害和毛细胞缺失，可在一定程度上有效预防庆大霉素的耳毒性。     

经圆窗应用地塞米松对豚鼠庆大霉素耳毒性的拮抗作用北大核心CSCD

目的探讨经圆窗局部应用地塞米松和全身应用地塞米松对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗损害的拮抗作用。方法选用听力正常豚鼠60只,随机分为4组:①庆大霉素组,肌肉注射庆大霉素120mg·kg-1·d-1,1次/天,共10天;②全身用药组,肌肉注射庆大霉素(用法同庆大霉素组),同时腹腔注射地塞米松2.5mg·kg-1·d-1,1次/天,共10天;③局部用药组,肌肉注射庆大霉素(用法同庆大霉素组),右耳经圆窗局部用明胶海绵浸地塞米松(5mg/ml)约0.1ml,共1次。④对照组:肌肉注射与庆大霉素等体积的生理盐水,1次/天,共10天,右耳经圆窗局部用地塞米松1次。于实验前、停药后第1天和第10天分别检测各组动物的听性脑干反应(ABR),显微镜下观察中耳粘膜反应,扫描电镜观察耳蜗毛细胞的形态学变化。结果停药第10天,除对照组外,庆大霉素组、全身用药组、局部用药组动物ABR反应阈较实验前均有不同程度的升高,其中庆大霉素组的反应阈明显高于局部用药组(P<0.05)。扫描电镜下可见庆大霉素组动物耳蜗毛细胞损害严重,而全身和局部用药组动物耳蜗毛细胞损伤程度明显减轻;各组动物中耳粘膜正常。结论地塞米松可以在一定程度上减轻庆大霉素所致的耳毒性,经圆窗局部给药的效果优于全身应用。     

丹参注射液对豚鼠耳蜗毛细胞的影响

目的观察丹参注射液对豚鼠庆大霉素耳中毒引起的耳蜗毛细胞酸性磷酸酶变化的影响。方法选用耳廓反射正常,体重250g～300g的健康杂色豚鼠,雌雄不限,随机分成3组,正常对照组15只,肌肉注射生理盐水2ml/(kg·d);庆大霉素组15只,肌肉注射庆大霉寨80mg／(kg·d);丹参注射液组15只,腹腔注射丹参注射液6mg／(kg·d),然后肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组。各组动物连续注射药物均20天。用脑干听觉诱发电位(auditory brainstem response audiometry,ABR)检查豚鼠的听阈变化情况;用组织化学方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化情况。结果正常对照组、庆大霉素组和丹参注射液组动物的ABR阈值分别为：(34.50±1.22)dB peSPL、(34.25±1.18)dBpeSPL和(34.39±1.27)dB peSPL;用药后第22天,反应阈值分别为：(34.65±1.32)dB peSPL、(71.25±24.73)dB peSPL和(41.05±10.93)dB peSPL。对照组分别与庆大霉素、丹参注射液组比较,差异显著(t=8.097,3.184,P＜0.01);丹参注射液组与庆大霉察组比较,有显著性差异(t=6.118,P＞0.01)。耳蜗铺片光镜下观察毛细胞酸性磷酸酶染色：正常对照组呈棕褐色,显色分布均匀,毛细胞排列整齐;庆大霉素组毛细胞依动物耳聋程度不同而出现不同程度染色缺失,庆大霉素组染色缺失显著,丹参注射液组染色缺失轻,两组比较有明显差异。结论丹参注射液能明显降低庆大霉素的耳毒性;保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性,降低庆大霉素对溶酶体的损坏而造成的毛细胞自溶性损伤,是丹参注射液降低庆大霉索耳毒性的机制之一。     

NGB基因转染拮抗庆大霉素耳毒性作用的实验研究

目的验证阳离子脂质体介导脑红蛋白(neuroglobin,NGB)基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保护作用。方法将ABR反应阈均不超过40dB SPL的120只健康花色豚鼠随机分为5组,每组24只:Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:人工外淋巴液对照组(经左耳注入人工外淋巴液);Ⅲ组:人工外淋巴液实验组(经左耳注入人工外淋巴液后肌肉注射庆大霉素);Ⅳ组:空质粒转染组(经左耳注入空质粒pEGFP-C1后肌肉注射庆大霉素);Ⅴ组:NGB基因转染组(经左耳注入pEGFP-NGB后肌肉注射庆大霉素),庆大霉素均经后腿肌肉注射120mg.kg-1.d-1,共给药14天。停止给药后喂养14天,各组均行ABR检测,耳蜗基底膜铺片、免疫组化观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学及NGB蛋白表达的变化。结果给药后Ⅰ组ABR反应阈平均为37.22dB SPL(左耳)和36.94dB SPL(右耳),Ⅱ组阈值平均为37.22dB SPL(左耳)和37.50dB SPL(右耳),Ⅲ组阈值平均为119.44dB SPL(左耳)和122.22dB SPL(右耳);Ⅳ组阈值平均为119.72dB SPL(左耳)和120.83dB SPL(右耳);Ⅴ组阈值平均为83.89dB SPL(左耳)和100.56dB SPL(右耳)。Ⅴ组ABR反应阈较Ⅰ组和Ⅱ组显著升高(P<0.05),较Ⅲ组和Ⅳ组显著降低(P<0.05)。Ⅴ组中手术耳ABR反应阈较非手术耳降低(P<0.05)。耳蜗基底膜铺片示Ⅰ组和Ⅱ组内外毛细胞排列整齐,无缺失,Ⅲ组和Ⅳ组内外毛细胞极少量残存,其中ABR阈值大于135dB SPL的豚鼠耳蜗毛细胞几乎消失殆尽,Ⅴ组毛细胞部分缺失,且主要是外毛细胞;免疫组织化学染色示Ⅴ组耳蜗毛细胞NGB蛋白表达量较其余各组均显著增高(P<0.05),其余各组几乎均未见明显阳性表达。结论本研究成功验证了阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性具有有效的保护作用。     

耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的判定标准与抵抗耳中毒的能力

目的建立耳蜗外毛细胞(OHC)静纤毛束变异的判定标准,观察毛细胞静纤毛束变异对庆大霉素耳中毒的抵抗能力.方法对豚鼠测定听性脑干反应(ABR)阈值和畸变产物耳声发射(DPOAE)振幅后,选取静纤毛束正常和变异豚鼠各5只,连续肌注庆大霉素(grntamicin,GM)12 d后,测定ABR阈值,扫描电镜观察耳蜗外毛细胞静纤毛束变异情况,耳蜗铺片计数毛细胞的损失数.结果耳蜗底回第一排外毛细胞静纤毛束转位超过45°、"W"变形数超过10%,作为豚鼠耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的判定标准.5只静纤毛变异豚鼠GM注射12 d后平均ABR阈值51.0±8.76 dB SPL,外毛细胞损失约16%～39.96%,柯替器受损程度较轻;而外毛细胞(OHC)正常豚鼠GM注射12 d后ABR阈值上升到58.4～100 dB SPL,OHC基本消失,柯替器毛细胞破坏较为严重.结论耳蜗外毛细胞静纤毛束变异豚鼠较OHC正常者对GM中毒具有较大的耐受能力.     

聚天冬氨酸抑制庆大霉素致耳蜗自由基产生的实验研究

目的观察聚天冬氨酸(polyasparticacid,PAA)对庆大霉素(gentamicin,GM)致耳蜗组织氧自由基产生的影响,进一步探讨PAA对GM耳毒性拮抗作用机制.方法将88只豚鼠随机分为Ⅰ组-单用GM、Ⅱ组-PAA+GM、Ⅲ组-单用PAA、Ⅳ组-单用生理盐水,采用电子顺磁共振法(electronparamagneticresonancespectroscopy,EPR),直接探测在体给药1、5、10d后,豚鼠耳蜗组织羟自由基(OH-)的产生量;同时,记录ABR,用透射电镜观察耳蜗Corti器毛细胞溶酶体形态改变.结果①给药1dⅠ、Ⅱ组耳蜗组织EPR积分值有升高趋势;ABR阈值4组间差异无显著性(P>0.05);耳蜗Corti器毛细胞溶酶体形态无明显改变.②给药5dⅠ组耳蜗组织EPR积分值(37.74±4.10)较其他3组明显升高(P<0.01),给药10d4组间耳蜗组织EPR积分值差异无显著性(P>0.05);超微结构Ⅰ组耳蜗Corti器毛细胞皮板下溶酶体改变给药10d较给药5d更明显,可见溶酶体聚集数量增多,体积明显增大;Ⅰ组ABR阈值随用药时间延长而升高.结论PAA对GM致耳蜗组织氧自由基的产生有抑制作用,从而拮抗了GM所致溶酶体磷脂沉积病态及耳蜗毒性的发生.     

褪黑素在豚鼠耳蜗内的抗氧化作用研究

目的 通过检测豚鼠耳蜗中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量研究褪黑素(melatonin,MLT)在豚鼠耳蜗内的抗氧化作用.方法 雄性杂色豚鼠40只,随机分为4组,每组10只.第2组肌肉注射庆大霉素,且肌肉注射褪黑素.第1组只注射褪黑素,注射褪黑素的时间与剂量与第2组相同.第3组注射庆大霉素,且肌肉注射与褪黑素同等剂量的生理盐水,注射时间与第2组相同.第4组单纯注射庆大霉素.第2、3、4组每天都注射庆大霉素,连续10天.所有动物均于注射庆大霉素前及注射庆大霉素后立即检测听性脑干反应(ABR)阈,庆大霉素注射结束后,测完ABR立即断头处死,取出豚鼠双侧耳蜗,并测定其活性氧含量.结果 注射庆大霉素前,4组实验动物的ABR阈值无显著性差异,本实验的庆大霉素注射剂量可以使听阈提高.注射褪黑素能使ABR阈值降低.注射庆大霉素可以引起耳蜗内活性氧含量增加,注射褪黑素能使耳蜗内活性氧含量降低.结论 褪黑素可以抵抗豚鼠耳蜗中增多的活性氧.     

谷氨酸／天冬氨酸转运体抗体对豚鼠听性脑干反应及毛细胞形态的影响

目的 研究谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate--aspartate transporter,GLAST)抗体对豚鼠耳蜗听性脑干反应(ABR)和耳蜗毛细胞形态的影响.方法 健康豚鼠20只随机分为实验组和对照组,每组10只.实验组耳蜗鼓阶内灌注GLAST抗体,对照组灌注人工外淋巴液,观察两组术后3、6、9天ABR反应阈、耳蜗基底膜铺片和透射电镜的形态学改变.结果 实验组术后第3天ABR波形消失,术后第9天无恢复;对照组术后第3天8只动物ABR波形消失,术后第6天和第9天全部动物引出ABR波形,平均阈值分别为62.50±5.25、47.50±6.18dB SPL,差异有统计学意义(P<0.05).随着GLAST抗体灌注后时间延长,实验组内、外毛细胞及纤毛出现不同程度缺失,透射电镜显示内、外毛细胞及神经末梢胞浆、线粒体空化,细胞核染色质边集等凋亡早期征象.对照组的损伤较轻,与ABR阈值改变相一致.结论 耳蜗内GLAST抗体灌注后出现耳蜗毛细胞、神经末梢的损伤及ABR波形消失,提示GLAST抗体阻断耳蜗Corti器中的GLAST,导致谷氨酸的神经毒性表达.     

水杨酸钠对爆震性聋治疗作用的实验研究

目的　探讨水杨酸钠(NaSA)对豚鼠爆震性聋的治疗效果及其作用机制。方法　豚鼠分为爆震组、爆震+NaSA组、NaSA组。每组动物12只。爆震动物暴露于平均压力峰值176.7dB(SPL);水杨酸钠为腹腔注射400mg/kg,每日一次。实验前和实验后第1d、3d、1周、2周、4周分别检测ABR阈值;扫描电镜观察毛细胞形态改变,耳蜗铺片计算毛细胞损伤数;测定耳蜗组织丙二醛(MDA)含量。结果　爆震组于爆震第1d、3d、1周、2周、4周的ABR阈移分别为46.75±13.56、38.0±12.4、35.5±10.67、41.5±12.57、33.75±8.42dB,爆震+NaSA组则分别为46.65±11.7、38.25±9.52、30.5±9.17、30.0±9.8、23.0±6.57dB,两组间于1周,2周,4周显著性差异(P＜0.05)。形态学改变与听阈改变一致,耳蜗铺片计算外毛细胞损失数,两组有显著性差异(P＜0.05)。耳蜗组织MDA检测,两组于2周,4周有显著性差异(P＜0.05)。单纯NaSA给药后24h内ABR阈值有暂时性升高,14h后基本恢复正常。结论　NaSA可部分减轻爆震所致的听力损失。可能因NaSA在一定程度上清除了爆震产生的过量的过氧化物,从而保护毛细胞,使听力得到部分恢复。     

5－BrdU 标记骨髓间充质干细胞对顺铂耳中毒豚鼠耳蜗的保护作用

目的：探讨5－BrdU（5－bromo－2－deoxyuridine）标记的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）植入豚鼠耳蜗后的生长情况及对顺铂耳中毒豚鼠耳蜗的保护作用。方法20只健康豚鼠,随机抽取4只豚鼠的骨髓,分离培养 MSCs,用5－BrdU 标记 MSCs。另16只豚鼠建立顺铂耳毒性模型,建模前后分别进行ABR 检测。然后每只豚鼠左侧耳蜗注射5－BrdU 标记的 MSCs,右侧耳蜗注射生理盐水,注射后1、4 w 豚鼠 ABR检测后断头取耳蜗做石蜡切片和耳蜗毛细胞铺片,BrdU 免疫化学观察耳蜗内 MSCs 存活情况。结果顺铂耳毒性模型豚鼠右侧耳蜗注射 MSCs 1、4 w 后,ABR 反应阈（25．07±0．12、20．07±0．14 dB SPL）随着时间延长逐渐恢复,左侧耳蜗注射生理盐水1、4 w 后,ABR 反应阈（31．07±0．08、32．07±0．14 dB SPL）随着时间延长无变化。耳蜗毛细胞铺片及耳蜗 BrdU 免疫组织化学显示右侧耳蜗移植术后1 w 可见部分棕黄色颗粒,BrdU 染色阳性细胞,排列不规则,移植术后4 w 耳蜗内 BrdU 染色阳性细胞逐渐增多,排列逐渐规则,左侧耳蜗注射生理盐水后1、4 w均未见棕黄色颗粒。结论5－BrdU 标记 MSCs 耳蜗移植后可在耳蜗存活、增殖,其对顺铂耳毒性耳蜗具有保护作用。     

一氧化氮对庆大霉素耳毒性的影响

目的研究耳蜗内不同水平的一氧化氮(NO)含量对庆大霉素(GM)耳毒性的影响.方法将实验动物豚鼠随机分为GM组;庆大霉素加左旋精氨酸(GM加L-Arg)组;庆大霉素加NG-单甲基-L-精氨酸(GM加L-NMMA)组和正常对照组.实验过程中观察动物体重变化,检测ABR反应阈;取标本检测血清和耳蜗组织NO含量,耳蜗铺片观察毛细胞损失程度.结果对照组动物体重增加明显,各实验组体重增加缓慢,其中GM加L-Arg组体重略有下降.实验第4周,GM加L-Arg组ABR反应阈升高明显,与GM组比较有统计学意义(P<0.05),GM加L-NMMA组ABR反应阈升高较少,与GM组比较有统计学意义(P<0.05).GM加L-Arg组血清和耳蜗NO含量明显升高,GM加L-NMM A组NO含量升高不明显,与GM组比较差异具有显著性(P<0.05).耳蜗铺片各组毛细胞损失程度与ABR变化相对应.结论增加耳蜗NO含量可增加GM耳毒性,减少耳蜗NO含量可减轻GM耳毒性.     

纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的实验研究

目的观察纯中药制剂对庆大霉素致聋动物和耳蜗毛细胞的修复再生作用。方法选用73只健康青年豚鼠,行听力学检查后,53只动物连续肌肉注射庆大霉素(80mg.kg-1.d-1)24～30天致聋(GM组),其间死亡8只,剩余45只随机分成中药治疗组(25只)和致聋后对照组(20只),中药治疗组给予纯中药制剂"复聪汤Ⅰ号"口服液和"复聪汤Ⅱ号"滴耳液治疗,致聋后对照组同法给予生理盐水。另外20只豚鼠作为正常对照组,每天肌肉注射等量生理盐水。在治疗30、60和90天后对GM组两组动物分别行ABR、DPOAE检测,同时,每一时间点处死6只动物,左侧耳蜗行扫描电镜观察,右侧耳蜗铺片行光镜观察和毛细胞计数。结果实验前所有豚鼠的听功能正常;连续注射庆大霉素30天后,GM组豚鼠ABR反应阈值上升到50～80dB SPL,DPOAE幅值降低,光镜和电镜下表现为耳蜗毛细胞纤毛断碎、倒伏、融合和消失,多处毛细胞表皮板肿胀、突起和疱疹样变性,或毛细胞被完全挤出网状板,基底回和第三回耳蜗毛细胞严重消失;中药治疗30天后,80%的耳聋豚鼠的ABR反应阈恢复到30～50dB SPL,DPOAE幅值明显提高;耳蜗铺片和电镜观察显示耳蜗毛细胞数目有一定恢复,组织结构有修复现象,扫描电镜可见再生毛细胞仅出现少量纤毛,而致聋后对照组未发现此种现象;治疗60天后,耳蜗毛细胞数目明显增多,Corti器的毛细胞区有大量的增殖细胞出现,扫描电镜可见成小束的新生纤毛出现在毛细胞缺失部位,同时支持细胞大量增殖;治疗90天后,再生的静纤毛束已基本形成,尤其是耳蜗基底部位的毛细胞明显增多,听功能基本正常。结论纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞有一定的修复和再生作用。     

还原型谷胱甘肽拮抗庆大霉素耳毒性作用观察

目的观察还原型谷胱甘肽对庆大霉素耳蜗毒性的拮抗效果,并且比较了两种给药方法对其效果的影响.方法健康黑目豚鼠41只,随机分为五组,各组动物在观察期结束后,检测由8kHz、4kHz、2kHz频率短音诱发的脑干听觉诱发电位Ⅲ波反应阈;扫描电镜观察外毛细胞形态变化;采用耳蜗基底膜铺片的方法,对深染的外毛细胞表皮板进行计数.结果谷胱甘肽组耳蜗三排外毛细胞呈V字型排列有序.庆大霉素组外毛细胞纤毛散乱、倒伏,深染的表皮板数明显增加,Ⅲ波反应阈明显提高.合并给药组深染的表皮板数较庆大霉素组明显减少,Ⅲ波反应阈的提高幅度明显减小(P＜0.05).后继给药组深染的表皮板数和8kHz、4kHz的Ⅲ波反应阈与庆大霉素组比较均无统计学差异(P＞0.05),然而2kHz的Ⅲ波反应阈与庆大霉素组比较差异有显著性(P＜0.05),谷胱甘肽组与生理盐水组差异无显著性(P＞0.05).结论还原型谷胱甘肽与庆大霉素合并应用可以显著地减轻庆大霉素的耳毒性;庆大霉素停药后再给予还原型谷胱甘肽,对耳蜗高频段的毛细胞所受庆大霉素毒性可能难以产生拮抗作用,但是对耳蜗中、低频段的毛细胞可能提供一定程度的保护作用.     

灯盏花对庆大霉素内耳毒性的防护作用

目的　探讨灯盏花对庆大霉素耳毒性的防护作用。方法　选用听力正常豚鼠 4 0只 ,随机分为 2组 :非治疗组 (庆大霉素组 ) ;治疗组 (庆大毒素 +灯盏花组 )。两组皆肌肉注射庆大霉素注射液 (12 0mg·kg-1·d-1) ,治疗组同时腹腔注射灯盏细辛注射液 (4 5mg·kg-1·d-1)连续 10天。分别于停药后第 1、7、14、2 1天随机抽取一定数量的豚鼠处死行毛细胞及血管纹的电镜及光镜观察 ,于处死前行畸变产物耳声发射 (DPOAE)、听性脑干反应 (ABR)检测。结果　非治疗组耳蜗功能和结构损害严重 ,外毛细胞的外形及核已固缩 ,血管纹毛细血管数量随用药后时间的延长逐渐稀少、管径狭窄。治疗组耳蜗功能和结构损伤较轻 ,除可见轻度胞质水肿及线粒体固缩外 ,外毛细胞基本正常 ,血管纹毛细血管管径有所增宽 ,DPOAE振幅和ABR波潜伏期、阈值两组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　灯盏花对庆大霉素耳毒性有一定的防护作用     

卡那霉素联合速尿致聋豚鼠的Math1基因治疗

目的 观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法 健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素(500 mg/kg)和速尿(50 mg/kg)联合致聋,将听性脑干反应(ABR)反应阈＞95 dB SPL的豚鼠按随机数字表法分为空白对照组(不做任何处置,3只),手术对照组(右耳单纯鼓阶钻孔,3只),人工外淋巴液组(右耳鼓阶钻孔导入人工外淋巴液,3只),单纯病毒载体组[右耳鼓阶钻孔导入携带增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒(Ad.EGFP),4只]、Math1基因治疗组[右耳鼓阶钻孔导入携带Math1及EGFP基因的重组腺病毒(Ad.Math1-EGFP),6只].各组动物分别于鼓阶注射前及注射后8周时行ABR测试,结束测试后处死动物,取出耳蜗组织行扫描电镜观察.结果 各组豚鼠不同频率(4、8、16、20 kHz)短纯音ABR阈值在不同检测时间段差异均无统计学意义,组间比较差异亦无统计学意义(P值均＞0.05).除Math1基因治疗组外,其余各组右耳耳蜗各回毛细胞形态和数目与左耳(自身对照)比较无明显差别.4只Math1基因治疗组豚鼠中,有2只右耳耳蜗第三回内、外毛细胞数量明显比左耳多,其中内毛细胞排列形态较外毛细胞整齐.结论 鼓阶显微注射导入Math1基因能使部分卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠的耳蜗毛细胞修复或再生,但其听觉功能没有改善.     

盐酸椒苯酮胺对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤的听力保护作用北大核心CSCD

目的探讨盐酸椒苯酮胺(piperphentonamine hydrochloride,PPTA)对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后听功能保护作用及其对耳蜗组织形态的影响。方法将32只成年豚鼠随机分为4组,每组8只,第1组为正常组(不做任何处理),第2组为空白对照组(手术切开颈前正中皮肤,分离出双侧椎动脉、双侧颈总动脉,但不做其它处理),第3组为缺血再灌注对照组(阻断双侧椎动脉及右侧颈总动脉建立豚鼠耳蜗缺血再灌注模型,再灌注同时股静脉给予与PPTA同等剂量生理盐水),第4组为缺血再灌注实验组(手术造模成功后,再灌注同时静脉给予PPTA 10mg/kg)。测量实验前后各组动物的听性脑干反应(ABR)波Ⅲ反应阈。动物造模成功后24小时迅速断头取听泡,每组取4只扫描电镜下观察耳蜗结构、另外4只用透射电镜观察耳蜗结构。结果实验前4组动物ABR波Ⅲ反应阈差异无统计学意义(P>0.05),缺血再灌注24h后第3组ABR波Ⅲ反应阈显著高于第1组和第2组(P<0.05),第4组ABR波Ⅲ反应阈比第3组明显降低(P<0.05);扫描及透射电镜下可见第3组耳蜗外毛细胞纤毛倒伏、脱落,内毛细胞纤毛散乱,血管纹内皮细胞核固缩、边集,神经元可见脱髓鞘改变,而第4组的耳蜗组织损伤明显减轻。结论 PPTA可以防止耳蜗缺血再灌注损伤后毛细胞损伤缺失,对豚鼠耳蜗缺血再灌注听力损伤有保护作用。     

γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力及Notch2/hes1信号通路表达的影响

目的 观察γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响.方法 72只成熟大鼠随机分成三组,每组24只;对照组给予生理盐水3 ml·kg-1·d-1 腹腔注射,连继10天,庆大霉素组给予Gen 120 mg·kg-1·d-1腹腔注射,连继10天,DAPT组给予DAPT 5 mg·kg-1·d-1腹腔注射,连用5天后停用2天,再用3天,同时腹腔注射Gen 120 mg·kg-1·d-1,连继10天.各组注射前及注射后1、14、28天进行ABR检测后处死动物,应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的表达.结果 对照组注射前后ABR反应阈无明显变化,与注射前相比,DAPT组和庆大霉素组注射后1、14、28天ABR阈值均明显升高,但随时间的延长阈值有所下降(P<0.05),其中,第28天DAPT组ABR反应阈较庆大霉素组下降明显(P<0.05);与对照组相比,DAPT组和庆大霉素组Notch2/hes1的表达均明显增高(P<0.05);与庆大霉素组相比,DAPT组的Notch2/hes1表达明显降低(P<0.05).结论 在庆大霉素致耳损伤及修复过程中,DAPT可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻耳蜗毛细胞损伤并促进耳蜗毛细胞修复,进而促进听功能恢复.     

肺表面活性物质治疗豚鼠分泌性中耳炎前后咽鼓管的组织形态学变化

目的　研究肺表面活性物质对分泌性中耳炎的治疗作用 ,为分泌性中耳炎的治疗探索新的途径。方法　采用灭活的肺炎链球菌鼓室内注射 ,建立豚鼠分泌性中耳炎的动物模型 ,鼓室内注射肺表面活性物质 1周后检测听性脑干反应 (auditorybrainstemresponse ,ABR)反应阈的变化 ,观察肺表面活性物质治疗前后咽鼓管黏膜光镜和电镜下的组织形态学变化。结果　豚鼠鼓室内注射灭活肺炎链球菌悬浮液 5d后 :鼓室积液 ,鼓膜浑浊 ,光锥消失 ,ABR平均 ( x±s)反应阈由正常对照组的 (14 0± 3 1)dB提高至 (45 0± 5 7)dB ;豚鼠咽鼓管黏膜层增厚 ,黏膜面有无结构的红染物覆盖 ,纤毛排列紊乱。经肺表面活性物质治疗 1周后 :鼓室积液减少或消失 ,ABR平均反应阈由 (45 0± 5 7)dB降低为(2 3 5± 6 3)dB。t检验分析 ,造模组与肺表面活性物质治疗组反应阈差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;豚鼠咽鼓管黏膜层变薄 ,纤毛排列较整齐 ,朝向鼻咽侧。结论　肺表面活性物质对豚鼠分泌性中耳炎有治疗作用。     

西地那非对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响

目的 探讨西地那非(sildenafil)对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响.方法 将豚鼠按随机数字表法分为对照组、噪声暴露组和西地那非给药组,每组10只.西地那非组及噪声组豚鼠在白噪声(A计权声压级110 dB)暴露1周后分别腹腔注射西地那非10 mg/(kg·d)及生理盐水4mL/(kg·d),连续给药4周.分别测试噪声暴露前1日、噪声暴露后1、2及4周听性脑干反应(ABR)阈值,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态变化.结果 噪声暴露1后,噪声暴露组豚鼠ABR阈值(声压级)平均提高19.1 dB,随着时间推移,阈移逐渐加大,暴露后4周,阈值平均提高22.0 dB;西地那非组噪声暴露后ABR阈值提高19.8 dB,给药后阈移逐渐减小,给药后4周,阈值仅平均提高4.8 dB.西地那非组与噪声暴露组相比,除噪声暴露结束后这一时间点以外,其余给药后各时间点ABR阈值差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).扫描电镜显示,噪声组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而西地那非组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象.结论 西地那非能够减轻噪声对豚鼠耳蜗毛细胞的损害,降低噪声性听觉损伤引起的ABR阈值升高.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对噪声性耳蜗损伤的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对噪声性耳蜗损伤的影响.方法 45只豚鼠随机分为EGCG+噪声组、生理盐水+噪声组、正常对照组,每组15只.EGCG+噪声组和生理盐水+噪声组豚鼠在接受噪声暴露(120 dB SPL, 4 h)前一日及每次暴露前1 h分别腹腔注射EGCG(25 mg/1 000 g)和等量生理盐水,正常对照组不予任何处理.噪声暴露后即刻和第1、3、7、14天检测三组豚鼠听性脑干反应(ABR),第14天分离各组豚鼠耳蜗,行耳蜗基底膜、血管纹铺片及免疫组化染色,观察各组豚鼠耳蜗基底膜、血管纹细胞形态及外毛细胞运动蛋白(Prestin)、3-硝基酪氨酸(3-NT)分布的变化.结果 噪声暴露后,EGCG+噪声组各时间点的ABR反应阈均高于对照组,但低于生理盐水+噪声组,从第3天开始,与两组间ABR反应阈差异缩小,但差异仍有统计学意义(均为P<0.05).免疫组织化学染色显示,正常对照组Prestin蛋白显绿染的耳蜗三排外毛细胞排列整齐,无细胞缺失,3-NT主要分布于毛细胞胞质及表皮板;与生理盐水+噪声组相比,噪声暴露后,EGCG+噪声组豚鼠外毛细胞形态较好,Prestin染色清晰;基底膜、血管纹处损伤轻,细胞排列规则,3-NT分布减少.结论 预防性腹腔注射EGCG可减轻噪声引起的耳蜗损伤,对噪声性听力损伤有一定的防护作用.