两株形态不同脓肿分枝杆菌的鉴定与分析

分析比较临床1例重症肺炎患者痰标本培养出的平滑型脓肿分枝杆菌（Mab S）和粗糙型脓肿分枝杆菌（Mab R）,并进行药敏试验研究,为临床诊断治疗提供科学依据。对Mab S和Mab R进行菌体形态观察、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和16S r...     

10株蜃楼弗朗西斯菌的鉴定与特征分析

目的对10株蜃楼弗朗西斯菌样细菌进行菌种鉴定和特征分析。方法对环境水源及临床患者样本中分离的10株实验菌株,进行菌体形态和生长特征观察、生化表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rRNA测序分析。E-test方法检测菌株对各种药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果该10株菌均为着色较淡的革兰阴性小球杆菌;尿素酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、V因子和X因子需求试验阴性,氧化酶和触酶试验阳性;在M-H平板和麦康凯平板上不生长,血平板、巧克力平板和BCYE平板上生长迅速,可形成白色不透明型、无色透明型和灰色光滑型,直径约2 mm大小的菌落。16S rRNA基因测序显示,该10株菌与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015同源性在99.6%以上,系统发育分析亦位于同一个分枝上。MALDI-TOF MS分析显示,该10株均含有6 153 m/z、5 180 m/z、7 757 m/z和9 392 m/z等特征峰,与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015类似。采用Vitek 2 GN卡及NH卡、API 20NE及NH试条则可能错误鉴定为少动鞘氨醇单胞菌、灰色奈瑟菌、气味黄杆菌和嗜血杆菌等。药敏试验显示,对氯霉素、多西环素、庆大霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星等均敏感。结论该10株菌可鉴定为蜃楼弗朗西斯菌,其生化反应不活泼,常规方法鉴定会发生错误,应予以重视。     

MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的实验条件优化

目的 构建用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定马尔尼菲篮状菌的数据库,并探索用于MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的最佳培养条件和前处理方法 .方法 利用8株马尔尼菲篮状菌构建自建数据库,比较不同培养基[沙保弱葡萄糖琼脂培养基(SDA)、沙氏葡萄糖肉汤培养基(SDB)]、培养...     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定布鲁菌1例

正布鲁菌病(布病,brucellosis)又称波浪热或马耳他热等,是由布鲁菌引起的人畜共患的烈性传染病,主要以牛、羊、猪为传染源。布鲁菌可通过皮肤、呼吸道、消化道进入人体引起感染,以长期发热、多汗、关节痛及全身乏力、疼痛为主要特征。该病以往多见于牧区,近年来散发于大中城市,以青壮年为主。我院近期从1例来自山西的反复发热的患儿血培     

百日咳鲍特菌MALDI-TOF MS谱库的扩展及鉴定效果评价

目的对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定百日咳鲍特菌谱库进行扩展。方法采用Microflex LT软件,用经全基因组测序确认的9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌构建蛋白质指纹谱库,对布鲁克数据库进行扩展。对标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853进行MALDI-TOF MS鉴定,评价扩展库的准确性。选取6株百日咳鲍特菌,每个菌株取3个菌落分别用MALDI-TOF MS鉴定,评价试验的精密度。采用36株临床分离株验证扩展谱库对百日咳鲍特菌的识别能力,并进行扩展库前后鉴定结果比较。结果成功构建9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌参考谱库,并扩展现有布鲁克数据库Taxonomy(5989)数据库为Taxonomy(5989+)。扩展库准确鉴定4株标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853,对鲍特菌鉴定无干扰;6株百日咳鲍特菌的重复鉴定符合率为100%,精密度良好。用于外部验证的36株菌经扩展后数据库鉴定,种水平鉴定率达86.1%。结论百日咳鲍特菌质谱库的扩展提升了地区性分离菌株鉴定能力。     

脓性渗出物中老兵诺卡菌的分离鉴定及文献复习

目的 通过对临床分离老兵诺卡菌(Nocardia veterana,N.veterana)的培养鉴定、药敏分析及相关文献复习,为实验室对该菌感染的识别提供参考.方法 分析分离菌培养特性、镜下形态及生化反应;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和16S rRNA测序分析对分离菌进行鉴定,采用Me...     

VITEK MS质谱仪错误鉴定福氏志贺菌1例

目的了解VITEK MS对1株从血培养分离的福氏志贺菌的鉴定能力。方法采用VITEK MS、Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪、血清凝集试验及16S rRNA基因测序进行鉴定;采用VITEK MS分别对福氏志贺菌临床株、福氏志贺菌CMCC51572、大肠埃希菌ATCC8739进行质谱鉴定及蛋白质谱图比较分析。结果 VITEK MS鉴定为大肠埃希菌,可信度为99.9%;Vitek 2 Compact鉴定为志贺菌属,可信度为89.0%;血清学结果为福氏志贺菌3a型;16S rRNA基因测序为志贺菌、福氏志贺菌1a、福氏志贺菌2a、大肠埃希菌,序列同源性达97%以上;福氏志贺菌临床株、福氏志贺菌CMCC51572、大肠埃希菌ATCC8739的蛋白质谱图相似。结论志贺菌和大肠埃希菌在基因角度上符合同一个种,VITEK MS不能区分志贺菌和大肠埃希菌,需要附加生化反应、科玛嘉尿道定位显色培养及血清学试验进行志贺菌的排除。     

渗透压选择性裂解法在MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本中的应用

摘要：目的?采用渗透压选择性裂解法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养瓶中病原菌，为临床早期诊断和治疗提供可靠依据。方法?收集2018年12月至2019年3月杭州迪安医学检验中心微生物室送检的阳性血培养瓶179例，采用渗透压选择性裂解法直接进行MALDI-TOF MS检测。结果?血培养阳性标本经裂解离心、甲酸萃取后得到的谱峰丰度最高，鉴定分值最优；174份单种菌血培养的种、属水平鉴定的符合率分别是67.8%(118/174)、85.1%(148/174)。革兰阴性杆菌的种、属水平鉴定的符合率是74.7%(62/83)、91.6%(76/83)，革兰阳性球菌的种、属水平的鉴定符合率是69.4%(50/72)、80.6%(58/72)，革兰阳性杆菌鉴定种水平的准确率显著低于革兰阴性杆菌(P<0.05)和革兰阳性球菌(P<0.05)。结论?MALDI-TOF MS采用渗透压裂解法对血培养阳性标本直接鉴定，具有简单、快速的优点，但其对菌种鉴定的准确性以及前处理步骤优化方面仍然需要进一步研究。     

丝状真菌的快速鉴定及药敏试验

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在丝状真菌鉴定中的作用,分析常用抗菌药物对丝状真菌的药敏试验结果。方法收集100株丝状真菌,采用MALDI-TOF MS进行快速鉴定,并与显微镜检查结果进行比对;用E-test法进行丝状真菌药敏试验。结果 MALDI-TOF MS对100株丝状真菌鉴定达到种鉴定水平的有61株(得分≥2.000),达到属鉴定水平的有36株(1.700~1.999),未能鉴定的有3株(1.700);与镜检结果不一致的有1株。两性霉素B对絮状表皮癣菌的90%最低抑菌浓度(MIC_(90))为0.19μg/m L,而对黄曲霉的MIC_(90)32μg/m L。伊曲康唑对断发毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮癣菌的MIC_(90)均0.38μg/m L,而对黑曲霉的MIC_(90)32μg/m L。氟康唑对大部分受试菌株的MIC_(90)均256μg/m L。伏立康唑和卡泊芬净对烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、红色毛癣菌、断发毛癣菌和犬小孢子菌的MIC_(90)分别≤0.38μg/m L和≤1μg/m L。结论 MALDI-TOF MS技术可快速、准确、高通量检测临床分离的丝状真菌。伏立康唑和卡泊芬净对丝状真菌具有较好的抗菌活性。     

人源猪链球菌19株分离鉴定及毒力基因检测

目的检测广西右江民族医学院附属医院2015-2019年临床分离的猪链球菌对常用抗生素耐药性及毒力基因,了解该地区猪链球菌对常用抗生素耐药性及分子流行病学特征。方法收集2015-2019年临床分离的猪链球菌19株,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对其进行鉴定,参照CLSI推荐的微量肉汤稀释法测定猪链球菌对常用8种抗生素的敏感性,同时检测其种特异性基因16S rDNA及cps2J、mrp、ef、orf2、fbps、gapdh 6个毒力基因携带情况。结果19株菌株经MALDI-TOF MS鉴定均为猪链球菌,鉴定正确率均在99%以上。药敏试验结果显示这19株菌株对青霉素的敏感率为68.5%,对氨苄西林、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松和万古霉素均100%敏感,对红霉素和克林霉素100%耐药。毒力基因检测结果显示该地区流行的猪链球菌主要基因型以cps2J、mrp、ef、orf2、fbps、gapdh型为主。所有的分离株均携带了ef和fbps毒力基因。结论及时掌握该地区致病性猪链球菌对常用抗生素的耐药性及其毒力因子的流行病学,对于预防和控制大规模暴发猪链球菌感染具有参考意义。     

MALDI-TOF-MS鉴定丝状真菌研究进展

正近年来,丝状真菌感染的发病率和病死率逐渐增高,研究表明抗真菌治疗延迟与病死率升高密切相关,因此,快速、准确鉴定至种水平越来越必要[1]。目前形态学鉴定是丝状真菌鉴定最广泛的方法。该方法鉴定率低,鉴定时间长,需4~5d时间,易延误临床的诊断和治疗;由于菌株表型特征多变,易受到实验室人员个人经验的影响:裂褶菌、尖端赛多孢子菌组织形态学与曲霉属、镰刀菌非常相似,仅靠组织形态学很难区别开[2]。用真菌通用引物Its1和Its4进行聚合酶链反应扩增结合DNA测序对丝状真菌进行鉴定,是目前公认的金标准,但操作繁琐,前处理需1h,鉴定需24~48h,对操作人员要求高,     

血培养阳性样本快速菌种鉴定和药物敏感性分析

目的 分析分离胶离心富集和5 h培养2种前处理方法在血培养阳性样本快速菌种鉴定和快速药物敏感性分析中的临床应用价值。方法 收集2021年10月—2022年10月宁波大学附属第一医院报阳的血培养样本211例,分别采用分离胶离心富集和5 h培养（快速方法）,以及12 h培养（标准方法）3种方法进行前处理。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS,简称MS）对3种方法处理的血培养阳性样本进行快速菌种鉴定。采用自动化鉴定药敏仪对156例需氧瓶报阳血培养样本进行药物敏感性试验。以常规培养（18～24 h）+MS鉴定结果为标准,比较5 h培养+MS和分离胶离心富集+MS 2种快速方法菌株鉴定准确率。以培养24 h后仪器法药物敏感性试验结果为标准,判断5 h培养和分离胶离心富集后仪器法药物敏感性试验结果与标准方法的一致率。结果 2种快速方法鉴定准确率最高的菌种为粪肠球菌,分别为100.00%、87.50%;5h培养+MS对链球菌属的鉴定准确率较低（33.33%）。2种快速方法对肠杆菌科和非发酵菌的药物敏感性分析结果与标准培养+MS的药物敏感性分析结果一致性分别超过73.00%和...     

长孢洛德酵母菌致腹膜炎1例及生物学特性分析

目的通过分离自临床透析液标本的长孢洛德酵母菌的培养鉴定、药敏分析及对其临床意义的探讨,提高实验室对该菌的识别能力及临床对该菌感染的重视度。方法分析长孢洛德酵母菌生物学特性变化并与5种常见酵母菌(白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、东方伊萨酵母、近平滑念珠菌)进行比较;用Vitek 2、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)以及测序分析对分离菌进行鉴定;用菌株自建库绘制聚类树状图,分析与常见5种酵母菌菌株的关系;用微量肉汤稀释法检测抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果长孢洛德酵母菌培养24～96 h后在PDA及血平板上均呈白色光滑菌落,24 h科玛嘉显色平板上未显色,48～96 h逐渐显色最终呈现蓝绿色菌落。Vitek 2鉴定分离菌结果为无名念珠菌,MALDI-TOF MS和基因测序均鉴定为长孢洛德酵母菌。长孢洛德酵母菌与其他5种酵母菌的MSP聚类分析结果显示长孢洛德酵母菌与近平滑念珠菌在同一个分类中。药敏试验结果显示其对常见抗真菌药物的MIC值均较低。结论长孢洛德酵母菌的临床分离率较低,报道的病例较少,提高微生物实验室对该菌的识别能力和临床对该菌感染的重视度十分重...     

3种方法对曲霉菌鉴定结果对比研究

目的 对传统手工法、分子测序、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)3种鉴定方法进行比较,建立一套适合该实验室的快速准确的丝状真菌鉴定标准操作流程。方法 收集2020年1月至2021年3月于重庆医科大学附属第二医院住院患者的56株曲霉菌株,分别采用上述3种鉴定方法对菌株进行鉴定,比较鉴定准确率;比较传统甲酸乙腈萃取法与改良锆珠甲酸乙腈法两种前处理方法对质谱鉴定能力的影响;比较曲霉菌不同培养基及培养天数对质谱鉴定能力的影响。结果 以分子测序为金标准,传统手工法鉴定准确率为57.1%(32/56),MALDI-TOF MS鉴定准确率为92.9%(52/56);菌丝在锆珠中震荡研磨后,再进行甲酸乙腈萃取获得的质谱鉴定能力更佳;曲霉菌用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养3 d和5 d时,质谱鉴定准确率最高,分别为73.2%和75.0%。结论 MALDI-TOF MS操作简便、快速,且准确性高。曲霉菌用PDA液体水平振摇培养后,使用锆珠甲酸乙腈法前处理,进行质谱鉴定可获得较理想的鉴定效果和蛋白图谱质量,适合常规实验室曲霉菌的质谱鉴定。     

MALDI-TOF-MS技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用研究

目的 探究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用.方法 收集2019年1-12月该院临床标本中分离培养的230株常见丝状真菌,行MALDI-TOF-MS技术鉴定,并与传统形态学及DNA基因测序结果进行综合对比,评价MALDI-TOF-MS技术在丝状真菌鉴定中的能力...     

梅里埃MALDI-TOF-MS 系统与VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定仪对临床常见病原菌鉴定的一致性分析

目的　分析梅里埃基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flightmass spectrometry,MALDI-TOF-MS）系统与VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定仪对临床常见病原菌鉴定的一致性。方法　收集福建医科大学孟超肝胆医院2018 年6 月~ 2019 年3 月来自临床不同标本分离的非重复菌株300 株,分别采用梅里埃MALDI-TOF-MS 系统和VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定仪对病原菌进行鉴定,结果不一致菌株采用16SrDNA 基因测序予以确认,比较两种鉴定方法的准确性与一致性,评估两种方法在鉴定16 株大肠埃希菌的时间和经济成本。结果　300 株临床分离菌中,鉴定到种水平的菌株MALDI-TOF-MS 有268 株(89.33%),VITEK 2 Compact 有266 株(88.67%);鉴定到属水平的菌株MALDI-TOF-MS 有297 株(99.00%),VITEK 2 Compact 有297 株(99.00%);两种方法在种属鉴定的一致性分别为82.67% 与98.33%,MALDI-TOF-MS 的准确性略高于VITEK 2 Compact。两种方法鉴定不一致菌株有39 株(13.00%),与16SrDNA 测序鉴定结果相比,MALDI-TOF MS 的准确率(79.49%) 高于VITEK 2Compact(58.97%)。对16 株大肠埃希菌的鉴定,MALDI-TOF-MS 耗时较VITEK 2 Compact 少3.5h,且成本仅为VITEK2 Compact 的2/5。结论　MALDI-TOF MS 与VITEK 2 Compact 对于临床常见病原菌的鉴定结果较为一致,但MALDITOFMS 准确率更高,且更快速与经济。     

4种不同方法用于院内感染肺炎克雷伯菌菌株同源性分析的价值比较

目的比较不同同源性方法对暴发感染的菌株进行同源性分析的价值。方法用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对福建省立医院儿科ICU 1个月内7名新生儿患者检出的15株肺炎克雷伯菌进行同源性分析,并用多位点序列分析(MLST)进行菌株ST分型。结果15株肺炎克雷伯菌经ERIC-PCR分为a类(7株)、b类(7株)和c类(1株); PFGE分为A类(7株)、B类(1株)和C类(7株); MALDI-TOF MS分为Ⅰ类(7株)、Ⅱ类(7株)和Ⅲ类(1株); MLST将菌株分为3个ST型:ST37(7株)、新型ST3006(7株)(gap A 69,inf B 19,mdh 90,pgi 20,pho E 125,rpo B 18,新型ton B 406)和ST1224(1株)。结论 MALDI-TOF MS可用于院内感染肺炎克雷伯菌菌株的同源性分析,与ERIC-PCR、PFGE和MLST方法一致性较好,并具有便捷、快速等特点。     

不同培养条件下丝状真菌 Ｖｉｔｅｋ 质谱鉴定结果分析

摘要：目的 以生物梅里埃质谱仪（Ｖｉｔｅｋ ＭＳ）为技术平台，探讨不同培养温度、培养基、培养时间下对基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳ）鉴定丝状真菌能力的影响。方法 将 １４８ 株临床分离的丝状真菌分别接种于沙氏葡萄糖培 养基（ＳＤＡ）与马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ），并分别放置于 ２８ ℃ 与 ３７ ℃ 两种不同温度条件下，培养至第 ２、３、４、５、６、７、８、 ９ 天进行 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳ 鉴定，统计其鉴定情况，筛选适合质谱鉴定的最佳培养条件。结果 ４ 种培养条件下（ＳＤＡ ２８ ℃ 、 ＳＤＡ ３７ ℃ 、ＰＤＡ ２８ ℃ 和 ＰＤＡ ３７ ℃ ）的鉴定率分别为 ８３．１１％、８１．７６％、７０．９５％、６９．６０％，总体差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），４ 种培养条件两两比较，其中ＳＤＡ ２８ ℃ 组的鉴定率优于 ＰＤＡ ３７ ℃ 组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），故ＳＤＡ ２８ ℃ 组合为最适培 养条件。置 ＳＤＡ 于 ２８ ℃ 条件下，质谱对培养 ２ ～ ９ ｄ 丝状真菌的鉴定率分别为 ８９．８６％、８７．８３％、７６．３５％、６６．８９％、６２．８３％、 ６３．５１％、５９．０４％、５０．０５％，不同培养天数下的鉴定率差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），其中第 ２ 天与第 ３ 天鉴定率均较高；随着培 养时间的延长，培养第 ４～ ９ 天得到的鉴定率明显下降。结论 以 Ｖｉｔｅｋ ＭＳ 为丝状真菌鉴定平台，使用 ＳＤＡ 培养基在 ２８ ℃ 培 养 ２～ ３ ｄ 可获得较理想的鉴定率和较高质量的质谱图谱。