一种新的RHD合子型直接测定方法

目的　建立简易的RHD合子型直接测定方法。方法　根据RHD基因序列和RHD基因缺失的原理设计两对引物 ,分别特异性针对RHD基因第一外显子和融合Rh盒子 ,再引入一对内对照引物 ,建立新的双管复式PCR方法 ;并用于检测 15 2份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本、以及 35 9份已知Rh表型样本的RHD合子型。检测结果与使用近期报道的限制性片段长度多态性(RFLP)技术的鉴定结果相比较。结果　 15 2份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本包括 92份Rh阴性、2 8份D放散型、3例部分D表型、5例弱D型及 2 4例Rh阳性样品 ,全部样品的RHD合子型PCR检测结果均与已知的基因型相符合 ,可直接判断RHD( ) /RHD( )、RHD( ) /RHD( )和RHD( ) /RHD( )三种合子型 ;35 9份已知Rh表型的样本 ,包括 12例孕妇配偶、18名家系成员、4 8例Rh阴性及2 81例Rh阳性捐血者 ,PCR检测结果 ,除一例外 ,均与RFLP结果一致。该个例PCR检测为RHD( ) /RHD( )杂合型 ,而RFLP结果为RHD( ) /RH1D( )纯合型 ,由于个例为Rh阳性表型 ,肯定存在至少一条RHD基因 ,所以显然RFLP检测下游Rh盒子出现假阴性。结论　双管PCR技术鉴定RHD合子型 ,简便、快速 ,具有较高的准确率 ,可常规用于临床或血库实验室。     

风湿热的诊断与治疗

风湿热(rheumatic fever,RF)是一种上呼吸道感染A组乙型溶血性链球菌(Group Aβ-hemolytic strepto-coccus,GAS)后诱发的急性或慢性非化脓性全身性结缔组织炎症性疾病。RF初发年龄通常为5~14岁,男女比例相当,在3岁以下婴幼儿中罕见。风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)是RF累及心脏瓣膜导致的炎症反应消退后形成的局部瘢痕病灶所致,是全球儿童及青少年最常见的获得性心脏疾病。20世纪以来世界各国RF的严重性和死亡率已明显下降,尤其是发达国家,但在拥有世界2/3人口的发展中国家,RF仍不少见,且流行病学出现变化,爆发型少,轻度、不典型病例增多。本病发作多呈自限性,游走性关节炎、心脏炎、环形红斑、皮下结节及舞蹈症是RF的典型临床表现;近年来RF是轻型化与非典型化倾向,仅有关节隐痛、低热、心悸等症状,易误诊、漏诊。      

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性,探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD(+)、120例RhD(-) 和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出RHD 基因的10个外显子,120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23.33%),19例样本10个外显子部分存在(占15.83%),大部分为中间缺失型,73例样本10个外显子全缺失(占60.83/%)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD 基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

链球菌抗原性和宿主遗传易感性在风湿热发病中的作用及临床意义

风湿热(RF)至今仍是严重危害我国青少年身心健康的常见病之一,链球菌(外因)和宿主遗传易感性(内因)的综合作用才能导致RF的发生。深入研究它们之间的关系,对于RF本质的认识及早期诊断和防治均具有重要意义。为此,本项目对链球菌膜和壁的抗原性及其在RF发病中的作用以及人类白细胞抗原(HLA)与RF的相关性进行研究,以期进一步探讨RF发病机制,并籍此寻找出早期特异性诊断方法和有效的防治手段。主要研究     

1例Rh抗原变异体分子机理研究

目的:研究RhD抗原阳性(变异)、产生IgG-D抗体致新生儿溶血病个体的RHD基因结构。方法:采用常规血清学方法,检测1例RhD抗原,鉴定个体体内引发新生儿溶血病抗体的性质。采用PCR-SSP方法检测分析RHD/RHCE基因。结果:RhD抗原检测符合部分D类,体内存在IgG-D抗体。基因分析发现RHD与RHCE基因交换形成一种新的RHD-CE(3~6)-D融合基因。RHD杂合性试验显示为RHD /RHD-。结论:该个体Rh血型为RH DVIⅢ型(部分D类)。     

天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型及Rh表型分析

目的 研究天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型,并分析不同基因型的RhC、c、E、e分布特征。方法 收集2017年1月至2019年12月在天津市第五中心医院就诊的RhD阴性围产期妇女标本104例,应用血清学方法进行Rh C、c、E、e表型鉴定;使用PCR-SSP法对间接抗人球蛋白试验(IAT)确认为Rh D阴性的样本进行RHD基因分型。结果 104例RhD初筛阴性个体中RhC/E血型分型结果显示,ccee 57例(54.8%),Ccee 29例(27.9%),cc Ee 10例(9.6%),CCee 4例(3.8%),CcEe 3例(2.9%),ccEE 1例(1%);RHD基因分型结果显示,全缺失RHD基因型70例(67.3%),DEL RHD 1227A纯合型13例(12.5%),RHD-CE(2-9)-D型10例(9.6%),弱D15型5例(4.8%),DEL RHD 1227A杂合型2例(1.9%),RhD阳性2例(1.9%),2例(1.9%)不能用此PCR-SSP方法确定其基因型。结论 RhD阴性围产期妇女的RHD基因型分子机制具有丰富的多态性,主要为RHD全缺失型,其...     

抗心肌球蛋白抗体在风心病患儿血清中的变化

目的 :为探讨儿童风湿性心脏病 (RHD)患者血清抗心肌球蛋白抗体 (ACMA)的变化及意义。方法 :采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测 2 7例RHD活动期、30例静止期患儿及 32例健康儿童的血清ACMA。结果 :活动期组阳性率 81.5 % (2 2 /2 7) ;静止期组及正常对照组阳性率分别为 16 .7% (5 /30 )和 3.1% (1/32 )。活动期组阳性率显著高于静止期组及正常对照组 (P <0 .0 1)。静止期组与正常对照组无显著差异 (0 .0 5

相似文献   

1990—2019年中国与全球风湿性心脏病疾病负担分析

目的：探讨1990—2019年中国与全球风湿性心脏病(RHD)疾病负担变化趋势。方法：基于2019年全球疾病负担研究(GBD 2019)数据库公开数据,利用患病率、发病率、死亡率、伤残调整寿命年(DALYs)及其年龄标化率等指标对1990—2019年中国与全球RHD疾病负担进行分析。结果：与1990年数据相比,2019年中国RHD年龄标化患病率、发病率及死亡率分别下降了12.6%、19.2%和77.9%,全球RHD年龄标化患病率及发病率仍呈上涨趋势,而死亡率下降了56.2%。此外,2019年数据显示,中国及全球RHD女性患病率、发病率和DALYs率均高于男性,中国RHD患病人数及患病率均呈现出一致的年龄双高峰现象(30～34岁、45～49岁),全球RHD患病人数及患病率高峰为20～24(男性)和25～29岁(女性),RHD新发病例数在中国及全球均于10～14岁达到高峰。1990—2019年,中国及全球RHD年龄标化DALYs率均呈下降趋势,但我国DALYs负担仍较重。结论：1990—2019年,中国及全球RHD患病率、发病率及死亡率均有所下降,但总体来看RHD疾病负担仍然很重,患病个体...     

感染性心内膜炎患者体外循环手术中ACT的监测

目的:探讨感染性心内膜炎(infective endocarditis,IE)患者外科治疗时肝素及鱼精蛋白的合理用量.方法:IE患者与风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)患者各30例,在体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)期间测定激活全血凝固时间(activated clotting time,ACT),CPB终止后,测ACT拮抗值.结果:转流前IE组肝素用量[(407.2±51.3)U/kg]明显高于RHD组[(350±25)U/kg(P＜0.05)],鱼精蛋白用量IE组[(3.00±0.25)mg/kg]亦明显高于RHD组[(2.51±0.26)mg/kg(P＜0.05)],鱼精蛋白与肝素之比IE组为0.76±0.23,RHD组为0.74±0.12,二组间无统计学差异(P＞0.05).结论:IE病人转流前肝素用量大于400 U/kg,鱼精蛋白用量需增加至3 mg/kg,而鱼精蛋白与肝素之比无明显变化.     

风湿性心脏病患者能量、能量效率与左室收缩功能关系的研究

目的　探讨风湿性心脏病 (RHD)患者能量 (E)、能量效率 (EE)与左室收缩功能的关系。方法　应用超声心动图检测 5 8例RHD患者左室收缩功能 ,根据相应公式计算出E、EE ,并与 45例正常对照组进行比较 ,了解RHD患者E、EE与左室收缩功能的关系。结果　与对照组比较 ,RHD患者E随心功能变化而改变 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;EE则明显降低(P <0 0 5 )。结论　RHD患者E、EE与左室收缩功能密切相关     

风湿性心脏病患者心肌肌球蛋白轻链的变化

目的:研究风湿性心脏病(RHD)心衰时心室肌中肌球蛋白轻链(VMLC)的变化与心脏重塑的关系。方法:采用Western blotting技术对13例RHD心衰患者及7例意外死亡者VMLC-1,VMLC-2含量进行定量分析。结果:RHD组VMLC-1,VMLC-2含量均显著低于正常对照组,以VMLC-2含量下降最明显,VMLC-1/VMLC-2比值在1∶0.95-1∶0.61。结论:RHD心衰发展过程中涉及了VMLC-1,VMLC-2蛋白水平的改变,这种改变可能对心功能的进行性恶化有直接影响。     

RHD1227A型弱D的D抗原表位分析

目的分析携带RHD1227A等位基因的Rh血型弱D型个体的红细胞D抗原表位。方法采用常规血清学方法检测Rh血型D、C、c、E和e抗原表型,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认D抗原,序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)测定RHD基因,并检测RHD杂合型。对确认的弱D型,使用12种抗-D抗原不同表位的单克隆抗体,分析红细胞D抗原表位。结果血清学筛选和PCR-SSP检测鉴定出3例携带RHD1227A等位基因的弱D型样本,Rh小因子均为C+c+E-e+,RHD合子型鉴定均为RHD+/RHD-杂合型,提示3例个体基因型为CDe/cde。3例个体红细胞D抗原表位分析显示均具有基本完整D抗原表位,与Rh(D)阳性对照样本相同。结论发现3例RHD1227A型弱D型;不管RHD1227A等位基因表达DEL型或弱D型,其D抗原表位近似,均表达基本完整D抗原,提示该等位基因不同量的表达可能与其它调节因素有关。     

人RHD基因结构研究及意义

目的：研究RHD基因结构,重点检测启动子区,探究RHD基因的表达机制．方法：采用PCR—SSP方法,设计3对序列特异性引物,对60例无血源关系RhD( )汉族人样本、98例无血源关系RhD(-)汉族人样本和2例弱D型汉族人样本RHD基因启动子区约1000bp范围内的4个RHD基因特异性多态性位点进行检测．结果：RhD表型(-)／RHD基因型(一)个体启动子区全缺失,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失．结论：RhD表型(-)／RHD基因型(-)个体符合RhD阴性的普遍机制,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种RhD阴性机制。     

类风湿因子三种检测方法对类风湿性关节炎诊断价值的研究

目的　类风湿因子 (RF)常用的检测方法有乳胶凝集法、ELISA法和散射比浊法。本研究利用受试者工作特性 (ROC)曲线比较上述 3种RF检测方法对类风湿性性关节炎 (RA)的诊断价值 ,并获得最佳临界值。方法　以 2 0 0 1年 7～ 12月因关节肿痛在我院门诊就诊和住院治疗的 2 4 7例患者为实验组 ,其中RA患者91例 ,非RA患者 15 6例 ;以 12 0名健康体检者为正常组。分别采用乳胶法、ELISA法和散射比浊法测定其血清RF ,金标准为在不依赖实验室检测RF的前提下仍符合 1987年美国风湿病协会所修订的RA诊断标准。绘制ROC曲线。结果　ELISA法测定的IgM RF曲线下面积最大 ,与其他曲线下面积的差异有显著性 (P <0 .0 5 )。比浊法的最佳临界值是 4 5U/ml,与原临界值相比 ,特异度明显上升。结论　ELISA法测定IgM RF对RA诊断价值最高 ,散射比浊法测定RF的最佳临界值是 4 5U/ml     

超声心动图声学造影对风湿性心脏病三尖瓣返流的探讨

风湿性心脏病(RHD)仍为我国常见的心脏病之一,众所周知,以二尖瓣及主动脉瓣受累为主,左心瓣膜的损害远较右心瓣膜损害受重视。自Lieppe以超声声学造影探查三尖瓣返流(TR)以来渐引起人们重视。近年来又用Doppler超声进行检测。本组采用超声声学造影法探查RHD的TR。材料与方法:31例经临床、X线及超声心动图(M型及二维超声)证实为RHD;男性7例,女性24例,年龄自15岁至81岁,平均年龄49岁。受累的瓣膜主要为二尖瓣及主动脉瓣,仅一例受检前诊断有TR。病程自2年至32年,20年以上者17例。     

类风湿因子与抗角蛋白抗体联合检测类风湿关节炎的诊断探讨

目的探讨抗角蛋白抗体(AKA)和血清类风湿因子(RF)联合检测诊断类风湿关节炎(RA)的临床应用。方法对125例RA和159例结缔组织病患者(CTD)采用散射比浊定量与荧光染色法测定RF与AKA。结果血清RF阳性率在RA组与CTD组分别为85.6%(107/125)和29.6%(47/159);AKA阳性率在RA组与CTD组分别为48.8%(61/125)和6.9%(11/159);RF和AKA两种方法对RA的诊断分别特异性是70.4%和93.1%、阳性预测值是69.5%和84.7%、阴性预测值是86.1%和69.8%。对89例RA患者血清的RF与AKA同时进行比较分析,两种方法差异具有显著意义(P<0.025)。结论RF的检测灵敏度高于AKA,但其特异性则不如,RF是类风湿关节炎诊断中较好过筛试验。AKA对RA的诊断具有满意的敏感性与特异性,是病情活动早期及严重的指标,可与RF联合检测作为RA的诊断。     

安徽地区RHD(-)个体D基因外显子多态性检测

目的分析安徽地区RHD(-)个体的D基因的多态性。方法用PCR-SSP技术,对50例经血清学试验证实的真实RHD(-)个体3例弱D表现型个体15例DEL型个体进行外显子检测。结果发现本地区RHD(-)个体D基因外显子存在明显的多态性:15例DEL型个体D基因外显子均全部完整存在;3例弱D型个体中有2例存在完整的D基因,1例为缺失大部分外显子的DVIⅢ型;50例真实RHD(-)个体中,90%为外显子完全缺失,4%为外显子完整存在,但不表达D抗原;4%为缺失大部分外显子(存在第1、10外显子),不表达D抗原;另有2%为缺失两边外显子(存在第3、4、5外显子),不表达D抗原。结论PCR-SSP技术可用于RHD基因的研究,在本地区血清学鉴定的RHD阴性个体中存在较高比例的DEL型个体,同时,常规血清学RHD(-)个体D基因存在多态性。     

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性，探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD( )、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出R}tD基因的10个外显子，120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23．33％)，19例样本10个外显子部分存在(占15．83％)，大部分为中间缺失型，73例样本10个外显子全缺失(占60．83／％)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性．主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

风心病病人二尖瓣轻度狭窄与二尖瓣重度狭窄者免疫功能的变化

目的:风湿性心脏病(Rheumatic heart disease RHD)病人二尖瓣面积<1.0 cm2(重度狭窄)可产生肺动脉高压使左房失代偿。RHD病人的细胞免疫功能CD3、CD4、CD8减少,CD4/CD8降低与正常人有明显的差异。RHD病人二尖瓣轻度狭窄与RHD病人二尖瓣重度狭窄者;单瓣膜损害与多瓣膜损害者外周T淋巴胞亚群的变化及其特点国内无公开文献报道,本文探讨RHD病人二尖瓣轻度狭窄与RHD病人二尖瓣重度狭窄者;单瓣膜损害与多瓣膜损害者细胞免疫功能的变化及其特点。方法:用流式细胞仪检测RHD病人外周血T淋巴细胞亚群。用液相终点散射免疫沉淀法检测RHD血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、补体3(C3)、补体4(C4)。用聚乙二醇法测血清循环免疫复合物(CIC)。结果:。RHD病人二尖瓣重度狭窄者CD3、CD4、CD8、CD19较RHD二尖瓣轻度狭窄者明显低下P<0.01。RHD病人二尖瓣重度狭窄者IgG、IgA、IgM、C3、C4、CIC较RHD病人二尖瓣轻度狭窄者高,但无统计学差异。RHD联合瓣膜损害者CD3+、CD4+明显低于单瓣膜损害者,差异具有统计学差异。结论:RHD病人二尖瓣重度狭窄者、联合瓣膜损害者细胞免疫功能低于RHD病人二尖瓣轻度狭窄者、单瓣膜损害者。     

PCR-SSP RHD基因定型方法的初步应用

目的采用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)进行RHD基因定型.方法采用新近报道的PCR-SSP RHD定型方法检测10例RhD阳性个体,包括2例哈萨克族人、2例蒙古族人、2例藏族人和4例维吾尔族人,以及11例RhD阴性个体(汉族10例、维吾尔族人1例),并通过测序和内含子检测分析1例汉族个体的RHD基因型.结果全部样品的PCR-SSP检测结果与血清学表型相符,1例汉族RhD阴性个体鉴定为D放散型,携带RHD1227A等位基因,1例个体的检测结果提示携带融合RHD基因.测序分析显示该融合基因的第1、2和第10外显子序列与正常RHD基因相应外显子相同,而缺失其余外显子,由于RHD基因和RHCE(e)基因的第2外显子序列相同,笔者采用PCR方法检测RHD基因第2内含子,结果为阴性,说明该个体携带的融合基因为RHD-CE(2-9)-D2等位基因.结论 PCR-SSP可用于中国人Rh血型D抗原基因定型.