共聚焦超分辨率成像与SIM超分辨率成像在蒿草生物组织样本荧光成像中的使用价值分析

目的 研究分析共聚焦超分辨率成像与SIM超分辨率成像在蒿草生物组织样本荧光成像中的使用价值。方法 使用激光扫描共聚焦显微镜对蒿草生物组织样本进行荧光成像和使用结构光照明显微镜对蒿草生物组织样本进行SIM超分辨率荧光成像。实验分为三组。(1)使用激光扫描共聚焦显微镜对蒿草组织样本共聚焦普通成像;(2)使用激光扫描共聚焦显微镜的超分辨率成像模块对蒿草组织样本超分辨率成像;(3)使用结构光照明显微镜对蒿草组织样本SIM超分辨率成像。结果 激光扫描共聚焦显微镜不仅可获取蒿草组织样本的不同倍数共聚焦普通图像,而且可获取蒿草组织样本的共聚焦超分辨率图像;结构光照明显微镜可获取蒿草组织样本的SIM超分辨率荧光图像。结论 激光扫描共聚焦显微镜和结构光照明显微镜均可对生物组织样本进行超分辨率成像。共聚焦超分辨率成像图像清晰度较高,色彩对比度明显,而SIM超分辨率成像具有显示组织样本局部的超微结构细节更加突出的特点。     

浅谈激光扫描共聚焦显微镜的使用维护及保养

阐述激光扫描共聚焦显微镜的组成及工作原理,并根据使用共聚焦显微镜所积累的经验,提出激光扫描共聚焦显微镜的日常使用所遇见的问题,以及共聚焦显微镜主要部件的维护与保养方法.     

共聚焦激光扫描显微镜在反向银屑病诊断中的应用研究

目的探讨共聚焦激光扫描显微镜在反向银屑病诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法选取临床疑诊反向银屑病的患者20例,比较共聚焦激光扫描显微镜扫描检查和常规组织病理检查的结果。结果20例患者共聚焦激光扫描和组织病理检查结果经统计学分析,无显著性差异。结论共聚焦激光扫描为反向银屑病提供了有价值的、无创的、新的诊断方法。     

小檗胺对ROCC介导的血管平滑肌细胞内游离钙的影响

目的　研究小檗胺 (BA)对受体调控性Ca2 +通道介导的家兔胸主动脉血管平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响。方法　家兔主动脉血管平滑肌以Fluo 3/AM负载 ,通过激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM )测定 [Ca2 +]i。结果　在细胞外Ca2 +存在的条件下 ,BA 30 μmol·L-1不影响静息[Ca2 +]i;但对去甲肾上腺素 (NE) 30mmol·L-1、5 羟色胺 (5 HT) 1μmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高有明显的抑制作用。在无胞外钙时 ,对咖啡因 40mmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高没有作用。结论　BA对ROCC激活后的外钙内流有明显的抑制作用 ,对内钙释放没有影响。其作用与维拉帕米相似     

灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca2+浓度和胞内pH的影响

目的通过考察灵芝多糖(GLP)对免疫细胞信号转导过程的影响,探讨GLP免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,动态监测GLP均一体组分GLB7对小鼠T细胞胞浆游离Ca     

异丙酚对PC12细胞膜流动性及[Ca~(2+)]_i的影响

目的　研究异丙酚对PC12细胞膜流动性及 [Ca2 + ]i的影响。方法　以PC12细胞作为神经细胞模型 ,加入不同浓度的异丙酚 ,用荧光偏振法测定细胞膜微粘度 η的动态变化 ,用激光扫描共聚焦显微镜检测 [Ca2 + ]i 随时间变化曲线。结果　①异丙酚各剂量组的 η值均降低 ,并呈现剂量依赖性 ;② 30、10 0mg·L-1的异丙酚在加药后 2 0～ 30s使[Ca2 + ]i 短暂升高 ,[Ca2 + ]i的峰值分别比加药前增加了119%和 14 0 % ,但在 5 0s内均恢复到加药前水平。结论　异丙酚的全麻作用机制可能与细胞膜流动性增高有关     

比较布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2+移动的影响

目的:应用激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对大鼠心室肌细胞Ca2 移动的影响,比较它们的心肌毒性。方法:原代培养新生SD大鼠的心室肌细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜观察心室肌细胞内钙荧光强度的变化,比较不同浓度的布比卡因和罗哌卡因对KCl诱导的荧光强度峰值的影响。结果:10μmol/L时两种局麻药对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内钙荧光强度的变化无显著影响;50μmol/L和100μmol/L时两种局麻药明显抑制细胞内钙荧光强度的变化;相同浓度的布比卡因抑制作用大于罗哌卡因。结论:同浓度布比卡因对心室肌细胞Ca2 移动的抑制作用大于罗哌卡因,表明布比卡因心肌毒性大于罗哌卡因。     

七氟醚对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的 观察七氟醚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制.方法 用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率.采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2 ]i随缺氧或加入KCl前后的实时变化.结果 七氟醚在2MAC(肺泡气最小有效浓度),可降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P＜0.05).0.5～2MAC七氟醚能抑制缺氧及50 mmol/L KCl引起的[Ca2 ]i升高(P＜0.05).结论 七氟醚对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与七氟醚抑制缺氧引起[Ca2 ]i异常升高有关.     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞内Ca2+浓度的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及细胞内[Ca2+]i的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用MTT法、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs增殖及PASMCs[Ca2+]i调节的作用.结果 Pin显著抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖.呈浓度依赖效应,KATP通道拮抗剂格列本脲呈浓度依赖性阻断Pin的作用;ET-1诱导人PASMCs内[Ca2+]i显著增加,Pin(10 μmol/L)拈抗ET-1诱导的人PASMCs内[Ca2+]i升高.结论 KATP通道开放剂Pin可明显抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖作用,抑制细胞内Ca2+浓度增加.     

激光扫描共聚焦显微技术及在药学上的应用

激光扫描共聚焦显微镜是20世纪80年代发展起来的医药学图像分析仪器,现已成为细胞生物学、生理学、病理学及药学等研究领域中很重要的技术、其性能是普通光学显微镜的一个飞跃,是电子显微镜的一个补充。本文拟以激光扫描共聚焦显微镜的原理、药学上的应用及其前景作一个简单介绍。     

依托咪酯对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的观察依托咪酯对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2+]i随缺氧或加入谷氨酸、KC l前后的实时变化。结果依托咪酯在1.2~4.8 mg.L-1范围内,可剂量依赖性地降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.05)。0.3~4.8 mg.L-1依托咪酯能抑制缺氧及50 mmol.L-1KC l引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),仅在4.8 mg.L-1时才抑制1 mmo.lL-1谷氨酸所致的[Ca2+]i升高(P<0.01)。结论依托咪酯对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与依托咪酯抑制缺氧引起[Ca2+]i异常升高有关。     

三氧化二砷对心肌细胞蛋白激酶C及胞内游离钙的影响

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3)治疗白血病时的心脏不良反应机制。方法　Fluo 3/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞 ,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2 O3干预后的心室肌胞浆 [Ca2 +]i,磷基转移法测定心室肌胞膜和胞浆内蛋白激酶C(PKC)的活性。结果　 0 .5 μmol·L- 1As2 O3对台氏液中豚鼠心室肌细胞 [Ca2 +]i 无明显影响。 2 μmol·L- 1As2 O3持续作用 6min时 ,细胞 [Ca2 +]i 开始升高 ,持续约 9min后恢复到给药前水平。 10 μmol·L- 1As2 O3作用不到 3min时 ,心室肌细胞 [Ca2 +]i 持续升高至扫描结束共 2 7min ,一直没有恢复。As2 O3引起的 [Ca2 +]i 升高可被钙通道阻滞剂维拉帕米和硝苯地平不完全阻断。 2～ 10 μmol·L- 1AS2 O3作用3h可使细胞膜及胞浆相的PKC活性升高 ,10 μmol·L- 1组 ,细胞膜相的PKC升高更明显。结论　一定浓度的As2 O3可使心肌细胞内游离钙升高、PKC活化 ,细胞膜可能是As2 O3最初作用靶点。     

小檗碱对豚鼠心室肌细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响

研究小檗碱对豚鼠心肌细胞胞浆 [Ca2 + ]i 的影响 .用酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,Fluo- 3/AM标记胞浆内游离钙离子 ,激光扫描共聚焦显微镜实时测定胞浆 [Ca2 + ]i变化 .结果 ,小檗碱 1 -1 0 0 μmol· L-1对正常台氏液中静息状态细胞胞浆[Ca2 + ]i 无明显影响 ;小檗碱 1 μmol·L-1对 KCl30mmol·L-1引起的细胞外钙内流有抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ,而小檗碱 1 0 0 μmol·L-1对细胞内钙库释放有强烈激动作用 ( P<0 .0 1 ) .结果提示在豚鼠心肌细胞上低浓度小檗碱即能抑制电压依赖性钙通道 ,而高浓度时又能激动细胞内钙库释放 .     

川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆游离钙的影响

目的　研究川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)的作用 ,寻找创新中药的理论基础。方法　采用体外培养 4～ 6d的大鼠皮层神经元 ,分为生理盐水空白对照组、乙醇本底对照组、尼莫地平阳性对照组、川芎醇提取物干预组。以胞浆内Ca2 + 特异性荧光探针Fluo 3负载神经元后 ,分别加入马桑内酯 80、12 0 μg·ml-1作用 5min ,用激光扫描共聚焦显微镜动态监测药物对神经元胞浆 [Ca2 + ]的影响。结果　马桑内酯 12 0 μg·ml-1促进神经元 [Ca2 + ]荧光强度增加 ,乙醇抑制马桑内酯所致神经元胞浆内 [Ca2 + ]增加 ,尼莫地平有这种作用趋势却无统计学意义 ,川芎的醇提部分 10 0 μg·ml-1能够抑制马桑内酯导致的神经元胞浆Ca2 + 荧光强度增加 (P <0 .0 5 )。结论　川芎的醇提部分对致痫神经元有钙通道拮抗作用 ,为创新中药的发展提供细胞学基础     

极化心脏停搏液对离体成熟心肌细胞保护作用的研究

目的观察Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞内[Ca2+]i的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用。方法成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组和TTX组,STH2组和TTX组分别应用St.ThomasⅡ号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞不同时期的[Ca2+]i。结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Ca2+]i均明显高于基础组,TTX组明显低于STH2组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Ca2+超载,对离体成熟心肌细胞有较好的保护作用。     

15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的　通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法　采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果　在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论　15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。     

极化心脏停搏液对离体成熟心肌细胞保护作用的研究

目的 观察Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞内[Ca2+]I的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用.方法 成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组和TTX组,STH2组和TTX组分别应用St.Thomas Ⅱ号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞不同时期的[Ca2+]I.结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Ca2+]I均明显高于基础组,TTX组明显低于STH2组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Ca2+超载,对离体成熟心肌细胞有较好的保护作用.     

碱性成纤维细胞生长因子对豚鼠耳蜗外毛细胞钙调控的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (Basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)对豚鼠耳蜗外毛细胞 (Outerhaircells,OHCs)钙调控的影响以及这种影响与硫酸链霉素的拮抗效应 ,旨在深入探讨硫酸链霉素急性耳毒性和bFGF防治作用的分子生物学机制。方法　豚鼠全麻后断头活杀 ,酶 -机械法分离获得单离的OHCs。 10 μmol·L-1的Fluo 3 /AM负载 ,室温下放置 60min后用ACASUltima型激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM ,MeridianUSA)观察各种条件下OHCs[Ca2 + ]i的变化。结果　① 10 0mmol·L-1的高钾细胞外液和含 1nmol·L-1bFGF的正常细胞外液灌流分别导致 10 /11和 9/9个细胞的 [Ca2 + ]i升高 ,而高钾无钙细胞外液和含 1nmol·L-1bFGF的无钙细胞外液灌流则分别为 0 /7和 0 /8个细胞 [Ca2 + ]i 升高。②经 1 0mmol·L-1的硫酸链霉素处理后 ,灌流高钾细胞外液则 0 /12个细胞 [Ca2 + ]i 升高 ,灌流bFGF则为 4/8个细胞 [Ca2 + ]i 升高。③ 1nmol·L-1的bFGF作用后 ,灌流高钾细胞外液 ,OHCs[Ca2 + ]i升高的幅度较高 ,持续时间较长。④ 3组细胞均提前 1h加入 1mmol·L-1的硫酸链霉素 ,实验前 5min分别加入 0 1、1 0和 10nmol·L-1的bFGF ,灌流高钾细胞外液则分别导致 4/11、6/9和 12 /12个细胞 [Ca2 + ]i的升高。结论　bFGF和?     

青蒿琥酯对人前列腺癌PC-3细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:研究青蒿琥酯(ART)对人前列腺癌PC-3细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响。方法:ART处理PC-3细胞,用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM标记PC-3细胞,激光共聚焦扫描显微镜检测PC-3细胞内[Ca2+]i变化。结果:ART诱导PC-3细胞内[Ca2+]i在0～0.5h显著升高;在0.5～1h维持高水平;在4～24h降到初始水平。结论:ART能够诱导PC-3细胞内[Ca2+]i显著持续升高,[Ca2+]i升高可能在ART诱导PC-3细胞凋亡中起重要作用。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的　观察猪苓多糖对人T2 4膀胱癌细胞内钙离子 (Ca2 )浓度的影响 ,探讨猪苓多糖抗癌机理。方法　体外培养人T2 4细胞经钙荧光指示剂 (calciumcrimson AM )负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca2 随时间的变化。结果　猪苓多糖低剂量 (0 .2mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 降低 ,高剂量 (>1mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 升高 ,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca2 升高 ,细胞浆Ca2 无明显改变。结论　猪苓多糖可引起T2 4细胞内Ca2 水平的显著变化 ,而且这种变化主要表现在细胞核内 ,提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用