黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

DADS对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用。方法：采用MTT、细胞计数法,观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用;施用流式细胞术检测不同浓度DADS对SW480细胞的凋亡率。结果：MTT法显示,DADS能明显抑制SW480细胞生长增殖,呈浓度和时间依赖性,细胞生长增殖速度明显减慢。细胞计数表明,当DADS浓度增加时,SW480细胞群体倍增时间延长,与对照组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。流式细胞仪分析显示,随着DADS处理浓度增加,使SW480细胞凋亡率逐渐增高,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：DADS具有诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用。     

中药复方脏毒清体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的:探讨中药复方脏毒清对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW480,用不同质量浓度的脏毒清(0.05,0.10,0.15,0.20,0.25 g·m L-1)进行干预12,24,36,48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。用不同质量浓度脏毒清(0.10,0.15,0.20 g·m L-1)作用SW480细胞24 h后,另设空白组,采用用荧光染色技术和流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬酶-3(Caspase-3),Caspase-9的酶活性,Western blot技术检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示脏毒清对其有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;与空白组比较,脏毒清0.10,0.15,0.20 g·m L-1组能明显诱导SW480细胞凋亡,Caspase-3及Caspase-9酶活性明显升高,促凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bal-2表达明显降低,均具有统计学意义(P0.01)。结论:脏毒清具有促进人结肠癌SW480细胞凋亡的作用,并通过线粒体凋亡途径发挥作用。     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

芪术方诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制研究

目的:探讨芪术方(QZP)诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法:以不同浓度的QZP干预人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况,RT-PCR法检测AKT1、AKT2、Caspase-9mRNA的表达;蛋白质印迹法检测p-AKT、PTEN蛋白表达。结果:QZP能阻滞人肝癌细胞SMMC-7721从G0/G1期进入S期,并诱发细胞凋亡;能抑制AKT1、AKT2表达,提高Caspase-9表达,且跟浓度呈正比例关系。结论:QZP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡和阻滞细胞周期,其机制可能为促进人肝癌细胞SMMC-7721 PTEN表达的增加,使得PI3K/AKT信号通路激活受阻,同时抑制p-AKT、AKT1、AKT2的表达,激活下游Caspase-9促凋亡分子的表达,从而为PI3K/AKT信号通路介导细胞凋亡这一设想提供了理论依据。     

半夏泻心汤对H2O2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨半夏泻心汤对H_2O_2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制。方法大鼠随机分组灌胃,取血收集含药血清,300μM H_2O_2干预RIN-m5F细胞,测定半夏泻心汤最佳浓度,后随机分组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率、Western blot检测各组蛋白表达。结果半夏泻心汤含药血清最佳浓度为10%(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤含药血清可显著降低RIN-m5F细胞凋亡率(P0.05),下调Caspase-3、Bax的表达(P0.05),上调Bcl-2、PAKT的表达(P0.05)。结论半夏泻心汤含药血清可抑制RIN-m5F细胞凋亡,其机制可能与PI3K/AKT通路的活化有关。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

姜黄素作用PTEN/PI3K/AKT通路诱导膀胱癌EJ细胞凋亡

目的:研究姜黄素抗癌作用的分子机制。方法:以人膀胱癌细胞株EJ为模型,采用MTT法、流式细胞术,检测姜黄素对EJ细胞生长和凋亡的影响,并通过Western Blotting法检测姜黄素对EJ细胞PTEN/PI3K/AKT通路凋亡相关蛋白表达的影响。结果:姜黄素以浓度及时间依赖的方式抑制EJ细胞的增殖;流式细胞仪检测发现姜黄素作用于EJ细胞24 h后凋亡率呈剂量依赖性增加。Western Blotting显示50μM姜黄素作用EJ细胞后,PTEN、GSK-3β、C-raf、Bad、caspase-9、caspase-3的活性增强,PARP的裂解增加和Akt、PDK1的表达水平降低。结论:姜黄素能增加EJ细胞PTEN的表达,进而抑制PI3K/Akt信号通路的激活,继之激活下游GSK-3β,caspase-9和Bad等多种促凋亡分子的表达,诱导EJ细胞发生凋亡。该研究表明PTEN/PI3K/Akt信号通路在姜黄素诱导的EJ膀胱癌细胞凋亡中起了重要作用。     

苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW480细胞凋亡的实验研究

目的:观察苦参碱(MT)诱导人结肠腺癌细胞株SW480凋亡的作用并探讨其可能机制。方法:以不同浓度MT处理人结肠腺癌细胞株SW480,分别通过MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,光镜观察、Hochest 33258荧光染色观察MT对SW480细胞变化的影响,AnnexinⅤ-FITC法检测MT对SW480细胞凋亡的影响,荧光定量PCR法检测MT对SW480细胞中Caspase3、Bcl-2 mRNA表达的影响。结果:MT对体外培养的SW480细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48 h IC50=0.70mg.mL-1;光镜观察显示,凋亡细胞变圆,体积缩小,Hochest 33258荧光强染;经MT作用的SW480细胞,其Bcl-2表达低于正常组,Caspase3表达则显著高于正常组。结论:MT在体外能抑制SW480细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导凋亡有关。     

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。     

复方肠泰抑制人结肠癌SW480细胞增殖的实验研究

目的:考察复方肠泰(人参、薏苡仁、莪术等)对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝比色法测定不同浓度复方肠泰在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:复方肠泰可在G0/G1期以及G2/M期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖,使S期细胞比率降低。结论:复方肠泰在3.51～7.81mg/mL范围内呈现明显的量效关系。     

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。     

藤黄醇提取物对结肠癌SW480干细胞荷瘤裸鼠的实验研究

目的观察藤黄醇提取物对结肠癌SW480干细胞荷瘤裸鼠的治疗效果。方法采用荧光分选法分选肿瘤干细胞后,建立裸鼠结肠癌干细胞荷瘤动物模型,随机分为5组,即对照组、伊立替康组、5-氟尿嘧啶组、高、低剂量藤黄醇提取物组。给药开始后每周称重2次,给药2周后继续观察一周后,处死裸鼠。解剖后剥取肿瘤标本,称质量,并计算抑瘤率。结果中药藤黄醇提取物疗效介于5-氟尿嘧啶和伊立替康之间,低剂量抑瘤率达42.5%,高剂量抑瘤率达67.5%。结论藤黄醇提取物能有效地抑制结肠癌SW480干细胞的增殖,是一种潜在治疗结肠癌干细胞的药物。     

川芎嗪对人结肠癌LoVo细胞增殖与凋亡的影响

目的研究川芎嗪对人结肠癌LoVo细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法采用质量浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/mL川芎嗪分别作用LoVo细胞24 h、48 h和72 h,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测细胞基因p53正向凋亡调节因子(PUMA)及Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果川芎嗪可有效抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖,并诱导凋亡,且显示质量浓度时间依赖性(P<0.01);但川芎嗪对293T细胞的生长无显著性影响。质量浓度为1.0、2.0、4.0 mg/mL川芎嗪均能提高PUMA mRNA和蛋白表达,进而促进Bax mRNA和蛋白表达上调,同时下调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论PUMA及其下游信号通路介导了川芎嗪抑制人结肠癌LoVo细胞增殖及促凋亡作用。     

莪黄汤对结肠癌SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响

目的:了解莪黄汤含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、cyclin D1蛋白表达的影响。方法:通过莪黄汤不同浓度含药血清处理SW480细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期,免疫组化及Western blot检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达。结果:MTT检测显示不同浓度莪黄汤含药血清在体外对结肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,呈时间依赖及浓度依赖关系;流式细胞检测显示莪黄汤可抑制SW480细胞增殖,并提示莪黄汤可能在S期发挥作用,阻止细胞进入G2/M期,其中7.14g/kg组抑制作用最明显;免疫组化及Western检测提示莪黄汤可降低β-catenin及其下游cyclin D1蛋白的表达。结论:莪黄汤可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制SW480细胞增殖发挥抗肿瘤作用。     

龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响

目的研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化。结果龙葵碱对MCF-7细胞的IC50为22.08μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期;能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量。结论龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。     

新合成的紫草萘醌类衍生物TEISHNZ的细胞毒作用和诱导人鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨一种新的人工半合成紫草萘醌类衍生物(2,3,11-三乙巯基-6-异己萘茜,简称TE ISHNZ)。在体外对8种人癌细胞的细胞毒作用及诱导人鼻咽癌细胞(CNE2)细胞凋亡的作用。方法应用噻唑蓝(M TT)比色法检测TE ISHNZ对8种人癌细胞的增殖抑制作用,以半数抑制浓度(IC50)为指标进行评价。应用流式细胞术(FCM)检测TE ISHNZ诱导CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果TE ISHNZ在0.78~25μg/mL质量浓度下,对8种人癌细胞均有明显的增殖抑制作用;对CNE2细胞、人肺腺癌细胞(GLC-82)、人肝癌细胞(B e l-7402)、人白血病细胞(K 562)、人宫颈癌细胞(H eL a)、人胃腺癌细胞(M GC-803)、人乳腺癌细胞(M DA 453)和人口腔癌细胞(KB)的IC50分别为3.96、2.48、5.13、1.92、4.54、5.88、1.35和3.44μg/mL,IC50值均在6μg/mL以下。FCM检测结果显示,以TE ISHNZ(1.56、3.12和6.25μg/mL)处理CNE2细胞48 h后,在FCM的DNA直方图上可见亚二倍体(亚G1峰);细胞凋亡率依次为3.9%、10.8%和28.1%,而对照组的细胞凋亡率为2.2%;TE ISHNZ对CNE2细胞的诱导凋亡作用呈浓度依赖性;细胞周期分析显示CNE2细胞被阻滞于G2/M期。用6.25μg/mL TE ISHNZ处理CNE2细胞12、24、36和48 h后亦可见细胞凋亡,细胞凋亡率分别为4.5%、27.2%、48.2%和24.9%,而对照组的凋亡率为1.0%。CNE2细胞被TE ISHNZ处理的前36 h,其凋亡率随着作用时间的延长而增加,被阻于S和G2/M期;作用48 h时,被阻于G2/M期。结论TE ISHNZ对多种人癌细胞有明显的细胞毒作用,且能诱导CNE2细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期和(或)G2/M期。     

黄芪注射液诱导人结肠癌Lovo细胞凋亡机制的研究

目的研究黄芪注射液诱导结肠癌Lovo细胞株的凋亡机制。方法以不同浓度的黄芪注射液作用于人结肠癌Lovo细胞株,用MTT法测黄芪注射液对Lovo细胞体外增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞仪AnnexinV和PI双重染色行凋亡相关检查。结果与对照组相比,实验组对Lovo细胞株增殖均有明显的抑制作用,且与浓度和作用时间呈正比;电镜下可见凋亡的早、中、晚期细胞及凋亡小体,同时可见部分细胞呈坏死改变。流式细胞仪显示:黄芪注射液作用Lovo细胞48 h后,0.05 g/mL、0.1 g/mL、0.15 g/mL、0.2g/mL各组的凋亡率分别为4.8%,18.6%,42.1%,64.8%。结论黄芪注射液能抑制Lovo细胞生长,诱导细胞凋亡。