纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原

取弓形虫RH株感染小鼠腹腔灌洗液20ml,加入无菌生理盐水至250ml,在5μm滤膜孔径的容器过滤器上过滤。收集的滤液经1512×g离心15min,沉淀即为纯净虫体。超声粉碎虫体,11200×g离心30min,收集上清即为弓形虫可溶性抗原。采集感染弓形虫SD大鼠慢性期血清和健康SD大鼠血清,用上述抗原作间接酶联免疫吸附试验(indirectELISA),检测抗原特异性和抗原效价。结果显示,通过改进过滤器、滤膜孔径和过滤方法纯化弓形虫速殖子,平均白细胞清除率为99.9%,红细胞清除率为80.3%,虫体回收率为71.0%。平均每只小鼠提取1.38mg弓形虫可溶性抗原。间接ELISA试验结果表明,抗原效价为5μg/ml。     

旋毛虫诊断抗原的鉴定

旋毛虫病免疫诊断的可靠性主要取决于抗原的质量和特异性。假阳性是由于所用的粗抗原未经纯化。作者将大鼠肌肉消化分离的新鲜幼虫经PBS洗涤后1000g离心10min。沉淀物经冻融后置入含10mmol/L的Tris-HCl(pH8,2mmol/L EDTA)、抑胃酶素(1μg/ml)、亮肽素(1μg/ml)和2mmol/LPMSF的缓冲液中制成匀浆,不溶部分经离心沉淀后重复浸出共4次。最后将上清与残渣混匀30min后再50000g离心1h,上清     

斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

大量制备鼠疫F_1致敏血球的探讨

目前鼠疫间接血凝试验仍是鼠疫检测中的重要手段,其中关键是F:致敏血球质量。过去以小量实验室制备的程序用于大量生产,质量不稳定,甚至失败。因此笔者探索了大量制备的程序。 予试验合格的公绵羊全采血,与等量阿氏液(Alsever's)混合,4℃保存,2日后,离心去阿氏液,用PH7.0生理盐水洗5次,血球容积与洗液比大于1:10,每次3500～4000r/min 5min(以下洗涤步骤相同),再用生理盐水制成25％血球液,取其1.5份与1份2.5％戊二醛液混合(滴加要慢),后于20℃振荡温育3h,离心去上清液,用生理盐水洗3次,并制     

PPA-ELISA用于人群弓形体病血清学诊断的初步研究

<正> 本文用酶标SPA-ELISA(PPA-ELISA)和间接血凝(IHA)检查了来自福建省部分农村地区的652份人血清,并用补体结合试验(CF)对弓形体阳性血清复判,现将结果报告如下。 (一)弓形体可溶性抗原的制备:感染本室保存的弓形体“弓Ⅱ”株的小鼠腹水经离心洗涤、0.25％胰酶消化、细胞分层液去除残存小鼠细胞、冻融和超声破碎后获得纯弓形体可溶性抗原。 (二)PPA-ELISA方法:把上述抗原稀释后包被反应板,然后依次加正常兔血清盐水、1∶128以上稀释的被检血清、酶标SPA、底物、终止液,最后用酶免仪测定OD值,凡被检标本OD值/阴性对照OD均值≥2.1者为阳性。     

用酶联免疫吸附试验检测寄生线虫体表抗原的特异抗体

本文报道用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巴西钩虫体表抗体的结果。巴西钩虫成虫取自感染大鼠的小肠,并用过量的0.85％盐水洗涤4次。超免疫血清取自感染该虫的大鼠的心脏,在56℃灭活30分钟,并在15000rpm(4℃)离心30分钟,除去脂肪,经玻璃     

以排泄和分泌物抗原进行ELISA诊断猪旋毛虫病

由于ELISA具有敏感和快速的优点,故在猪旋毛虫病的诊断方面亦受到重视。取接种旋毛虫35天的大鼠肌肉,以1%胃蛋白酶-盐酸37℃消化4小时,幼虫经过20孔过筛,在自来水中静置几次再以盐水充分洗涤。于4℃下用组织研磨器将幼虫磨碎,以20,000g离心20分钟,上清液为粗抗原。另用活的培养的旋毛虫幼虫,以pH7.4加有     

应用冻干血球间接血凝试验诊断包虫病的研究

本文应用包虫囊液抗原致敏的冻干血球进行IHA,对45例包虫病患者,100例正常人和77例其它寄生虫病患者的血清进行检测,并与致敏的新鲜血球比较。致敏的冻干血球阳性率为91.11％,正常人血清的假阳性率为0％,其它寄生虫病中囊虫病的交叉反应为29.16％。致敏的新鲜血球阳性率为91.11％,假阳性率为1％,其交叉反应肝吸虫为4.76％,囊虫病为41.66％。结果显示两种致敏血球的敏感性和特异性无显著差异。定期观察致敏冻干血球效价,贮存4℃冰箱18个月仍未降低。     

用囊尾蚴囊液抗原诊断猪肉绦虫囊尾蚴病的可靠血清学方法:ELISA和IHA

本文报道以囊尾蚴囊液作抗原用于ELISA和IHA检测人血清中抗囊尾蚴抗体具有高度的重现性和敏感性。囊尾蚴取自猪骨胳肌后浸于冰冷却的pH 7.4PBS中,尽快取囊液,每ml囊液加50μl 0.3M草酸铵和25μl 1:3稀释的氨水,离心去钙离子,上清液即为可溶性囊液抗原,分装后置液氮保存。ELISA采用平底反应板,酶显色系统为生物素化A蛋白-抗生物素过氧化物酶结合物-OPD,被检血清作1:5稀释。用囊液抗原致敏戊二醛醛化的羊红细胞,     

1985年四川省人畜弓形体病血清流行病学调查

<正> 为了进一步了解弓形体在我省人畜中的感染情况,1985年我们继续采用间接血凝试验(IHA),对3市5县作血清流行病学调查,结果如下。 材料和方法 一、抗原制备 (一)虫株传代:弓形体长宁株,上海市农科院畜牧兽医研究所提供。取20～25g小白鼠经腹腔接种虫株,3天后剖杀,注入腹腔PBS2ml,抽取腹水转种传代,不用时置液氮深冷保存。 (二)抗原处理:按上海市农科院畜牧兽医研究所介绍的方法,抽取腹水、洗涤、胰酶消化、低温冻融而获得。 二、血球制备 (一)固定羊血球:采年青公羊血,常规处理后用2.5％戊二醛醛化1小时,洗涤后即为固定羊血球。     

间接血凝试验在囊虫病诊断中的应用

囊虫病是人畜共患疾病,严重损害人民健康。本文报道用间接血凝试验检测人血清中囊虫抗体,具有较高的特异性和敏感性。 1 囊虫抗原致敏血球的制备 1·1 囊虫抗原的制备,选取新鲜的含猪囊蚴的猪肉,用消毒空针抽取囊液,经3000rpm/分离心10min,上清即为囊液抗原。用分光光度计测量蛋白     

鼠疫间接血凝试验工作液的探讨

鼠疫间接血球凝集试验 (IHA)具有敏感、特异、简单、快速的特点。该法目前仍是鼠疫监测和现场应用中的重要手段 ,特别在轻型病人、病人的追溯诊断以及隐性感染病人的血清学诊断方面 ,有着独特的优势。常规用 1%健康家兔血清盐水作封闭和稳定液及血凝工作液 ;近年因鼠疫防治任务的不断加重 ,兔血清生产工作量和成本也逐年加大 ;笔者用同源的羊血清盐水试图代替兔血清盐水 ,探讨其作为 IHA工作液的可能性。1　材料鼠疫抗原致敏血球 (批号 980 4 ,本所生产 ) ,鼠疫 175抗血清 (批号 990 1) ,抗假结核伪 5血清 ,健康人血清、兔血清、羊血清、…     

一种新型IAA稀释剂的研制报告

稀释剂在间接血凝试验(IHA)中,虽不是关键制剂,但对IHA结果有相当大影响。Boyden用1％正常兔血清盐水作稳定剂后,致敏血球在此溶液中很稳定,使IHA广泛应用至今。如使用绵羊红血球制备致敏血球,采用绵羊血清作为IHA稀释剂,在全国主要鼠疫省(区)应用多年,得到良好的效果。1 试验方法与结果1.1 试验材料 Tween-80:大连试剂厂;Tween-20:进口分装;     

乳胶凝集试验诊断弓形虫病的研究

当前弓形虫病的诊断极需一种可靠的免疫学诊断方法,为此作者介绍一种新的简便、快速、特异的乳胶凝集试验,并与目前常用的血凝试验和免疫荧光试验作比较。方法:将收集的弓形虫混悬于蒸馏水中,经超声处理后高速离心,取其上清作为弓形虫抗原。并用该抗原致敏乳胶颗粒:乳胶悬液和抗原在37℃接触一小时,然后慢速离心以获取底部的乳胶——抗原结合物,并用牛血清白蛋白配成混悬液。试验时用圆底微量滴定板,每井加入经缓冲液从1∶20开始对倍稀释的试验血清25μl和致敏的乳胶悬液25μl在Kine氏震荡机上震摇5分钟,置室温下过夜,次日直接读取结果,若井底形成一清楚的白色圆形凸出物者为阴性;并根据膜状沉淀占据井底的面积大小确定其阳性程度,若占整个井底则为+++、随着沉淀膜面积的减少分别作为+++、++、和+。全部血清先用1/20、1/40和1/80三个稀释度进行测定,然后择阳性者再作系列稀释以测定其阳     

诊断人体旋毛虫病的简易红细胞凝集试验

抗原的制备是用旋毛虫幼虫干粉,按1:100混悬于生理盐水中,振荡1小时,而后在-20℃内冰冻和加热融化反复10次,经20,000g离心45分钟,将上清液用蒸馏水透析,冻干。1克幼虫粉约得80毫克冻干抗原。试验血清不予灭能,亦不用绵羊红细胞吸附。鞣酸处理和致敏绵羊红细胞采用稍加改良的Stavitsky法进行,即将洗涤和沉积的绵羊红细胞在37℃内用pH7.2的缓冲盐水     

间接血凝试验诊断日本血吸虫病价值的探讨

现将我市1996—1997年应用间接血凝试验（IHA）检测血吸虫病的实验及现场结果报告如下。1材料和方法1．1材料①血吸虫冻干血球抗原系四川省寄生虫病防治研究所提供的血吸虫卵可溶性抗原致敏的冻干血球，效价1：128o，批号97401。②稀释浪含．5％正常兔血清的0．9％氯化钠液。③     

IHA一步法诊断血吸虫病

目前，IHA已成为诊断血吸虫病最常用的方法之一，在基层应用比较广泛，但操作比较繁琐。我们采用微量末稍血直接稀释的一步法，简化了操作手续，取得了满意结果。1材料和方法1．1材料10min×75mm试管，血红蛋白吸管，定量加样器，V形反应板；生理盐水；血吸虫病IHA冻干诊断血球。1．2方法a在试管中加入0．2ml生理盐水。b按常规采血法取20μl指血或耳垂血放入预先加入生理盐水的试管中，即全血标本稀释为1：10，稍作振荡。c待血球沉淀后取上清液50μl，加入V形反应板一孔内，再加入稀释的致敏诊断血球悬液50μl，立即旋转振荡2min，37℃…     

家兔感染猪蛔虫卵后血清抗体水平的变化

为了寻找能准确反映蛔虫感染情况和流行动态的调查方法,我们用ELISA试验定期检测实验感染猪蛔虫卵的家兔的血清抗体水平。 材料和方法 1 抗原 从刚屠宰的猪肠管内收集活的雌蛔虫,用自来水和无菌生理盐水反复洗涤后,收集体腔液,10000rpm离心沉淀30min。上清液经硫酸铵     

使用不同抗原的间接血凝试验在包虫病诊断中应用的评价

本文报告了使用不同抗原的包虫病间接血凝试验方法的实验结果。采用高浓度戊二醛化和1/20000鞣酸处理的绵羊红细胞,用绵羊肝包囊液粗抗原和部分纯化抗原致敏。用包虫病人血清进行方阵滴定,包囊液粗抗原,亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原的最适致敏浓度分别为250、25、25和6.25μg/ml。血清终点稀释度的倒数皆为1024。用包囊液粗抗原对1295名健康人血清做间接血凝试验(IHA)结果,抗体滴度≥64者仅6例(0.46％)。95例牛肉绦虫病人血清的阳性率为1.05％(1/95)。这种致敏红细胞的冻干制剂,在室温下存放18个月后,仍保持稳定。囊液粗抗原、亲和层析抗原、Oriol氏法纯化抗原和Burstein氏法纯化抗原致敏红细胞,对47例包虫病人血清做IHA结果阳性率各为91.49％、44.68％、76.59％和85.12％,阳性血清抗体滴度的几何均值分别为389.29±2.55、247.69±4.20、271.21±2.45和343.65±2.43。29份囊虫病人血清IHA的结果为囊液粗抗原致敏红细胞的阳性率为27.5％,阳性血清的几何均值为128。其他三种抗原致敏的红细胞均为阳性。说明三种纯化抗原致敏红细胞与囊虫病人血清不发生交叉反应。根据本项实验结果建议将Burstein氏法纯化抗原致敏绵羊红细胞的间接血凝试验做为常规方法。     

快速酶联免疫吸附试验诊断囊虫病的研究

本文对快速酶联免疫吸附试验(快速ELISA)诊断囊虫病的敏感性和特异性、血清和脑脊液的检测效果以及部分病例治疗后血清抗体的动态变化进行了试验观察。 快速ELISA试验方法:以囊液抗原包被微板(200μ1/孔),水浴37℃2h,置冰箱过夜。次日试验时甩干微板,用洗涤液连续洗涤3次,甩干,加试验血清