淫羊藿苷对骨折大鼠骨髓基质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 探究淫羊藿苷对骨折大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖、成骨分化的影响及可能机制。方法 选取SPF级SD大鼠5只,8周龄,雌雄不限,体重（290±20）g。麻醉大鼠,于右膝髌骨内侧做一切口,暴露股骨髁间凹,在髁内钻孔后,将克氏针插入胫骨髓腔,钢锯横行截断股骨,形成横行骨折,缝合。骨折后2 d,麻醉后断颈处死,剥离股骨,体外分离BMSCs。取第三代BMSCs分为对照组（不做特殊处理）,低、中、高剂量组（加入终浓度为1、10、100μmol/L的淫羊藿苷溶液）。检测各组BMSCs增殖情况、碱性磷酸酶（ALP）活性、矿化结节面积、Janus激酶2(JAK2)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、p-STAT5表达情况。结果 与对照组比较,低、中、高剂量组光密度（OD）值、ALP活性、矿化结节面积占比均升高,JAK2、p-STAT5/STAT5均降低（P<0.05）;与低剂量组比较,中、高剂量组OD值、ALP活性、矿化结节面积占比均升高,JAK2、p-STAT5/STAT5均降低（P<0.05）;与中剂量组比较,高剂量组OD值、ALP活性、矿化结节面积占比升高,JAK2、...     

淫羊藿苷对成牙骨质细胞体外增殖及成骨分化能力的影响

目的:探讨淫羊藿苷(icariin, ICA)对成牙骨质细胞(OCCM-30)体外增殖及成骨分化能力的影响。方法:通过体外培养OCCM-30细胞,加入不同浓度(10、20、40μmol/L) ICA,倒置显微镜下观察细胞形态。设置10μmol/L ICA实验组与空白对照组处理,MTT法连续7 d检测OCCM-30细胞增殖率。通过Real-time PCR研究10μmol/L ICA作用于OCCM-30细胞后(1、4、7 d)成骨相关因子OCN和Runx-2的表达。结果:与对照组相比,加入ICA后OCCM-30细胞形态无显著变化,MTT结果显示10μmol/L ICA明显促进OCCM-30细胞增殖(P<0.05)。Real-time PCR结果显示实验组中成骨相关因子OCN和Runx-2的表达显著增高,与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:适宜浓度的ICA可有效促进OCCM-30的体外增殖及向成骨分化。     

淫羊藿黄酮的分离鉴定及其对前破骨细胞株增殖的影响

目的观察淫羊藿中单体黄酮的抗骨质疏松作用。方法利用硅胶和凝胶柱色谱分离淫羊藿中单体黄酮成分,根据化合物光谱数据(ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR)鉴定其结构,通过MTT法观察其对体外培养的前破骨细胞株RAW264.7增殖的影响。结果从淫羊藿地上部分的醋酸乙酯萃取物中分离得到5个化合物,分别为淫羊藿苷()、宝藿苷()、朝藿素B()、宝藿苷()及金丝桃苷()。活性结果表明,0.1~100μmol/L化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定程度的促进作用;浓度为0.1~100μmol/L的化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定的抑制作用,但随着浓度的升高,转而表现为轻微的促进作用;浓度为1.0和10μmol/L的化合物对该细胞的增殖基本上没有什么影响,而其他浓度下,则对前破骨细胞RAW264.7的增殖表现出明显的抑制作用;除个别浓度外,化合物和均对前破骨细胞RAW264.7的生长表现出相当程度的抑制作用。结论黄酮类化合物对RAW264.7的生长是促进还是抑制依赖于其自身的化学结构以及作用浓度,淫羊藿可能是通过黄酮类化合物抑制前体破骨细胞的增殖,进而抑制前体破骨细胞分化形成破骨细胞而发挥抗骨质疏松作用的。     

淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC测定

淫羊藿药材为《中华人民共和国药典》2 0 0 0年版收载品种 ,淫羊藿苷为其中有效成分。为了控制其质量 ,本实验建立了 HPLC法测定淫羊藿提取物中淫羊藿苷的含量 ,并在方法学考察过程中 ,对文献 [1～ 6 ]报道的多种色谱条件进行了比较 ,建立了合适的测定方法。1　仪器与试剂Waters(2 690 -996)高效液相色谱仪 ,Sart-o-rius BP2 1 1 D型电子天平 ,CQ-2 5 0超声波清洗仪。淫羊藿提取物 (浸膏粉 )为本公司自制。淫羊藿苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ,供含量测定用 ,批号 :0 73 7-2 0 0 1 1 1 )。乙腈为色谱纯 ,甲醇为分析纯 ,水为重…     

温度对油炙巫山淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷含量的影响

目的考察温度对油炙淫羊藿主要成分的影响.方法采用高效液相法、紫外分光光度法对淫羊藿生品及不同温度炮制品中总黄酮和淫羊藿苷进行定量分析.结果与生品比较,120 ℃炮制品淫羊藿苷和总黄酮的含量均最高;其他温度下总黄酮含量略有降低,淫羊藿苷含量均明显增加.结论温度对总黄酮和淫羊藿苷含量有很大影响,120 ℃可能是巫山淫羊藿油炙的最佳温度.     

淫羊藿苷药理研究进展

淫羊藿苷(Ica)为药用植物淫羊藿的主要有效成分.Ica具有滋阴补阳、保护心血管系统、调节免疫、抗肿瘤和促进造骨细胞的增殖和发育等多种重要的药理作用,是一类很有应用前景的中药单体,本文对Ica药理作用研究概况作一综述.     

淫羊藿苷对人牙囊干细胞旁分泌作用的影响

目的 探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)诱导人牙囊干细胞(dental follicle stem cell,DFSC)旁分泌作用对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的影响。方法 分离培养并鉴定DFSC;分别使用0、1和10μmol的ICA处理DFSC,24h后收集培养上清,CCK-8法和结晶紫染色检测MC3T3-E1的增殖活性;划痕实验和Transwell小室实验检测MC3T3-E1的迁移能力;qRT-PCR检测MC3T3-E1成骨相关基因的表达情况。结果 DFSC具有间充质来源干细胞特征;与对照组比较,0ICA-CM组和1ICA-CM组促进了MC3T3-E1增殖(3天,P<0.001;5天,P<0.001);并且1ICA-CM组显著促进了MC3T3-E1迁移(P<0.001),上调了成骨标志基因的表达。结论 ICA具有调控DFSC旁分泌的作用,可促进MC3T3-E1迁移和成骨分化。     

淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:探讨淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标志。取第3代细胞加入10-6mol/L淫羊藿苷培养基,对照组仅加入等量普通培养基进行培养。通过镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞表面标志,碱性磷酸酶试剂盒测定诱导细胞碱性磷酸酶活性,组织化学染色观察钙化结节形成能力。结果:体外培养的细胞表达CD29、CD44、CD105、CD166。淫羊藿苷诱导组细胞碱性磷酸酶呈阳性反应并有钙化结节形成,而对照组未见钙化结节形成。结论:淫羊藿苷能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,可视为一种良好的骨诱导活性因子。     

淫羊藿属9种淫羊藿叶中朝藿定C和淫羊藿苷量的考察

淫羊藿属Epimedium L．药用植物，在我国有29种，产于川陕者14种，具有多方面的药理活性。《中国药典》作为淫羊藿药材的有5种，分别为淫羊藿、朝鲜淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊藿和柔毛淫羊藿，笔者在进行淫羊藿成分系统分离研究的基础上，对采集的川陕豫产9种习惯人药的淫羊藿品种，将其叶中的主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的量进行了考察，结果表明大部分品种朝藿定C量大于淫羊藿苷。     

淫羊藿苷与淫羊藿次苷Ⅱ的体外抗氧化作用

的：检测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的体外抗氧化活性,阐明淫羊藿黄酮类化合物的抗氧化机制。方法: 以抗坏血酸(Vc)、二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照,测定淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和BHT对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH?)的清除率;铁氰化钾还原法测定其还原力;利用NADH-NBT-PMS系统测定其对超氧阴离子(O2－?)的清除率;2-脱氧-D-核糖降解法测定淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对羟自由基(OH?)的清除率,硫代巴比妥酸法测定其对脂质过氧化的抑制率,β-胡萝卜素-亚油酸自氧化体系测定其总抗氧化能力。结果:不同样品对DPPH?均有一定的清除作用,淫羊藿次苷Ⅱ清除DPPH?的能力较淫羊藿苷强(P<0.05)。淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在浓度梯度范围内对O2－?有一定的清除作用,均表现出一定的浓度依赖性,与同浓度的BHT比较,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对O2－?的清除率较低,且淫羊藿苷的清除能力略低于淫羊藿次苷Ⅱ。      淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在浓度为0.1～0.5 g.L^-1时对OH?清除率分别为(16.76±0.35)%~(40.56±1.46)%和(15.65±0.72)%~(28.51±0.91)%。当浓度为0.9 g.L^-1时,淫羊藿苷、Vc和淫羊藿次苷Ⅱ对脂质过氧化的抑制率为(58.79±1.56) %、(75.05±2.12)%和 (37.82±1.43)%。随着浓度的增加,抑制率不再有显著的增加。随着样品浓度的增加,淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和标准品Vc还原力均表现出浓度依赖性。30~120 min内淫羊藿次苷Ⅱ的抗氧化活性均低于淫羊藿苷和BHT（P<0.05或P<0.01）。淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在体外抗氧化的各项指标中表现出的抗氧化活性均弱于Vc和BHT。结论: 淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ在清除DPPH?、O2－?、OH?和抑制脂质过氧化、总抗氧化能力和还原力方面,均具有明显的抗氧化能力。     

组蛋白修饰对破骨细胞和成骨细胞分化及功能的调节

组蛋白修饰作为表观遗传学机制之一,在染色质结构、核小体定位、基因表达调控等方面发挥着至关重要的作用。近些年研究发现,组蛋白修饰如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等修饰方式在破骨细胞及成骨细胞分化的过程中进行调控,并影响骨稳态。本文对组蛋白修饰在破骨细胞和成骨细胞分化及功能调节方面的研究进展进行综述。     

不同脂肪酸对淫羊藿苷模拟体内外溶液系统的影响

[目的]探究羊油中3种主要脂肪酸单一和不同比例配比处方是否对淫羊藿苷纳米粒的形成产生影响。[方法]通过采用单体模拟炮制的方法,模拟炮制和煎煮过程,葡聚糖凝胶柱分离水煎液中的粒子,测定水煎液中粒子的粒径和ξ电位,高效液相色谱法(HPLC)测定粒子载药量和游离药量。[结果]通过粒径电位测定可以发现3种脂肪酸单一和不同比例配比使用都会形成纳米粒子且会对淫羊藿苷纳米粒子的粒径和含药量形成产生影响。[结论]不同脂肪酸成分对淫羊藿苷纳米粒子形成可能产生不同的影响。     

煤尘对人红细胞谷胱甘肽和碱性磷酸酶活性的影响

目的：为了解煤尘对人血清红细胞谷胱甘肽（GSH）和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：用生物化学方法对48名煤工尘肺（CWP）患者及40名健康对照者红细胞谷胱甘肽和碱性磷酸酶活性（ALP）进行了测定。结果：煤工尘肺患者血清红细胞GSH、ALP含量明显高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）,且随着煤工尘肺病程发展和工龄不同,上述指标改变程度亦不相同（P＜0．05）。结论：接触煤尘可使红细胞内氧化代谢产物蓄积,从而使其活性,功能活跃,有助于机体对煤尘所致氧化损伤的代偿和适应。     

淫羊藿苷对去势雌性大鼠骨质疏松的影响

目的 研究淫羊藿苷对去势雌性大鼠骨质疏松的影响,为开发传统中药治疗骨质疏松症提供理论依据.方法 将60只3月龄健康雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(SHAM组,20只),去势造模组(OVX组,20只),淫羊藿苷组(ICA组,20只).模型建立后ICA组大鼠给予淫羊藿苷(浓度30mg/ml,10ml/kg,1次/d)灌胃90d.处死所有大鼠前采用股动脉取血法采集大鼠血液测定血清雌二醇水平、血碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b),并且用DEXA骨密度仪检测腰椎、股骨和全身骨密度;断颈法处死后采集双侧股骨,左侧股骨做组织病理学切片,右侧股骨匀浆提取骨组织中的Total RNA,RT-Real Time PCR检测OPG、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA的表达水平.结果 OVX组和ICA组的雌二醇水平均显著低于SHAM组(P＜0.01),而ALP水平显著高于SHAM组(P＜0.01),OVX组的TRAP5b水平较SHAM组和ICA组显著升高(P＜0.01);SHAM组和ICA组的腰椎骨密度和全身骨密度均高于OVX组(P＜0.05),SHAM组的股骨骨密度高于OVX组(P＜0.05),而ICA组与OVX组差异无统计学意义;SHAM组和ICA组的OPG、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA相对表达量明显高于OVX组(P＜0.01);SHAM组和ICA组的骨小梁与皮质骨均无变薄断裂,而OVX组有严重的骨质疏松病变特征.结论 淫羊藿苷具有防治去势雌性大鼠骨质疏松的作用.     

雌激素水平对大豆苷原(DAI)促大鼠成骨细胞分化作用的影响

 目的  观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果  培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11%(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2%去激素胎牛血清)。此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16%~21%,P<0.05)。继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L 时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100 pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100 pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论  DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。     

牵张应力影响破骨细胞形成的研究

目的 探讨牵张应力对破骨细胞形成的影响,为骨质疏松、骨折延迟愈合等临床疾病的治疗及Ilizarov牵张成骨技术的推广应用奠定理论基础。方法 在体外利用Flex Cell细胞应力加载系统刺激小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7分化为破骨细胞,通过免疫组化、RT-PCR等技术,从蛋白及基因水平探讨牵张应力刺激对诱导破骨细胞形成的作用特点。结果 在M-CSF(30 ng/mL)和RANKL(100 ng/mL)联合诱导的同时加入不同强度的牵张应力刺激,在0、0.5、1.0、2.0 Hz牵张应力刺激后,破骨细胞的形成明显增多,M-CSF阳性细胞面积依次增大(38.36±4.58)%、(42.21±5.74)%、(70.36±9.55)%、(85.42±11.36)%;RANKL阳性细胞面积依次增大(37.15±4.27)%、(40.42±5.25)%、(63.26±9.11)%、(90.25±12.38)%,差异有统计学意义(P0.05),且随着应力强度的增加,促进显著增强。在体外诱导破骨细胞分化的过程中,给予小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7在0、0.5、1.0、2.0 Hz牵张应力刺激后,TRAP[(0.92±0.22)、(1.44±0.53)、(1.61±0.36)、(2.45±0.67)]、Calcitonin Receptor [(0.94±0.26)、(1.05±0.31)、(1.51±0.42)、(1.97±0.58)]、Cathepsin K[(0.91±0.25)、(1.39±0.35)、(2.11±0.57)、(2.37±0.51)]基因的表达水平明显增高,差异有统计学意义(P0.05),且随着应力强度的增加,促进作用显著增强。结论 牵张应力环境刺激有利于破骨细胞的形成。     

脂联素对人成骨细胞分化的影响

目的:研究脂联素对成骨细胞的分化作用.方法:免疫印迹检测体外培养成骨细胞脂联素受体(adiponectin receptor,AdipoR)表达.用酶联免疫吸附试验检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;用放射免疫测定法测定骨钙素(osteocalcin,OC);并观测脂联素对矿化的影响.用siRNAs抑制AdipoR1表达,观察脂联素对成骨细胞分化作用的变化.结果:检测到成骨细胞AdipoR1蛋白表达.脂联素可提高ALP活性和促进OC分泌,并促进矿化结节形成,此作用可被AdipoR1的siRNAs转染抑制.脂联素作用于成骨细胞可诱导p38和JNK磷酸化,而p38抑制剂SB203580可减轻其对成骨细胞ALP活性的影响.结论:脂联素通过诱导p38信号转导途径诱导人成骨细胞分化.     

复合阿伦磷酸钠骨水泥对成骨细胞的影响

目的：研究不同阿伦磷酸钠含量的骨水泥对成骨细胞的影响，确定复合阿伦磷酸钠骨水泥的细胞毒性。方
法：根据阿伦磷酸钠含量不同分成6组，在50 g Cemex®XL骨水泥粉末中分别加入0，10，50，100，500，1 000 mg阿伦
磷酸钠，依次命名为G0~G5组。通过电镜观察各组成骨细胞样MG-63的黏附能力，MTT比色法测定吸光度值，碱性磷
酸酶试剂盒测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase activity，AKP)活性，Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒测定凋亡率，相差
显微镜观察骨矿化情况。结果：各组MG-63细胞黏附能力良好；与G0组相比，G1~G4组抑制细胞凋亡，G5组促进细
胞凋亡和抑制细胞增殖(P<0.05)；各组特异性碱性磷酸酶活性、骨矿化能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论：在50 g
骨水泥粉末中加入阿伦磷酸钠不超过500 mg对成骨细胞无毒性。     

肿瘤坏死因子α对小鼠破骨细胞分化的影响

目的:在诱导破骨细胞分化的体外骨髓细胞培养系统中,研究破骨细胞分化因子(RANKL)存在和不存在的情况下,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对破骨细胞分化的影响.方法:选用小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)依赖性非附着性骨髓细胞,在含有25μg/L M-CSF和0,l,10,100μg/L TNF-α的α-MEM培养液中培养5 d后,观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)阳性多核细胞的形成;细胞在含有25 μg/L M-CSF和30μg/L sRANKL的α-MEM培养液中进行培养,比较加入和不加人10μg/L TNF-α培养4、5、6和9 d后,所形成的TRAP( )多核细胞的数目和骨吸收面积.结果:TNF-α在没有RANKL的情况下,不能诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞.在RANKL存在的情况下,TNF-α可促进破骨样细胞的形成和骨吸收,但对破骨细胞分化的促进作用仅表现在培养的早期.结论:在RANKL存在的情况下TNF-α可促进破骨细胞的分化,但不能取代RANKL.TNF-α加速破骨细胞的形成,却并不延长其生存时间.