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1.
目的 观察向软骨方向诱导分化的自体骨髓间充质千细胞(BMSCs)复合Ⅱ型胶原修复兔关节软骨缺损的质量.方法 扫描电镜观察Ⅱ型胶原结构.24只新西兰大白兔体外分离BMSCs,进行原代、传代培养,倒置显微镜观察.取第3代BMSCs,软骨诱导培养液培养14 d,调整细胞浓度为5×106/ml,与Ⅱ型胶原复合培养1周备用,并观察细胞在支架材料中的生长情况.于膝关节股骨滑车处制作一个直径为4 mm的圆柱形软骨缺损区,右侧植入复合培养1周的自体BMSCs和Ⅱ型胶原组织(实验组);左侧单纯植入Ⅱ型胶原(胶原对照组);另取12只,左右侧均不植入任何材料(空白对照组).术后2,4,8,12周取材,大体和组织学观察检测修复软骨的质量. 结果 Ⅱ型胶原呈网架状结构,孔隙大小在40~300μm之间,BMSCs在其中生长良好,软骨基质大量形成.实验组修复的关节面光亮、平整,镜下表现为透明样软骨,软骨细胞排列规律,与宿主软骨整合好;胶原对照组以纤维组织修复为主,与宿主软骨整合差;空白对照组未能修复软骨缺损.组织学评分实验组明显优于两对照组(P<0.05). 结论 自体BMSCs复合Ⅱ型胶原修复软骨缺损质量好,长期疗效需要进一步的观察.  相似文献   

2.
目的 :比较软骨细胞、骨髓基质细胞及成纤维细胞对全层关节软骨缺损的修复作用。材料和方法 :取幼兔的软骨细胞、骨髓基质细胞及成纤维细胞 ,共 3种有生成软骨潜力的细胞进行体外分离培养 ;以聚乳酸 (PLA)为载体 ,将培养的原代细胞植入PLA支架上 ,形成细胞 -PLA复合物。于 2 8只成年新西兰大白兔的股骨滑车关节面上造成直径 4 5mm、深 3 0mm的全层关节软骨缺损 ,将 3种细胞 -PLA复合物分别植入关节软骨缺损处。植入细胞 -PLA复合物为实验组 ,单纯植入PLA支架为对照组。术后 6周、12周观察缺损修复情况及新生组织类型。结果 :软骨细胞移植组为软骨样组织修复 ,分界明显 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阳性 ;软骨下骨部分重建 ;细胞排列紊乱。骨髓基质细胞移植组为软骨样组织修复 ,分界不明显 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阳性 ;软骨下骨重建良好 ,软骨下潮线恢复 ;细胞排列趋于正常。成纤维细胞移植组为纤维组织修复 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阴性 ;软骨下潮线消失。对照组为纤维组织修复。结论 :软骨细胞、骨髓基质细胞移植修复软骨缺损明显优于成纤维细胞及对照组。骨髓基质细胞与软骨细胞移植组的修复结果无统计学差异 ,但骨髓基质细胞修复组织的细胞排列有序 ,软骨下骨重建良好 ,与周围组织融合密切 ,更接近正?  相似文献   

3.
目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。  相似文献   

4.
目的探讨转胰岛素样生长因子-Ⅰ(insu lin like growth factorⅠ,IGF-Ⅰ)基因软骨细胞与交联透明质酸复合后在裸鼠体内形成组织工程软骨的能力。方法分离培养人关节软骨细胞,将IGF-Ⅰ基因转染人关节软骨细胞,转基因细胞(转染组)、未转基因的软骨细胞(对照组)分别与交联透明质酸材料在体外孵育2 d后,移植裸鼠皮下。移植后6周,取出裸鼠皮下新生组织进行大体形态学观察(HE染色、阿尔新蓝染色),逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测新生组织中Ⅰ型、Ⅱ型前胶原和IGF-Ⅰ基因mRNA的表达,判断裸鼠体内新生组织的结构和功能。结果转染组裸鼠体内新生组织6周仍能表达IGF-ⅠmRNA,而对照组不能;转染组和对照组在6周后均能形成软骨组织陷窝,但对照组的陷窝数量明显低于转染组;转染组的Ⅱ型前胶原mRNA的相对表达量为1.204±0.139,高于对照组(P<0.05);Ⅰ型前胶原mRNA的相对表达量为0.069±0.019,低于对照组(P<0.01)。结论转IGF-Ⅰ基因软骨细胞与交联透明质酸在体内能构建出软骨样组织,其结构更接近于自然软骨。  相似文献   

5.
目的:观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对关节软骨缺损修复的作用。方法:采用组织工程方法制备骨基质明胶(BMG)-软骨细胞移植物。40只4-5个月龄的新西兰兔均分为软骨细胞实验组及软骨细胞对照组,BMG对照组,空白对照组。实验组兔膝关节注射IGF-Ⅰ,各对照组均注射等渗盐水。术后行大体,组织学观察及免疫组化检测。结果:实验组软骨细胞生长较快,术后24周修复的软骨组织Safranin-O染色,Ⅱ型胶原染色与正常关节软骨一致,软骨细胞呈柱状排列,软骨细胞对照组术后24周修复软骨组织Safranin-O染色较淡,部分软骨细胞呈柱状排列,BMG,空白对照组未修复。结论:IGF-Ⅰ能促进关节软骨缺损修复。  相似文献   

6.
目的 :研究成人骨性关节炎关节软骨中的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布。方法 :分别用抗Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体对成人骨性关节炎关节软骨切片进行免疫组织化学染色法。结果 :骨性关节炎关节软骨全层无Ⅰ型胶原 ;Ⅹ型胶原分布在深层和钙化层 ;Ⅱ型和Ⅲ型胶原分布相同 ,轻度病变时分布于软骨全层 ,中、重度病变时主要分布于中、深层。结论 :成人骨性关节炎关节软骨中不仅含有Ⅱ型胶原 ,而且含有大量Ⅲ型和Ⅹ型胶原 ,但无Ⅰ型胶原。Ⅹ型胶原和Ⅱ、Ⅲ型胶原的分布有重叠区  相似文献   

7.
目的:用原位杂交法研究骨和软骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因的表达。方法:以与Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型胶原mRNA特异性互补的寡核苷酸序列为探钍,用末端转移酶将地高辛标记于3′-末端,在兔胫骨近端组织切片上进行Northen原位杂交,检测关节软骨、骺板和新生骨小梁区三种胶原基因的表达情况。结果:关节软骨和骺板区均检测到软骨细胞中有ⅡB型胶原基因表达,新生骨小梁区检测到成骨细胞中有Ⅰ型胶原基因表达。结论:本实验方  相似文献   

8.
目的 :研究同种异体半月板移植和异种异体半月板移植后 ,移植半月板和关节软骨中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥反应发生的情况。方法 :切除 30只成年新西兰白兔的内侧半月板造成半月板缺失的动物模型。A组进行同种异体内侧半月板移植。B组取猪半月板组织修剪成同兔内侧半月板形态和尺寸相同的异种异体半月板植入物 ,进行兔内侧半月板的异种异体移植。分别在术后第 6周、12周、2 4周取实验动物的半月板、关节软骨进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的单克隆抗体的免疫组织化学染色 ,并取外周血进行补体依赖性微量淋巴细胞毒实验 (CDMT) ,用放射免疫法检测血清中IL - 2和IL - 6的含量 ,了解是否发生免疫排斥反应。结果 :同种异体半月板移植后 ,关节软骨和移植半月板的情况良好 ,但术后第 2 4周 ,异种异体移植物部分被吸收 ,关节软骨出现损伤。两组中各时段移植半月板中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况无明显差异 ,术后第 12周 ,两组关节软骨中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况相似 ,但术后第 2 4周 ,异种异体半月板组的关节软骨开始有异常Ⅹ型胶原表达。同种异体和异种异体半月板移植组均未发现致命的免疫排斥反应发生。结论 :用猪的半月板组织塑形后移植替代兔内侧半月板组织 ,半年后移植物被溶解吸收 ,同种异体?  相似文献   

9.
目的 分析膝骨关节炎(OA)软骨MRI信号强度(SI)与软骨Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达的相关性,探讨软骨MR序列反映OA软骨组分变化的能力. 资料与方法 对26例膝关节置换手术患者术前行关节软骨MRI,采用序列为快速自旋回波(FSE)T2WI、三维脂肪抑制扰相梯度回波序列(3D-FS-SPGR)和脂肪抑制质子加权序列(FS-PDWI).观察各序列上软骨SI.术后对截骨标本进行软骨采样,以鼠抗人单克隆抗体进行Ⅱ型胶原和蛋白多糖免疫组织化学染色和分级评价.对软骨缺损旁区域SI值与基质Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达等级进行多个独立样本的秩和检验和Spearman相关性分析. 结果 OA软骨基质的不同Ⅱ型胶原表达等级间FSE T2WI和FS-SPGR序列上软骨SI差异无统计学意义(FSPGR=0.771,PSPGR=0.474;FT2WI=1.075,PT2WI=0.358),FS-PDWI序列上软骨SI差异有统计学意义(FPD= 28.739,PPD<0.001);软骨基质蛋白多糖的不同表达等级的MR各序列软骨SI差异均无统计学意义(FT2WI=1.275,PT2WI=0.299;FPD= 2.045,PPD=0.152; FSPGR=1.057,PSPGR=0.364).FS-PDWI上OA缺损旁区域软骨SI与Ⅱ型胶原表达呈负相关(P<0.001,r=-0.825),软骨SI随Ⅱ型胶原破坏程度升高而降低;其他序列上软骨SI虽有随Ⅱ型胶原和蛋白多糖缺失而变化的趋势,但统计学上无相关性. 结论 在常用软骨MRI序列中,FS-PDWI与OA软骨基质Ⅱ型胶原表达具有相关性,但常规MRI序列无法反映OA软骨蛋白多糖丢失状况.  相似文献   

10.
一氧化氮抑制兔关节软骨细胞II型胶原的合成   总被引:7,自引:1,他引:6  
一氧化氮(NO)在骨关节炎和关节软骨代谢中具有重要的病理生理作用。为研究NO与关节软骨II型胶原的关系,我们在培养的兔关节软骨细胞中以药物刺激产生NO后,分别用ELISA及RT-PCR法测定II型胶原及前II型胶原α1链(COL2A1)mRNA表达量的变化。结果表明,0.2mM的硝普钠(SNP)可释放出大量NO,使软骨细胞II型胶原的含量减低,同时,RT-PCR法证实前II型胶原mRNA表达量也减少。100u/ml白细胞介素-1(IL-1)可刺激软骨细胞释放NO并使II型胶原量降低,其COL2A1mRNA表达量也减少。加用1mg/ml精氨酸甲酯(NAME,NO合酶抑制剂)后,则抑制了IL-1的作用,使NO产量下降,II型胶原含量部分恢复,COL2A1完全恢复。本试验证实了NO作为IL-1的下游分子抑制II型胶原的合成;其抑制作用是通过减少前II型胶原α1链mRNA表达量完成的。这在软骨细胞反分化过程中具有重要意义。  相似文献   

11.
采用关节软骨细胞培养和同位素标记的方法观察抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对软骨细胞代谢的影响,结果示抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对家兔关节软骨细胞DNA和胶原合成都有明显的抑制作用,认为抗Ⅲ型胶原抗体可能协同抗Ⅱ型胶原抗体参与关节软骨损伤的自家免疫反应。  相似文献   

12.
目的 评价中药舒筋止痛液配合离子导入治疗兔膝骨关节炎的效果和机制. 方法 采用兔改良Hulth膝骨关节炎模型(即前交叉韧带切断+内侧半月板切除).24只骨关节炎模型兔随机分为3组:药透组,兔患侧膝关节放置中药舒筋止痛液药垫,应用中频电疗仪进行离子导入治疗;阳性对照组,兔饲服盐酸氨基葡萄糖胶囊;空白对照组,不给予任何治疗.分别于造模前、治疗前(造模4周)、治疗4周和8周时进行血清一氧化氮(NO)含量检测,治疗4周和8周时采用流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,RT-PCR检测软骨细胞Ⅱ犁胶原和软骨聚集蛋白聚糖基凶的表达水平. 结果 治疗4周时,药透组和阳性对照组血清NO含量低于空白对照组,8周时药透组血清NO含量低于阳性对照组和空白对照组;治疗4周和8周时,药透组和阳性对照组的软骨细胞凋亡率均明显低于空白对照组;治疗4周时,药透组和阳性对照组软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨聚集蛋白聚糖基因表达水平高于空白对照组,8周时,药透组上述两种基因表达水平高于阳性对照组和空白对照组. 结论 中药舒筋止痛液配合离子导入对骨关节炎有一定的治疗作用,其机制与抑制软骨细胞凋亡进程和炎性因子分泌,提高相关基因表达水平以促进软骨修复有关.  相似文献   

13.
透明质酸钠预防骨关节炎Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 研究关节内注射透明质酸钠 (海尔根 )预防膝骨关节炎 (OA)过程中Ⅱ型胶原抗体水平及其动态变化。方法 取 12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型 ,随机等分为 2组。Ⅰ组术后当时及每 2周关节内注射 1ml 1%透明质酸钠 (Hyalgan)至 12周 ;Ⅱ组注射 1ml生理盐水为对照。各组术前及术后每隔 2周收集血清 ,建立间接法ELISA ,检测Ⅱ型胶原抗体水平。结果 Ⅰ组术后第 6、10、12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;Ⅱ组Ⅱ型胶原抗体水平第 10周显著高于术前 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ组与Ⅱ组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论 OA使机体产生自身免疫 ,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答 ,导致抗体水平进一步升高。提示 ,注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时 ,应考虑其免疫调节作用  相似文献   

14.
目的 研究机械刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesehchymal stem cells,BMSCs)分化的影响.方法 对大鼠BMSCs施以10%形变,1 Hz的周期性单向牵张刺激,并检测牵张不同时段后,其Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的表达和这2种蛋白的分泌.结果 牵张12 h后,BMSCs Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达与对照组相比增高有显著差异,24 h后,种胶原蛋白的合成与对照组相比有统计学差别.结论 说明机械刺激可以促进BMSCs合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白.  相似文献   

15.
目的 探讨microRNA-22对软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎(OA)发病中作用机制。方法 原代培养人健康、OA软骨细胞,荧光定量PCR检测microRNA-22在健康、OA软骨细胞中的表达水平;Western blot检测健康、OA软骨细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Ⅰ的表达水平;软骨细胞转染microRNA-22模拟物、抑制物,平板克隆形成实验检测microRNA-22对软骨细胞活性的影响,Western blot检测软骨细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ及Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达水平。结果 荧光定量PCR检测结果显示,OA软骨细胞(14例)中microRNA-22表达含量(2.50±0.39)显著增高(P<0.01),约为健康软骨细胞(12例)(0.98±0.25)的2.5倍。Western blot检测结果显示,与健康软骨细胞相比,OA软骨细胞自噬相关蛋白LC3B的Ⅱ类亚型含量降低;OA软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.25±0.13,健康软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.85±0.21,差异具有统计学意义(P&...  相似文献   

16.
雌激素对软骨细胞胶原表型表达的影响   总被引:6,自引:0,他引:6  
目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞胶原表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β -雌二醇 0mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L、1 0 - 8mol/L、1 0 - 9mol/L、1 0 - 10 mol/L、1 0 - 11mol/L、1 0 - 12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL - 1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 - 6 mol/L~ 1 0 - 12 mol/L 1 7β -雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达。结果 :1 0 - 6 mol/L雌二醇或单用IL - 1 β均抑制正常软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达 ,低浓度雌二醇 (1 0 - 11、1 0 - 12 mol/L)能够对抗IL - 1 β的抑制作用 ;所有软骨细胞均未表达Ⅲ型胶原mRNA ;几乎所有浓度雌二醇 (1 0 - 12 mol/L除外 )均诱导软骨细胞表达Ⅰ型胶原。结论 :雌激素对关节软骨细胞胶原表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素 (1 0 - 12 mol/L)对维持其胶原表型最适宜。  相似文献   

17.
目的 检测低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达。方法 用RT PCR的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达的改变。结果 与正常对照组相比 ,低顺应性膀胱组逼尿肌层中Ⅲ型胶原蛋白基因的表达明显上调 ,Ⅰ型胶原蛋白基因的表达上调。结论 膀胱组织肌层内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达上调与梗阻后低顺应性膀胱的形成存在一定的关系。  相似文献   

18.
异种脐血干细胞移植修复兔全层关节软骨缺损的初步研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的 :探讨人脐血干细胞对兔全层关节软骨缺损的修复作用及免疫反应。材料和方法 :取人脐带血中脐血干细胞及幼兔的骨髓基质细胞 ,体外分离培养 ;以聚乳酸 (PLA)为载体 ,将培养的原代细胞植入PLA支架上 ,形成细胞 -PLA复合物。于 2 0只成年新西兰大白兔的股骨滑车关节面上造成直径 4.5mm深 3 .0mm的全层关节软骨缺损 ,将两种细胞 -PLA复合物分别植入关节软骨缺损处。植入异种脐血干细胞 -PLA复合物为实验组 ,植入同种异体骨髓基质细胞 -PLA复合物为阳性对照组 ,缺损不处理为阴性对照组。术后 6周、1 2周观察缺损修复情况、新生组织类型及有无免疫反应。结果 :脐血干细胞组 6周时标本为纤维组织修复 ,内有少量软骨细胞 ;1 2周时 40 %标本为软骨样组织修复 ,较薄 ;60 %标本为纤维组织修复。移植物周围无明显淋巴细胞聚集 ,部分滑膜有炎症反应。骨髓基质细胞组(阳性对照)为软骨样组织修复 ;滑膜无明显炎症反应。阴性对照组为纤维组织修复 ,无软骨形成。结论 :异种脐血干细胞移植修复软骨缺损优于缺损不处理组 (阴性对照) ,但明显差于同种骨髓基质细胞组 (阳性对照 )。脐血干细胞有可能成为软骨修复的新的种子细胞。由于种属差异的影响 ,脐血干细胞组可能存在免疫反应 ,结果需进一步研究  相似文献   

19.
威灵仙注射液对骨关节炎影响的实验研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的 :研究威灵仙注射液对大鼠骨关节炎模型关节软骨的影响。方法 :SD雄性大鼠分为 5组 ,Ⅰ正常空白对照组 ,ⅡOA模型空白对照组 ,ⅢOA模型生理盐水治疗组 ,ⅣOA模型威灵仙注射液治疗组 ,Ⅴ正常威灵仙注射液注射组。对Ⅳ、Ⅴ组以威灵仙注射液 0 2ml肌注每天 1次 ,于1、4、7周后对软骨标本行放射影像学观察、光镜观察Mankin’s评分、透射电镜观察。结果 :4周后Mankin’s评分、透射电镜观察可见到Ⅳ组大鼠关节软骨退变的延缓 ,但整个实验过程中未见放射影像学有明显差别。结论 :威灵仙注射剂可延缓骨关节炎的发展  相似文献   

20.
目的:探讨异种异体半月板移植对延缓关节软骨退变的作用。方法:对15只成年新西兰兔的后肢左、右膝均进行内侧半月板全切。在15只兔的左膝进行猪半月板组织成型后所得的异种异体内侧半月板移植,以其已切除内侧半月板的右膝作为对照。分别于术后6周、12周、24周择期处死动物,观察各组兔膝关节软骨的大体病理表现、组织病理Mankin评分改变,并用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色法观察关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的表达情况。结果:兔内侧半月板全切组膝内侧胫骨平台和内侧股骨髁软骨破坏严重,有大量骨赘形成,呈骨性关节炎表现。异种异体半月板移植在短期内对关节软骨具有明显保护作用,但随着术后24周移植半月板被破坏,关节软骨出现退变,但与同期的半月板切除膝相比,关节软骨退变较轻。结论:异种异体半月板移植短期内对关节软骨有保护作用;异种异体半月板移植可延缓关节软骨退行性变。  相似文献   

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