端粒酶反义寡核苷酸对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的　探讨端粒酶反义寡核苷酸 (ASON)对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制的作用机制。方法　针对端粒酶RNA的ASON作用于HeLa细胞 ,台盼蓝排斥法测定细胞存活力 ,以PCR为基础的TRAP法测定端粒酶的活性 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡及细胞周期。结果　ASON连续治疗 5d ,HeLa细胞的存活力无明显下降 ;在FuGENE6的介导下 ,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关。FCM未检测到特征性的亚G1 峰 ,ASON组中G2 /M期的DNA含量显著增多。结论　针对端粒酶RNA的ASON能抑制HeLa细胞的端粒酶活性 ,并将细胞阻滞在分裂期达到抑制细胞生长的目的     

奈韦拉平纳米混悬液的制备及大鼠体内药动学研究

目的：：制备奈韦拉平纳米混悬剂,考察其在大鼠口服给药后体内的药动学特征。方法：采用高压均质法制备奈韦拉平纳米混悬剂,以纳米混悬剂粒径分布、PdI和Zeta电位为指标,考察了奈韦拉平纳米混悬剂的影响因素,并对制得的纳米粒进行表征;采用高效液相色谱法测定大鼠血浆中的奈韦拉平浓度,使用3P97软件计算相应的药动学参数。结果：奈韦拉平纳米混悬液平均粒径为(456.1±72.1) nm,PdI为(0.441±0.072),Zeta电位为(-24.4±4.7) mV。奈韦拉平混悬液和奈韦拉平纳米混悬剂在大鼠体内的AUC0-12分别为(7.57±0.52)和(11.72±1.83) mg·h·L-1;t1/2分别为(2.45±0.31)和(3.16±0.39) h;Tmax分别为(1.43±0.38)和(1.61±0.32) h;Cmax分别为(1.62±0.42)和(3.15±0.52) mg·L-1。结论：奈韦拉平纳米混悬液能够明显改善大鼠体内奈韦拉平的药动学行为,与奈韦拉平混悬液相比显著提高了药物的生物利用度。     

植物诱导Hela细胞凋亡的机制

多种植物或其有效成分可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,其机制主要是细胞周期阻滞作用,调控凋亡相关基因表达并激活相关信号转导通路,下调端粒酶活性等.     

hTERT反义寡核苷酸增强DDP介导细胞凋亡作用

目的研究端粒酶催化亚基(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对HeLa细胞端粒酶活性的抑制及其对顺铂(DDP)诱导细胞凋亡的影响。方法用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)定量端粒酶重复扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性。观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪对细胞凋亡进行定量分析。结果ASODN作用后,细胞的端粒酶活性明显降低,且这种作用具有明显的时间和剂量依赖性。0.05、0.1μmol.L-1和0.2μmol.L-1的硫代ASODN治疗后,HeLa细胞的端粒酶活性分别下降了21.8%、52.4%和71.1%。0.2μmol.L-1的硫代ASODN作用HeLa24、48h和72h后,细胞的端粒酶活性分别下降了12.48%、38.27%和71.10%。细胞转染0.2μmol.L-1浓度的ASODN24h后再与1.5、3.0mg.L-1浓度的顺铂联合作用,吖啶橙染色可见典型的凋亡形态,并且凋亡百分率(50.35%、29.67%)分别与RSODN联合顺铂组(19.33%、12.13%)、单用顺铂组(19.67%、11.38%)比较,差异有显著性(P<0.05)。结论hTERT反义寡核苷酸能有效抑制其端粒酶活性,并且促进DDP诱导HeLa细胞凋亡。     

奈韦拉平产品说明书增加肝毒性信息

美国、加拿大提请医务人员注意:奈韦拉平(nevirapine,Viramune)说明书已增加肝毒性内容。奈韦拉平为非核苷酸抗逆转录酶药物,常与其他药物联合应用,治疗I型HIV感染。1、CD4 计数超过250个细胞/mm3的女性患者(包括妊娠妇女)其奈韦拉平肝毒性为一般患者的12倍;2、严重或致命的肝毒性最易发生在奈韦拉平治疗最初6周内,此后仍存在危险,故密切监测需坚持18周;3、奈韦拉平治疗停止后,肝损害仍可持续。医务人员需告诫患者:一旦出现肝炎体征或症状、严重皮肤反应或过敏反应,应停用奈韦拉平,并立即就医,此后不再重新服用。奈韦拉平产品说明书增加…     

端粒酶反义hTR和反义hTERT合用对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的探讨端粒酶反义hTR和反义hTERT联合作用于宫颈癌HeLa细胞,对HeLa细胞凋亡的影响。方法实验分空白对照组、脂质体对照组、正义hTR组、正义hTERT组、反义hTR组、反义hTERT组及反义hTR+反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、逆转录聚合酶链反应技术-端粒重复序列扩增(TRAP)酶联免疫法(ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测宫颈癌HeLa细胞转染反义hTR和反义hTERT后细胞的端粒酶活性、形态学、凋亡和周期的改变。结果宫颈癌HeLa细胞转染端粒酶反义核酸后,出现明显的细胞凋亡形态学改变,端粒酶活性抑制率、凋亡率增高及细胞周期阻滞,与空白对照组、脂质体对照组及正义核酸组比较,统计学上差异有显著性(P<0.01)。HeLa细胞转染0.2μmol·L-1反义hTR+反义hTERT72h后,端粒酶活性抑制率、细胞凋亡率分别为80.5%、28.6%,与反义hTR组和反义hTERT组比较(端粒酶活性抑制率、细胞凋亡率分别为hTR:62.7%、13.2%;hTERT:66.5%、13.7%),差异有显著性(P<0.01,q值分别为0.919、1.075)。反义hTR+反义hTERT组比反义hTR组和反义hTERT组细胞凋亡的形态学改变更明显,反义hTR+反义hTERT组G0/G1期细胞比例增加(G1期细胞比例为57.8%,空白对照组G1期细胞比例为50.7%)。结论端粒酶反义核酸能通过抑制端粒酶活性诱导细胞凋亡,端粒酶反义hTERT和反义hTR有协同效应。     

抗艾滋病药奈韦拉平合成技术研究新进展

奈韦拉平(NVP)是目前使用最广泛的抗艾滋病药物之一,其合成方法的研究近年来受到广泛关注.笔者介绍了目前国内外该化合物合成技术的最新进展,分析了6条合成路线,讨论了各合成方法的优缺点,并对其合成技术的发展作了展望.     

相思子蛋白P2抗肝癌作用及对端粒酶活性影响

目的研究相思子蛋白P2对肝癌细胞生长的抑制作用及机制。方法体外实验:MTT法检测相思子蛋白P2对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。TRAP-SYBR-Green染色法检测相思子蛋白P2作用前后细胞端粒酶活性的改变。体内实验:相思子蛋白P2 50、75、100μg.kg-1连续灌胃给药10 d,观察对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的生长抑制作用。小鼠口服给药急性毒性观察。结果相思子蛋白P2可明显抑制HepG2细胞增殖,IC50值为5.172×10-3 mg.L-1。在5×10-5～1×10-3 mg.L-1剂量作用下,可引起HepG2细胞凋亡。相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,从而抑制了肿瘤细胞增殖。同时可使细胞端粒酶活性明显降低,其下调端粒酶活性的作用随药物浓度的增加而明显增强。相思子蛋白P2对小鼠H22肝癌细胞生长有明显抑制作用,100μg.kg-1抑瘤率达62.47%,且对胸腺和脾脏指数的影响较环磷酰胺小。小鼠口服给药LD50值为6.77 mg.kg-1。结论相思子蛋白P2体内外均可明显抑制肝癌细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与下调细胞端粒酶活性、改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡有关。     

西多福韦对HeLa细胞增殖抑制作用的研究

目的 研究抗病毒药西多福韦(CDV)对HeLa细胞的增殖抑制作用.方法 采用MTT法分析CDV和阳性对照药顺铂(DDP)对HeLa细胞增殖活力的影响;利用细胞集落形成实验和Giemsa染色技术,观察CDV和DDP导致HeLa细胞凋亡情况;利用流式细胞仪观察CDV和DDP对细胞凋亡及细胞周期影响.结果 MTT法和细胞集落实验结果显示CDV能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;流式细胞仪测定显示CDV和DDP使HeLa细胞阻滞于细胞周期的S期,并诱导HeLa细胞发生凋亡.结论 CDV对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,并能诱导细胞凋亡,CDV有可能成为宫颈癌治疗的另一策略.     

绵毛胡桐内酯对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶的影响

目的:探讨绵毛胡桐内酯(Calanolide)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Calanolide对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测在Calanolide作用后KB细胞端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:Calanolide在10~50mg/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);Calanolide作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随Calanolide浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:Calanolide对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。     

Cariporide对肿瘤细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨特异性抑制剂Cariporide通过抑制钠氢离子交换蛋白1(NHE1)功能而阻止肿瘤细胞增殖的机制.方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Cariporide对细胞增殖的抑制率,共聚焦荧光显微镜测算双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF-AM)的荧光强度,检验其下调细胞内pH值,ELISA试剂盒测定其对体外培养细胞表达和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,观测其对动物体内肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果随着Cariporide的剂量增加或作用时间延长,HeLa细胞内pH值逐渐降低,肿瘤细胞表达VEGF减少.伴随着细胞内pH值降低,VEGF分泌水平逐渐下降,两者之间呈显著相关性(P＜0.05).另外,Cariporide能抑制动物体内的肿瘤增殖.结论Cariporide能够减少肿瘤细胞表达和分泌VEGF,抑制动物体内肿瘤增殖.     

Evaluation of Polycaprolactone Matrices for Sustained Vaginal Delivery of Nevirapine in the Prevention of Heterosexual HIV Transmission

Nevirapine (NVP) was loaded in polycaprolactone (PCL) matrices to produce vaginal inserts with the aim of preventing HIV transmission. NVP dispersions in PCL were prepared, at 10% (w/w) theoretical loading, measured with respect to the PCL content of the matrices, in the form of (1) NVP only, (2) a physical mixture of NVP with polyethylene glycol (PEG) 6000 or (c) a solid dispersion (SD) with PEG produced by co-dissolution in ethanol. Characterisation of SD by differential scanning calorimetry and attenuated total reflectance–Fourier transform infrared spectroscopy suggested transformation of the crystalline structure of NVP to an amorphous form which consequently increased the dissolution rate of drug. A low-loading efficiency of 13% was obtained for NVP-loaded matrices and less than 20% for matrices prepared using physical mixtures of drug and PEG. The loading efficiency was improved significantly to around 40% when a 1:4 NVP–PEG SD was used for matrix production. After 30 days, 40% of the drug content was released from NVP-loaded matrices, 55% from matrices containing 1:4 NVP–PEG physical mixtures and 60% from matrices loaded with 1:4 NVP–PEG SDs. The in vitro anti-viral activity of released NVP was assessed using a luciferase reporter gene assay following the infection of HeLa cells with pseudo-typed HIV-1. NVP released from PCL matrices in simulated vaginal fluid retained over 75% anti-HIV activity compared with the non-formulated NVP control. In conclusion, 1:4 NVP–PEG SDs when loaded in PCL matrices increase drug loading efficiency and improve release behaviour.     

CD147siRNA对恶性黑色素瘤细胞VEGF及血管内皮细胞体外迁移活性的影响

目的研究CD147siRNA对恶性黑色素瘤细胞株A375中VEGF表达水平和血管内皮细胞体外迁移活性的影响。方法采用半定量RT-PCR法检测转染后A375细胞中VEGF mRNA表达的变化。采用ELISA法检测A375细胞与成纤维细胞共同培养后VEGF表达水平的变化。采用细胞迁移实验检测转染CD147siRNA前后的A375细胞对脐静脉内皮细胞株ECV-304在体外迁移活性的影响。结果转染CD147siRNA后,A375细胞中VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著降低,其下调率分别为10.77%（P〈0.05）和38.5%（P〈0.01）。转染CD147siRNA前后的A375细胞与成纤维细胞共同培养后VEGF的表达水平均较单独培养时显著升高,其升高率分别为98.5%（P〈0.01）和159.9%（P〈0.01）。转染CD147siRNA后的A375细胞使ECV-304细胞的体外迁移活性下降44.77%（P〈0.01）。结论 CD147siRNA能有效抑制恶性黑色素瘤细胞株A375中VEGF的表达水平和脐静脉内皮细胞株ECV-304在体外的迁移活性。     

依地福新对Hela细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的:观察依地福新对人宫颈癌Hela细胞的体外生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:细胞中分别加入不同浓度的依地福新(0.5、1.0、5.0、10.0μmol.L-1)处理96h,并设立未加依地福新的对照组。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,不同浓度依地福新处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度及时间依赖性;1.0、5.0、10.0μmol.L-1浓度依地福新处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:依地福新对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

黄芪总苷的抑瘤作用及其作用机制

目的　探讨黄芪总苷的抗肿瘤作用及其作用机制。方法　采用小鼠肝癌 (HepA)和肉瘤 (S1 80 )两种小鼠移植瘤的动物模型 ,以瘤重抑制率作指标。体外采用人宫颈癌细胞株HeLa细胞 ,用MTT法测肿瘤细胞的生长 ,流式细胞术及TUNEL法检测细胞周期及细胞凋亡。结果　黄芪总苷显著抑制小鼠肝癌 (HepA)和肉瘤 (S1 80 )的生长 ;体外可显著抑制HeLa细胞的生长 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1 期 ,并诱导其凋亡。结论　黄芪总苷对小鼠肝癌 (HepA)与肉瘤(S1 80 )具有抑瘤作用。对HeLa细胞的生长有直接抑制作用。其抗肿瘤作用可能与细胞周期阻滞于G0 /G1 期和诱导细胞凋亡有关     

石蒜碱诱导H22荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及机制研究

目的:探讨石蒜碱诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及其机制。方法:以昆明种小鼠为对象,通过前肢腋部皮下接种H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠实体瘤模型,将造模后的小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组(羟基喜树碱6 mg/kg)和石蒜碱低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg),每组10只。阴性对照组小鼠灌胃等体积生理盐水,各给药组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续给药7天。末次给药后,检测小鼠的瘤体质量并计算抑瘤率。另通过腹腔注射H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠腹水瘤模型,同法分组、给药。末次给药后,记录小鼠的生存时间并计算生存延长率,采用流式细胞术检测小鼠肿瘤细胞的早期凋亡率;在设立正常对照组(未荷瘤正常小鼠)的基础上,采用荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯染色法考察各组小鼠肿瘤细胞的线粒体膜通透性,采用Rhodamine 123染色法考察其线粒体电位变化,采用比色法和Western blot法分别检测其胱天蛋白酶3(Caspase-3)活性和凋亡相关蛋白[Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)、Caspase-9]的表达情况。结果:与阴性对照组比较,阳性对照组和石蒜碱各剂量组小鼠瘤体质量均显著降低,生存时间均显著延长,肿瘤细胞的早期凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01);其抑瘤率分别为39.41%、23.36%、36.50%、56.93%,生命延长率分别为49.23%、29.09%、50.19%、69.08%。与正常对照组比较,阴性对照组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性、Caspase-3蛋白活性以及Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高,线粒体膜电位、Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较,各药物组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性和Bcl-2/Bax比值均显著降低,线粒体通透性、Caspase-3蛋白活性和Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:石蒜碱可诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡,这种作用可能与其开放线粒体膜通透性转换孔以增加线粒体通透性、降低线粒体膜电位、诱导凋亡相关蛋白表达上调有关。     

抑制组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶活性对胶质瘤恶性表型影响的研究

【摘要】 目的：探讨阻断组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶的活性后对胶质瘤恶性表型的抑制作用。方法：选择丙戊酸（VPA）为组蛋白去乙酰化酶抑制剂,5-氮杂-2′-脱氧胞苷（Aza）为DNA甲基转移酶抑制剂。将U251胶质瘤细胞分为对照组、VPA治疗组、Aza治疗组和VPA+Aza联合治疗组。采用四唑盐(MTT)比色法分析肿瘤细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V-FITC染色检测细胞凋亡,2D Matrigel、3D Matrigel、Transwell法检测胶质瘤细胞侵袭能力,并建立U251细胞裸鼠皮下移植瘤模型,进行肿瘤局部多点注射上述药物治疗,测量肿瘤体积。结果：与对照组比较,各治疗组肿瘤细胞的增殖在治疗2 d后均出现明显抑制,S期和G2M期细胞比例减少,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,治疗组细胞凋亡率明显下降,侵袭和运动迁移能力均明显下降,各治疗组鼠移植瘤体积增长较对照组明显减缓,与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。以上结果均以VPA+Aza联合治疗组最为显著。结论：联合阻断DNA甲基转移酶和组蛋白去乙酰化酶活性可抑制胶质瘤表观遗传学性征,抑制胶质瘤恶性表型。     

Shikonin regulates HeLa cell death via caspase-3 activation and blockage of DNA synthesis

Shikonin, isolated from the plant Lithospermum erythrorhizon Sieb. Et Zucc, inhibited tumor cell growth and induced cell death in various tumor cells, with 50% growth inhibition of human cervical cancer cells, HeLa, at 18.9±1.1 μmol L^-1. Treated with 40 μmol L^-1 shikonin, HeLa cells underwent marked apoptotic morphological changes such as a round shape, membrane blebbing and apoptotic bodies derived from the fragmented nuclei. Another hallmark of apoptosis, DNA fragmentation, was observed by gel electrophoresis. Shikonin (10 μmol L^-1) significantly blocked the transition from G1 to S phase in the HeLa cell cycle. Pan-caspase inhibitor (Z-VAD-FMK), caspase-3 inhibitor (Z-DEVD-FMK) or caspase-8 inhibitor (Z-IETD-FMK) effectively inhibited shikonin-induced cell death, while caspase-1 inhibitor (Ac-YVAD-CMK) and caspase-9 inhibitor (Z-LEHD-FMK) failed to affect cell death. Caspase-3 activity significantly increased within 12 h after shikonin treatment. Reduced expression of inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease (ICAD) after exposure to shikonin for 12 h suggests the resultant activation of caspase-activated deoxyribonuclease (CAD), leading to apoptosis.