细胞周期素D1及相关基因在胆管癌中的进展

细胞周期素D1（cyclin D1）在肿瘤中的作用日益受到人们的重视,本文研究cyclin D1及其相关基因其在胆管癌中的作用.     

细胞周期蛋白D1和P21WAF1在胃癌中的表达及其与化疗药物敏感性的关系

目的检测细胞周期蛋白（cyclin）D1、P21WAF1在胃癌组织中的表达,并探讨其与化疗药物敏感性的关系。方法采用MTT比色法观察80例胃癌原代培养细胞在体外对化疗药物羟基喜树碱（HCPT）、顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-Fu）及丝裂霉素（MMC）的敏感性;免疫组织化学染色检测cyclin D1和P21WAF1蛋白在胃癌组织中的表达情况。结果胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同：5-FU、MMC和DDP对胃癌细胞的抑制率显著高于ADM和HCPT（P〈0．05）。胃癌组织中cvclin D1和P21WAF1蛋白的阳性率分别为70．0％和47．5％。cyclin D1阳性表达者对5-Fu和HCPT的敏感性显著高于阴性表达者（P〈0．05）,而P21WAF1阴性表达者对MMC、5-FU和DDP的敏感性显著高于阳性表达者（P〈0．05）。结论cyclin D1和P21WAF1蛋白与胃癌对化疗药物敏感性有关．检测其表达对于化疗药物的选择具有一定的参考价值。     

Trop2基因与三阴性乳腺癌的研究进展

Trop2基因在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）的滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigen 2, Trop2)基因能调控周期蛋白D1(cyclin D1)及上皮钙黏素的表达,进而促进TNBC转移及侵袭。本文对Trop2基因的结构、功能、作用机制及在TNBC中的表达和治疗进行综述,以期找到TNBC的治疗靶点,探索新疗法。     

乳腺癌中细胞周期素D1基因改变和转录异常对其蛋白表达的影响

目的:研究乳腺癌中细胞周期素D1(cyclin D1)在DNA、mRNA和蛋白水平的改变,探讨cyclinD1基因改变和转录异常对其蛋白表达的影响.方法:免疫组织化学检测cyclin D1蛋白表达,RT-PCR检测cyclin D1 mRNA的转录异常, southern杂交检测cyclin Dl的基因改变.结果:(1)yclin D1蛋白在乳腺癌中表达阳性率为54%.(2)cyclin D1在早期乳腺癌、浸润性导管癌原发灶、腋窝淋巴结转移灶中表达阳性率的差异无统计学意义.(3)浸润性导管癌中15%出现cydinDl基因扩增,35%出现cyc-lin D1 mRNA表达升高.结论:(1)cyclin D1蛋白表达是乳腺癌发生中的早期事件,且在乳腺癌进程中有稳定保持的趋势.(2)cyclin D1的蛋白表达除受基因扩增和mRNA表达升高的影响外,还受到其他因素的影响.     

二甲基苯蒽诱导大鼠乳腺癌发生过程中周期蛋白D1、p53表达

目的 探讨周期蛋白D1（cyclin D1）、p53蛋白在大鼠乳腺癌生过程中的表达及其意义。方法 雌性Wistar大鼠120只，利用二甲基苯蒽200mg/kg体重灌胃，复制大鼠乳腺癌动物模型，应用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶C免疫组织化学技术检测周期蛋白D1、p53蛋白在正常乳腺、不典型增生乳腺及乳腺癌中的表达。结果 在正常乳腺组织中无cyclin D1、p53蛋白表达，不典型增生乳腺组织中无p53蛋白表达，在不典型增生Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级乳腺组织中分别为15％、30％、55％有cyclin D1表达，7／9的乳腺癌Ⅰ级有cyclin D1的表达，1／4的乳腺癌Ⅱ级中cyclin D1有表达，乳腺癌Ⅲ级无表达。p53蛋白在乳癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中分别有1／9、1／4、6／7有过度表达。结论 在大鼠乳腺癌发生过程中，cyclin D1过度表达参与肿瘤的发生，是肿瘤发生中的早期事件，而p53表达与肿瘤进展有关，是肿瘤发生的晚期事件，cyclin D1表达与p53蛋白表达呈负相关。     

阿司匹林对大鼠肝癌组织PCNA及cyclin D1表达的影响

目的 观察阿司匹林对二乙基亚硝胺诱导肝癌形成大鼠肝脏细胞增殖核抗原(proliferating nuclear antigen, PCNA)及细胞周期蛋白(cyclin D1)表达的影响,探讨阿司匹林在肝癌发生发展过程中的作用.方法 应用二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌模型,预防组饲料中添加阿司匹林,两组分别于第8、12、16周时处死大鼠6只,用免疫组化检测肝脏PCNA及cyclin D1,观察不同时期肝脏PCNA及cyclin D1表达的变化及肝癌发生率.结果 预防组大鼠肝硬化发生时间较晚,程度较轻,肝癌发生少,16周时对照组4/6只大鼠发生肝癌(P<0.05).PCNA及cyclin D1的表达明显低于对照组,阿司匹林对大鼠PCNA的抑制作用在12～16周时比较明显(F=5.696,F=11.057,均P<0.05),对cyclin D1的抑制作用在16周时比较明显(F=11.944,P<0.05).结论 阿司匹林能降低诱癌大鼠肝脏PCNA及cyclin D1表达,对实验性大鼠肝癌的形成有抑制作用.     

组织芯片技术应用于检测乳腺癌组织中p16和cyclin D1的表达

目的:探讨乳腺癌组织中多肿瘤抑制蛋白（p16）和细胞周期蛋白（cyclin D1）的表达及其意义。方法:采用组织芯片技术制作80例乳腺癌组织芯片，同时用SP免疫组织化学方法检测乳腺癌组织芯片中p16和cyclin D1的表达。结果:80例乳腺癌中p16和 cyclin D1的阳性率分别为40.0%和53.8%。乳腺癌中p16低表达与cyclin D1的高表达呈负相关（r<-0.49）;p16低表达、cyclin D1高表达与乳腺癌的淋巴结转移密切相关。结论:p16和cyclin D1的表达水平可以作为评估乳腺癌预后的参考指标。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

胃癌组织中细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激酶6的表达与预后的关系

目的检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白质依赖激酶6(CDK6)在胃癌组织中的表达情况,分析其表达与胃癌的临床病理因素和预后之间的关系。方法用Western blot 法测定48例胃癌组织及其邻近的正常胃黏膜中cyclinD1和CDK6的表达量。结果 Cyclin D1在 58％的胃癌组织中呈异常高表达,且其表达与胃癌的浸润深度、淋巴转移和TNM分期相关。CDK6 的表达水平在69％的胃癌组织中异常升高,并与组织学分类、淋巴转移和TNM分期相关。未发现 cyclin D1和CDK6在胃癌组织中的表达存在线性相关关系。包括cyclin D1和CDK6过表达在内的多个因素与胃癌患者的5年生存率相关,但只有TNM分期和CDK6是患者预后的独立影响因素。结论 Cyclin D1和CDK6的异常高表达有可能在胃癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

神经肽对大鼠骨髓间质干细胞增殖影响的研究

目的 观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、P物质(substance P,SP)对大鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响,并探讨其机制.方法 使用全骨髓法分离、培养大鼠BMSCs,采用RT-PCR、Western Blot在传代培养的不同时间(1、2、3周)检测BMSCs神经肽受体mRNA、蛋白的表达情况.在不同时间点(1、3、5、7、9 d)使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP、SP分别作用于BMSCs,使用MTT比色法检测BMSCs增殖能力,Western Blot法检测BMSCs细胞周期相关调控基因cyclin D1、cyclin E、p53的蛋白表达变化.结果 RT-PCR、Western Blot结果显示BMSCs稳定表达CGRP受体、SP受体,同一时间点的CGRP受体表达高于SP受体表达.MTT结果显示,与对照组相比,CGRP在9d时促进BMSCs增殖,SP在7、9 d时促进BMSCs增殖.Western Blot结果显示,与对照组相比,CGRP促进BMSCs内cyclin D1、cyclin E蛋白表达,在5 d时达到高峰;SP促进BMSCs内cyclin E蛋白表达,在5 d时达到高峰;两种神经肽均降低BMSCs内p53蛋白表达.结论 CGRP、SP对BMSCs的增殖有直接促进作用,影响细胞周期相关调控基因蛋白的表达是其作用机制之一.     

泌尿外科：肾脏、输尿管

应用输尿管镜治疗输尿管壁内段狭窄（附182例分析）；巨大肾积水肾折叠术对保存肾脏的作用（附21例报告）；早期肾癌保肾手术安全范围的研究；D—J管在肾绞痛治疗中的应用；p27dipl和cyclin D1在肾癌中的表达及临床意义     

神经肽对大鼠骨髓间质干细胞增殖影响的研究

目的 观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、P物质(substance P,SP)对大鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响,并探讨其机制.方法 使用全骨髓法分离、培养大鼠BMSCs,采用RT-PCR、Western Blot在传代培养的不同时间(1、2、3周)检测BMSCs神经肽受体mRNA、蛋白的表达情况.在不同时间点(1、3、5、7、9 d)使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP、SP分别作用于BMSCs,使用MTT比色法检测BMSCs增殖能力,Western Blot法检测BMSCs细胞周期相关调控基因cyclin D1、cyclin E、p53的蛋白表达变化.结果 RT-PCR、Western Blot结果显示BMSCs稳定表达CGRP受体、SP受体,同一时间点的CGRP受体表达高于SP受体表达.MTT结果显示,与对照组相比,CGRP在9d时促进BMSCs增殖,SP在7、9 d时促进BMSCs增殖.Western Blot结果显示,与对照组相比,CGRP促进BMSCs内cyclin D1、cyclin E蛋白表达,在5 d时达到高峰;SP促进BMSCs内cyclin E蛋白表达,在5 d时达到高峰;两种神经肽均降低BMSCs内p53蛋白表达.结论 CGRP、SP对BMSCs的增殖有直接促进作用,影响细胞周期相关调控基因蛋白的表达是其作用机制之一.     

膀胱癌组织中E-cd和cyclin D1的表达意义

目的 研究上皮钙粘附素(E-cd)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在膀胱移行细胞癌的表达水平及其相关,井探讨其与癌的发生,发展及生物学行为的关系。方法 应用免疫细化LSAB法检测69例膀胱癌和8例正常膀胱组织中E-cd和cyclin D1的表达。结果 膀胱癌组织中E-cd阳性表达率为50.7％(35/69)和cyclin D1阳性表达率为57.9％(40/69),与正常膀胱相比均有显著意义(P<0.05)。Ecd和cyclin D1阳性表达的病理分级分别为1级72.2％、33.3％,Ⅱ级65.2％、56.5％,Ⅲ级25％、71.4％,Ⅰ级与Ⅲ级均有显著意义(P<0.05)。复发组的阳性表达分别为29.7％、62.1％。生存时间大于5年的阳性表达分别为83.3％、39.2％。结论 E-cd的低表达或缺失与膀胱癌的侵袭、复发和预后密切相关,cyclin D1在膀胱癌形成中起重要的作用,二者均可以作为判断膀胱癌的病理分级、术后复发和临床预后的指标。     

环氧化酶2抑制剂对结肠癌细胞中BCL-3及细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂对BCL-3基因及其靶向基因细胞周期蛋白1（cyclin D1）的转录和表达的影响.方法 实验组分别以25、50、100及200 μmol/L的NS398（COX-2抑制剂）处理结肠癌SW480细胞48 h或72 h;对照组以不含NS398的溶媒处理SW480细胞.采用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学染色方法分别从mRNA和蛋白水平检测各组细胞中BCL-3和cyclin D1的表达情况.结果 各组细胞处理48 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1 mRNA水平下降,呈剂量依赖性;而蛋白水平则无明显差异（P〉0.05）.处理72 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1蛋白水平下降,亦呈现剂量依赖性.当NS398浓度达到100 μmol/L时,其BCL-3 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.01）：当NS398浓度达到50 μmol/L时,其cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.05）.结论 结肠癌细胞株SW480中有BCL-3的表达.COX-2抑制剂NS398可从基因及蛋白水平对BCL-3及cyclinD1进行抑制,并呈剂量依赖性.NS398可能通过BCL-3而抑制cyclinD1.     

胆囊癌组织中cyclin D1，cdk4，p16，Rb表达及意义

目的 研究胆囊癌组织中cyclin D1,cdk4,p16和Rb的表达相互关系。方法 石蜡包埋切片ABC免疫组织化学法。结果 40例胆囊癌cyclin D1,cdk4,p16和Rb阳性病例率分别为42.5%,47.5%,32.5%和37.5%;高分化、组织学分级Ⅰ级和未转移病例cyclin D1,cdk4,RB阳性率明显低于低分化、组织学分级Ⅲ级和转移病例;cyclin D1表达与cdk4表达呈正相关系和与P16呈负相关系,P16表达与Rb表达和cdk4表达呈负相关系,结论 cyclin D1,cdk4,p16和Rb表达特征与胆囊癌发生发展、生物学行为及其预后有密切关系。胆囊癌的分子发病机制可能涉及cdk4/cyclin D1,Rb和p16负反馈调节通路的异常。     

Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌发生中的分子机制研究

目的探讨Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌细胞增殖、迁移方面的影响和其在肝癌发生发展中的可能作用。方法体外培养HepG2和L02细胞,采用免疫荧光和Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平。培养的HepG2细胞分别用浓度100ng/ml的Wnt3α和20 ng/ml的DKK1处理,采用CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞实验检测细胞周期,Western Blot检测β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平,Trans-well检测HepG2的迁移情况。结果与正常肝细胞L02相比,HepG2细胞高表达β-catenin,cyclin D1和c-myc,低表达GSK3β。Wnt3α能够显著促进HepG2细胞的增殖活力,而DKK1能够显著抑制其增殖。与Wnt3α组相比,DKK1处理组细胞G0/G1期细胞比例增加,(68.6±0.5)%VS(47.5±1.5)%(P0.01),而S期细胞比例减少(17.4±0.5)%VS(28.6±0.5)%,(P0.01)。Western Blot检测结果说明,Wnt3α提高了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达水平,抑制了GSK3β的表达,而DKK1抑制了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达。迁移实验透膜细胞数对照组为(176.40±12.98)、Wnt3α组为(238.20±18.38)、DKK1组为(110.40±9.46),P0.05。结论 Wnt/β-catenin信号通路在促进HepG2细胞的增殖和迁移方面起重要作用,在肝癌的发生发展和转移中起着重要的作用,是肝癌发生的重要分子机制。     

衣霉素对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的 观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)β1整合素以及其下游重要信号分子粘着斑激酶(FAK)和细胞周期正调控蛋白cyclinD1表达的影响。了解衣霉素在抑制高糖刺激GMC增殖中的重要作用。方法 体外培养的大鼠系膜细胞株分为：正常对照组，高糖组，甘露醇组，高糖加不同浓度衣霉素(TM)组。用流式细胞技术检测B1整合素的表达；免疫组化方法测定FAK和细胞周期素D1(cyclin D1)的表达，四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖。结果 正常系膜细胞中B1整合素、FAK和cyclin D1均有一定表达，高糖作用24h可以使3者表达明显升高，细胞增殖能力增强，且与渗透压无关。衣霉素(TM)可呈浓度依赖性的抑制高糖的这种作用。结论 N-糖链抑制剂TM通过阻断细胞表面糖蛋白的糖基化过程，形成脱糖蛋白，从而抑制β1整合素的表达，并进一步影响细胞FAK和cyclin D1表达，使高糖诱导的细胞增殖受抑制。     

乳腺癌中Wnt信号蛋白β-catenin和cyclin D1的表达及其与侵袭转移的关系

目的：分析乳腺癌原发癌组织与其淋巴结转移癌组织中β-catenin和cyclin D1的表达及其与乳腺癌侵袭转移性的关系。 方法：用免疫组化法检测55例三阴乳腺癌原发癌与其中21例伴有淋巴结转移的转移癌,以及55例非三阴性乳腺原发癌与其中25例伴有淋巴结转移的转移癌组织中β-catenin与cyclin D1的表达情况。 结果：在有淋巴结转移的46例中,转移癌组织β-catenin异位表达率与cyclin D1阳性表达率均明显高于原发癌组织（54.3% vs. 76.1%;63.0% vs. 82.6%,均P<0.05）,且两种组织中β-catenin异位表达率和cyclin D1阳性表达率均呈正相关（r=0.29;r=0.38,均P<0.05）。无论是原发癌组织还是转移癌组织,β-catenin异位表达率与cyclin D1阳性表达率在三阴乳腺癌和非三阴性原发癌间的差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：高β-catenin异位表达与cyclin D1阳性表达与乳腺癌的高侵袭转移性有关,但三阴乳腺癌更高的侵袭转移性可能涉及其他独立于Wnt信号通路的机制。     

quercetin抑制肝细胞癌生长的在体实验研究

目的:探讨quercetin对肝癌细胞体内生长的抑制作用及机制。方法:用人肝癌Hep G2细胞皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型,成瘤后随机分为对照组、quercetin治疗组、5-FU治疗组、5-FU+quercetin联合治疗组,溶剂或药物均1次/d腹腔注射,3周后观察各组移植瘤大小并计算各治疗组的抑瘤率,分别用RT-PCR、Western blot、免疫组化法检测各组移植瘤组织中cyclin D1、cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:与对照组比较,各治疗组移植瘤体积明显减小、移植瘤组织中cyclin D1、cyclin E m RNA和蛋白表达以及PCNA阳性指数均明显降低(均P0.05),其中联合治疗组的抑瘤率明显大于两个单药组,cyclin D1、cyclin E、PCNA表达的降低程度也明显大于两个单药组(均P0.05),而两个单药组间各项指标差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:quercetin能通过下调cyclin D1与cyclin E的表达而抑制肝癌细胞的增殖,且与5-FU联合应用具有协同作用。     

凋亡相关基因survivin、caspase-3及cyclin-B1在胃癌发生、发展中的作用

目的 检测凋亡相关基因survivin、caspase-3和cyclin—B1在胃癌组织中的表达，探讨其表达在胃癌发生、发展中的作用。方法 采用RT—PCR方法检测survivin mRNA、caspase-3 mRNA和cyclin-B1 mRNA在30例胃癌组织、10例癌旁正常胃组织标本中的表达。结果 30例胃癌组织中有20例survivin mRNA阳性表达，10例正常胃组织中无survivin mRNA表达；30例胃癌组织和10例正常胃组织中均有caspase-3 mRNA和cyclin—B1 mRNA阳性表达；20例survivin mRNA阳性表达的胃癌组织中caspase-3 mRNA和cyclin-B1 mRNA表达水平明显低于lo例survivin mRNA阴性表达的胃癌组织（P〈0．01）和正常胃组织（P〈0．01）；10例survivin mRNA阴性表达的胃癌组织caspase-3 mRNA和cyclin—B1 mRNA表达水平亦明显低于10例正常胃组织（P〈0．01）。相关性分析表明，survivin的表达与caspase-3（r=-0．923，P〈0．01）和cyclin-B1（r=0．886，P〈0．01）表达呈负相关，caspase-3的表达与cyclin-B1表达呈正相关（r=0．892，p〈-0．01）。结论survivin促进胃癌发生、发展，caspase-3和cyclin-B1抑制胃癌发生、发展。