高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。     

Gene-Xpert MTB/RiF与熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药分析

目的评价Gene-Xpert MTB/RiF法与熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药的不同应用价值。方法入选235例涂阳结核病患者痰标本分别做传统比例法药敏试验、Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法检测结核分枝杆菌的利福平耐药,以传统药敏试验作为金标准进行比较。结果 235例标本中比例法药敏试验利福平耐药12例(5.1%)、Gene-Xpert MTB/RiF利福平耐药例15例(6.4%)、熔解曲线法利福平耐药19例(8.1%),Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法敏感度分别为91.7%和100.0%;特异度分别为98.2%和96.7%。结论Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法两者均可应用于结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测,Gene-Xpert MTB/RiF法在我国开展结核菌耐多药筛查具更有较强的实用性,有更广的应用前景。     

用聚合酶链反应单链构象多态性分析技术检测结核分枝杆菌L型的rpoB基因突变

目的：探索结核分枝杆菌L型的耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系，以及聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR-SSCP）技术的临床应用价值。方法：收集结核分枝杆菌L型菌株52株，采用PCR-SSCP方法检测rpoB基因，与采用常规药敏试验法检测利福平耐药的结果进行对比分析。结果：采用常规法检测，52株临床分离株中有38株利福平耐药，耐药率为73.08%（38/52）；PCR-SSCP方法对52株临床耐药株rpoB基因突变的检出率为65.38%（32/52），两种方法检测耐利福平的符合率为84.21%。结论：PCR-SSCP对利福平耐药的结核分枝杆菌L型菌株检出率较高，将其与常规药敏试验联合应用，是一种指导临床用药的好方法。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的 对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价其检测效能及在国境口岸应用价值.方法 应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离标本,与传统药物敏感性试验对比,衡量该方法的灵敏度、特异性.结果 对347例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本;...     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ快速检测结核分枝杆菌与 利福平耐药性的应用研究

摘要：目的　评估利福平耐药实时荧光定量ＰＣＲ技术（ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ）快速检测在诊断肺结核和利福平耐 药性的应用价值。方法　对２０１６年衢州市人民医院临床疑似肺结核患者的痰样本分别进行抗酸染色、Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ＲＩＦ 检测、ＭＧＩＴ３２０液体培养、胶体金试验、菌种鉴定和液体药敏试验。结果　４３５例肺结核痰样本 中，抗酸染色检出率为１７．０１％ （７４／４３５），液体培养检出率为３５．８６％ （１５６／４３５），ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检出率 为３５．１７％ （１５３／４３５）。ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检出率高于抗酸染色法，差异有统计学意义（χ ２＝２６．０８，犘＜０．０１）， ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ技术与液体培养法之间差异无统计学意义（χ ２＝０．１１，犘＞０．０５）。以液体培养结合胶体金法 菌型鉴定为金标准，ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ 检测结核分枝杆菌灵敏度为９４．２０％ （１３０／１３８），特异性为９６．３９％ （２６７／２７７），阳性预测值为９２．８６％ （１３０／１４０），阴性预测值为９７．０９％ （２６７／２７５），两者具有较好的一致性 （Ｋａｐｐａ＝０．９０）。以液体药敏为金标准，ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ 检测利福平耐药的灵敏度９０．００％ （９／１０），特异性 ９７．５０％ （１１７／１２０），阳性预测值７５．００％ （９／１２），阴性预测值９９．１５％ （１１７／１１８）。两种方法一致性较好 （Ｋａｐｐａ＝０．８０）。结论　ＸｐｅｒｔＭＴＢ／ＲＩＦ检测痰液中结核分枝杆菌和利福平耐药性具有较高的灵敏度和特异 性，能准确区分非结核分枝杆菌，适用于普通肺结核、耐多药肺结核的快速诊断和筛查。 关键词：结核分枝杆菌；耐多药肺结核；利福平；利福平耐药实时荧光定量ＰＣＲ 技术；灵敏度；特异性 中图分类号：Ｒ５２１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０９ ０６５６ ０４     

PCR熔解曲线法筛查结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药性

目的 利用PCR熔解曲线法快速筛查结核分枝杆菌(MTB)对链霉素、乙胺丁醇耐药性,并与药敏试验结果比较,评价其应用价值.方法 收集深圳市2007-2009年331株MTB临床分离株,应用PCR熔解曲线法检测embB基因306、378～380、406和497、rpsL基因43、88及rrs基因513～517、905 ～ 908位点耐药突变,并与药敏试验结果比较.结果 以药敏试验结果为标准,PCR熔解曲线法检测MTB链霉素耐药突变的敏感性为78.6％、特异性为90.1％、准确性为86.7％;检测MTB乙胺丁醇耐药突变的敏感性为83.0％、特异性为93.3％、准确性为91.8％.PCR熔解曲线法与药敏试验检测结果具有很好的一致性.结论 PCR熔解曲线法能够快速、特异地检测MTB对链霉素、乙胺丁醇耐药突变,可用于临床筛查.     

引起结核病分枝杆菌类型及其耐药性探讨

目的：对109株分枝杆菌进行分型和药敏试验的观察，了解引起结核病分枝杆菌主要类型及其耐药现状，为结核病的诊治提供准确的病原学和合理用药依据。方法：采用BACIECTB460仪器和BBIMGIT^TM分枝杆菌生长检测管进行分枝杆菌培养和药敏试验。结果：培养出109株分枝杆菌有四种类型，即人型分枝杆菌99株(90．8％)、牛型分枝杆菌3株(2．7％)、偶发分枝杆菌3株(2．7％)、龟分枝杆菌4株(3．6％)。结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、链霉素(Sm)的耐药率分别为54．9％、50．0％、41．2％、50．0％。结论：目前人型结核分枝杆菌仍然是引起结核病的主要病原菌，有少数患者可感染非结核分枝杆菌，这些分枝杆菌多数对异烟肼、链霉素产生较强的耐药性，结核分枝杆菌耐药性强于非结核分枝杆菌。提示临床和实验室须加强分枝杆菌的培养和耐药性监测，及时制订结核病的诊治、预防、控制等措施。     

浙江省衢州市分枝杆菌菌种鉴定和耐药现状研究

摘要：目的　了解衢州市分枝杆菌菌种分布和耐药情况,为结核病防治提供参考依据。方法　选取２０１４－ ２０１７年衢州市各结核病定点医院上送衢州市人民医院的２３８４株分枝杆菌菌株,采用ＰＮＢ／ＴＣＨ （Ｐ Ｎｉｔｒｏ ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ／ｔｈｉｏｐｈｅｎｅ ２ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ）生长试验进行菌种鉴定,对四种一线抗结核药物：异烟肼（ｉｓｏｎｉ ａｚｉｄ,ＩＮＨ）、利福平（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ,ＲＦＰ）、乙胺丁醇（ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌ,ＥＭＢ）、链霉素（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ,ＳＭ） 进行耐药性监测。结果　２３８４株分枝杆菌经过鉴定,结核分枝杆菌２２７０株（９５．２２％）,非结核分枝杆菌 （ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ,ＮＴＭ）１１４株（４．７８％）;２２７０ 株结核分枝杆菌总耐多药率为５．５１％ ; 复治患者的总耐药率、耐多药率以及对ＩＮＨ 、ＲＦＰ、ＥＭＢ、ＳＭ 任一药物的耐药率均高于初治患者,差异 有统计学意义（均犘＜０．０１）;单一耐药的前３位为ＳＭ＞ＩＮＨ＞ＲＦＰ;多耐药和耐多药的前３位为ＩＮＨ＋ ＲＦＰ ＋ ＳＭ＞ＩＮＨ ＋ ＳＭ＞ＩＮＨ ＋ＲＦＰ。结论　衢州市的复治患者的耐药情况较为严重,需进一步改善结 核病的预防控制工作。 关键词：肺结核;分枝杆菌;ＰＮＢ／ＴＣＨ 生长试验;药敏;耐药率;耐多药 中图分类号：Ｒ１８３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１９）０３ ０１９１ ０４     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

Xpert MTB/RIF检测技术用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测分析

目的了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)用于福建省耐多药结核病(MDRTB)利福平耐药检测的可行性。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的79株耐多药和40株全敏感结核分枝杆菌分离菌株进行Xpert MTB/RIF检测,同时用PCR测序验证是否存在利福平耐药位点突变。结果119株菌Xpert MTB/RIF检测结果均为结核分枝杆菌。以比例法药物敏感试验结果作为对照,Xpert MTB/RIF检测MDR结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度为97.47%(77/79),特异度为100.00%(40/40),Xpert MTB/RIF检测结果与PCR测序结果的一致性达到100%。结论 Xpert MTB/RIF方法用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测的意义较大,可用于福建省MDR-TB的快速筛查。     

Xpert MTB/RIF检测技术在结核病患者痰标本中的应用价值分析

目的评价Xpert MTB/RIF技术对临床标本中结核分枝杆菌及利福平耐药检测的应用价值。方法对80份痰标本采用Xpert MTB/RIF系统进行结核分枝杆菌与利福平耐药基因rpoB的突变检测,以培养结果及表型药敏试验为金标准,判断Xpert MTB/RIF检测的敏感度、特异度、95%CI。结果对临床确诊为结核病患者的80份临床标本中,Xpert MTB/RIF系统的结核分枝杆菌阳性检出率为76.2%;42份培养阳性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为97.6%;38份培养阴性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为52.6%;以传统表型药敏试验为金标准,采用Xpert MTB/RIF系统行利福平耐药性检测的敏感度为95.4%,特异度为95.1%。结论 Xpert MTB/RIF是一种简便、快速、准确,且能够同时对结核临床标本行结核分枝杆菌检测与利福平耐药性检测的分子检测技术,对及时发现病情与耐药结核病患者诊断具有重要价值。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性价值及耐药特征分析

目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物耐药情况,并对2种检测方案结果进行比较。结果 与液体药敏检测相比,熔解曲线法对5种抗结核药物耐药性检测结果差异无统计学意义(P> 0.05),以液体药敏检测为金标准,熔解曲线法检测RFP、INH、EMB、SM以及氟喹诺酮类药物耐药性的灵敏度分别为100.00%、75.86%、61.54%、75.00%、90.00%,特异度分别为97.10%、95.28%、99.30%、96.21%、100.00%,Kappa值分别为0.885、0.721、0.707、0.724、0.944,表明2种检测方法一致性好。结论 荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物RFP、INH、EMB、SM及氟喹诺酮类的耐药性与液体药敏法检测效果一致,灵敏度、特异度均较高,具有较好的临床应用价值。     

分格平板分枝杆菌药敏培养基在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的 评价分格平板分枝杆菌药敏培养基,在结核分枝杆菌药敏检测中的应用.方法 收集临床分离的结核分枝杆菌51株,药敏方法分别采用分格平板分枝杆菌药敏培养基比例法和罗氏培养基比例法(试管比例法).结果 试管比例法:51株结核分枝杆菌的耐药率对异烟肼为68.6％、利福平为51.0％、乙胺丁醇为49.0％、链霉素为52.9％;与试管比例法相比较,分格平板琼脂比例法药敏结果2株对异烟肼耐药、1株利福平耐药和2株乙胺丁醇耐药菌株与其不符,其余结果一致;4种一线抗结核药物的药敏结果符合率分别为异烟肼94.3％、利福平96.3％、乙胺丁醇92.0％、链霉素100.0％;51株分离的临床结核分枝杆菌中泛耐药24株,多药耐药7株,而对4种药物全敏感12株,敏感率仅为23.9％.结论 分格平板琼脂比例法操作简便,结果符合率高,容易观察,能广泛应用各级临床结核实验室.     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因

目的应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变和耐异烟肼katG、inhA基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作DNA芯片,PCR掺入法荧光标记,结核分枝杆菌基因突变位点的目的片断与DNA芯片杂交,同时以传统药敏试验和DNA测序法为对照。结果 70株结核分枝杆菌临床分离株中,20株药物敏感株芯片杂交结果与标准株完全相同;30株耐RIF临床分离株均检测到rpoB基因突变;50株异烟肼耐药株中有41株检测到katG基因突变,9株检测到inhA基因突变,与测序结果完全一致。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌分离株的rpoB、katG、inhA基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种初步鉴定及药敏中的应用

目的评价BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种鉴定及药敏中的应用价值。方法显微镜观察BACTEC MGIT 960系统分离的162株分枝杆菌在液体培养基中的形态,传统生化和核酸检测法同时鉴定分枝杆菌属菌种,分析细菌形态与菌种之间的关系;应用BACTEC MGIT 960系统对分离的141株结核分枝杆菌进行药敏试验。结果 162株分枝杆菌属在MGIT液体培养基中呈索条状、分枝状、点粒状和分散状4种形态;呈索条状132株分枝杆菌属均为结核分枝杆菌,呈点粒状10株和分散状6株分枝杆菌属均为非结核分枝杆菌;对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药率分别为9.9%、14.2%、9.2%和6.4%,总耐药率18.4%,同时耐利福平和异烟肼的为8.5%;药敏平均检测时间为9.3 d。结论 BACTEC MGIT 960系统可快速将分枝杆菌属初步鉴定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,能快速准确获得临床一线抗结核药物的药敏结果。     

焦磷酸测序技术在利福平rpoB基因突变检测中的应用评价

目的 应用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用价值.方法 利用焦磷酸测序技术,测定150株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因81个碱基的利福平抗药性决定区(RRDR),分析rpoB基因突变特点,并与绝对浓度法和MIC法药敏结果进行比较.结果 150株结核分枝杆菌中66株耐药84株敏感,54株为耐多药菌株,rpoB基因突变涉及6个密码子12种突变基因型,最常见的突变位点及突变形式分别为531位TCG突变为TYG,占60.6%,526位CAC突变为TAC、GAC,占22.7%.耐药性检测结果表明,焦磷酸检测法与绝对浓度法二者的符合率为92.7%,与MIC法的符合率为97.8%.结论 焦磷酸测序检测技术不仅是一种快速、准确、高通量的利福平分子药敏检测方法,同时也是结核分枝杆菌耐药性研究的有用工具.     

应用Xpert MTB/RIF技术快速筛查耐多药肺结核

目的评估Xpert MTB/RIF技术(简称Xpert法)快速筛查耐多药结核(MDR-TB)的可行性。方法采用Xpert法和结核液体药敏试验分别对197株痰培养检出结核分枝杆菌菌株做利福平耐药检测,比较两者诊断利福平耐药的一致性;收集温州市2 417例肺结核患者一线液体药敏试验结果,分析利福平耐药作为MDR-TB诊断指标的可行性;并依上述两项结果评估用Xpert法快速筛查耐多药结核的可能性。结果以液体药敏法为金标准,197株菌株中Xpert法检测利福平耐药的灵敏度为100.00%,特异度为98.45%,阳性预测值为97.14%,阴性预测值为100.00%,与液体药敏法检测结果具有较高的一致性(Kappa值=0.978)。对2 417例结核患者液体药敏结果进行分析,与同时对异烟肼和利福平耐药作为MDR-TB的诊断标准比较,利福平耐药作为MTB-TB筛查指标的灵敏度为100.00%,特异度为99.13%,阳性预测值为92.52%,阴性预测值为100.00%,两者Kappa值为0.957。结论 Xpert法可快速、准确检测利福平耐药性,至少在温州市可考虑将该法用于MDR-TB的快速筛查。     

Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究

目的探讨Xpert MTB/RIF技术检测涂阳痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药性的效能,分析该技术在不同利福平耐药率患者中进行耐多药结核诊断的应用价值。方法连续纳入769例涂阳肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、分枝杆菌初步菌型鉴定、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测。结果 Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的灵敏度为98.15%,特异度为70.00%。检测利福平耐药性与比例法药敏结果比较,Kappa值为0.859,灵敏度为93.04%,特异度为95.71%,复治涂阳患者特异度低于初治涂阳患者,阳性预测值和阴性预测值分别为85.47%和98.07%。结论 Xpert MTB/RIF技术能够快速检测出涂阳痰标本中结核分枝杆菌和利福平耐药性,具有较高的灵敏度和特异度。在云南省用于耐多药结核病患者快速筛查时,优先用于利福平耐药率较高的定点医院以及罹患耐多药高危人群。     

两种快速方法联合检测结核分枝杆菌耐药性

目的建立联合检测结核分枝杆菌耐药性试验方法,以提高耐药检测方法的灵敏度和特异度。方法对126株已知耐药浓度的结核分枝杆菌耐药株和敏感株分别采用硝酸盐还原试验(Nitrate Reductase Assay,NRA)和反向斑点杂交试验(reverse-dot blot hybridization,RBH),检测其对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并将结果与绝对浓度法结果相比较。结果硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测与绝对浓度法比较具有高度的一致性(P﹥0.05),异烟肼灵敏度95.5%,特异度100%;利福平灵敏度100%,特异度98.1%;链霉素灵敏度93.2%,特异度92.7%;乙胺丁醇灵敏度94.1%,特异度94.6%。结论硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。