79株临床分离MRSA的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的:了解天津某医院临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药状况及葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型.方法:应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测mecA基因,多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型.应用微量肉汤法及K-B纸片扩散法测试MRSA对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、环丙沙星、莫西沙星、头孢唑林、氯霉素、林可霉素、庆大霉素、头孢曲松、红霉素、利福平、盐酸四环素、万古霉素、替考拉宁、复方磺胺甲恶唑、利奈唑胺、替加环素18种抗生素药物敏感性.大环内酯、林可霉素、链阳霉素B类抗生素诱导耐药的检测采用克林霉素-红霉素双纸片诱导试验(D试验).结果:SCCmec分型显示79株受试MRSA均为SCCmecⅢ型菌株.79株MRSA临床株对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,对氯霉素、复方磺胺甲嗯唑耐药率相对较低,分别为3.80%、10.13%,对糖肽类抗生素和利奈唑胺、替加环素均敏感.7株红霉素耐药、林可霉素敏感MRSA D试验阳性.结论:天津某医院临床分离MRSA SCCmec基因型均为Ⅲ型,且具有多重耐药的特征,红霉素耐药、林可霉素敏感株存在诱导耐药现象.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCC mec基因分型的研究

目的了解安徽省立医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）SCCmec基因分型情况和各种基因型别的耐药特征及分子流行病学特点。方法采用VITEK32全自动微生物分析仪GPS药敏板检测MRSA菌株对14种抗菌药物的敏感性；采用PCR方法对MRSA菌株SCCmec进行基因分型。结果SCCmecⅡ型菌株4株（13．3％），SCCmecⅢ型菌株24株（80％），SCCmecⅣ型菌株2株（6．7％），未发现SCCmecⅠ型菌株。结论SCCmecⅢ菌株为安徽省立医院存在的主要流行菌株，SCCmecⅡ型菌株和SCCmecⅢ型菌株均为多重耐药菌株。     

儿童下呼吸道感染患者痰液耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株耐药性及基因分型

目的:研究儿童下呼吸道感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株的耐药性及基因分型,为临床诊疗提供参考。方法:对2009年1月-2010年12月收治的50例肺炎患儿进行临床调查,采集下呼吸道的痰液标本作细菌培养,用头孢西丁纸片法鉴定MRSA,并用琼脂稀释法测定MRSA对12种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用多重PCR方法检测MRSA的葡萄球菌染色体盒mec(SCCmec)基因分型。结果:MRSA所致的下呼吸道感染多见于低龄儿童(15 d～6岁),SCCmec基因分型中以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型为主。所有MRSA的分离株都对青霉素和苯唑西林耐药,对万古霉素敏感,对其他抗菌药物的耐药率较高并且存在多重耐药。结论:儿童下呼吸道感染MRSA分离株多见于学龄前的儿童,SCCmec基因分型以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型常见,MRSA对多种抗菌药物具有较高的耐药性并且存在多重耐药。     

健康儿童鼻携带MRSA SCCmec分型及耐药性分析

目的:了解健康儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型及其对抗生素的耐药性。方法:自2011年3-5月收集广州荔湾区463名幼儿园儿童及1 012名小学生鼻拭子进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,用头孢西丁药敏纸片鉴定MRSA,并对阳性菌株进行药敏检测;采用多重聚合酶链反应(M-PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型。结果:1 475名儿童中共检出28株MRSA,SCCmecⅢ型1株(3.6%)、SCCmecⅣa型24株(85.7%)、SCCmecⅤ型3株(10.7%)。39.3%的MRSA菌株(11株)呈多药耐药状态,最常见的耐药模式是青霉素-红霉素-克林霉素-四环素。28株MRSA对利福平、复方磺胺甲唑、利奈唑胺及万古霉素均敏感。结论:在健康儿童鼻前庭中既携带有社区相关MRSA(CA-MRSA)菌株,亦携带医院相关MRSA(HA-MRSA)。MRSA呈多药耐药状态,青霉素、红霉素、克林霉素、四环素不宜作为经验用药之首选。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的:了解并确定临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)型别的特点.方法:用常规方法将从天津医科大学第二医院等天津地区8家医院及武汉同济医院临床标本(痰、尿、血及分泌物)中分离细菌,金黄色葡萄球菌的鉴定采用凝固酶实验、常规生化鉴定、M43葡萄球菌乳胶凝集试剂盒及法国生物梅里埃公司的API staph条确定,MRSA的检测采用头孢西丁纸片扩散法及mecA基因的检测确定.应用10对引物的多重引物聚合酶链反应技术(M-PCR)扩增MRSA葡萄球菌染色体mec盒的基因片段,对其中不能分型的变异株进行mec基因复合体及ccr基因复合体分型,然后根据mec基因复合体及ccr基因复合体的组合情况对MRSA的型别情况作出判断.结果:本实验共分离出金黄色葡萄球菌127株,MRSA78株,其中天津地区51株,武汉地区27株.78株MRSA经过3组M-PCR方法最终得到SCCmec-Ⅰ型1株,SCCmec-Ⅱ型4株,SCCmec-Ⅲ型62株,SCCmec-Ⅴ型3株,未检测出SCCmec-Ⅳ型及SCCmec-Ⅵ型,并且有8株MRSA用本实验方法不能分型.结论:本实验分离的MRSA临床株的SCCmec以Ⅲ型(或SCCmecⅢ+dcs型)为主.     

夫西地酸对耐甲氧西林葡萄球菌的体外抗菌活性研究

目的:了解夫西地酸对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌临床分离株的体外抗菌活性。方法:采用血浆凝固酶、金黄色葡萄球菌单克隆抗体及Vitek-32型仪进行菌株鉴定,纸片琼脂扩散(K-B)法进行药物敏感性试验,头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林葡萄球菌。结果:97株金黄色葡萄球菌中,检测到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)56株,占57.7%;119株凝固酶阴性葡萄球菌中,检测到耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)77株,占64.7%。全部菌株均对万古霉素敏感,MRSA及MRCNS对夫西地酸的耐药率分别为1.8%和7.8%,耐甲氧西林葡萄球菌对其它抗菌药物的耐药率在25%～100%之间。结论:夫西地酸对耐甲氧西林葡萄球菌有较强的体外抗菌活性。     

医务人员手MRSA、MRCNS带菌状况研究

目的 通过对我院医护人员手耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)带菌状况的研究,及时发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)携带者.方法 按常规方法,对我院医护人员手进行采样,标本培养方法按<全国临床检验操作规程>微生物部分进行培养鉴定,部分细菌用VITEK-32和ATB全自动微生物鉴定仪进行鉴定.结果 取标本330份,共分离葡萄球菌7种63株,凝固酶阴性葡萄球菌57株,其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为9株,占凝固酶阴性葡萄球菌检出率的15.78%,金黄色葡萄球菌6株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为1株,占金黄色葡萄球菌检出率的16.66%.结论 医护人员手存在着MRSA、MRCNS带茵者,应提高医护人员对MRSA和MRCNS感染的认识度,采取严密的消毒隔离措施以降低我院MRSA和MRCNS感染率,防止交叉感染的发生.     

长春市金葡菌耐药状况及耐甲氧西林金葡菌基因分型

目的调查长春地区临床分离金葡菌的耐药状况及Panton—Valentine杀白细胞素（PVL）分布情况；确定耐甲氧西林金葡菌（MRSA）染色体及葡萄球菌me~盒式染色体（SCCmec）基因分型。方法琼脂稀释法测定苯唑西林等17种抗菌药物对2004年6月～2005年1月长春市3家教学医院临床标本分离的83株金葡菌的最低抑菌浓度（MIC）；聚合酶链式反应（PCR）进行金葡菌的PVL基因检测；脉冲场凝胶电泳（PFGE）对MRSA菌株作染色体同源性分析。多重PCR方法检测MRSA的SCCmec基因分型。结果83株金葡菌中MRSA12株（占14．5％）；金葡菌PVL的基因阳性7株（占8．4％）。MRSA对β-内酰胺类、红霉素、克林霉素、庆大霉素、四环素、氟喹诺酮类耐药率均超过90％，对氯霉素、利福平耐药率分别为8．3％、58．3％。未发现对糖肽类及复方磺胺甲嗯唑耐药的MRSA。甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）对青霉素G、红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素耐药率分别为95．8％、67．6％、49．3％、45．1％、26．8％，对头孢菌素、氯霉素、利福平、氟喹诺酮类、复方磺胺甲曙唑耐药率均低于20％。MRSA的PFGE显示为A、B两种类型，以A型为主，占92％（11／12），三家医院均有分布。MRSA的SCCmec分型．Ⅲ型为主75％（9／12）。结论长春市MRSA发生率低于国内报道平均水平；MRSA为两种不同类型克隆株，在不同医院间存在克隆传播；未发现社区获得性MRSA菌株。     

耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性监测及分析

自从1961年在英国报道首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）以来,MRSA和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）引起的感染遍及世界各地[1],也成为目前医院感染的重要致病菌。该菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药性逐年升高,目前仅有万古霉素治疗有效[2],其耐药问题已成为临床上的主要问题,且不同地区耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的分离率不同,其耐药谱也相差甚远,给临床治疗带来极大困难。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体mec盒基因分型及耐药性分析

目的了解我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的现状及耐药特征,为临床合理选用抗生素提供理论依据。方法收集我院2009年9月至2010年9月住院患者标本中分离到的临床资料完整的18株MRSA菌株作为研究对象,采用Kerby-Bauer纸片扩散法检测了18株MRSA对9种抗菌药物的敏感性水平;应用多重聚合酶链反应(PCR)方法对上述菌株进行了葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)分型。结果 18株MRSA对青霉素、苯唑西林、头孢西丁、环丙沙星和庆大霉素的耐药率均为100%,对克林霉素和红霉素的耐药率为89%,对利福平耐药率为56%、中敏率11%,无万古霉素耐药菌株;全部呈多重耐药,多重耐药主要表现为同时耐5种(22%)、6种(33%)及7种(44%)抗菌药物;18株MRSA的mecA基因阳性,其中9株(50%)携带有3种新的SCCmec型/亚型(New1～3)、6株(33%)携带ⅢB型SCCmec、3株(17%)为未定型菌株。结论 18株MRSA的SCCmec型别具有高度多态性,ⅢBSCCmec型是优势型别,未发现万古霉素耐药株。     

广东省肺炎克雷伯菌临床分离株病原特征分析

目的 了解广东省肺炎克雷伯菌临床分离株的抗生素耐药情况与多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集了广东省9个地市的肺炎克雷伯菌临床分离株102株,采用微量肉汤稀释法测定菌株对30种抗菌药物的敏感性,同时对所有分离株进行MLST分型,分析其菌群分布特征。结果 根据药敏试验与黏液拉丝试验结果,广东省9个地市102株肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药特点可分成4类,即(ESBLs)KP(43株,其中9株为ESBLs-hvKP)、CRKP(8株,其中1株为CR-hvKP)、较敏感的KP(30株,均为hvKP)和其它类型多重耐药KP(MDRKP)(21株,其中6株为MDR-hvKP)。MLST分型结果显示102株临床分离株可分成54个MLST型,其中有6种为新发现的ST型,地区分布上看,湛江地区以ST23(4/30)为主;茂名地区以ST1224(4/12)为主;阳江地区以ST11(3/6)为主;珠海地区以ST15(3/8)为主,其他地区的ST型呈多态性。结论 我省肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况较严重,菌群分布多样,在某些地区存在耐药变异株,应加强对此类菌株的耐药性和菌群结构变化的监测。     

广东省肺炎克雷伯菌临床分离株病原特征分析

目的 了解广东省肺炎克雷伯菌临床分离株的抗生素耐药情况与多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集了广东省9个地市的肺炎克雷伯菌临床分离株102株,采用微量肉汤稀释法测定菌株对30种抗菌药物的敏感性,同时对所有分离株进行MLST分型,分析其菌群分布特征。结果 根据药敏试验与黏液拉丝试验结果,广东省9个地市102株肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药特点可分成4类,即(ESBLs)KP(43株,其中9株为ESBLs-hvKP)、CRKP(8株,其中1株为CR-hvKP)、较敏感的KP(30株,均为hvKP)和其它类型多重耐药KP(MDRKP)(21株,其中6株为MDR-hvKP)。MLST分型结果显示102株临床分离株可分成54个MLST型,其中有6种为新发现的ST型,地区分布上看,湛江地区以ST23(4/30)为主;茂名地区以ST1224(4/12)为主;阳江地区以ST11(3/6)为主;珠海地区以ST15(3/8)为主,其他地区的ST型呈多态性。结论     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与分子流行病学分析

目的了解我院住院患者临床肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与分子流行特征,为临床抗感染及合理用药提供依据。方法收集2018年4-12月我院住院病人肺炎克雷伯菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一方案进行抗菌药物敏感性试验;聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行同源性分析和分型。结果共分离到肺炎克雷伯菌211株,对第3代头孢(头孢噻肟)和第四代头孢(头孢吡肟)的耐药率分别为54.5%和44.1%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率为32.7%和34.1%;其中107株(107/211,50.6%)菌株分离自ICU病房,56株(56/107,52.3%)为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KP),MLST分型显示以ST11为主,PFGE分型结果主要为A型和F型两大聚类。结论肺炎克雷伯菌耐药率高,特别是分离自ICU病房的菌株耐药情况尤为严重,且携带KPC-2基因的ST11克隆株在ICU病房流行传播。     

High clonal heterogeneity of Panton-Valentine leukocidin-positive meticillin-resistant Staphylococcus aureus strains from skin and soft-tissue infections in the Province of Bolzano, Northern Italy

Panton-Valentine leukocidin (PVL)-positive community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus (CA-MRSA) isolates are widespread in many countries, with varying distribution and epidemiology. The aim of this study was to characterise 10 PVL-positive MRSA isolates collected during February 2010 to January 2011 from skin and soft-tissue infections in the North Italian Province of Bolzano. Accessory gene regulator (agr) typing, staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) typing, staphylococcal protein A (spa) gene typing, multilocus sequence typing, toxin gene profiling, polymerase chain reaction for type I arginine catabolic mobile element (ACME) and antimicrobial resistance typing were applied to the isolates. Eight different CA-MRSA clones were identified, including ST30-IVc, ST772-V, ST80-IVc, ST5-IVc, ST88-IVa, ST93-IVa, ST8-IVc and the type I ACME-positive ST8-IVa. The high heterogeneity of PVL-positive MRSA probably reflects the introduction of different clones by international travellers or immigrants.     

Identification of novel vga(A)-carrying plasmids and a Tn5406-like transposon in meticillin-resistant Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis of human and animal origin

Nine staphylococcal strains of human and animal origin with a lincomycin-resistant/erythromycin-susceptible phenotype and carrying vga genes were characterised to determine the genetic elements involved in the dissemination of these uncommon resistance genes. These strains were typed by multilocus sequence typing (MLST), staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) and/or spa typing. Antimicrobial susceptibility was studied by disk diffusion and agar dilution methods. Presence of the genes lnu(A), lnu(B), vga(A), vga(A)v, vga(B), vga(C), vga(E), lsa(B) and cfr was studied by PCR. Transformation experiments were carried out in all strains, and the plasmid or chromosomal gene location was determined by Southern blot analysis. Genetic environments of the vga genes were analysed by PCR mapping or inverse PCR and sequencing. Five meticillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) ST398 strains and three Staphylococcus epidermidis strains harboured the gene vga(A), and one MRSA-ST8 strain contained the gene vga(A)v. One MRSA-ST398 strain, which also contained the gene lnu(A), showed the highest minimum inhibitory concentration (MIC) to lincomycin. The vga(A)v-positive strain presented lower MIC values than the vga(A)-positive strains. Presence of the pVGA plasmid was confirmed in two MRSA-ST398 strains. Four novel vga(A)-carrying plasmids were detected: pUR2355 (in two MRSA and one meticillin-susceptible S. epidermidis); pUR4128 (one MRSA); pUR3036 [one meticillin-resistant S. epidermidis (MRSE)]; and pUR3937 (one MRSE). The plasmid pUR4128 was very similar to pUR2355. Plasmids pUR3036 and pUR3937 were related and were very similar to plasmid pSE-12228-06. The gene vga(A)v was located in a transposon analogous to Tn5406. Therefore, four novel vga(A)-carrying plasmids and a variant of Tn5406 were identified in this study.     

MRSA的检测、耐药、流行及抗菌药物选择的研究进展

摘要：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)一直以来是全世界引起感染性疾病的 重要致病菌之一。MRSA的耐药机制主要与由葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)上的mecA和mecC耐药基因有关。同时，在sarA系 统和agr系统等调控下细菌容易聚集形成生物膜，能有效的阻挡抗菌药物作用而产生极大的耐药性。耐药基因和生物膜的共同作 用使MRSA的耐药机制更为复杂，并在全球广泛传播，而及时准确地选择抗菌药物和检测方法显得尤为重要。本文就MRSA流 行状况、抗菌药物选择、SCCmec的基本结构与功能、MRSA耐药机制和检测方法等方面进行综述，旨在更好地为临床治疗和预 防MRSA引起的感染提供科学依据。     

Higher biofilm formation in multidrug-resistant clinical isolates of Staphylococcus aureus

The biofilm-forming capacity of Staphylococcus aureus contributes to antibiotic resistance, but whether antibiotic-resistant strains have the capacity to form biofilms has not yet been determined. Therefore, we recovered 101 clinical isolates of S. aureus and performed antibiotic susceptibility testing for 30 antibiotics using a VITEK II automatic system. We then carried out a biofilm assay on 96-well polystyrene plates. In addition, the presence of IS256 involved in the variation of biofilm phases of S. aureus was determined by polymerase chain reaction. The prevalence of IS256 was significantly related to multidrug resistance as well as biofilm expression, with biofilm positivity in 27 (39.7%) of the 68 IS256-positive strains and 3 (9.1%) of the 33 IS256-negative strains. In our analysis of the relationship between meticillin resistance and biofilm formation, we found that the rate of biofilm positivity was 37.9% (25/66) for meticillin-resistant strains and 14.3% (5/35) for meticillin-susceptible strains (P<0.05). Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) typing found that SCCmec type IV was most prevalent, comprising 14 (56.0%) of the 25 biofilm-positive, meticillin-resistant strains. A statistical analysis testing the relationship between multidrug resistance and biofilm formation revealed a significantly higher rate of biofilm development in strains with greater multiresistance compared with strains with less multiresistance. Our results suggest that the multidrug-resistant clinical isolates of S. aureus have a greater likelihood of developing biofilms on medical devices.