纤溶酶原激活物与基质金属蛋白酶在矽肺发病中的机制研究

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其纤溶酶原抑制因子（PAI-1）在矽肺纤维化发病中的作用机制及其相互关系。方法 Wistar大鼠60只,分为染尘模型组（简称模型组）与对照组,分别30只。矽尘混悬液缓慢注入气管造模,对照组注入生理盐水。分别在5个时间点处死大鼠,取肺组织HE染色,观察病理变化。免疫组化方法检测肺组织中uPA、PAI-1、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）蛋白的表达。免疫结果半定量判断参照免疫组化显色标准。结果 uPA、PAI-1在模型组均有较强阳性表达,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。MMP-9阳性表达强度随时间延长逐渐增强,至第7天时达高峰,此后呈减弱趋势,TIMP-2染色明显增强并保持到第4周,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。uPA、PAI-1、MMP-9、TIMP-2显色指数与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 uPA、PAI-1、MMP-9、TIMP-2四者表达均呈正相关,在矽肺纤维化中MMPs的升高可能与PAI-1的降低有关,矽肺的发展过程中可能存在uPA诱导的纤溶系统的活化与MMPs介导通路的交互作用网络。     

用HOPE-MED8050动式染尘控制系统建立大鼠矽肺模型

[目的]采用动式染尘控制系统建立大鼠矽肺模型.[方法]40只SD大鼠随机分为1d、3d、7d、2周、4周、8周、12周及对照组,每组5只;大鼠暴露的染尘浓度为170～ 190 mg/m3,每天染尘2h,至各组相应的染尘时间段处死动物(对照组于12周末处死),称量体重与肺脏重量,计算肺脏器系数,检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量并对肺组织进行病理组织学观察.[结果]染尘室浓度稳定持久.肺脏器系数随染尘时间延长而逐渐增加;1d组肺组织轻度充血、水肿;7d组血管周围可见较多炎细胞围绕,以单核细胞和淋巴细胞为主;2周组可见肺泡内有红染物及泡沫细胞;4周组巨噬细胞呈结节状,肺泡上皮细胞部分脱落,少量纤维组织增生;8周组纤维性增生更甚,同时可见肺泡Ⅱ型上皮细胞腺营样增生;12周组出现纤维性结节,而对照组的大鼠肺部无明显异常.肺组织内Hyp含量随染尘时间延长而增加.[结论]采用动式染尘控制系统可建立大鼠矽肺模型.     

熊果酸对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞数量和波形蛋白表达的影响

目的研究熊果酸对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞(AM)数量和波形蛋白表达的影响。方法将无特定病原体级Wistar大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、矽肺组和熊果酸组,每组20只。空白对照组大鼠不予任何处理,其余3组大鼠均通过非暴露式气管滴注法一次性予剂量为250 mg/kg体质量的游离二氧化硅混悬液。其后,空白对照组和矽肺组大鼠灌胃剂量为10 m L/kg体质量的0. 9%氯化钠溶液,溶剂对照组大鼠灌胃10 m L/kg体质量为0. 6%的羧甲基纤维素钠溶液,熊果酸组大鼠灌胃剂量为40 mg/kg体质量的熊果酸,1次/d,连续56 d。在灌胃第7、14、28、56天时各组分别处死5只大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)检测AM数量,采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测肺组织中波形蛋白的表达。结果溶剂对照组和矽肺组大鼠4个时间点BALF中AM数量和肺组织中波形蛋白相对表达水平均高于同时间点空白对照组(P 0. 05)。熊果酸组大鼠BALF中AM数量在4个时间点分别低于同时间点溶剂对照组和矽肺组(P 0. 05),在第7和14天均高于同时间点空白对照组(P 0. 05),但在第28和56天分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05)。熊果酸组大鼠4个时间点肺组织中波形蛋白相对表达水平分别低于同时间点溶剂对照组和矽肺组(P 0. 05),高于同时间点空白对照组(P 0. 05)。免疫组织化学法结果显示:建立矽肺模型后,溶剂对照组和矽肺组大鼠肺组织纤维化程度逐渐加重,波形蛋白阳性表达在各时点有不同程度增加;熊果酸组大鼠肺组织中波形蛋白表达趋势与上述2组相似,但肺组织纤维化程度和肺泡结构破坏程度均相对较轻,波形蛋白阳性表达相对减弱。结论熊果酸可减少矽肺大鼠肺泡巨噬细胞的数量,下调波形蛋白的表达。     

AcSDKP对矽肺大鼠细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路调节的作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对矽肺大鼠纤维化肺组织中c-Raf、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响,以探讨AcSDKP对Ras-Raf-ERK1/2信号转导通路调节的作用.方法 选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,60只大鼠随机分为6组,每组10只.对照1组(4周后处死)和对照2组(8周后处死):支气管内均灌注生理盐水1.0 ml/只;矽肺模型1组(4周后处死)和矽肺模型2组(8周后处死):支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只(SiO250mg/ml);抗纤维化治疗组(治疗组):支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只,4周后给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-1,并持续至第8周处死;预防治疗组:给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-148 h后,支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只,8周后处死.采用免疫组织化学法和免疫印迹(Western blot)法对矽肺大鼠肺内c-Raf、磷酸化-c-Raf、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1的蛋白表达进行检测.结果 与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,治疗组大鼠肺组织内磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达均明显降低,其中,治疗组磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达分别为矽肺模型1组的52.25%、51.72%、67.74%,为矽肺模型2组的49.37%、55.76%、65.63%;预防治疗组蛋白表达分别为矽肺模型2组的54.64%、55.76%、78.91%,差异均有统计学意义(P＜0.05).而各组间比较c-Raf、ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论 AcSDKP可能是通过抑制TGF-β1介导的Ras/Raf/ERK1/2信号通路发挥拮抗矽肺纤维化的作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对TGF-β1介导Smad通路调节在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

[目的]观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化肺组织中胶原含量、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3和Smad 7表达的调节,探讨AcSDKP拮抗矽肺纤维化的作用机制. [方法]选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法和Western-blot法定量分析肺组织中胶原蛋白的含量.Western-blot法检测肺组织内TGF-31、phospho-Smad2/3及Smad7蛋白的表达. [结果]AcSDKP治疗组胶原含量和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达均增加,而Smad7蛋白表达减弱.与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达表达均明显降低.而Smad7蛋白表达增强. [结论]AcSDKP可能是通过对TGF-β1介导Smad通路调节而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

AcSDKP经由PDGF介导的细胞外信号调节激酶1/2的调节通路在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)经由血小板源性生长因子(PDGF)介导的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的调节通路在矽肺纤维化形成中的作用。采用一次性支气管内灌注二氧化硅(SiO2)粉尘制作矽肺大鼠模型,将其分为对照组(4周组和8周组)、矽肺模型组(4周和8周组)、AcSDKP治疗组(抗纤维化治疗组和预防治疗组)。采用贴块法进行肺成纤维细胞的原代和传代培养。HE染色观察肺组织形态学变化,Western blot法检测肺组织、肺成纤维组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和ERK1/2及磷酸化-ERK1/2蛋白的表达以及肺组织PDGF及其受体蛋白的表达。与对照比较,矽肺大鼠肺内PDGF及其受体蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白以及磷酸化-ERK1/2蛋白表达均增强,而AcSDKP治疗组则见上述蛋白表达减弱;在培养的肺成纤维细胞,PDGF能够刺激其Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达增加,同时上调磷酸化-ERK1/2蛋白的表达,而AcSDKP则显示出与PD98059(细胞外信号调节激酶通路特异性抑制剂)相同的作用,即能够抑制PDGF刺激成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达和上调磷酸化-ERK1/2蛋白表达...     

实验性矽肺大鼠肺组织中Th1/Th2型细胞因子动态变化

目的检测Th1/Th2型细胞因子在实验性矽肺大鼠肺组织中的动态表达水平。方法将SPF级成年雄性SD大鼠随机分为染尘组和对照组,每组42只。模型组采用非气管暴露法一次性注入1 m L二氧化硅悬液(100 mg/m L)建立大鼠矽肺模型,对照组气管内注入等量灭菌生理盐水。分别在染尘第1天、1周、2周、3周、6周、9周和12周各处死6只大鼠,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素18(IL-18)、白介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)及IFN-γ/IL-4的表达水平。结果染尘组TNF-α表达量均高于对照组(P0.05);染尘组IFN-γ在染尘第1天~2周表达量高于对照组(P0.05);染尘组IL-18表达量均高于对照组,差异无统计学意义;染尘组IL-4在染尘第1周表达量低于对照组(P0.05),第9周及12周高于对照组(P0.05);染尘组IL-10在染尘第6~9周表达量高于对照组(P0.05);染尘组Th1/Th2比值随染尘时间增长而降低,染尘组Th1/Th2在染尘第1天~2周比值高于对照组(P0.05)。结论在矽肺的发生发展过程中细胞因子发生变化:Th1型细胞因子持续高表达,Th2型细胞因子表达量先降低后升高。     

姜黄素对矽肺大鼠肺组织水通道蛋白-1表达影响

目的 探讨姜黄素对矽肺大鼠肺组织水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响及意义.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、生理氯化钠溶液组、矽肺模型组、姜黄素组和溶剂对照组.后3组均一次性气管内给予质量浓度为50 g/L的矽尘混悬液1 ml,生理氯化钠溶液组一次性气管内注入等体积的生理氯化钠溶液.染尘第2天,姜黄素组给予质量浓度为20 g/L姜黄素300 mg·kg-1·d-1(0.5％羧甲基纤维素钠溶解),溶剂对照组给予质量分数为0.5％羧甲基纤维素钠15ml·kg-·d-1.于第29天处死动物,采用免疫组织化学、免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠肺组织AQP-1及mRNA表达.结果 矽肺模型组、溶剂对照组肺组织中AQP-1表达较正常对照组和生理氯化钠溶液组减低(P＜0.05),姜黄素组肺组织AQP-1表达较矽肺模型组增强(P＜0.05).结论 姜黄素可使大鼠矽肺模型肺组织中AQP-1表达增强,提示姜黄素可能通过影响AQP-1的表达,在矽肺的发病过程中具有一定的保护作用.     

染矽尘大鼠早期肺组织病理变化观察

目的探讨大鼠染矽尘早期肺组织病理改变。方法 Wistar大鼠随机分为对照组和15、30、60mg/ml染矽尘实验组,每组42只。一次性气管内注入染尘建立大鼠矽肺模型,每组分6个时间点(1、3、7、14、21、28d)分别取7只大鼠处死,取肺脏称重,福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,普通光镜下观察肺组织病理变化。结果各剂量染尘大鼠各时间点肺组织脏器系数均高于对照组(P<0.05),且随时间延长和染尘剂量增加其增高幅度增大(P<0.05);肺组织肉眼观察可见,随着染尘时间的延长,肺表面逐渐出现颜色变深、体积增大、不规则斑块增多、弹性减弱等症状;HE染色显示,大鼠染尘后28d内,肺组织以炎症反应为主伴发肺间质的弥漫性纤维化。实验大鼠炎症反应程度随染尘剂量的增加加重,在染尘后7～14d肺组织的炎症反应比较明显。肺间质纤维化程度随实验时间的延长及染尘剂量的增加有逐渐加重的趋势。结论矽肺早期炎症反应明显,主要表现为细胞浸润聚集,肺泡间隔增厚,纤维组织增生,肺泡正常组织发生改变。     

AcSDKP对大鼠矽肺纤维化转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的抑制

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 将大鼠随机分为6组.每组10只.对照组大鼠支气管内灌注1.0 ml生理盐水,矽肺模型对照1组4周后处死,矽肺模型对照2组8周后处死;矽肺模型组大鼠予SiO2混悬液50 mg/ml,矽肺模型1组4周后处死,矽肺模型2组8周后处死;抗纤维化治疗组(治疗组):支气管内灌注SiO2混悬液50mg/ml,4周后给予AcSDKP 800 μg/(kg·d),至第8周处死;预防治疗组给予AcSDKP800μg(kg·d)48h后,支气管内灌注SiO2混悬液50mg/ml,8周后处死.HE染色进行形态学观察;采用免疫组织化学法检测TGF-β1与CTGF的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1与CTGF的mRNA表达.结果 治疗组TGF-β2及CTGF蛋白表达分别为0.244±0.016、0.241±0.017,明显低于矽肺模型1组和矽肺模型2组;治疗组TGF-β1 mRNA及CTGF mRNA表达水平明显低于矽肺模型1组和矽肺模型2组,差异均有统计学意义(P<0.05);预防治疗组TGF-β1和CTGF蛋白表达和mRNA表达水平明显低于矽肺模型2组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AcSDKP能减轻实验性矽肺纤维化大鼠肺组织中的TGF-β1与CTGF表达水平.     

血红素加氧酶-1在大鼠矽肺纤维化中的作用

目的观察血红素加氧酶-1在大鼠矽肺纤维化中的作用。方法 Wistar大鼠60只,随机分为4组,分别为对照组(A组)和染尘模型组(B组)、B组+HO-1抑制剂(锌原卟啉)组(C组)、B组+HO-1诱导剂(钴原卟啉)组(D组)。采用气管暴露法滴注二氧化硅悬液制造大鼠矽肺模型。C、D组分别腹腔注射锌原卟啉12.5 mg/kg、钴原卟啉5 mg/kg,隔日一次,连续4周后,取肺,HE染色观察各组肺组织病理结构,Western blot检测各组肺组织HO-1蛋白含量,荧光定量PCR检测各组肺组织HO-1mRNA的表达。结果与对照组比较,B组出现典型的矽肺纤维化的病理改变,C组较B组加重,D组较B组改善;对照组中HO-1蛋白表达明显低于其他各组(P0.05),抑制剂C组较B组HO-1蛋白表达明显降低,而诱导剂D组较B组HO-1蛋白表达量明显升高(P0.05)。RT-PCR检测A、B、C、D组HO-1 mRNA相对表达量分别为1、2.25±0.38、1.81±0.74、7.75±0.56,抑制剂C组较B组表达明显降低,而诱导剂D组较B组表达显著升高(P0.05)。结论 HO-1参与了大鼠矽肺纤维化的形成过程,通过对其干预可以改变大鼠矽肺纤维化的程度,可为矽肺纤维化的诊断与治疗提供新途径。     

水通道蛋白1在矽肺大鼠肺组织中的表达及意义初探

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在矽肺肺组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot等方法检测矽肺模型大鼠肺组织AQP1分布及表达。结果正常对照组和生理盐水组大鼠肺组织中AQP1表达差异无统计学意义,矽肺模型大鼠肺组织中AQP1表达较正常对照组和生理盐水组减低。结论矽肺模型大鼠肺组织中AQP1表达降低,提示AQP1可能在矽肺的发病过程中具有一定的作用。     

乙酰化微管蛋白在矽肺成纤维细胞中定位及表达变化

目的观察乙酰化微管蛋白α(Ac-tubulinα)在矽肺纤维化的成纤维细胞中的定位及表达变化。方法 (1)采用典型抽样方法,选取22例煤工尘肺尸检病例病变肺组织为煤工尘肺组,以其临近较为正常肺组织为对照组。(2)将无特定病原体级雄性大鼠随机分为对照组和5个染尘组,每组10只。采用动式吸入染尘方法,染尘组大鼠以质量浓度为2 000 mg/m~3游离二氧化硅粉尘分别染尘2、4、8、12、16周,对照组大鼠不予染尘。(3)采用贴壁法原代培养大鼠肺成纤维细胞,予浓度为100 nmol/L的血管紧张素(Ang)Ⅱ分别诱导刺激0、5、15、30 min和1、3、6、12、24、48 h。(4)采用免疫组织化学法检测Ac-tubulinα和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,免疫荧光染色法观察Ac-tubulinα/Vimentin和Ac-tubulinα/α-SMA的表达,免疫印迹法检测Ac-tubulinα和α-SMA蛋白的相对表达水平。结果与对照组比较,煤工尘肺组病例肺组织中Ac-tubulinα表达阳性率下调(P0.01),α-SMA表达阳性率上调(P0.01)。免疫荧光染色结果显示,煤工尘肺组病例肺组织纤维化病变区域Vimentin阳性表达明显增强,Ac-tubulinα表达缺失;对照组正常肺组织中存在Ac-tubulinα和Vimentin共表达。动物实验结果显示,随染尘时间的增加,大鼠肺组织Ac-tubulinα表达量逐渐下调(P0.01),α-SMA表达量逐渐上调(P0.01)。采用AngⅡ诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,随诱导时间的增加,成纤维细胞中Ac-tubulinα表达量逐渐下调(P0.05),α-SMA表达量逐渐上调(P0.05)。结论 Ac-tubulinα的缺失表达可能参与了矽肺纤维化的发生与发展。     

染矽尘大鼠肺组织纤维化及自噬相关蛋白的变化

目的 探讨游离二氧化硅(SiO2)粉尘暴露大鼠肺组织不同时间点自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(Microtubules associated protein 1 light chain 3,LC3)和酵母自噬相关基因6(Beclin1)的变化。 方法 将72只无特定病原体级(SPF)Wistar雄性大鼠随机分为溶剂对照组和SiO2模型组,模型组大鼠采用非暴露式气管滴注法一次性给予SiO2悬浮液建立矽肺模型,溶剂对照组大鼠给予等量生理盐水。造模后两组分别于1、7、14、21、28、60 d处死6只大鼠,用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察两组大鼠不同时间点肺组织常规病理变化和纤维化程度;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织匀浆中转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-1和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;用Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白LC3和Beclin1的相对表达水平。 结果 HE染色结果显示,模型组大鼠肺组织在第1天至第60天持续存在炎性反应,炎性评分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson染色观察结果显示,模型组大鼠肺组织从第14天开始出现少量胶原纤维增生,至第60天可见大量胶原纤维,纤维化评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组大鼠肺组织未见胶原纤维增生。ELISA法测定结果显示,模型组大鼠在染尘后各时间点肺组织匀浆中IL-1、TNF-α和TGF-β的含量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,模型组大鼠肺组织Beclin1蛋白表达水平在第7、14、21、28和60天时呈下降趋势,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠肺组织LC3II/LC3I的比值在第1、7、14、21、28和60天时呈下降趋势,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 游离SiO2粉尘致大鼠矽肺发病过程中,自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达水平与矽肺的不同发展阶段有关。在大鼠染矽尘早期,肺组织以炎性变化为主;随着染矽尘大鼠纤维化程度的加重。     

抗纤维化短肽对大鼠矽肺纤维化MCP-1、ED-1表达的影响

目的探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、ED-1表达的影响在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法气管内灌尘法制作大鼠矽肺纤维化动物模型,实验大鼠随机分为6组,包括:对照1组,对照2组和矽肺模型1组,矽肺模型2组,矽肺抗纤维化治疗组,矽肺预防治疗组。采用HE染色对矽肺纤维化病变及其变化特点进行形态学观察;采用羟脯氨酸法对矽肺大鼠肺内胶原含量进行检测;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织中MCP-1的表达与巨噬细胞(ED-1阳性)的数量。结果抗纤维化治疗组与矽肺模型1组与2组相比,矽结节面积下降到84.28%和67.93%,羟脯氨酸含量下降到70.89%和58.18%,MCP-1蛋白表达下降到82.3%和84.1%,MCP-1阳性细胞数下降到67.4%和72.5%,ED-1蛋白表达下降到78.7%和79.3%,ED-1阳性细胞数下降到54.4%和66.8%;预防治疗组与矽肺模型2组相比,矽结节面积下降到61.13%,羟脯氨酸含量下降到60.27%,MCP-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到85.2%和86.3%,ED-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到87.2%和74.9%。结论AcSDKP具有拮抗矽肺纤维化的作用,这可能与其抑制巨噬细胞在肺内的浸润、聚集,减轻了尘性肺泡炎的程度相关。     

姜黄素对矽肺大鼠肺组织PDGF及ERK1/2表达的影响

将雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、生理氯化钠溶液组、模型组、溶剂对照组、姜黄素组。采用免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组大鼠肺组织的血小板源性生长因子(PDGF)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白及mRNA表达。结果显示,矽肺模型组、溶剂对照组大鼠肺组织中PDGF、p-ERK1/2蛋白及mRNA表达较正常对照组和生理氯化钠溶液组增高(P0.05),姜黄素组大鼠肺组织PDGF、p-ERK1/2蛋白及mRNA表达较模型组降低(P0.05)。提示姜黄素可降低矽肺模型组大鼠肺组织中PDGF、p-ERK1/2蛋白及mRNA表达,并可能通过影响PDGF、p-ERK1/2的表达在矽肺发病中起到一定的保护作用。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对矽肺大鼠蛋白激酶B通路调节与作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过血小板源性生长因子(PDGF)及其受体介导的蛋白激酶B(AKT)通路的调节进而发挥其抗矽肺纤维化的作用。方法选用气管内灌注法制作大鼠矽肺模型,将其分为对照组(4周组和8周组)、矽肺模型组(4周组和8周组)、AcSDKP治疗组(抗纤维化治疗组和预防治疗组)。采用羟脯氨酸法分析肺组织中总胶原蛋白水平。免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内PDGF及其受体、AKT、磷酸化AKT、c-myc蛋白、磷酸化-糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的表达。结果 AcSDKP治疗组胶原水平低于相对应的矽肺模型组。与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内PDGF及其受体、磷酸化AKT、c-myc蛋白表达均增加(P<0.05);而磷酸化GSK3β的表达无明显变化。与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内PDGF及其受体、磷酸化AKT、c-myc蛋白表达均明显降低(P<0.05)。而各组间比较AKT蛋白表达无明显改变。结论 AcSDKP可能通过阻断PDGF及其受体介导的AKT和c-myc途径,抑制矽肺组织间质细胞的增生,减少其胶原的合成,发挥抗矽...     

PI3K/Akt通路在大鼠矽肺纤维化中的作用研究

探讨PI3K/Akt通路在大鼠矽肺纤维化过程中的作用。将SD雄性大鼠75只均分成3组,矽肺组大鼠以非暴露式气管内注入50 mg/m l二氧化硅混悬液1 m l建立矽肺模型,于染尘3、7、14、21和28 d分别股动脉放血处死各组5只大鼠,取肺组织进行病理观察及总RNA和蛋白的提取,分别采用RT-PCR及WB检测PI3K、AktmRNA及p-Akt的表达变化。染尘3 d后肺组织出现炎性反应,7 d后见细胞性结节并进行性加重。PI3K、AktmRNA和p-Akt蛋白随着染尘时间延长有不同程度变化,但统计学差异不显著。提示PI3K/Akt通路可能在大鼠矽肺纤维化中发挥作用,但发挥作用的时间段有待进一步探讨。     

大鼠肝纤维化复合模型的建立及动态观察

目的:采用复合因素建立大鼠肝纤维化模型,并对其肝脏纤维化病变和相关指标进行动态观察。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组和肝纤维化模型组,模型组大鼠每周2次乙醇灌胃、猪血清腹腔注射、CCl4葵花仔油溶液皮下注射,同时每日喂饲高脂饲料进行联合造模。分别在造模后第2、4、6、7、8、9、10周检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9、MMP-13)及其抑制物(TIMP1、TIMP-2)水平,并观察肝脏病理病变。结果:从第2周起,模型组大鼠血清ALT、AST水平开始升高,各时间点与对照组比较均具有显著性差别;血清HA和LN水平逐渐增高,第7~10周与对照组比较均具有显著性差别;血清MMP-2水平逐步升高,第4、6~10周与对照组相比均具有显著性差别;血清MMP-13水平从第6周起逐渐降低,第9和10周时显著低于对照组;血清TIMP-1和TIMP-2水平随造模时间延长逐步升高,TIMP-1在第4,6~10周与对照组相比均具有显著性差别,TIMP-2在第7~10周显著高于对照组;模型组大鼠各时间点血清TGF-β1水平均显著高于对照组。病理组织学检查显示,第6周时,模型组大鼠肝脏细胞广泛性空泡变性,汇管区成纤维细胞增生,肝小叶间隔可见胶原纤维沉积,出现典型的肝纤维化改变;到第8周时,形成典型的假小叶,肝硬化形成。结论:采用酒精灌胃,猪血清腹腔注射,喂饲高脂饲料,并结合CCl4皮下注射6周后,可成功建立大鼠肝纤维化模型;HA、LN、TGF-β1、MMP-2、TIMP-1和TIMP-2等可作为较好反映大鼠肝纤维化病变的无创伤化血清学指标。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抗大鼠矽肺纤维化的实验研究

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化的拈抗作用.方法 实验大鼠随机分为6组,每组10只.矽肺模型对照1组:支气管内灌注生理盐水1ml/只,4周后处死;矽肺模型对照2组:支气管内灌注生理盐水1ml/只,8周后处死;矽肺模型1组:支气管内灌注二氧化硅混悬液1ml/只(每ml含SiO250mg),4周后处死;矽肺模型2组:支气管内灌注二氧化硅混悬液1ml/只,8周后处死;矽肺抗纤维化治疗组:支气管内灌注二氧化硅混悬液1ml/只,4周后给予AcSDKP 800μg/(kg·d),并持续至第8周处死;矽肺纤维化防治组:给予AcSDKP 800 μg/(kg·d)48h后,支气管内灌注二氧化硅混悬液1ml/只,8周后处死.采用HE和VG染色对矽肺纤维化病变及其变化特点进行形态学观察.采用羟脯氨酸测定法和Western blot法对矽肺大鼠肺内胶原含量及其I型与Ⅲ型胶原的表达进行检测.结果 抗纤维化治疗组与矽肺模型1组及模型2组相比,矽结节面积下降到84.28%和67.93%,羟脯氨酸含量下降到70.89%和58.18%,Ⅰ型胶原表达量下降到71.08%和58.13%,Ⅲ型胶原表达量下降到80.13%和70.70%,差异均有统计学意义(P＜0.05);预防治疗组与矽肺模型2组相比,矽结节面积下降到61.13%,羟脯氨酸含量下降到60.27%,Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达量分别下降到40.13%和65.77%,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AcSDKP对二氧化硅刺激的大鼠矽肺纤维化有一定的拮抗作用.