冰片通过下调TLR4-NF-κB通路缓解LPS诱导的BMECs损伤

目的研究冰片对脂多糖（LPS）引发脑微血管内皮细胞（BMECs）损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的生成,DCFH-DA探针检测ROS含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、p-p65、p65、p-IκBα和IκBα的表达。结果冰片剂量优化结果表明其在10 mg·L^-1和20 mg·L^-1具有良好的剂量-效应依赖性。以它们为低、高剂量,发现冰片可显著减少TNF-α、IL-6和IL-8的分泌和ROS的生成,降低凋亡细胞百分率,减少TLR4、p-p65和IκBα的表达,并增加p65和p-IκBα的表达。结论冰片可通过下调TLR4-NF-κB通路缓解BMECs的炎症反应,进而减少大脑损伤。     

薄荷脑通过miR-1247-3p/PI3K/Akt通路影响LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的：探讨薄荷脑对脂多糖（LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮（AT-Ⅱ）细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法：以5、10、15 mg/L的LPS处理AT-Ⅱ细胞，CCK-8法检测细胞活性；将AT-Ⅱ细胞随机分为对照（NC）组、15 mg/L LPS组、1、5、10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、anti-miR-NC+15 mg/L LPS组、anti-miR-1247-3p+15 mg/L LPS组、miR-NC+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、miR-1247-3p+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组；采用流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平；Western blot检测蛋白表达；RT-qPCR检测miR-1247-3p表达水平。结果：不同浓度LPS处理后AT-Ⅱ细胞活性降低（P<0.05）。LPS诱导的AT-Ⅱ细胞中Cleaved-caspase-3表达水平及细胞凋亡率升高，TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高，miR-1247-3p表达水平升高，p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低（P...     

依托咪酯通过促进miR-142-3p表达减轻缺氧诱导的PC12细胞神经炎症反应和细胞凋亡的分子机制研究

目的：探究依托咪酯是否通过调控miR-142-3p影响缺氧诱导的PC12细胞炎症反应和细胞凋亡。方法：采用不同剂量（2、6、12μmol/L）的依托咪酯预处理PC12细胞后建立缺氧模型;转染miR-142-3p模拟物或抑制剂后,采用0或12μmol/L依托咪酯预处理建立缺氧模型。采用CCK-8法、流式细胞术、Western blot分别检测细胞活性、凋亡、蛋白（CyclinD1、Cleaved-caspase-3）表达,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,RT-qPCR检测miR-142-3p表达。结果：依托咪酯提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白和miR-142-3p表达,降低细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。上调miR-142-3p可提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白表达,降低细胞凋亡率、Cleavedcaspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。下调miR-142-3p可逆转依托咪酯对...     

ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。     

白桦脂醇对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用。方法 MTT法预实验证实10μmol/L Aβ_(25-35)的浓度对细胞活力无影响,但是影响炎症因子分泌,遂以10μmol/L Aβ_(25-35)作用于BV2细胞,实验随机分为对照组、模型组、白桦脂醇5、10和20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率、Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白(NF-κB P65、IκBα、p-NF-κB P65、p-IκBα)表达水平及炎症诱导酶环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的水平,以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10水平。结果 Aβ_(25-35)浓度为10μmol/L时,对BV2细胞存活率无影响。白桦脂醇浓度在0～20μmol/L时低毒性、细胞活力无变化。白桦脂醇预处理组IκBα、NF-κB P65的蛋白表达水平升高,p-NF-κB P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著降低,COX-2、iNOS的水平显著降低,促炎因子IL-1β、TNF-α的表达降低,而抑炎因子IL-10的表达升高。结论白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的BV2细胞的炎症反应有抑制作用,通过NF-κB信号通路,抑制iNOS及COX-2蛋白表达,并抑制TNF-α和IL-1β水平,提高IL-10水平。     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠NF-κB磷酸化水平及炎症相关通路的影响北大核心CSCD

目的：探究人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及炎症相关通路的影响。方法：盲肠结扎穿孔法（CLP）构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,60只大鼠随机分为假手术（sham）组、CLP组、人参皂苷Rg1低剂量（CLP+Rg1L）组、人参皂苷Rg1中剂量（CLP+Rg1M）组、人参皂苷Rg1高剂量（CLP+Rg1H）组、瑞沙托维（CLP+TAK-242）组,每组10只。LPS构建体外脓毒症心肌细胞模型,H9C2细胞分为对照（control）组、LPS组、LPS+Rg1L组、LPS+Rg1M组、LPS+Rg1H组、LPS+TAK-242组。右颈总动脉插管法检测各组大鼠平均动脉压（MABP）、心率×左心室发展压（LVDP×HR）、左心室压力最大上升/下降速率（±dp/dtmax）水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌组织和H9C2细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清和H9C2细胞肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β含量;CCK-8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;RT-qPCR检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK） mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38MAPK、p-p38MAPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果：人参皂苷Rg1能够提高MABP、LVDP×HR、±dp/dtmax水平,降低CK、LDH、AST活力,降低cTnⅠ、TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB p65、p38MAPK mRNA与TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38MAPK、NLRP3蛋白水平（P<0.05）,促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡与炎症水平,改善心肌损伤。结论：人参皂苷Rg1能够抑制心肌组织细胞凋亡及炎症水平,提高心功能,从而减轻脓毒症所致心肌损伤,其机制可能与TLR4/NF-κB、p38MAPK信号通路有关。     

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P<0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P<...     

去氢木香内酯抑制人肝癌细胞系HepG2增殖及促凋亡

目的研究去氢木香内酯(Dehy)对人肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并对分子机制进行一定的探索。方法将HepG2细胞分为对照组、Dehy 10、20、30、40及50μmol/L组。MTT法检测细胞增殖;Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测p-IκBα、IκBα、nuclear-p65和total-p65蛋白表达。结果与对照组相比,Dehy明显呈剂量与时间依赖性抑制HepG2细胞的增殖,并显著诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05或P<0.01);p-IκBα、nuclear-p65蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),IκBα蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),而total-p65未见明显变化。结论 Dehy抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制可能与下调NF-κB通路有关。     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法 采用人SH-SY5Y细胞，设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达，Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p3...     

栀子多糖调控miR-141-3p对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨栀子多糖对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应、凋亡的影响及分子机制。方法:100 ng/ml LPS处理H9C2细胞作为LPS组,正常培养的细胞作为对照组,采用终浓度为2.5、5、10μmol/L的栀子多糖和100 ng/ml LPS共同培养的细胞作为栀子多糖低、中、高浓度组。将H9C2细胞分为LPS+Experiment-H+anti-miR-NC组、LPS+Experiment-H+anti-miR-141-3p组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1-KLF6组。ELISA检测IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Krupple样转录因子6(KLF6)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-141-3p表达;荧光素酶报告实验检测miR-141-3p和KLF6的靶向关系。结果:LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著升高,miR-141-3p表达显著降低,KLF6表达显著升高(P<0.05)。栀子多糖处理后LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著降低,miR-141-3p表达显著升高,KLF6表达显著降低(P<0.05)。抑制miR-141-3p表达和过表达KLF6逆转了栀子多糖对LPS作用的H9C2细胞凋亡和炎症因子的抑制作用。miR-141-3p可靶向调控KLF6表达。结论:栀子多糖可抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡和炎症因子释放,对LPS诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与miR-141-3p和KLF6有关。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

丙泊酚减轻低氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡

目的 研究丙泊酚是否通过抑制miR-141-3p的表达，减轻低氧诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡的分子机制。方法 将PC12细胞分为对照组、低氧组、(5、10、20)μmol/L丙泊酚+低氧组、anti-miR-con+低氧组、anti-miR-141-3p+低氧组、miR-con+20μmol/L丙泊酚+低氧组、miR-141-3p+20μmol/L丙泊酚+低氧组。流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡；Western blot检测活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达；相关试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性；活性氧荧光探针DCFH-DA法测定活性氧(ROS)含量；ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量；RT-qPCR检测miR-141-3p表达。结果 与对照组比较，低氧组PC12细胞的凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达水平、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量和miR-141-3p表达量均升高，SOD活性减弱(P<...     

LRRFIP1基因干扰对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响

目的探讨富亮氨酸重复序列相互作用蛋白1(LRRFIP1)基因对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法使用LPS处理人支气管上皮细胞株16HBE,并利用Lipofectamine 2000试剂将siLRRFIP1转染到16HBE细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LRRFIP1 mRNA表达;免疫印迹试验(Western blot)检测LRRFIP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、p65、磷酸化p65(p-p65)、IκBα和IκBα和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)水平和炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌;流式细胞术检测细胞凋亡。结果LPS诱导的16HBE细胞中L...     

丹参酮ⅡA通过miR-155-5p激活SIRT1-AMPK通路改善H9c2心肌细胞缺血/再灌注损伤

目的：探究丹参酮ⅡA(TⅡA)通过miR-155-5p激活沉默信息调节因子1(SIRT1)-腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路改善H9c2心肌细胞缺血/再灌注（I/R）损伤的机制。方法：体外培养H9c2细胞并建立I/R损伤模型,造模完成后将H9c2细胞随机分为模型组、TⅡA组、TⅡA+miR-NC组、TⅡA+miR-155-5p mimics组,转染后分别加入10μmol/L TⅡA进行干预,并以添加DMSO的H9c2细胞作为对照组。qRT-PCR检测miR-155-5p表达水平;MTT法分析细胞增殖能力;流式细胞术评估细胞凋亡情况;ELISA测定TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平;Western blot检测SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白水平。结果：与对照组相比,模型组miR-155-5p表达升高,细胞活力下降,凋亡率及TNF-α、IL-17、LDH、MDA表达升高,IL-4、IL-10、SOD、SIRT1、p-AMPK表达减少（P<0.05）;与模型组比较,TⅡA组miR-155-5p表达...     

circFADS2靶向miR-125a-5p调控MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的机制

目的：探究circFADS2靶向miR-125a-5p调控帕金森病（PD）细胞炎症反应和凋亡的机制。方法：100μmol/L MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD模型，分为Con组、PD组、PD+pcDNA组、PD+pcDNA-circFADS2组、PD+anti-miR-NC组、PD+anti-miR-125a-5p组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-NC组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-125a-5p组。qRT-PCR检测circFADS2和miR-125a-5p表达；ELISA检测IL-1β、TNF-α含量；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测circFADS2与miR-125a-5p的靶向关系。结果：与Con组相比，PD组circFADS2表达降低，miR-125a-5p表达、凋亡率、IL-1β、TNF-α含量、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达升高（P<0.05）。circFADS2过表...     

乔松素抑制人胃癌细胞系AGS增殖、迁移和侵袭

目的 探讨乔松素(pinocembrin)对人胃癌细胞系AGS增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 将AGS细胞分为不同浓度乔松素组(50、100、200和400μmol/L)、NC组、200μmol/L pinocembrin+anti-miR-NC组、200μmol/L pinocembrin+anti-miR-34a-5p组;采用CCK-8法及流式细胞测量术检测AGS细胞增殖及凋亡;采用Transwell小室法及蛋白质免疫印迹法检测AGS细胞增殖及凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-34a-5p表达水平。结果 不同浓度乔松素降低AGS细胞的增殖活性(P<0.05),且G₀/G₁期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,MMP2、MMP9、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达降低,细胞迁移和侵袭数量减少,miR-34a-5p的表达水平升高(P<0.05)。抑制miR-34a-5p表达减轻乔松素对AGS细胞增殖,迁移和侵袭的抑制作用。结论 乔松素可通过调控miR-34a-5p抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究北大核心CSCD

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。     

藁本内酯通过下调miR-292-5p表达改善氧糖剥夺对PC12细胞的促凋亡和炎症因子表达效应

目的 探讨藁本内酯对氧糖剥夺（OGD）诱导的PC12神经细胞炎症因子表达的影响及分子机制。方法 将PC12细胞缺糖缺氧处理6 h、12 h、24 h,用MTT法检测细胞存活率;将缺糖缺氧处理24 h的PC12细胞作为模型组,不处理的细胞作为对照组;用0.1、1、10μmol/L藁本内酯处理再进行缺糖缺氧,记为低、中、高剂量藁本内酯组;将miR-NC、miR-292-5p转染至PC12细胞后用1μmol/L藁本内酯处理,再进行氧糖剥夺,记为中剂量藁本内酯+miR-NC组、中剂量藁本内酯+miR-292-5p组。MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-292-5p表达水平。结果 氧糖剥夺处理后PC12细胞存活率显著降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-292-5p表达水平升高（P<0.05）。不同剂量藁本内酯处理后,OGD诱导的PC12细胞中细...     

雷公藤甲素对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响

目的 探究雷公藤甲素（TP）对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响，并探讨其可能的分子机制。方法 建立去势小鼠骨质疏松模型，分为假手术组（Sham组）、卵巢切除去势组（OVX组）、雷公藤甲素组（TP组）、利维爱组（Livial组），造模后第3天给予对应药物处理。治疗6周后，采用TRAP染色检测左侧股骨干骺端的破骨细胞数量。Micro-CT重建三维骨结构图像，检测左侧胫骨干骺端的骨密度（BMD）、骨小梁数目（Tb.N）、骨体积分数（BV/TV）、骨表面积组织体积比（BS/TV）、骨小梁分离度（Tb.Sp），ELISA检测外周血中IL-6、TNF-α、骨形成标志物骨钙素（OC）、骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAcp5b）含量。Western Blot检测右侧股骨组织中p65、p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达水平。结果 骨小梁周围破骨细胞数量比较：OVX组与Sham组相比明显增加；TP组与OVX组相比明显减少；TP组与Livial组比较，差异无统计学意义。骨参数分析：OVX组与Sham组相比，小鼠骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著下降，而Tb.Sp显著升高（P＜0.01）；与OVX组相比，TP组和Livial组骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著升高，而Tb.Sp显著下降（P＜0.01）；TP组与Livial组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-6、TNF-α、OC、TRAcp5b含量比较：OVX组的IL-6、TNF-α含量显著高于Sham组（P＜0.01）；各组间OC水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；OVX组的TRAcp5b水平显著高于Sham组（P＜0.01）。蛋白表达水平：与Sham组相比，OVX组的p65、IκBα表达水平不变，而p-p65和p-IκBα表达水平显著升高（P＜0.01）；TP处理后，p65、IκBα表达水平不变，而p-p65和p-IκBα表达水平却显著降低（P＜0.01）；TP组与Livial组比较，两者间p65、IκBα、p-p65和p-IκBα表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TP抑制破骨细胞分化，改善了去势小鼠的骨量丢失，其分子机制可能与抑制炎症因子IL-6、TNF-α的表达及NF-κB信号通路的磷酸化水平有关。