门静脉高压症患者脾静脉壁细胞间黏附分子-1激活的意义

目的 研究蛋白激酶Cα（PKCα）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）在门静脉高压症患者脾静脉血管的表达，探讨其在门静脉高压症形成机制中的作用。方法 对34例门静脉高压症患者的脾静脉与30例对照组织行ICAM-1原位杂交染色。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定门静脉高压症患者脾静脉血管平滑肌细胞（VSMC）中PKCα mRNA的表达。结果 正常脾静脉I—CAM-1原位杂交染色呈阴性或弱阳性。门静脉高压症患者脾静脉呈强阳性，差异有统计学意义（P〈0．01）。RT—PCR表明门静脉高压症患者脾静脉VSMC中PKCα mRNA的表达是正常的2．81倍。结论 PKCa和ICAM-1过度表达可能是门静脉高压症患者肝外血管结构改变的重要原因；I—CAM-1的激活在门静脉高压症的形成机制中有重要作用。     

门静脉高压症血流动力学改变及冠状静脉脾静脉壁NOS2、VEGF表达与出血的关系

目的研究门静脉高压症病人门静脉系统血流动力学改变与食管胃底静脉曲张破裂出血的关系,及不同出血史病人门静脉系统血管壁NOS2、VEGF的表达.方法 43例门静脉高压症病人依照出血病史分为两组,A 组(无上消化道出血史或1次出血史)26例,B组(>1次出血史)17例行门静脉系统超声血流检查,术中测压,取冠状静脉脾静脉血管壁免疫组化NOS2、VEGF染色(S-P法).结果门静脉主干内径(PVD)(14.56±1.69)mm,最大血流速度(PVMAX)(19.47±5.35) cm/s,血流量(PVBF)(840.66±211.81)L/min,门静脉压(PVP)(33.2±7.07) cmH2O.A、B两组病人门静脉最大血流速度及门静脉压(PVP)无统计学意义.A组病人门静脉直径及门静脉血流量显著高于B组.43例中28例(65.1%)有冠状静脉逆流(离肝血流).脾静脉血流量(422.5±139.4)L/min,脾静脉平均血流量与门静脉平均血流量之比为0.503,B组病人脾静脉血流量低于A组.脾静脉NOS2阳性率A组为30.8%,B组为52.9%.冠状静脉VEGF阳性率A组为38.5%,B组为58.8%.门静脉系统血管内皮的NOS2和VEGF均有高表达.结论门静脉系统高血流动力学是引起出血的基本条件,初期高血流动力学是机体代偿机制;多次出血史病人门静脉脾静脉血流量明显下降;脾静脉主动充血在门静脉高压症的发生中起重要作用;血管结构改变是影响出血的重要抑或直接因素;门静脉系统血管内皮NOS2高表达在维持高血流动力学中起重要作用;门静脉系统血管内皮VEGF高表达与血管结构改变紧密关联,并因此影响出血情况.     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠细胞外信号调节蛋白和丝裂原激活蛋白激酶的影响

目的 观察肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)对肝纤维化(hepatofibrosis,HF)大鼠肝组织中细胞外信号调节蛋白(extracellular regulated protein kinases,ERK)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路蛋白的影响.方法 SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4 d注射一次,连续8周制备HF模型.HF大鼠采用胶原酶原位灌注法分离,percall纯化原代HOC.HOC悬液0.5 ml(1×109个细胞)经门静脉植入8周HF大鼠的肝脏内,分别于8、15、30d处死大鼠,HE和Masson染色观察HF病理组织学变化,Western blot 法检测肝组织ERK与P38MAPK信号通路蛋白的表达,同时检测ALB、FGF-3、c-kit、HNF-1α、PCNA表达.结果 病理组织学显示,HOC处理组大鼠HF被部分逆转,肝组织胶原纤维增生程度明显减轻,肝组织Ras、ERK、p-ERK、c-fos、c-jun、STAT3、ALB、FGF-3、PCNA蛋白表达显著下降(分别F=91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45,27.03,均P＜0.05),而HNF-α1和c-kit表达上调(分别F=18.63,25.99,均P＜0.05).结论 HOC抑制HF活化的ERK信号通路而改善肝纤维化程度,在HOC存在条件下p-P38并不激活c-fos、c-jun、STAT3、5表达,c-kit和HNF-1α表达增加,而肝组织结构损害程度明显减轻,肝纤维化程度明显改善.

Abstract：

Objective To observe the influence of hepatic oval cell (HOC) on the expression ERK and P38MAPK signaling pathway protein in liver tissue of murine experimental hepatofibrosis (HF).Method SD rats were fed with 10% ethanol and food with high-fat and low-protein, and were injected subcutaneously with carbontetrachloride once every four days for 8 weeks to establish hepatic fibrosis. HOGs were isolated from male HF rats by collagenase porfusion of the liver. HF rats at 8th week were transplanted with 0. 5 ml HOC suspension medium at a density of 1 × 109 cell /ml via portal vein, and the rats were sacrificed at 8th, 15th, 30th day respectively. Histopathologic changes of liver tissues were observed by HE and Masson. The expression of ERK and P38MAPK signaling pathway protein were determined by Western blotting. Result Hepatofibrosis was reversed and the degree of hyperplasia fibrilcollagen in hepatic fibrosis rats decreased significantly by HOC transplantion. HOC down-regulated the protein expression of Ras, ERK,p-ERK, c-fos, c-jun, STAT3, ALB, FGF-3, PCNA ( F = 91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45 ,27.03, all P ＜ 0.05 ), up-regulated the protein expression level of HNF-α1, PDGF-Rβ significantly in liver tissues(F = 18.63,25.99,P ＜0.05). Conclusions HOC improves the degree of hepatofibrosis through inhibiting hyperplasia of collagen fibril in liver tissue of hepatofibrosis rats. With the presence of HOC the expression of c-fos,c-jun,STAT3,5 was not activated by p-P38MAPK. The expression of c-kit and HNF-1α increased and that liver tissue injury alleviated, and hepatofibrosis was improved.     

细胞外信号调节激酶及其上游激酶在人乳腺癌发生发展中的意义

目的　研究人乳腺癌组织、良性肿瘤以及瘤旁乳腺组织中细胞外信号调节激酶 (ERK1、ERK2 )及其上游激酶 (MEK1、MEK2 )的表达 ,以及术前化疗对MEK1、MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达的影响。　方法　应用蛋白质印迹法检测 5 6例患者乳腺癌组织、8例乳腺良性肿瘤以及相应瘤旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达情况 ,其中 16例患者术前接受环磷酰胺 ,表阿霉素加 5 氟脲嘧啶或泰素加表阿霉素方案化疗。应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织及癌旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达。　结果　 4 0例未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于癌旁组织 ,分别为癌旁组织的 4 76、1 4 8和 2 0 9倍 (t值分别为 7 2 4 4 ,5 95 9,3 735 ,P <0 0 1) ;MEK1水平低于相应癌旁组织 (t=2 2 0 6 ,P <0 0 5 ) ;未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于乳腺良性肿瘤 (t值分别为 2 932 ,2 0 82 ,2 0 2 1,P <0 0 5 ) ;MEK1水平低于良性肿瘤 (t=2 0 75 ,P <0 0 5 ) ;雌激素受体阴性的乳腺癌中MEK2蛋白表达水平高于雌激素受体阳性的肿瘤 (t=2 4 0 ,P <0 0 5 ) ,MEK1蛋白表达水平低于雌激素受体阳性的肿瘤 (t =2 5 8,P <0 0 1) ;术前化疗的乳腺癌组织中MEK2蛋白表达     

细胞外信号调节激酶在血管瘤组织中的表达及活性

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其活性形式磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在血管瘤组织中的蛋白表达及其意义。方法:应用免疫组织化学SP法,检测23例增生期血管瘤组织及19例退化期血管瘤组织ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达。结果:增生期血管瘤组织与退化期血管瘤组织ERK1/2的蛋白表达无统计学差异(Z=-0.305,P>0.05);增生期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达显著高于退化期血管瘤组织的表达(Z=-4.271,P<0.01)结论:增生期血管瘤组织p-ERK1/2呈高表达,血管瘤的增生与ERK通路的激活有关。     

门静脉高压症患者脾血管内皮素-1 mRNA的表达

门静脉高压症的具体病理生理过程尚不清楚，我们研究了局部缩血管活性物质内皮素-1(ET-1)mRNA在内脏血管中的表达，探讨其在门静脉高压症血管病变中的意义。     

紫杉醇对人胆管癌RBE细胞凋亡及细胞外信号调节激酶表达的影响

目的观察紫杉醇对人胆管癌RBE细胞凋亡及细胞外信号调节激酶 (ERK)表达的影响 ,以了解ERK在其中的作用。方法运用体外细胞培养 ,AnnexinV 异硫氰酸荧光素和碘化丙啶双染法及流式细胞技术观察紫杉醇以及与ERK上游激酶MEK抑制剂PD980 5 9合用 2 4h后RBE细胞的凋亡情况 ,运用蛋白质印迹法观察紫杉醇以及与PD980 5 9合用后RBE细胞的ERK1,ERK2和ERK的活化形式 (pERK)的表达情况。 结果紫杉醇诱导RBE细胞 ,凋亡率为 14 8%± 2 7% (n =6 ) ,明显高于对照组凋亡率 3 4 %± 1 3% (n =6 ) ,(P <0 0 1) ,紫杉醇合用PD980 5 9后凋亡率2 8 2 %± 5 7% (n =6 ) ,明显高于单用紫杉醇组凋亡率 14 8%± 2 7% (n =6 ) ,(P <0 0 1) ,紫杉醇可介导细胞 pERK的表达增加 ,两药合用后细胞的ERK1,ERK2及 pERK的表达降低。 结论紫杉醇可诱导胆管癌细胞凋亡 ,并激活了ERK途径 ,针对ERK的抑制剂可抑制紫杉醇介导的ERK的活化 ,同时增强紫杉醇诱导的凋亡作用。     

细胞外信号调节激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的表达水平对人精子活动力的影响

目的:比较细胞外信号调节激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的磷酸化和蛋白表达水平在正常精子和弱精子症患者精子中的差异,旨在探讨ERK和P38MAPK表达水平与精子活动力的相关性。方法:收集正常精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子≥25%或a+b级精子≥50%)和弱精子症患者精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子<25%或a+b级精子≤40%)各20份,洗涤后提取精子总蛋白,采用Western印迹方法分别检测ERK、P38MAPK的磷酸化和蛋白表达水平。结果:ERK和P38MAPK在正常精子和弱精子症患者精子中均有表达,ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精子症患者组显著升高(P<0.05),而两组间ERK磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人精子ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平升高可能是精子活动力低下的原因之一。     

Rock-Ⅰ和MYPT-1在门静脉高压症脾静脉壁中的表达变化

目的 研究Rho激酶（Rho-associated kinaseⅠ,Rock-Ⅰ）及其底物肌球蛋白磷酸酶肌球蛋白结合亚基1（myosine phosphatae targeting subunit 1,MYPT-1）在门静脉高压症脾静脉壁中的表达,初步探讨Rock信号转导通路在门静脉高压症时脾静脉病变中的作用.方法 实验组为门静脉高压症患者45例.住院期间患者接受断流或分流术脾切除.对照组为同期外伤性脾破裂行脾切除患者16例.采用免疫组化ABC法,Western Blot技术检测Rock-Ⅰ以及MYPT-1在脾静脉壁中的蛋白表达水平,并以MYPT-1的表达水平作为Rock-Ⅰ功能活化状态的指标.结果 Rock-Ⅰ和MYPT-1在门静脉高压症脾静脉壁中表达明显上调（P〈0.01）,Western Blot结果显示Rock-Ⅰ和MYPT-1的蛋白表达水平在实验组中明显升高（P〈0.01）,差异有统计学意义.实验组Rock-Ⅰ和MYPT-1的蛋白表达,二者呈显著正相关（r=0.858,P〈0.01）.结论 门静脉高压症患者脾静脉壁中明显存在Rock-Ⅰ表达上调与功能活化,提示Rho激酶信号转导通路在门静脉高压症脾静脉病变的发生机制中具有重要作用.     

门静脉主干缩窄附加脾静脉结扎制备犬门脉高压症模型

目的 观察犬门静脉主干缩窄加脾静脉结扎后门静脉系统的变化,为该方法能否建立一种具有脾亢的门静脉高压症大动物模型提供依据.方法 犬15条,采用门静脉主干缩窄加脾静脉结扎的方法建立模型,术前及术后每周观察实验动物血象的变化,在预定时间点分别随机选择5条犬开腹观测门静脉自由压、脾脏大小、门体侧支循环形成情况,并切取脾脏行组织病理学检查.此外,术前及术后预定时间点了解骨髓增生情况变化.结果 建模后,外周血红细胞、血小板下降,脾脏肿大明显,并且能够有效持续到第9周;术后第5、7、9周的脾脏组织病理学改变符合脾脏慢性淤血改变,而且骨髓增生情况较正常明显活跃.结论 门静脉主干缩窄加脾静脉结扎后门静脉系统的变化符合门静脉高压症的表现,尤其是脾亢状态较满意,具有良好的实验应用价值.     

门静脉高压症患者门静脉系统的三维重建特点

With the development of modern imaging technologies,three-dimensional (3D) reconstruction techniques based on the computed tomography (CT) or magnetic resonance imaging (MRI) data has been gradually ap...     

CT门静脉成像的临床解剖学分析

目的 进行CT门静脉成像(computed tomography portal venography,CTPV)的临床解剖学分析,探讨其临床应用价值.方法 选取手术组(实验组)40例门静脉高压症合并上消化道出血患者和20例正常对照组进行CTPV临床读片与影像学测量,包括门静脉主干及其主要侧支血管.对胃左静脉的注入方式进行分类总结.应用直线拟合数学模型处理测量数据.结果 60例均成功进行CTPV摄片.实验组和对照组门静脉主干直径分别为(16.62±4.80) mm、(10.84±2.14) mm,肠系膜上静脉直径分别为(12.36±2.67) mm、(8.79±1.44) mm,脾静脉直径分别为(14.29±4.24) mm、(8.32±1.78) mm.实验组胃左静脉大部分注入脾-门交角和脾静脉.直线拟合11/18=X/30数学公式计算显示,阈值压力下门静脉主干X值=18.33 mm.胃左静脉食管支的显影率为52.38％、胃左静脉胃支显影率66.67％、胃左静脉食管支及胃支同时显影率23.81％,仍有相当一部分门脉高压患者胃左静脉的胃支和食管支显影不良甚至不显影.腹膜后静脉的显影率为25％.结论 应用CTPV在术前对食管胃底周围曲张的门静脉进行形态和功能的详尽评估,指导术者进行区域性断流(regional devascularization,RDV)具有实用价值及临床意义.CTPV显示胃左静脉注入脾-门交角和脾静脉的患者临床上出血的风险大.门静脉主干直径≥18 mm时可能出血,初步定义为CTPV阈值压力.CTPV在胃左静脉胃支/食管支的精细结构显示上仍然具有一定的局限性.CTPV中提高腹膜后静脉显影率应予关注.     

门静脉高压症患者脾静脉平滑肌细胞gax mRNA的表达

目的观察门静脉高压症患者脾静脉平滑肌细胞gax mRNA的表达。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分别检测28例门脉高压症患者脾静脉和12例正常对照血管gax mRNA和PCNA蛋白的表达。结果gax mRNA在实验组和对照组中相对表达量分别为1.13±0.21和10.17±0.81(P<0.01);PCNA蛋白在实验组中的表达为(29.8±4.7)%,而正常对照组无明显表达(P<0.01)。结论门静脉高压症患者脾静脉平滑肌细胞中gax mRNA表达下降PCNA蛋白过表达,调节了脾静脉平滑肌细胞增殖、迁移和表型改变,使血管结构重建,对门静脉高压症的形成和维持可能起重要作用。     

门静脉置管在门奇静脉断流术治疗门静脉高压症中的作用

目的探讨经颈内静脉肝内门体分流术(transjugular intrahepatic porto-systemic shunt,TIPS)途径门静脉置管对门奇静脉断流术治疗门静脉高压症疗效的作用。方法 2011年3月至2015年5月,对60例门静脉高压症病人行门奇静脉断流术治疗,术前采用随机方法分为研究组(门静脉直接抗凝)和对照组,每组各30例。采用直接门静脉造影和测压、门静脉CT血管造影(CTA)检查,观察断流术的彻底性、门静脉血栓发生率和门静脉压力的变化。结果门奇静脉断流术后1周,门静脉CTA显示研究组和对照组门静脉血栓发生率分别为6.7%(2/30)和26.7%(8/30),差异有统计学意义(P0.05);直接门静脉测压示门静脉压力较术前明显下降(P0.05),术后7 d稍有回升。直接门静脉造影示研究组病人冠状静脉和食管静脉曲张显影4例,采用弹簧栓栓塞。两组病人术中失血量、术后并发症发生率差异均无统计学意义。术后随访,研究组和对照组出血复发率分别为3.3%(1/30)和16.7%(5/30)。门静脉CTA复查示研究组病人冠状静脉无显影,对照组病人显示冠状静咏和食管静脉曲张,TIPS治疗成功4例,失败1例。结论经TIPS途径门静脉置管,直接门静脉造影、冠状静脉栓塞以及抗凝可以提高断流术的彻底性、降低门静脉血栓发生率,同时还能动态观察门静脉压力变化。     

缩窄门静脉主干1／2加丝线慢性栓塞术制备犬门静脉高压症模型

目的:探索操作简便且效果满意的门静脉高压症动物模型制备方法.方法:缩窄门静脉主干1/2加丝线慢性栓塞术,通过22条犬进行实验.结果:除1条死亡外.其余21条术后3～4周时门静脉压力升高至2.83±0.66kPa(术前1.33±0.28kPa,P<0.001):胃镜、门静脉造影及病理学检查证实,17条犬有食管胃底曲张静脉形成,形成率80.95%(其中方法完善后制备的14条、形成率100%),12条发生门脉高压性胃病,发生率57.14%.1条观察至术后4月.门静脉高压症表现仍然存在.结论:该法简便易行、建立模型周期短、成功率高且质量可靠并较持久.     

可溶性P-选择素对肝硬化门静脉高压术后门静脉血栓形成的影响

目的探讨可溶性P-选择素对肝硬化门静脉高压症术后门静脉血栓形成的影响。方法检测乙肝肝硬化患者在门静脉高压症围手术期血小板的数量及反映血小板功能的可溶性P-选择素水平的动态变化,比较其在有门静脉血栓形成组患者及无血栓形成组患者间的差异。结果血栓形成组患者及无血栓形成组患者间,血小板数量无显著差异,而可溶性P-选择素水平在术后第4～6天有显著性差异(P<0.05)。结论乙肝肝硬化患者在行门静脉高压症手术后,血小板功能的变化对门静脉血栓形成可能起着重要的作用。     

内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1、蛋白激酶C、核因子-κB在门静脉高压血管内皮细胞的表达及意义

目的 探讨门静脉局部内皮源性血管活性物质异常与内皮细胞应力信号转导通路激活的关系.方法 用免疫组织化学和免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜技术检测18例门静脉高压症、10例外伤性脾破裂患者脾静脉和15例门静脉高压、10例对照组大鼠门静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(ET-1)、蛋白激酶C(PKC)、核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨门静脉高压时其血管内皮细胞eNOS、ET-1表达改变与信息分子PKC、NF-κB的关系.结果 实验组内皮细胞PKC表达呈阳性或强阳性,对照组则呈阴性或弱阳性表达.其平均吸光度分别为实验组0.068 2±0.009 2(人)/0.059 3±0.005 7(鼠),对照组0.025 7±0.008 2(人)/0.022 4±0.006 5(鼠),差异有统计学意义(P＜0.01).eNOS、ET-1与NF-κB在门静脉高压患者脾静脉和实验组大鼠模型门静脉内皮的荧光信号强度均显著高于对照组ET-1107.359±30.147比56.441±18.874,P＜0.01(人);91.017±32.517比51.065±19.018,P＜0.01(鼠).eNOS95.610±28.333比57.872±27.374,P＜0.01(人);88.712±28.159比50.897±16.546,P＜0.01(鼠).NF-κB90.098±30.964(人)/90.348±32.852(鼠)比48.358±19.326(人)/48.070±19.065(鼠),P＜0.01(人)/P＜0.01(鼠).脾/门静脉内皮细胞ET-1、eNOS的表达与PKC、NF-κB的表达呈正相关(P＜0.05).结论 门静脉血中ET-1和NO的增高是由于门静脉系统内皮细胞合成增多所致,内皮细胞合成NO的增多与其eNOS表达上调有关.门静脉高压时其血管内皮细胞的机械应力信号通路被激活,内皮细胞ET-1和eNOS表达上调与该通路激活有关.     

门静脉高压症门静脉血栓形成的机制研究

目的:探讨肝硬化门静脉高压症病人术后门静脉系统血栓形成的原因。方法:回顾性分析2011年1月至12月间收治资料完整的40例肝硬化门静脉高压症病人术前术后的临床资料,分析术前术后门静脉系统血栓形成与凝血功能及血流动力学状况之间的关系。结果:术前在有无门静脉系统血栓形成的两组间各项凝血功能参数均无统计学差异,唯门静脉血流速度在血栓组较无血栓组显著减慢(P